Π€Π΅ΡΠΌΠ΅Π½ΡΡ
Π. ΠΠΎΠ»ΠΈΠΌΠ΅ΡΠΈΠ·Π°ΡΠΈΡ Π±Π΅Π· ΠΌΠ°ΡΡΠΈΡΡ Π’Π΅ΡΠΌΠΈΠ½Π°Π»ΡΠ½Π°Ρ Π΄Π΅Π·ΠΎΠΊΡΠΈΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄ΠΈΠ»ΡΡΠ°Π½ΡΡΠ΅ΡΠ°Π·Π° ΡΠ²Π»ΡΠ΅ΡΡΡ Π² ΠΎΠΏΡΠ΅Π΄Π΅Π»Π΅Π½Π½ΠΎΠΌ ΡΠΌΡΡΠ»Π΅ ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠΌΠ΅ΡΠ°Π·ΠΎΠΉ, ΠΏΠΎΡΠΊΠΎΠ»ΡΠΊΡ ΠΎΠ½Π° ΠΊΠ°ΡΠ°Π»ΠΈΠ·ΠΈΡΡΠ΅Ρ ΡΠΈΠ½ΡΠ΅Π· ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠ΄Π΅Π·ΠΎΠΊΡΠΈΡΠΈΠ±ΠΎ-Π½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄ΠΎΠ² ΠΈΠ· Π΄Π΅Π·ΠΎΠΊΡΠΈΡΠΈΠ±ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΠ·ΠΈΠ΄ΡΡΠΈΡΠΎΡΡΠ°ΡΠΎΠ² Ρ Π²ΡΡΠ²ΠΎΠ±ΠΎΠΆΠ΄Π΅Π½ΠΈΠ΅ΠΌ Π½Π΅ΠΎΡΠ³Π°Π½ΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΎΠ³ΠΎ ΠΏΠΈΡΠΎΡΠΎΡΡΠ°ΡΠ°. ΠΠΎΠ΄ΠΎΠ±Π½ΠΎ ΠΠΠ-ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠΌΠ΅ΡΠ°Π·Π°ΠΌ, ΠΎΠ½Π° Π½Π΅ ΡΠΏΠΎΡΠΎΠ±Π½Π° ΠΈΠ½ΠΈΡΠΈΠΈΡΠΎΠ²Π°ΡΡ ΡΠΈΠ½ΡΠ΅Π· Π½ΠΎΠ²ΠΎΠΉ ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠΌΠ΅ΡΠ½ΠΎΠΉ ΡΠ΅ΠΏΠΈ ΠΈ ΠΏΠΎΡΡΠΎΠΌΡ ΡΡΠ΅Π±ΡΠ΅Ρ ΠΏΡΠΈΡΡΡΡΡΠ²ΠΈΡ ΠΏΡΠ°ΠΉΠΌΠ΅ΡΠ° ΡΠΎ ΡΠ²ΠΎΠ±ΠΎΠ΄Π½ΠΎΠΉ… Π§ΠΈΡΠ°ΡΡ Π΅ΡΡ >
Π€Π΅ΡΠΌΠ΅Π½ΡΡ (ΡΠ΅ΡΠ΅ΡΠ°Ρ, ΠΊΡΡΡΠΎΠ²Π°Ρ, Π΄ΠΈΠΏΠ»ΠΎΠΌ, ΠΊΠΎΠ½ΡΡΠΎΠ»ΡΠ½Π°Ρ)
Π€Π΅ΡΠΌΠ΅Π½ΡΡ
ΠΠΎΠ·ΠΌΠΎΠΆΠ½ΠΎΡΡΡ ΠΏΡΠΎΠ²Π΅Π΄Π΅Π½ΠΈΡ ΡΠ°Π·Π»ΠΈΡΠ½ΡΡ ΠΌΠ°Π½ΠΈΠΏΡΠ»ΡΡΠΈΠΉ Ρ ΠΠΠ in vitro Π²ΡΠ΅ΡΠ΅Π»ΠΎ Π·Π°Π²ΠΈΡΠΈΡ ΠΎΡ Π½Π°Π»ΠΈΡΠΈΡ ΠΎΡΠΈΡΠ΅Π½Π½ΡΡ ΡΠ΅ΡΠΌΠ΅Π½ΡΠΎΠ², ΠΊΠΎΡΠΎΡΡΠ΅ ΡΠΏΠ΅ΡΠΈΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈΠΌ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΠΎΠΌ ΡΠ°Π·ΡΠ΅Π·Π°ΡΡ, ΠΌΠΎΠ΄ΠΈΡΠΈΡΠΈΡΡΡΡ ΠΈ ΡΠΎΠ΅Π΄ΠΈΠ½ΡΡΡ ΠΌΠΎΠ»Π΅ΠΊΡΠ»Ρ. Π Π½Π°ΡΡΠΎΡΡΠ΅Π΅ Π²ΡΠ΅ΠΌΡ ΠΎΡΡΡΡΡΡΠ²ΡΡΡ ΡΠΈΡΡΠΎ Ρ ΠΈΠΌΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈΠ΅ ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄Ρ, Ρ ΠΏΠΎΠΌΠΎΡΡΡ ΠΊΠΎΡΠΎΡΡΡ ΠΌΠΎΠΆΠ½ΠΎ Π±ΡΠ»ΠΎ Π±Ρ ΠΎΡΡΡΠ΅ΡΡΠ²Π»ΡΡΡ ΠΏΠ΅ΡΠ΅ΡΡΡΠΎΠΉΠΊΡ ΠΌΠΎΠ»Π΅ΠΊΡΠ» ΠΠΠ Ρ ΡΠ°ΠΊΠΈΠΌΠΈ ΡΠ΅Π»Π΅ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎΡΡΡΡ ΠΈ ΡΠ°Π·Π½ΠΎΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΠΈΠ΅ΠΌ, ΠΊΠΎΡΠΎΡΡΠ΅ Ρ Π°ΡΠ°ΠΊΡΠ΅ΡΠ½Ρ Π΄Π»Ρ ΡΠ΅ΡΠΌΠ΅Π½ΡΠ°ΡΠΈΠ²Π½ΡΡ ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠΉ. Π ΡΠΎ ΠΆΠ΅ Π²ΡΠ΅ΠΌΡ Π΄Π°ΠΆΠ΅ Ρ ΠΏΠΎΠΌΠΎΡΡΡ Π΄ΠΎΠ²ΠΎΠ»ΡΠ½ΠΎ Π½Π΅Π±ΠΎΠ»ΡΡΠΎΠ³ΠΎ ΡΠΈΡΠ»Π° ΡΠ΅ΡΠΌΠ΅Π½ΡΠΎΠ² ΠΌΠΎΠΆΠ½ΠΎ ΠΏΠΎΠ»ΡΡΠ°ΡΡ ΡΠ΅ΠΊΠΎΠΌΠ±ΠΈΠ½Π°Π½ΡΠ½ΡΠ΅ ΠΌΠΎΠ»Π΅ΠΊΡΠ»Ρ ΠΠΠ. ΠΠΎΠ»ΡΡΠΈΠ½ΡΡΠ²ΠΎ ΡΡΠΈΡ ΡΠ΅ΡΠΌΠ΅Π½ΡΠΎΠ² Π±ΡΠ»ΠΈ ΠΎΡΠΊΡΡΡΡ ΠΏΡΠΈ ΠΎΠ±ΡΡΠΎΡΡΠ΅Π»ΡΡΡΠ²Π°Ρ , Π½Π΅ ΡΠ²ΡΠ·Π°Π½Π½ΡΡ Ρ ΠΈΡ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ΠΌ ΠΏΡΠΈ ΠΌΠ°Π½ΠΈΠΏΡΠ»ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠΈ Ρ ΠΌΠΎΠ»Π΅ΠΊΡΠ»Π°ΠΌΠΈ ΠΠΠ. ΠΠ° ΡΠ°ΠΌΠΎΠΌ Π΄Π΅Π»Π΅ ΠΊΠ°ΠΆΠ΄ΡΠΉ ΡΠ΅ΡΠΌΠ΅Π½Ρ ΠΈΠ³ΡΠ°Π΅Ρ Π²Π°ΠΆΠ½ΡΡ ΡΠΎΠ»Ρ ΠΊΠ°ΡΠ°Π»ΠΈΠ·Π°ΡΠΎΡΠ° Π² ΡΠΎΠΌ ΠΈΠ»ΠΈ ΠΈΠ½ΠΎΠΌ Ρ ΠΈΠΌΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΎΠΌ ΠΏΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ΅, ΠΏΡΠΎΡΠ΅ΠΊΠ°ΡΡΠ΅ΠΌ Π² ΠΎΡΠ³Π°Π½ΠΈΠ·ΠΌΠ΅, ΠΈΠ· ΠΊΠΎΡΠΎΡΠΎΠ³ΠΎ ΠΎΠ½ Π²ΡΠ΄Π΅Π»Π΅Π½. ΠΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ ΡΠ΅ΡΠΌΠ΅Π½ΡΠΎΠ² Π² ΠΊΠ°ΡΠ΅ΡΡΠ²Π΅ ΠΈΠ½ΡΡΡΡΠΌΠ΅Π½ΡΠ° ΠΏΡΠΈ ΠΌΠ°Π½ΠΈΠΏΡΠ»ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠΈ Ρ ΠΠΠ Π·Π°Π²ΠΈΡΠΈΡ, Π² ΡΠ°ΡΡΠ½ΠΎΡΡΠΈ, ΠΎΡ ΠΈΡ Π΄ΠΎΡΡΡΠΏΠ½ΠΎΡΡΠΈ ΠΈ ΡΡΠ°Π±ΠΈΠ»ΡΠ½ΠΎΡΡΠΈ, Π° ΠΎΡΠΎΠ±Π΅Π½Π½ΠΎ ΠΎΡ ΠΈΡ ΡΠΈΡΡΠΎΡΡ, ΠΈ ΠΏΡΠ΅ΠΆΠ΄Π΅ Π²ΡΠ΅Π³ΠΎ ΠΎΡ ΡΠΎΠ³ΠΎ, ΡΠ²ΠΎΠ±ΠΎΠ΄Π½Ρ Π»ΠΈ ΠΎΠ½ΠΈ ΠΎΡ ΠΏΡΠΈΠΌΠ΅ΡΠ΅ΠΉ, Π²Π»ΠΈΡΡΡΠΈΡ Π½Π° ΡΠ΅ΡΠΌΠ΅Π½ΡΠ°ΡΠΈΠ²Π½ΡΡ Π°ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎΡΡΡ.
Π Π°Π·Π½ΡΠ΅ ΡΠΊΠ·ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π·Ρ ΡΠ°ΡΡΠ΅ΠΏΠ»ΡΡΡ ΡΠ΅ΠΏΡ ΠΏΡΠ΅Π΄ΠΏΠΎΡΡΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎ Π»ΠΈΠ±ΠΎ Ρ 5'-, Π»ΠΈΠ±ΠΎ Ρ 3'-ΠΊΠΎΠ½ΡΠ°, Π½ΠΎ ΠΈΠ½ΠΎΠ³Π΄Π° ΠΎΠ½ΠΈ Π½Π΅ ΠΏΡΠΎΡΠ²Π»ΡΡΡ ΡΠ°ΠΊΠΎΠΉ ΡΠΏΠ΅ΡΠΈΡΠΈΡΠ½ΠΎΡΡΠΈ. ΠΠ½Π΄ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π·Π°ΠΌ ΡΠ²ΠΎΠ±ΠΎΠ΄Π½ΡΠ΅ ΠΊΠΎΠ½ΡΡ Π½Π΅ ΡΡΠ΅Π±ΡΡΡΡΡ, ΠΏΠΎΡΡΠΎΠΌΡ Π΄Π°Π½Π½ΡΠ΅ ΡΠ΅ΡΠΌΠ΅Π½ΡΡ ΠΌΠΎΠ³ΡΡ Π³ΠΈΠ΄ΡΠΎΠ»ΠΈΠ·ΠΎΠ²Π°ΡΡ ΠΊΠΎΠ»ΡΡΠ΅Π²ΡΠ΅ ΠΌΠΎΠ»Π΅ΠΊΡΠ»Ρ ΠΠΠ. Π Π°Π·ΡΠ΅Π·Π°Π½ΠΈΠ΅ ΠΎΡΡΡΠ΅ΡΡΠ²Π»ΡΠ΅ΡΡΡ ΠΏΠΎ Π²Π½ΡΡΡΠ΅Π½Π½ΠΈΠΌ ΡΠΎΡΡΠΎΠ΄ΠΈΡΡΠΈΡΠ½ΡΠΌ ΡΠ²ΡΠ·ΡΠΌ, ΠΏΡΠΈ ΡΡΠΎΠΌ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΡΡΡΡΡ ΡΡΠ°Π³ΠΌΠ΅Π½ΡΡ ΡΠ°Π·Π½ΠΎΠΉ Π΄Π»ΠΈΠ½Ρ. Π‘ ΠΏΠΎΠΌΠΎΡΡΡ ΡΠΊΠ·ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π· ΡΠΎΠΆΠ΅ ΠΌΠΎΠ³ΡΡ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΠΎΠ²ΡΠ²Π°ΡΡΡΡ ΠΊΠΎΡΠΎΡΠΊΠΈΠ΅ ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄Π½ΡΠ΅ ΡΡΠ°Π³ΠΌΠ΅Π½ΡΡ, ΠΎΠ΄Π½Π°ΠΊΠΎ ΠΊΠΎΠ½Π΅ΡΠ½ΡΠΌ ΠΏΡΠΎΠ΄ΡΠΊΡΠΎΠΌ Π²ΠΎ ΠΌΠ½ΠΎΠ³ΠΈΡ ΡΠ»ΡΡΠ°ΡΡ ΡΠ²Π»ΡΡΡΡΡ Π½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΠ·ΠΈΠ΄ΠΌΠΎΠ½ΠΎΡΠΎΡΡΠ°ΡΡ, ΠΏΠΎΡΠΊΠΎΠ»ΡΠΊΡ ΡΠΊΠ·ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π·Ρ ΠΎΡΡΡΠ΅ΡΡΠ²Π»ΡΡΡ Π³ΠΈΠ΄ΡΠΎΠ»ΠΈΠ·, ΠΎΡΡΠ΅ΠΏΠ»ΡΡ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎ ΠΎΠ΄ΠΈΠ½ ΠΎΡΡΠ°ΡΠΎΠΊ Π·Π° Π΄ΡΡΠ³ΠΈΠΌ.
ΠΠ°ΠΊΠΎΠ½Π΅Ρ, Π½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π·Ρ ΠΎΡΠ»ΠΈΡΠ°ΡΡΡΡ ΠΎΠ΄Π½Π° ΠΎΡ Π΄ΡΡΠ³ΠΎΠΉ ΠΏΠΎ ΡΠΎΠΌΡ, Ρ ΠΊΠ°ΠΊΠΎΠΉ ΡΡΠΎΡΠΎΠ½Ρ ΠΎΡ ΠΌΠ΅ΠΆΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄Π½ΠΎΠ³ΠΎ ΡΠΎΡΡΠΎΠ΄ΠΈΡΡΠΈΡΠ½ΠΎΠ³ΠΎ ΠΌΠΎΡΡΠΈΠΊΠ° ΠΎΡΡΡΠ΅ΡΡΠ²Π»ΡΠ΅ΡΡΡ Π³ΠΈΠ΄ΡΠΎΠ»ΠΈΠ·. ΠΠ΄Π½ΠΈ ΡΠ΅ΡΠΌΠ΅Π½ΡΡ Π΄Π΅Π»Π°ΡΡ ΡΠ°Π·ΡΠ΅Π· ΠΌΠ΅ΠΆΠ΄Ρ ΡΠΎΡΡΠ°ΡΠΎΠΌ ΠΈ 3'-Π³ΠΈΠ΄ΡΠΎΠΊΡΠΈΠ»ΡΠ½ΠΎΠΉ Π³ΡΡΠΏΠΏΠΎΠΉ Ρ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ΠΌ 5'-ΡΠΎΡΡΠΎΠΌΠΎΠ½ΠΎΡΡΠΈΡΠ½ΡΡ ΠΏΡΠΎΠ΄ΡΠΊΡΠΎΠ², Π΄ΡΡΠ³ΠΈΠ΅ — ΠΌΠ΅ΠΆΠ΄Ρ ΡΠΎΡΡΠ°ΡΠΎΠΌ ΠΈ 5'-Π³ΠΈΠ΄ΡΠΎΠΊΡΠΈΠ»ΡΠ½ΠΎΠΉ Π³ΡΡΠΏΠΏΠΎΠΉ.
ΠΡΠΊΠ»Π΅Π°Π·Ρ
Π°. ΠΠ±ΡΠΈΠ΅ ΡΠ²ΠΎΠΉΡΡΠ²Π° ΠΡΠΊΠ»Π΅Π°Π·Ρ ΠΏΠΎΠ·Π²ΠΎΠ»ΡΡΡ ΡΠΏΠ΅ΡΠΈΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈΠΌ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΠΎΠΌ ΠΌΠΎΠ΄ΠΈΡΠΈΡΠΈΡΠΎΠ²Π°ΡΡ ΠΌΠΎΠ»Π΅ΠΊΡΠ»Ρ ΠΠΠ ΠΈ Π ΠΠ. ΠΠ°ΠΆΠ΄ΡΠΉ ΡΠ΅ΡΠΌΠ΅Π½Ρ ΠΌΠΎΠΆΠ΅Ρ Π±ΡΡΡ ΠΎΡΠ½Π΅ΡΠ΅Π½ ΠΊ ΡΠΎΠΌΡ ΠΈΠ»ΠΈ ΠΈΠ½ΠΎΠΌΡ ΠΊΠ»Π°ΡΡΡ Π² ΡΠΎΠΎΡΠ²Π΅ΡΡΡΠ²ΠΈΠΈ Ρ Π΅Π³ΠΎ ΡΠΏΠ΅ΡΠΈΡΠΈΡΠ½ΠΎΡΡΡΡ ΠΈΠ»ΠΈ ΡΠΈΠΏΠΎΠΌ ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠΈ, ΠΊΠΎΡΠΎΡΡΡ ΠΎΠ½ ΠΊΠ°ΡΠ°Π»ΠΈΠ·ΠΈΡΡΠ΅Ρ. Π’Π°ΠΊ, ΡΡΠ΄ ΡΠ΅ΡΠΌΠ΅Π½ΡΠΎΠ², ΠΏΠΎΠ΄ΠΎΠ±Π½ΠΎ ΡΠ΅ΡΡΡΠΈΠΊΡΠΈΡΡΡΡΠΈΠΌ ΡΠ½Π΄ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π·Π°ΠΌ, Π΄Π΅ΠΉΡΡΠ²ΡΠ΅Ρ ΡΠΎΠ»ΡΠΊΠΎ Π½Π° ΠΠΠ. ΠΡΡΠ³ΠΈΠ΅, ΠΏΠΎΠ΄ΠΎΠ±Π½ΠΎ ΠΏΠ°Π½ΠΊΡΠ΅Π°ΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΎΠΉ Π ΠΠΠ°Π·Π΅, Π³ΠΈΠ΄ΡΠΎΠ»ΠΈΠ·ΡΡΡ ΡΠΎΠ»ΡΠΊΠΎ Π ΠΠ. ΠΡΡΡ ΡΠ΅ΡΠΌΠ΅Π½ΡΡ, ΠΊΠΎΡΠΎΡΡΠ΅ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΡΡΡ Π² ΠΊΠ°ΡΠ΅ΡΡΠ²Π΅ ΡΡΠ±ΡΡΡΠ°ΡΠΎΠ² ΠΊΠ°ΠΊ ΠΠΠ, ΡΠ°ΠΊ ΠΈ Π ΠΠ. ΠΠ΄Π½ΠΈ Π½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π·Ρ ΠΏΡΠ΅Π΄ΠΏΠΎΡΡΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎ Π΄Π΅ΠΉΡΡΠ²ΡΡΡ Π»ΠΈΠ±ΠΎ Π½Π° Π΄Π²ΡΡ ΡΠ΅ΠΏΠΎΡΠ΅ΡΠ½ΡΠ΅, Π»ΠΈΠ±ΠΎ Π½Π° ΠΎΠ΄Π½ΠΎΡΠ΅ΠΏΠΎΡΠ΅ΡΠ½ΡΠ΅ ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄Π½ΡΠ΅ ΡΡΠ±ΡΡΡΠ°ΡΡ, Π΄ΡΡΠ³ΠΈΠ΅ Π½Π΅ ΠΏΡΠΎΡΠ²Π»ΡΡΡ ΡΠ°ΠΊΠΎΠΉ Π²ΡΡΠ°ΠΆΠ΅Π½Π½ΠΎΠΉ ΠΏΡΠ΅Π΄ΠΏΠΎΡΡΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΠΈ.
ΠΡΠΊΠ»Π΅Π°Π·Ρ ΠΌΠΎΠΆΠ½ΠΎ ΡΠ°ΠΊΠΆΠ΅ ΡΠ°Π·Π΄Π΅Π»ΠΈΡΡ Π½Π° Π΄Π²Π΅ ΡΠ»Π΅Π΄ΡΡΡΠΈΠ΅ ΠΊΠ°ΡΠ΅Π³ΠΎΡΠΈΠΈ: ΡΠΊΠ·ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π·Ρ ΠΈ ΡΠ½Π΄ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π·Ρ.
ΠΠΎΠ»ΡΡΠΈΠ½ΡΡΠ²ΠΎ ΡΠ΅ΡΠΌΠ΅Π½ΡΠΎΠ² ΡΠΏΠΎΠΌΠΈΠ½Π°ΡΡΡΡ Π² ΡΠ΅ΠΊΡΡΠ΅ ΡΡΠΎΠΉ ΠΊΠ½ΠΈΠ³ΠΈ. ΠΡΠΊΠ»Π΅Π°Π·Ρ, ΠΎΡΠΌΠ΅ΡΠ΅Π½Π½ΡΠ΅ Π·Π²Π΅Π·Π΄ΠΎΡΠΊΠΎΠΉ, ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΡΡΡΡΡ ΠΊΠ°ΠΊ ΡΡΡΠΈΠ½Π½ΡΠ΅ ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠ²Ρ Π² ΡΠΊΡΠΏΠ΅ΡΠΈΠΌΠ΅Π½ΡΠ°Ρ ΠΏΠΎ ΠΏΠΎΠ»ΡΡΠ΅Π½ΠΈΡ ΡΠ΅ΠΊΠΎΠΌΠ±ΠΈΠ½Π°Π½ΡΠ½ΡΡ ΠΌΠΎΠ»Π΅ΠΊΡΠ» ΠΠΠ ΠΈ ΠΏΠΎΡΡΠΎΠΌΡ ΡΠ°ΡΡΠΌΠ°ΡΡΠΈΠ²Π°ΡΡΡΡ Π±ΠΎΠ»Π΅Π΅ Π΄Π΅ΡΠ°Π»ΡΠ½ΠΎ.
Π±. ΠΡΠΊΠ»Π΅Π°Π·Ρ, ΡΠΏΠ΅ΡΠΈΡΠΈΡΠ½ΡΠ΅ Π² ΠΎΡΠ½ΠΎΡΠ΅Π½ΠΈΠΈ ΠΎΠ΄Π½ΠΎΡΠ΅ΠΏΠΎΡΠ΅ΡΠ½ΠΎΠΉ ΠΠΠ
ΠΠ½Π΄ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π·Ρ. ΠΠ΅ΠΊΠΎΡΠΎΡΡΠ΅ ΡΠ½Π΄ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π·Ρ Π³ΠΈΠ΄ΡΠΎΠ»ΠΈΠ·ΡΡΡ ΠΎΠ΄Π½ΠΎΡΠ΅ΠΏΠΎΡΠ΅ΡΠ½ΡΠ΅ ΠΌΠΎΠ»Π΅ΠΊΡΠ»Ρ ΠΠΠ ΠΏΡΠΈΠΌΠ΅ΡΠ½ΠΎ Π² ΡΡΡΡΡΡ ΡΠ°Π· Π±ΡΡΡΡΠ΅Π΅, ΡΠ΅ΠΌ Π΄Π²ΡΡ ΡΠ΅ΠΏΠΎΡΠ΅ΡΠ½ΡΠ΅. Π’Π°ΠΊΠ°Ρ ΡΠΏΠ΅ΡΠΈΡΠΈΡΠ½ΠΎΡΡΡ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΡΠ΅ΡΡΡ Π²ΠΎ ΠΌΠ½ΠΎΠ³ΠΈΡ ΡΠΊΡΠΏΠ΅ΡΠΈΠΌΠ΅Π½ΡΠ°Ρ — ΠΏΡΠΈ ΠΊΠΎΠ½ΡΡΡΡΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠΈ ΡΠ΅ΠΊΠΎΠΌΠ±ΠΈΠ½Π°Π½ΡΠ½ΡΡ ΠΠΠ, ΠΏΡΠΈ Π³Π΅ΡΠ΅ΡΠΎΠ΄ΡΠΏΠ»Π΅ΠΊΡΠ½ΠΎΠΌ Π°Π½Π°Π»ΠΈΠ·Π΅ ΠΈ Π΄Π°ΠΆΠ΅ ΠΏΡΠΈ Π°Π½Π°Π»ΠΈΠ·Π΅ ΡΠΊΡΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΠΈ Π³Π΅Π½ΠΎΠ². ΠΠ΅ΠΊΠΎΡΠΎΡΡΠ΅ ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠΈ, ΠΊΠ°ΡΠ°Π»ΠΈΠ·ΠΈΡΡΠ΅ΠΌΡΠ΅ ΠΏΠΎΠ΄ΠΎΠ±Π½ΡΠΌΠΈ ΡΠ½Π΄ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π·Π°ΠΌΠΈ.
ΠΠ΅ΡΠΊΠΎΠ»ΡΠΊΠΎ ΡΠ°Π·Π½ΡΡ ΡΠ½Π΄ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π· ΡΠ°ΠΊΠΎΠ³ΠΎ ΡΠΈΠΏΠ° Π±ΡΠ»ΠΈ Π΄ΠΎΡΡΠ°ΡΠΎΡΠ½ΠΎ Ρ ΠΎΡΠΎΡΠΎ ΠΎΡΠΈΡΠ΅Π½Ρ ΠΈ ΠΎΡ Π°ΡΠ°ΠΊΡΠ΅ΡΠΈΠ·ΠΎΠ²Π°Π½Ρ, ΡΡΠΎΠ±Ρ ΠΈΡ ΠΌΠΎΠΆΠ½ΠΎ Π±ΡΠ»ΠΎ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°ΡΡ Π² ΠΊΠ°ΡΠ΅ΡΡΠ²Π΅ ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠ²ΠΎΠ². ΠΠ΄Π½Π° ΠΈΠ· Π½ΠΈΡ , Π½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π·Π° S1, ΠΏΠΎΠ»ΡΡΠ΅Π½Π° ΠΈΠ· Π²ΡΡΡΡΠ΅Π½Π½ΡΡ ΠΏΡΠ΅ΠΏΠ°ΡΠ°ΡΠΎΠ² ΠΏΠ»Π΅ΡΠ½Π΅Π²ΠΎΠ³ΠΎ Π³ΡΠΈΠ±Π° Aspergillus oryzae; ΠΈΡΡΠΎΡΠ½ΠΈΠΊΠ°ΠΌΠΈ Π΄Π²ΡΡ Π΄ΡΡΠ³ΠΈΡ ΡΠΈΡΠΎΠΊΠΎ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΡΠ΅ΠΌΡΡ ΡΠ΅ΡΠΌΠ΅Π½ΡΠΎΠ² ΡΠ²Π»ΡΡΡΡΡ Neurospora ΠΈ Mung beans. ΠΠ°ΠΆΠ΄ΡΠΉ ΠΈΠ· ΡΡΠΈΡ ΡΡΠ΅Ρ ΡΠ΅ΡΠΌΠ΅Π½ΡΠΎΠ² ΠΏΡΠΎΡΠ²Π»ΡΠ΅Ρ ΠΌΠ°ΠΊΡΠΈΠΌΠ°Π»ΡΠ½ΡΡ Π°ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎΡΡΡ ΠΈ ΡΠΎΡΠ½ΠΎΡΡΡ ΡΠ°ΡΠΏΠΎΠ·Π½Π°Π²Π°Π½ΠΈΡ ΠΎΠ΄Π½ΠΎΡΠ΅ΠΏΠΎΡΠ΅ΡΠ½ΡΡ ΠΈ Π΄Π²ΡΡ ΡΠ΅ΠΏΠΎΡΠ΅ΡΠ½ΡΡ ΠΌΠΎΠ»Π΅ΠΊΡΠ» ΠΏΡΠΈ ΠΎΠΏΡΠ΅Π΄Π΅Π»Π΅Π½Π½ΡΡ ΡΡΠ»ΠΎΠ²ΠΈΡΡ . ΠΡΠ΅ ΡΡΠΈ ΡΠ΅ΡΠΌΠ΅Π½ΡΠ° Π³ΠΈΠ΄ΡΠΎΠ»ΠΈΠ·ΡΡΡ ΠΊΠ°ΠΊ ΠΠΠ, ΡΠ°ΠΊ ΠΈ Π ΠΠ. ΠΡΠΈ ΡΠ°Π·ΡΡΠ²Π΅ ΡΠΎΡΡΠΎΠ΄ΠΈΡΡΠΈΡΠ½ΡΡ ΡΠ²ΡΠ·Π΅ΠΉ Ρ ΠΏΠΎΠΌΠΎΡΡΡ ΡΡΠΈΡ ΡΠ΅ΡΠΌΠ΅Π½ΡΠΎΠ² ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΡΡΡΡΡ 5'-ΠΌΠΎΠ½ΠΎΡΠΎΡΡΠ°ΡΠ½ΡΠ΅ ΠΈ Π'-Π³ΠΈΠ΄ΡΠΎΠΊΡΠΈΠ»ΡΠ½ΡΠ΅ ΠΊΠΎΠ½ΡΡ.
ΠΠΊΠ·ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π·Ρ. ΠΠΊΠ·ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π·Π° E. coli exo VII ΡΠΏΠ΅ΡΠΈΡΠΈΡΠ½Π° Π² ΠΎΡΠ½ΠΎΡΠ΅Π½ΠΈΠΈ ΠΎΠ΄Π½ΠΎΡΠ΅ΠΏΠΎΡΠ΅ΡΠ½ΡΡ ΠΠΠ. ΠΠ½Π° ΠΎΠ±Π»Π°Π΄Π°Π΅Ρ Π½Π΅ΠΎΠ±ΡΡΠ½ΠΎΠΉ ΡΠΊΠ·ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π·Π½ΠΎΠΉ Π°ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎΡΡΡΡ Π² ΡΠΎΠΌ ΡΠΌΡΡΠ»Π΅, ΡΡΠΎ ΠΈΠ½ΠΈΡΠΈΠΈΡΡΠ΅Ρ ΠΎΡΡΠ΅ΠΏΠ»Π΅Π½ΠΈΠ΅ ΠΊΠ°ΠΊ Ρ 5'-, ΡΠ°ΠΊ ΠΈ Ρ Π'-ΠΊΠΎΠ½ΡΠΎΠ² ΡΠ΅ΠΏΠΈ, Π² ΡΠΎ Π²ΡΠ΅ΠΌΡ ΠΊΠ°ΠΊ Π½Π°ΠΈΠ±ΠΎΠ»Π΅Π΅ ΠΈΠ·Π²Π΅ΡΡΠ½ΡΠ΅ ΡΠΊΠ·ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π·Ρ ΡΠΏΠ΅ΡΠΈΡΠΈΡΠ½Ρ ΠΊ ΠΊΠ°ΠΊΠΎΠΌΡ-ΡΠΎ ΠΎΠ΄Π½ΠΎΠΌΡ ΠΊΠΎΠ½ΡΡ. ΠΡΠΎΠ΄ΡΠΊΡΠ°ΠΌΠΈ Π³ΠΈΠ΄ΡΠΎΠ»ΠΈΠ·Π° ΠΎΡΠ΄Π΅Π»ΡΠ½ΡΡ ΡΠ΅ΠΏΠ΅ΠΉ ΡΠΊΠ·ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π·ΠΎΠΉ Π΅Ρ ΠΎ VII ΡΠ²Π»ΡΡΡΡΡ ΠΎΠ»ΠΈΠ³ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄Ρ Π΄Π»ΠΈΠ½ΠΎΠΉ ΠΏΡΠΈΠΌΠ΅ΡΠ½ΠΎ 25 ΠΌΠΎΠ½ΠΎΠΌΠ΅ΡΠ½ΡΡ Π΅Π΄ΠΈΠ½ΠΈΡ, ΠΊΠΎΡΠΎΡΡΠ΅ ΡΠΎΠ΄Π΅ΡΠΆΠ°Ρ 5'-ΡΠΎΡΡΠΎΠΌΠΎΠ½ΠΎΡΡΠΈΡΠ½ΡΠ΅ ΠΊΠΎΠ½ΡΠ΅Π²ΡΠ΅ Π³ΡΡΠΏΠΏΡ.
Π². ΠΡΠΊΠ»Π΅Π°Π·Π° Bal 31
ΠΡΠ΅Π²Π΄ΠΎΠΌΠΎΠ½Π°Π΄Π° Alteromonas espejiana ΡΠ΅ΠΊΡΠ΅ΡΠΈΡΡΠ΅Ρ Π΅Π΄ΠΈΠ½ΡΡΠ²Π΅Π½Π½ΡΡ Π΄Π΅Π·ΠΎΠΊΡΠΈΡΠΈΠ±ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π·Ρ, ΠΏΠΎΠ»ΡΡΠΈΠ²ΡΡΡ Π½Π°Π·Π²Π°Π½ΠΈΠ΅ Bal 31. Π ΠΎΡΠ½ΠΎΡΠ΅Π½ΠΈΠΈ ΠΎΠ΄Π½ΠΎΡΠ΅ΠΏΠΎΡΠ΅ΡΠ½ΠΎΠΉ ΠΠΠ, Π² ΡΠΎΠΌ ΡΠΈΡΠ»Π΅ ΠΎΠ΄Π½ΠΎΡΠ΅ΠΏΠΎΡΠ΅ΡΠ½ΡΡ ΡΡΠ°ΡΡΠΊΠΎΠ² Π΄Π²ΡΡ ΡΠ΅ΠΏΠΎΡΠ΅ΡΠ½ΠΎΠΉ ΠΠΠ, Bal 31 Π²Π΅Π΄Π΅Ρ ΡΠ΅Π±Ρ ΠΊΠ°ΠΊ ΡΠ½Π΄ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π·Π°, Π΄Π΅ΠΉΡΡΠ²ΡΡ Π°Π½Π°Π»ΠΎΠ³ΠΈΡΠ½ΠΎ Π΄ΡΡΠ³ΠΈΠΌ ΡΠ½Π΄ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π·Π°ΠΌ, ΡΠΏΠ΅ΡΠΈΡΠΈΡΠ½ΡΠΌ ΠΊ ΠΎΠ΄Π½ΠΎΡΠ΅ΠΏΠΎΡΠ΅ΡΠ½ΡΠΌ ΠΠΠ. ΠΠ΄Π½Π°ΠΊΠΎ Π² ΠΎΡΠ½ΠΎΡΠ΅Π½ΠΈΠΈ ΠΈΠ½ΡΠ°ΠΊΡΠ½ΠΎΠΉ Π΄Π²ΡΡ ΡΠ΅ΠΏΠΎΡΠ΅ΡΠ½ΠΎΠΉ ΠΠΠ ΡΡΠΎΡ ΡΠ΅ΡΠΌΠ΅Π½Ρ ΠΏΡΠΎΡΠ²Π»ΡΠ΅Ρ ΡΠΊΠ·ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π·Π½ΡΡ Π°ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎΡΡΡ, ΠΏΠΎ-Π²ΠΈΠ΄ΠΈΠΌΠΎΠΌΡ, Π±Π»Π°Π³ΠΎΠ΄Π°ΡΡ ΡΠΎΠΌΡ, ΡΡΠΎ ΠΎΠ½ ΡΠΏΠΎΡΠΎΠ±Π΅Π½ ΡΠ°ΡΠΏΠΎΠ·Π½Π°Π²Π°ΡΡ Π»ΠΎΠΊΠ°Π»ΡΠ½ΡΠ΅ ΠΎΠ΄Π½ΠΎΡΠ΅ΠΏΠΎΡΠ΅ΡΠ½ΡΠ΅ ΡΡΠ°ΡΡΠΊΠΈ. Bal 31 ΡΠ°Π·ΡΠ΅Π·Π°Π΅Ρ ΠΎΠ±Π΅ ΡΠ΅ΠΏΠΈ Π½Π° ΠΎΠ±ΠΎΠΈΡ ΠΊΠΎΠ½ΡΠ°Ρ Π΄ΡΠΏΠ»Π΅ΠΊΡΠ°, Ρ. Π΅. ΠΎΡΡΡΠ΅ΡΡΠ²Π»ΡΠ΅Ρ Π΄Π΅Π³ΡΠ°Π΄Π°ΡΠΈΡ ΠΎΠ΄Π½ΠΎΠ²ΡΠ΅ΠΌΠ΅Π½Π½ΠΎ Π² Π½Π°ΠΏΡΠ°Π²Π»Π΅Π½ΠΈΡΡ 3' - >5' ΠΈ 5'->3'. Π ΡΠ΅Π·ΡΠ»ΡΡΠ°ΡΠ΅ Π΄Π²ΡΡ ΡΠ΅ΠΏΠΎΡΠ΅ΡΠ½Π°Ρ ΠΌΠΎΠ»Π΅ΠΊΡΠ»Π° ΠΏΠΎΡΡΠ΅ΠΏΠ΅Π½Π½ΠΎ ΡΠΊΠΎΡΠ°ΡΠΈΠ²Π°Π΅ΡΡΡ. ΠΡΠ»ΠΈ ΡΠΌΠΏΠΈΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈ ΠΎΡΠ΅Π½ΠΈΡΡ ΡΠΊΠΎΡΠΎΡΡΡ ΡΡΠΎΠ³ΠΎ ΠΏΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ°, ΡΠΎ Ρ ΠΏΠΎΠΌΠΎΡΡΡ ΡΠ΅ΡΠΌΠ΅Π½ΡΠ° Bal 31 ΠΌΠΎΠΆΠ½ΠΎ ΠΏΠΎΠ»ΡΡΠ°ΡΡ ΡΡΠ°Π³ΠΌΠ΅Π½ΡΡ ΠΠΠ Π½ΡΠΆΠ½ΠΎΠΉ Π΄Π»ΠΈΠ½Ρ. Π₯ΠΎΡΡ ΡΠΊΠΎΡΠΎΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅ ΡΠ°Π·Π½ΡΡ ΠΌΠΎΠ»Π΅ΠΊΡΠ» ΠΠΠ ΠΏΡΠΎΠΈΡΡ ΠΎΠ΄ΠΈΡ Π½Π΅ΡΠΈΠ½Ρ ΡΠΎΠ½Π½ΠΎ, ΠΏΠΎΠ»ΡΡΠ°Π΅ΡΡΡ Π½Π°Π±ΠΎΡ ΡΡΠ°Π³ΠΌΠ΅Π½ΡΠΎΠ², Π΄Π»ΠΈΠ½Π° ΠΊΠΎΡΠΎΡΡΡ Π±Π»ΠΈΠ·ΠΊΠ° ΠΊ Π·Π°Π΄Π°Π½Π½ΠΎΠΉ. Π ΡΠ΅Π·ΡΠ»ΡΡΠ°ΡΠ΅ ΠΈΡΡΠ΅ΡΠΏΡΠ²Π°ΡΡΠ΅Π³ΠΎ Π³ΠΈΠ΄ΡΠΎΠ»ΠΈΠ·Π° Ρ ΠΏΠΎΠΌΠΎΡΡΡ Bal 31 ΠΏΡΠΎΠΌΠ΅ΠΆΡΡΠΎΡΠ½ΡΠ΅ ΠΎΠ»ΠΈΠ³ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄Π½ΡΠ΅ ΠΏΡΠΎΠ΄ΡΠΊΡΡ ΡΠ°ΡΡΠ΅ΠΏΠ»ΡΡΡΡΡ Π΄ΠΎ 5'-ΠΌΠΎΠ½ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄ΠΎΠ².
Π³. Π ΠΠΠ°Π·Ρ Π Π‘ΡΡΠ΅ΡΡΠ²ΡΠ΅Ρ Π³ΡΡΠΏΠΏΠ° ΡΠ΅ΡΠΌΠ΅Π½ΡΠΎΠ², ΠΏΠΎΠ»ΡΡΠΈΠ²ΡΠΈΡ Π½Π°Π·Π²Π°Π½ΠΈΠ΅ Π ΠΠΠ°Π·Ρ Π ΠΏΠΎΡΠΎΠΌΡ, ΡΡΠΎ ΠΎΠ½ΠΈ ΡΠΏΠ΅ΡΠΈΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈ ΡΠ°ΡΡΠ΅ΠΏΠ»ΡΡΡ ΡΠ΅ΠΏΡ Π ΠΠ Π² Π³ΠΈΠ±ΡΠΈΠ΄Π½ΠΎΠΌ Π΄ΡΠΏΠ»Π΅ΠΊΡΠ΅ Π ΠΠ-ΠΠΠ. Π ΠΠΠ°Π·Π° Π E. coli ΠΏΡΠ΅Π΄ΡΡΠ°Π²Π»ΡΠ΅Ρ ΡΠΎΠ±ΠΎΠΉ ΡΠ½Π΄ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π·Ρ, ΠΏΡΠΎΠ΄ΡΠΊΡΠ°ΠΌΠΈ Π΄Π΅ΠΉΡΡΠ²ΠΈΡ ΠΊΠΎΡΠΎΡΠΎΠΉ ΡΠ²Π»ΡΡΡΡΡ ΠΎΠ»ΠΈΠ³ΠΎΡΠΈΠ±ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄Ρ Ρ 5'-ΡΠΎΡΡΠΎΠΌΠΎΠ½ΠΎΡΡΠΈΡΠ½ΡΠΌΠΈ ΠΊΠΎΠ½ΡΠ°ΠΌΠΈ. ΠΡΠΎΡ ΡΠ΅ΡΠΌΠ΅Π½Ρ ΡΠΈΡΠΎΠΊΠΎ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΡΠ΅ΡΡΡ ΠΊΠ°ΠΊ ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠ². ΠΠ»Π΅ΡΠΊΠΈ ΡΡΠΊΠ°ΡΠΈΠΎΡ ΡΠΎΠΆΠ΅ ΡΠΎΠ΄Π΅ΡΠΆΠ°Ρ ΠΏΠΎΠ΄ΠΎΠ±Π½ΡΡ ΡΠ½Π΄ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΠ»ΠΈΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΡΡ Π ΠΠΠ°Π·Ρ Π. Π ΠΠΠ°Π·Π° Π-ΡΠΊΠ·ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΠ»ΠΈΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠ°Ρ Π°ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎΡΡΡ ΠΏΡΠΈΡΡΡΠ° ΡΠΊΠ·ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π·Π΅ III E. coli ΠΈ ΠΎΠ±ΡΠ°ΡΠ½ΡΠΌ ΡΡΠ°Π½ΡΠΊΡΠΈΠΏΡΠ°Π·Π°ΠΌ, ΠΊΠΎΠ΄ΠΈΡΡΠ΅ΠΌΡΠΌ ΡΠ΅ΡΡΠΎΠ²ΠΈΡΡΡΠ°ΠΌΠΈ. ΠΠΊΠ·ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π·Π° III ΡΠ°ΡΡΠ΅ΠΏΠ»ΡΠ΅Ρ Π ΠΠ Π΄ΠΎ 5'-Π½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΠ·ΠΈΠ΄-ΠΌΠΎΠ½ΠΎΡΠΎΡΡΠ°ΡΠΎΠ² Π² Π½Π°ΠΏΡΠ°Π²Π»Π΅Π½ΠΈΠΈ Π'->5', Π° ΠΏΡΠΎΠ΄ΡΠΊΡΠ°ΠΌΠΈ Π³ΠΈΠ΄ΡΠΎΠ»ΠΈΠ·Π° ΡΠ΅ΠΏΠΈ Π ΠΠ Ρ ΠΏΠΎΠΌΠΎΡΡΡ ΠΎΠ±ΡΠ°ΡΠ½ΠΎΠΉ ΡΡΠ°Π½ΡΠΊΡΠΈΠΏΡΠ°Π·Ρ ΡΠ²Π»ΡΡΡΡΡ 5'-ΡΠΎΡΡΠΎΡΠΈΠ»ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΡΠ΅ ΠΎΠ»ΠΈΠ³ΠΎΡΠΈΠ±ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄Ρ Π΄Π»ΠΈΠ½ΠΎΠΉ ΠΎΡ Π΄Π²ΡΡ Π΄ΠΎ Π΄Π΅ΡΡΡΠΈ Π½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄ΠΎΠ².
ΠΠ½Π΄ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π·Ρ ΡΠ΅ΡΡΡΠΈΠΊΡΠΈΠΈ
ΠΠ²ΠΎΠ»ΡΡΠΈΡ Π½Π°Π΄Π΅Π»ΠΈΠ»Π° ΡΠ°Π·Π»ΠΈΡΠ½ΡΠ΅ Π²ΠΈΠ΄Ρ Π±Π°ΠΊΡΠ΅ΡΠΈΠΉ ΡΠ½ΠΈΠΊΠ°Π»ΡΠ½ΡΠΌΠΈ ΡΠ½Π΄ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π·Π°ΠΌΠΈ, ΠΏΠΎΠ·Π²ΠΎΠ»ΡΡΡΠΈΠΌΠΈ ΠΈΠΌ ΠΎΡΠ»ΠΈΡΠ°ΡΡ ΠΈΡ ΡΠΎΠ±ΡΡΠ²Π΅Π½Π½ΡΡ ΠΠΠ ΠΎΡ ΡΡΠΆΠ΅ΡΠΎΠ΄Π½ΠΎΠΉ. Π’Π΅ΠΌ ΡΠ°ΠΌΡΠΌ ΠΏΡΠΈΡΠΎΠ΄Π° ΡΠ½Π°Π±Π΄ΠΈΠ»Π° ΡΡΠ΅Π½ΡΡ Π±ΠΎΠ³Π°ΡΡΠΌ Π½Π°Π±ΠΎΡΠΎΠΌ Π²ΡΡΠΎΠΊΠΎΡΠΏΠ΅ΡΠΈΡΠΈΡΠ½ΡΡ ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠ²ΠΎΠ² Π΄Π»Ρ ΡΠ°ΡΡΠ΅ΠΏΠ»Π΅Π½ΠΈΡ ΠΠΠ. ΠΡΠΈ ΠΈΠ·ΡΡΠ΅Π½ΠΈΠΈ ΠΠΠ Π±ΠΎΠ»ΡΡΠΎΠ΅ Π·Π½Π°ΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅ ΠΈΠΌΠ΅ΡΡ Π΄Π²Π΅ Π²Π°ΠΆΠ½ΡΠ΅ ΠΎΡΠΎΠ±Π΅Π½Π½ΠΎΡΡΠΈ ΡΠ΅ΡΡΡΠΈΠΊΡΠΈΡΡΡΡΠΈΡ ΡΠ½Π΄ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π·. ΠΠ΅ΡΠ²Π°Ρ ΡΠ²ΡΠ·Π°Π½Π° Ρ Π·Π°ΠΌΠ΅ΡΠ°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΠΉ ΡΠΏΠΎΡΠΎΠ±Π½ΠΎΡΡΡΡ ΡΠ΅ΡΠΌΠ΅Π½ΡΠ° ΡΠ·Π½Π°Π²Π°ΡΡ ΡΠΏΠ΅ΡΠΈΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈΠ΅ ΠΊΠΎΡΠΎΡΠΊΠΈΠ΅ Π½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄Π½ΡΠ΅ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΠΈ Π² ΠΠΠ. ΠΡΠΎΡΠ°Ρ ΡΠΎΡΡΠΎΠΈΡ Π² ΡΠΎΠΌ, ΡΡΠΎ ΡΡΡΠ΅ΡΡΠ²ΡΠ΅Ρ Π±ΠΎΠ»ΡΡΠΎΠ΅ ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²ΠΎ ΡΠ°Π·Π»ΠΈΡΠ½ΡΡ ΡΠ½Π΄ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π· ΡΠ΅ΡΡΡΠΈΠΊΡΠΈΠΈ, ΠΊΠ°ΠΆΠ΄Π°Ρ ΠΈΠ· ΠΊΠΎΡΠΎΡΡΡ ΡΠ·Π½Π°Π΅Ρ ΡΠΏΠ΅ΡΠΈΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΡΡ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΡ.
Π°. Π’ΡΠΈ ΡΠΈΠΏΠ° ΡΠ½Π΄ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π· ΡΠ΅ΡΡΡΠΈΠΊΡΠΈΠΈ
ΠΠ½Π΄ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π·Ρ ΡΠΈΠΏΠΎΠ² I ΠΈ Π. Π€Π΅ΡΠΌΠ΅Π½ΡΡ, ΠΎΡΠ½ΠΎΡΡΡΠΈΠ΅ΡΡ ΠΊ Π³ΡΡΠΏΠΏΠ΅ ΡΠ½Π΄ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π· ΡΠΈΠΏΠΎΠ² I ΠΈ II, — ΡΡΠΎ ΡΠ»ΠΎΠΆΠ½ΡΠ΅ Π±Π΅Π»ΠΊΠΈ, ΠΎΠ±Π»Π°Π΄Π°ΡΡΠΈΠ΅ Π°ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎΡΡΡΠΌΠΈ ΡΠ΅ΡΡΡΠΈΠΊΡΠΈΡΡΡΡΠ΅ΠΉ ΡΠ½Π΄ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π·Ρ ΠΈ ΠΌΠ΅ΡΠΈΠ»Π°Π·Ρ. ΠΡΠΈ ΠΈΠ½ΡΠ΅ΡΠ΅ΡΠ½ΡΠ΅ ΡΠ΅ΡΠΌΠ΅Π½ΡΡ Π½Π΅ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΡΡΡΡΡ, ΠΎΠ΄Π½Π°ΠΊΠΎ, ΠΏΡΠΈ ΠΊΠΎΠ½ΡΡΡΡΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠΈ ΡΠ΅ΠΊΠΎΠΌΠ±ΠΈΠ½Π°Π½ΡΠ½ΡΡ ΠΌΠΎΠ»Π΅ΠΊΡΠ» ΠΠΠ. Π€Π΅ΡΠΌΠ΅Π½ΡΡ ΡΠΈΠΏΠ° I ΡΠ²ΡΠ·ΡΠ²Π°ΡΡΡΡ Ρ ΠΠΠ Π² ΡΠΏΠ΅ΡΠΈΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈΡ ΡΡΠ°ΡΡΠΊΠ°Ρ ΠΈ Π·Π°ΡΠ΅ΠΌ ΠΏΡΠΎΠΈΠ·Π²ΠΎΠ΄ΡΡ Π΄Π²ΡΡ ΡΠ΅ΠΏΠΎΡΠ΅ΡΠ½ΡΠ΅ ΡΠ°Π·ΡΠ΅Π·Ρ Π½Π° ΡΠ°Π·Π½ΠΎΠΌ ΡΠ°ΡΡΡΠΎΡΠ½ΠΈΠΈ ΠΎΡ ΡΠ°ΠΉΡΠΎΠ² ΡΠ·Π½Π°Π²Π°Π½ΠΈΡ, Π²Π°ΡΡΠΈΡΡΡΡΠ΅ΠΌ ΠΎΡ 400 ΠΏ.Π½. Π΄ΠΎ 7 Ρ.ΠΏ.Π½. ΠΠ»Ρ ΠΎΡΡΡΠ΅ΡΡΠ²Π»Π΅Π½ΠΈΡ ΡΠ΅ΡΠΌΠ΅Π½ΡΠ°ΡΠΈΠ²Π½ΠΎΠ³ΠΎ Π³ΠΈΠ΄ΡΠΎΠ»ΠΈΠ·Π° ΠΠΠ Π½Π΅ΠΎΠ±Ρ ΠΎΠ΄ΠΈΠΌΡ Mg2+, ATP ΠΈ S_Π°Π΄Π΅Π½ΠΎΠ·ΠΈΠ»ΠΌΠ΅ΡΠΈΠΎΠ½ΠΈΠ½. ΠΠΎΡΠ»Π΅Π΄Π½ΠΈΠΉ Π°ΠΊΡΠΈΠ²ΠΈΡΡΠ΅Ρ ΡΠ΅ΡΠΌΠ΅Π½Ρ. Π Π°Π·ΡΠ΅Π·Π°Π½ΠΈΠ΅ ΡΠΎΠΏΡΠΎΠ²ΠΎΠΆΠ΄Π°Π΅ΡΡΡ Π³ΠΈΠ΄ΡΠΎΠ»ΠΈΠ·ΠΎΠΌ ΠΠ’Π , ΠΏΡΠΈ ΡΡΠΎΠΌ ΡΠ΅ΡΠΌΠ΅Π½Ρ ΡΡΡΠ°ΡΠΈΠ²Π°Π΅Ρ ΡΠ½Π΄ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΠ»ΠΈΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΡΡ Π°ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎΡΡΡ, Π½ΠΎ ΡΠΎΡ ΡΠ°Π½ΡΠ΅Ρ ΠΠ’Π Π°Π·Π½ΡΡ. Π’Π°ΠΊΠΈΠΌ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΠΎΠΌ, ΡΠ½Π΄ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π·Ρ ΡΠΈΠΏΠ° I ΡΠ²Π»ΡΡΡΡΡ ΠΠΠ-Π·Π°Π²ΠΈΡΠΈΠΌΡΠΌΠΈ ΠΠ’Π Π°Π·Π°ΠΌΠΈ. ΠΡΠΎΠΌΠ΅ ΡΠΎΠ³ΠΎ, ΠΎΠ½ΠΈ ΠΏΡΠ΅Π΄ΡΡΠ°Π²Π»ΡΡΡ ΡΠΎΠ±ΠΎΠΉ ΡΠ°ΠΉΡΡΠΏΠ΅ΡΠΈΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈΠ΅ ΠΌΠ΅ΡΠΈΠ»Π°Π·Ρ, ΠΊΠ°ΡΠ°Π»ΠΈΠ·ΠΈΡΡΡΡΠΈΠ΅ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ 6_ΠΌΠ΅ΡΠΈΠ»Π°Π΄Π΅Π½ΠΈΠ½ΠΎΠ²ΡΡ ΠΎΡΡΠ°ΡΠΊΠΎΠ² Π² ΡΠ°ΠΉΡΠ΅ ΡΠ·Π½Π°Π²Π°Π½ΠΈΡ. ΠΠ°ΠΏΡΠΈΠΌΠ΅Ρ, ΡΠ°ΠΉΡΠΎΠΌ ΡΠ·Π½Π°Π²Π°Π½ΠΈΡ Π΄Π»Ρ ΡΠ΅ΡΠΌΠ΅Π½ΡΠ° ΠΈΠ· E. coli K12 ΡΠ²Π»ΡΠ΅ΡΡΡ
5'-AACNNN NN N GTGC3' 3_TTGNNNNNNCACG5'
Π³Π΄Π΅ N — Π»ΡΠ±ΠΎΠ΅ ΠΎΡΠ½ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅, a N_ΠΊΠΎΠΌΠΏΠ»Π΅ΠΌΠ΅Π½ΡΠ°ΡΠ½ΠΎΠ΅ Π΅ΠΌΡ ΠΎΡΠ½ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅. ΠΠ½Π΄ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π·Π° ΡΠ°Π·ΡΠ΅Π·Π°Π΅Ρ ΡΠ΅ΠΏΡ Π½Π° Π·Π½Π°ΡΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΠΌ ΡΠ°ΡΡΡΠΎΡΠ½ΠΈΠΈ ΠΎΡ ΡΠ°ΠΉΡΠ° ΡΠ·Π½Π°Π²Π°Π½ΠΈΡ, Π½ΠΎ ΠΏΡΠΈ ΡΡΠΎΠΌ ΠΌΠ΅ΡΠΈΠ»ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ Ρ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ΠΌ 6_ΠΌΠ΅ΡΠΈΠ»-Π°Π΄Π΅Π½ΠΈΠ½Π° ΠΏΡΠΎΠΈΡΡ ΠΎΠ΄ΠΈΡ Π² ΠΏΡΠ΅Π΄Π΅Π»Π°Ρ ΡΡΠΎΠ³ΠΎ ΡΠ°ΠΉΡΠ°. ΠΠ½Π΄ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π·Π½Π°Ρ Π°ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎΡΡΡ ΠΏΡΠΎΡΠ²Π»ΡΠ΅ΡΡΡ ΡΠΎΠ»ΡΠΊΠΎ ΠΏΡΠΈ Π½Π°Π»ΠΈΡΠΈΠΈ ΠΏΠΎΠ»Π½ΠΎΡΡΡΡ Π½Π΅ΠΌΠ΅ΡΠΈΠ»ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΠΎΠ³ΠΎ ΡΠ°ΠΉΡΠ°. Π‘Π°ΠΉΡ ΡΠ·Π½Π°Π²Π°Π½ΠΈΡ Π΄Π»Ρ ΡΠ΅ΡΠΌΠ΅Π½ΡΠ° E. coli K12 ΡΠΎΡΡΠΎΠΈΡ ΠΈΠ· Π΄Π²ΡΡ ΠΊΠΎΡΠΎΡΠΊΠΈΡ ΡΠΏΠ΅ΡΠΈΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈΡ ΠΎΠ»ΠΈΠ³ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄ΠΎΠ², ΡΠ°Π·Π΄Π΅Π»Π΅Π½Π½ΡΡ ΡΠ΅ΡΡΡΡ-Π²ΠΎΡΠ΅ΠΌΡΡ Π½Π΅ΡΠΏΠ΅ΡΠΈΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈΠΌΠΈ ΠΏΠ°ΡΠ°ΠΌΠΈ ΠΎΡΠ½ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠΉ. Π’Π°ΠΊΠ°Ρ ΡΡΡΡΠΊΡΡΡΠ° ΡΠΈΠΏΠΈΡΠ½Π° Π΄Π»Ρ ΡΠ°ΠΉΡΠΎΠ² ΡΠ·Π½Π°Π²Π°Π½ΠΈΡ ΡΠ΅ΡΠΌΠ΅Π½ΡΠΎΠ² ΡΠΈΠΏΠ° I, ΠΎΠ±Π½Π°ΡΡΠΆΠ΅Π½Π½ΡΡ Ρ ΡΠ°Π·Π»ΠΈΡΠ½ΡΡ ΡΡΠ°ΠΌΠΌΠΎΠ² Π±Π°ΠΊΡΠ΅ΡΠΈΠΉ. Π‘ΠΏΠ΅ΡΠΈΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈΠ΅ ΠΎΠ»ΠΈΠ³ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄Π½ΡΠ΅ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΠΈ Π΄Π»Ρ ΡΠ°Π·Π½ΡΡ ΡΠ΅ΡΠΌΠ΅Π½ΡΠΎΠ² ΡΠ°Π·Π»ΠΈΡΠ°ΡΡΡΡ, Π½ΠΎ ΠΌΠ΅ΡΠΈΠ»ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΡΠ΅ ΠΎΡΡΠ°ΡΠΊΠΈ, Π Π²ΡΠ΅Π³Π΄Π° Π½Π°Ρ ΠΎΠ΄ΡΡΡΡ Π² ΠΎΠ΄ΠΈΠ½Π°ΠΊΠΎΠ²ΡΡ ΠΏΠΎΠ·ΠΈΡΠΈΡΡ .
Π ΠΎΠ΄ΡΡΠ²Π΅Π½Π½ΡΠ΅ ΡΠΈΡΡΠ΅ΠΌΡ ΡΠ΅ΡΡΡΠΈΠΊΡΠΈΠΈ-ΠΌΠΎΠ΄ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΠΈ ΡΠΈΠΏΠ° I ΠΊΠΎΠ΄ΠΈΡΡΡΡΡΡ Π°Π»Π»Π΅Π»ΡΠ½ΡΠΌΠΈ Π»ΠΎΠΊΡΠ»Π°ΠΌΠΈ Π³Π΅Π½ΠΎΠΌΠΎΠ² ΡΠ°Π·Π»ΠΈΡΠ½ΡΡ ΠΊΠΈΡΠ΅ΡΠ½ΡΡ Π±Π°ΠΊΡΠ΅ΡΠΈΠΉ. Π‘ ΠΊΠ°ΠΆΠ΄ΠΎΠΉ ΡΠΈΡΡΠ΅ΠΌΠΎΠΉ ΡΠ²ΡΠ·Π°Π½Ρ ΡΡΠΈ ΡΡΠ΅ΠΏΠ»Π΅Π½Π½ΡΡ Π³Π΅Π½Π°: hsdR, hsdM ΠΈ hsdS, ΡΠ°ΡΠΏΠΎΠ»ΠΎΠΆΠ΅Π½Π½ΡΠ΅ Π² ΠΏΠΎΡΡΠ΄ΠΊΠ΅, ΡΠΎΠΎΡΠ²Π΅ΡΡΡΠ²ΡΡΡΠ΅ΠΌ ΠΏΠΎΡΡΠ΄ΠΊΡ ΡΡΠ°Π½ΡΠΊΡΠΈΠΏΡΠΈΠΈ. ΠΠΎΠ»ΠΈΠΏΠ΅ΠΏΡΠΈΠ΄Π½ΡΠ΅ ΠΏΡΠΎΠ΄ΡΠΊΡΡ hsdM ΠΈ hsdS ΡΡΠ°Π½ΡΠ»ΠΈΡΡΡΡΡΡ Ρ ΠΎΠ΄Π½ΠΎΠΉ Π΄Π²ΡΡ ΡΠΈΡΡΡΠΎΠ½Π½ΠΎΠΉ ΠΌΠ ΠΠ ΠΈ Π²ΠΌΠ΅ΡΡΠ΅ ΡΠΎΡΡΠ°Π²Π»ΡΡΡ ΠΌΠ΅ΡΠΈΠ»Π°Π·Ρ. ΠΠ΅ΡΠ²ΡΠΉ ΠΈΠ· Π½ΠΈΡ ΠΎΠ±Π»Π°Π΄Π°Π΅Ρ ΠΌΠ΅ΡΠΈΠ»Π°Π·Π½ΠΎΠΉ Π°ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎΡΡΡΡ, Π° Π²ΡΠΎΡΠΎΠΉ ΠΎΡΡΡΠ΅ΡΡΠ²Π»ΡΠ΅Ρ ΡΠ°ΠΉΡΡΠΏΠ΅ΡΠΈΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΎΠ΅ ΡΠ·Π½Π°Π²Π°Π½ΠΈΠ΅. ΠΡΠΎΠ΄ΡΠΊΡ Π³Π΅Π½Π° hsdR ΠΎΠ±Π»Π°Π΄Π°Π΅Ρ ΡΠ½Π΄ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π·Π½ΠΎΠΉ Π°ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎΡΡΡΡ. ΠΡΠ΅ ΡΡΠΈ ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠΏΠ΅ΠΏΡΠΈΠ΄Π° ΡΠΎΠ΄Π΅ΡΠΆΠ°ΡΡΡ Π² ΡΠ°Π·Π»ΠΈΡΠ½ΡΡ ΠΏΡΠΎΠΏΠΎΡΡΠΈΡΡ Π² Π°ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΡΡ ΠΏΡΠ΅ΠΏΠ°ΡΠ°ΡΠ°Ρ ΡΠ΅ΡΠΌΠ΅Π½ΡΠΎΠ² ΡΠΈΠΏΠ° I.
Π€Π΅ΡΠΌΠ΅Π½ΡΡ ΡΠΈΠΏΠ° III, ΡΠ°ΠΊ ΠΆΠ΅ ΠΊΠ°ΠΊ ΠΈ ΡΠ½Π΄ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π·Π° ΡΠΈΠΏΠ° I, ΠΎΠ±Π»Π°Π΄Π°ΡΡ Π½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π·Π½ΠΎΠΉ ΠΈ ΠΌΠ΅ΡΠΈΠ»Π°Π·Π½ΠΎΠΉ Π°ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎΡΡΡΠΌΠΈ. ΠΠ΄Π½Π°ΠΊΠΎ, Π½Π΅ΡΠΌΠΎΡΡΡ Π½Π° ΡΠΎ, ΡΡΠΎ ΡΠ΅ΡΠΌΠ΅Π½ΡΡ ΡΠΈΠΏΠ° III Π°ΠΊΡΠΈΠ²ΠΈΡΡΡΡΡΡ S_Π°Π΄Π΅Π½ΠΎΠ·ΠΈΠ»ΠΌΠ΅ΡΠΈΠΎΠ½ΠΈΠ½ΠΎΠΌ ΠΈ Π΄Π»Ρ ΡΠ²ΠΎΠ΅ΠΉ ΡΠ°Π±ΠΎΡΡ ΡΡΠ΅Π±ΡΡΡ ΠΠ’Π , ΠΎΠ½ΠΈ Π½Π΅ ΠΊΠ°ΡΠ°Π»ΠΈΠ·ΠΈΡΡΡΡ Π΅Π΅ Π³ΠΈΠ΄ΡΠΎΠ»ΠΈΠ·Π°. ΠΠ½Π΄ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π·Ρ ΡΠΈΠΏΠ° III Π΄Π΅Π»Π°ΡΡ Π΄Π²ΡΡ ΡΠ΅ΠΏΠΎΡΠ΅ΡΠ½ΡΠ΅ ΡΠ°Π·ΡΠ΅Π·Ρ Π² ΠΠΠ Π½Π° ΡΠ°ΡΡΡΠΎΡΠ½ΠΈΠΈ ΠΏΡΠΈΠΌΠ΅ΡΠ½ΠΎ 25 ΠΏ.Π½. ΠΎΡ ΡΠ²ΠΎΠΈΡ ΡΠ°ΠΉΡΠΎΠ² ΡΠ·Π½Π°Π²Π°Π½ΠΈΡ. Π ΠΏΡΠΈΡΡΡΡΡΠ²ΠΈΠΈ ΠΠ’Π ΠΈ S_Π°Π΄Π΅Π½ΠΎΠ·ΠΈΠ»ΠΌΠ΅ΡΠΈΠΎΠ½ΠΈΠ½Π° ΡΠ΅ ΠΆΠ΅ ΡΠ΅ΡΠΌΠ΅Π½ΡΡ ΠΊΠ°ΡΠ°Π»ΠΈΠ·ΠΈΡΡΡΡ ΡΠ°ΠΉΡΡΠΏΠ΅ΡΠΈΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΎΠ΅ ΠΌΠ΅ΡΠΈΠ»ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅. Π€Π΅ΡΠΌΠ΅Π½ΡΡ ΡΠΈΠΏΠ° III_Π³Π΅ΡΠ΅ΡΠΎΠ΄ΠΈΠΌΠ΅ΡΠ½ΡΠ΅ Π±Π΅Π»ΠΊΠΈ. ΠΡ ΡΡΠ±ΡΠ΅Π΄ΠΈΠ½ΠΈΡΡ ΠΊΠΎΠ΄ΠΈΡΡΡΡΡΡ Π΄Π²ΡΠΌΡ ΡΡΠ΅ΠΏΠ»Π΅Π½Π½ΡΠΌΠΈ Π³Π΅Π½Π°ΠΌΠΈ, Π»ΠΎΠΊΠ°Π»ΠΈΠ·ΠΎΠ²Π°Π½Π½ΡΠΌΠΈ Ρ Π½Π΅ΠΊΠΎΡΠΎΡΡΡ ΡΡΠ°ΠΌΠΌΠΎΠ² Π. coli Π²ΠΎ Π²Π½Π΅Ρ ΡΠΎΠΌΠΎΡΠΎΠΌΠ½ΡΡ Π³Π΅Π½ΠΎΠΌΠ°Ρ . ΠΠ°ΠΆΠ΄ΡΠΉ ΡΠ°ΠΊΠΎΠΉ Π³Π΅Π½ ΠΏΡΠ΅Π΄ΡΡΠ°Π²Π»ΡΠ΅Ρ ΡΠΎΠ±ΠΎΠΉ ΠΎΡΠ΄Π΅Π»ΡΠ½ΡΡ ΡΡΠ°Π½ΡΠΊΡΠΈΠΏΡΠΈΠΎΠ½Π½ΡΡ Π΅Π΄ΠΈΠ½ΠΈΡΡ. ΠΠ΄ΠΈΠ½ Π³Π΅Π½Π½ΡΠΉ ΠΏΡΠΎΠ΄ΡΠΊΡ ΡΠ·Π½Π°Π΅Ρ ΡΠΏΠ΅ΡΠΈΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΡΡ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΡ ΠΈ ΠΎΠ±Π»Π°Π΄Π°Π΅Ρ ΠΌΠ΅ΡΠΈΠ»Π°Π·Π½ΠΎΠΉ Π°ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎΡΡΡΡ, Π΄ΡΡΠ³ΠΎΠΉ Π²ΡΠΏΠΎΠ»Π½ΡΠ΅Ρ ΡΠ½Π΄ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π·Π½ΡΡ ΡΡΠ½ΠΊΡΠΈΡ.
ΠΠΎΡΠΊΠΎΠ»ΡΠΊΡ ΡΠ΅ΡΠΌΠ΅Π½ΡΡ ΡΠΈΠΏΠ° I Π½Π΅ ΡΠ°Π·ΡΠ΅Π·Π°ΡΡ ΠΌΠΎΠ»Π΅ΠΊΡΠ»Ρ ΠΠΠ Π½Π° ΡΠ΅ΠΏΡΠΎΠ΄ΡΡΠΈΡΡΡΡΠΈΠ΅ΡΡ ΡΡΠ°Π³ΠΌΠ΅Π½ΡΡ ΠΈ ΡΠ½Π΄ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π·Π½ΡΠ΅ Π°ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎΡΡΠΈ ΡΠ΅ΡΠΌΠ΅Π½ΡΠΎΠ² ΡΠΈΠΏΠ° I ΠΈ III ΠΊΠΎΠ½ΠΊΡΡΠΈΡΡΡΡ Ρ ΠΌΠ΅ΡΠΈΠ»ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ΠΌ, Π½ΠΈ ΠΎΠ΄ΠΈΠ½ ΠΈΠ· Π½ΠΈΡ Π½Π΅ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΡΠ΅ΡΡΡ Π² ΠΊΠ°ΡΠ΅ΡΡΠ²Π΅ ΡΠ΅Π°Π³Π΅Π½ΡΠ° ΠΏΡΠΈ ΠΏΠΎΠ»ΡΡΠ΅Π½ΠΈΠΈ ΡΠ΅ΠΊΠΎΠΌΠ±ΠΈΠ½Π°Π½ΡΠ½ΡΡ ΠΠΠ.
ΠΠ½Π΄ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π·Ρ ΡΠΈΠΏΠ° II. Π Π΅ΡΡΡΠΈΠΊΡΠΈΡΡΡΡΠΈΠ΅ ΡΠ½Π΄ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π·Ρ ΡΠΈΠΏΠ° II ΡΠ²Π»ΡΡΡΡΡ ΠΎΡΠ½ΠΎΠ²Π½ΡΠΌ ΠΈΠ½ΡΡΡΡΠΌΠ΅Π½ΡΠΎΠΌ ΠΏΡΠΈ ΠΊΠΎΠ½ΡΡΡΡΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠΈ ΡΠ΅ΠΊΠΎΠΌΠ±ΠΈΠ½Π°Π½ΡΠ½ΡΡ ΠΌΠΎΠ»Π΅ΠΊΡΠ» ΠΠΠ ΠΈ ΠΏΡΠΈ Π°Π½Π°Π»ΠΈΠ·Π΅ ΡΡΡΡΠΊΡΡΡΡ ΠΠΠ. ΠΡΠΈ ΡΠ΅ΡΠΌΠ΅Π½ΡΡ ΡΠΏΠΎΡΠΎΠ±Π½Ρ ΡΠ·Π½Π°Π²Π°ΡΡ ΡΠΏΠ΅ΡΠΈΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈΠ΅ ΠΊΠΎΡΠΎΡΠΊΠΈΠ΅ Π½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄Π½ΡΠ΅ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΠΈ ΠΈ ΡΠ²ΡΠ·ΡΠ²Π°ΡΡΡΡ Ρ Π½ΠΈΠΌΠΈ, Π½ΠΎ Π² ΠΎΡΠ»ΠΈΡΠΈΠ΅ ΠΎΡ ΡΠ½Π΄ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π· ΡΠΈΠΏΠΎΠ² I ΠΈ III ΠΎΠ½ΠΈ ΠΏΡΠΎΠΈΠ·Π²ΠΎΠ΄ΡΡ Π΄Π²ΡΡ ΡΠ΅ΠΏΠΎΡΠ΅ΡΠ½ΡΠ΅ ΡΠ°Π·ΡΠ΅Π·Ρ ΠΏΠΎ ΡΠΏΠ΅ΡΠΈΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈΠΌ ΡΠΎΡΡΠΎΠ΄ΠΈΡΡΠΈΡΠ½ΡΠΌ ΡΠ²ΡΠ·ΡΠΌ Π»ΠΈΠ±ΠΎ Π² ΠΏΡΠ΅Π΄Π΅Π»Π°Ρ ΡΠ°ΠΌΠΎΠ³ΠΎ ΡΠ°ΠΉΡΠ° ΡΠ·Π½Π°Π²Π°Π½ΠΈΡ, Π»ΠΈΠ±ΠΎ Π½Π° Π²ΠΏΠΎΠ»Π½Π΅ ΠΎΠΏΡΠ΅Π΄Π΅Π»Π΅Π½Π½ΠΎΠΌ Π½Π΅Π±ΠΎΠ»ΡΡΠΎΠΌ ΡΠ°ΡΡΡΠΎΡΠ½ΠΈΠΈ ΠΎΡ Π½Π΅Π³ΠΎ. ΠΠ΄ΠΈΠ½ ΠΈ ΡΠΎΡ ΠΆΠ΅ ΡΠ΅ΡΠΌΠ΅Π½Ρ ΡΠ°Π·ΡΠ΅Π·Π°Π΅Ρ Π΄Π°Π½Π½ΡΡ ΠΌΠΎΠ»Π΅ΠΊΡΠ»Ρ ΠΠΠ Ρ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ΠΌ ΠΎΠ΄ΠΈΠ½Π°ΠΊΠΎΠ²ΡΡ Π½Π°Π±ΠΎΡΠΎΠ² ΡΡΠ°Π³ΠΌΠ΅Π½ΡΠΎΠ². ΠΠ»ΠΈΠ½Π° ΡΡΠ°Π³ΠΌΠ΅Π½ΡΠΎΠ² ΠΎΠΏΡΠ΅Π΄Π΅Π»ΡΠ΅ΡΡΡ ΡΠ°ΡΡΡΠΎΡΠ½ΠΈΠ΅ΠΌ ΠΌΠ΅ΠΆΠ΄Ρ ΡΠΏΠ΅ΡΠΈΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈΠΌΠΈ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΡΠΌΠΈ, ΡΠ·Π½Π°Π²Π°Π΅ΠΌΡΠΌΠΈ ΡΡΠΈΠΌ ΡΠ΅ΡΠΌΠ΅Π½ΡΠΎΠΌ. Π€Π΅ΡΠΌΠ΅Π½ΡΡ ΡΠΈΠΏΠ° II Π³ΠΈΠ΄ΡΠΎΠ»ΠΈΠ·ΡΡΡ ΡΠΎΡΡΠΎΠ΄ΠΈΡΡΠΈΡΠ½ΡΠ΅ ΡΠ²ΡΠ·ΠΈ ΠΌΠ΅ΠΆΠ΄Ρ 3'-Π³ΠΈΠ΄ΡΠΎΠΊΡΠΈΠ»ΡΠ½ΠΎΠΉ Π³ΡΡΠΏΠΏΠΎΠΉ ΠΈ ΡΠΎΡΡΠ°ΡΠΎΠΌ, Π² ΡΠ΅Π·ΡΠ»ΡΡΠ°ΡΠ΅ ΡΠ΅Π³ΠΎ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΡΠ΅ΡΡΡ 5'-ΡΠΎΡΡΠΎΠΌΠΎΠ½ΠΎΡΡΠΈΡΠ½Π°Ρ Π³ΡΡΠΏΠΏΠ° Ρ ΠΎΠ΄Π½ΠΎΠΉ ΡΡΠΎΡΠΎΠ½Ρ ΠΎΡ ΡΠ°Π·ΡΡΠ²Π° ΠΈ 3'-Π³ΠΈΠ΄ΡΠΎΠΊΡΠΈΠ»ΡΠ½Π°Ρ Π³ΡΡΠΏΠΏΠ° — Ρ Π΄ΡΡΠ³ΠΎΠΉ.
Π‘Π°ΠΉΡ ΡΠ·Π½Π°Π²Π°Π½ΠΈΡ ΠΈ ΡΠ°Π·ΡΠ΅Π·Π°Π½ΠΈΡ Π΄Π»Ρ ΡΠ΅ΡΡΡΠΈΠΊΡΠΈΡΡΡΡΠ΅ΠΉ ΡΠ½Π΄ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π·Ρ Eco RI. Π Π°Π·ΡΠ΅Π·Π°Π½ΠΈΠ΅ ΠΏΡΠΎΠΈΡΡ ΠΎΠ΄ΠΈΡ Π² Π΄Π²Π° ΡΡΠ°ΠΏΠ°: ΡΠ½Π°ΡΠ°Π»Π° Π³ΠΈΠ΄ΡΠΎΠ»ΠΈΠ·ΡΠ΅ΡΡΡ ΠΎΠ΄Π½Π° ΡΠ΅ΠΏΡ, ΠΏΠΎΡΠΎΠΌ — Π΄ΡΡΠ³Π°Ρ. ΠΡΠΈ ΠΎΠ±ΡΡΠ½ΡΡ ΡΡΠ»ΠΎΠ²ΠΈΡΡ ΠΏΡΠΎΠ΄ΡΠΊΡΠ°ΠΌΠΈ ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠΈ ΡΠ²Π»ΡΡΡΡΡ Π΄Π²Π° Π΄ΡΠΏΠ»Π΅ΠΊΡΠ½ΡΡ ΡΡΠ°Π³ΠΌΠ΅Π½ΡΠ° Ρ ΠΊΠΎΠΌΠΏΠ»Π΅ΠΌΠ΅Π½ΡΠ°ΡΠ½ΡΠΌΠΈ ΠΎΠ΄Π½ΠΎΡΠ΅ΠΏΠΎΡΠ΅ΡΠ½ΡΠΌΠΈ ΠΊΠΎΠ½ΡΠ°ΠΌΠΈ. Π ΡΡΠ»ΠΎΠ²ΠΈΡΡ , ΡΠΏΠΎΡΠΎΠ±ΡΡΠ²ΡΡΡΠΈΡ ΡΡΠ°Π±ΠΈΠ»ΠΈΠ·Π°ΡΠΈΠΈ Π²ΠΎΠ΄ΠΎΡΠΎΠ΄Π½ΡΡ ΡΠ²ΡΠ·Π΅ΠΉ ΠΌΠ΅ΠΆΠ΄Ρ ΡΠ΅ΡΡΡΡΠΌΡ Π½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄Π°ΠΌΠΈ ΠΈΠ· ΡΠ°Π·Π½ΡΡ ΡΠ΅ΠΏΠ΅ΠΉ, ΡΡΠ°Π³ΠΌΠ΅Π½ΡΡ ΠΌΠΎΠ³ΡΡ ΡΠ΅Π°ΡΡΠΎΡΠΈΠΈΡΠΎΠ²Π°ΡΡ.
Π±. Π’ΠΈΠΏΠΈΡΠ½Π°Ρ ΡΠ΅ΡΡΡΠΈΠΊΡΠΈΡΡΡΡΠ°Ρ ΡΠ½Π΄ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π·Π° ΡΠΈΠΏΠ° II
ΠΠ½Π΄ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π·Π° Eco RI. Π¨ΠΈΡΠΎΠΊΠΎ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΡΠ΅ΠΌΠ°Ρ ΡΠ΅ΡΡΡΠΈΠΊΡΠΈΡΡΡΡΠ°Ρ ΡΠ½Π΄ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π°Π·Π° Eco RI ΡΠ°Π·ΡΠ΅Π·Π°Π΅Ρ ΠΠΠ Π² ΡΠ΅Ρ ΠΌΠ΅ΡΡΠ°Ρ , Π³Π΄Π΅ Π²ΡΡΡΠ΅ΡΠ°Π΅ΡΡΡ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΡ 5'-GAATTC3'. ΠΠ°ΠΊ ΠΈ Π² ΡΠ»ΡΡΠ°Π΅ Π΄ΡΡΠ³ΠΈΡ ΡΠ΅ΡΡΡΠΈΠΊΡΠΈΡΡΡΡΠΈΡ ΡΠ½Π΄ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π· ΡΠΈΠΏΠ° II, ΡΡΠ° ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΡ ΡΠ²Π»ΡΠ΅ΡΡΡ ΠΏΠ°Π»ΠΈΠ½Π΄ΡΠΎΠΌΠΎΠΌ, Ρ. Π΅. Π² ΠΎΠ±Π΅ΠΈΡ ΡΠ΅ΠΏΡΡ ΡΠΎΡΠ½ΠΎ Π½Π°ΠΏΡΠΎΡΠΈΠ² Π΄ΡΡΠ³ Π΄ΡΡΠ³Π° Π½Π°Ρ ΠΎΠ΄ΡΡΡΡ ΠΎΠ΄ΠΈΠ½Π°ΠΊΠΎΠ²ΡΠ΅ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΠΈ, ΡΠΈΡΠ°Π΅ΠΌΡΠ΅ Π² Π½Π°ΠΏΡΠ°Π²Π»Π΅Π½ΠΈΠΈ 5'->3'. Eco RI Π³ΠΈΠ΄ΡΠΎΠ»ΠΈΠ·ΡΠ΅Ρ ΡΠΎΡΡΠΎΠ΄ΠΈΡΡΠΈΡΠ½ΡΠ΅ ΡΠ²ΡΠ·ΠΈ ΠΌΠ΅ΠΆΠ΄Ρ ΠΎΡΡΠ°ΡΠΊΠ°ΠΌΠΈ G ΠΈ, Π Π² ΠΊΠ°ΠΆΠ΄ΠΎΠΉ ΡΠ΅ΠΏΠΈ. ΠΠΎΡΠΊΠΎΠ»ΡΠΊΡ ΡΠ½Π΄ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π·Π° Eco RI ΡΠ°Π·ΡΠ΅Π·Π°Π΅Ρ ΠΎΠ±Π΅ ΡΠ΅ΠΏΠΈ Π² ΡΠΎΠΌ ΠΌΠ΅ΡΡΠ΅, Π³Π΄Π΅ Π²ΡΡΡΠ΅ΡΠ°Π΅ΡΡΡ ΠΏΠ°Π»ΠΈΠ½Π΄ΡΠΎΠΌΠ½Π°Ρ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΡ 5'-GAATTC3', ΠΌΠΎΠ»Π΅ΠΊΡΠ»Π° ΠΠΠ ΡΠ°Π·ΡΠ΅Π·Π°Π΅ΡΡΡ Π½Π° Ρ Π°ΡΠ°ΠΊΡΠ΅ΡΠ½ΡΠΉ Π΄Π»Ρ Π½Π΅Π΅ Π½Π°Π±ΠΎΡ ΡΡΠ°Π³ΠΌΠ΅Π½ΡΠΎΠ².
ΠΠΈΠΏΠΊΠΈΠ΅ ΠΊΠΎΠ½ΡΡ. ΠΠ½Π΄ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π·Π° Eco RI ΠΏΡΠΎΠΈΠ·Π²ΠΎΠ΄ΠΈΡ ΡΡΡΠΏΠ΅Π½ΡΠ°ΡΡΠ΅ Π΄Π²ΡΡ ΡΠ΅ΠΏΠΎΡΠ΅ΡΠ½ΡΠ΅ ΡΠ°Π·ΡΠ΅Π·Ρ, ΠΏΡΠΈ ΡΡΠΎΠΌ Ρ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΡΡΡΠΈΡ ΡΡ ΡΡΠ°Π³ΠΌΠ΅Π½ΡΠΎΠ² ΠΠΠ Π½Π° ΠΊΠΎΠ½ΡΠ°Ρ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΡΡΡΡΡ ΠΊΠΎΡΠΎΡΠΊΠΈΠ΅ ΠΊΠΎΠΌΠΏΠ»Π΅ΠΌΠ΅Π½ΡΠ°ΡΠ½ΡΠ΅ ΠΎΠ΄Π½ΠΎΡΠ΅ΠΏΠΎΡΠ΅ΡΠ½ΡΠ΅ Ρ Π²ΠΎΡΡΡ ΠΈΠ· ΡΠ΅ΡΡΡΠ΅Ρ ΠΎΡΠ½ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠΉ — 5'-ΠΠΠ’Π’3'. Π Π·Π°Π²ΠΈΡΠΈΠΌΠΎΡΡΠΈ ΠΎΡ ΠΈΠΎΠ½Π½ΠΎΠΉ ΡΠΈΠ»Ρ ΡΠ°ΡΡΠ²ΠΎΡΠ° ΠΈ ΡΠ΅ΠΌΠΏΠ΅ΡΠ°ΡΡΡΡ ΡΡΠΈ ΠΊΠΎΠΌΠΏΠ»Π΅ΠΌΠ΅Π½ΡΠ°ΡΠ½ΡΠ΅ Ρ Π²ΠΎΡΡΡ Π»ΠΈΠ±ΠΎ ΠΎΡΡΠ°ΡΡΡΡ ΡΠΏΠ°ΡΠ΅Π½Π½ΡΠΌΠΈ, Π»ΠΈΠ±ΠΎ Π΄Π΅Π½Π°ΡΡΡΠΈΡΡΡΡ, ΠΈ ΡΠΎΠ³Π΄Π° ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΡΡΡΡΡ ΠΎΡΠ΄Π΅Π»ΡΠ½ΡΠ΅ ΡΡΠ°Π³ΠΌΠ΅Π½ΡΡ Ρ ΠΊΠΎΡΠΎΡΠΊΠΈΠΌΠΈ ΠΎΠ΄Π½ΠΎΡΠ΅ΠΏΠΎΡΠ΅ΡΠ½ΡΠΌΠΈ Π²ΡΡΡΡΠΏΠ°ΠΌΠΈ Π½Π° 5'-ΠΊΠΎΠ½ΡΠ°Ρ . ΠΡΠΈ ΡΠΎΠΎΡΠ²Π΅ΡΡΡΠ²ΡΡΡΠΈΡ ΡΡΠ»ΠΎΠ²ΠΈΡΡ ΠΊΠΎΠΌΠΏΠ»Π΅ΠΌΠ΅Π½ΡΠ°ΡΠ½ΡΠ΅ Ρ Π²ΠΎΡΡΡ Π²ΠΎΡΡΠΎΠ΅Π΄ΠΈΠ½ΡΡΡΡΡ. ΠΠ΄Π½ΠΎΡΠ΅ΠΏΠΎΡΠ΅ΡΠ½ΡΠ΅ ΠΊΠΎΠ½ΡΡ, ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΡΡΡΠΈΠ΅ΡΡ ΠΏΡΠΈ ΡΠ°ΡΡΠ΅ΠΏΠ»Π΅Π½ΠΈΠΈ ΠΠΠ ΡΠ½Π΄ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π·ΠΎΠΉ Eco RI, ΠΏΠΎΠ»ΡΡΠΈΠ»ΠΈ Π½Π°Π·Π²Π°Π½ΠΈΠ΅ Π»ΠΈΠΏΠΊΠΈΡ , ΠΏΠΎΡΠΊΠΎΠ»ΡΠΊΡ ΠΎΠ½ΠΈ ΡΠΏΠΎΡΠΎΠ±Π½Ρ ΡΠΏΠ°ΡΠΈΠ²Π°ΡΡΡΡ Π΄ΡΡΠ³ Ρ Π΄ΡΡΠ³ΠΎΠΌ. ΠΠ°ΠΆΠ½ΡΠΌ ΡΠ»Π΅Π΄ΡΡΠ²ΠΈΠ΅ΠΌ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΡ ΡΡΡΠΏΠ΅Π½ΡΠ°ΡΡΡ ΡΠ°Π·ΡΡΠ²ΠΎΠ² ΡΠ²Π»ΡΠ΅ΡΡΡ ΡΠΎ, ΡΡΠΎ ΡΡΠ°Π³ΠΌΠ΅Π½ΡΡ, ΠΏΠΎΠ»ΡΡΠ°ΡΡΠΈΠ΅ΡΡ Π² ΡΠ΅Π·ΡΠ»ΡΡΠ°ΡΠ΅ ΠΎΠ±ΡΠ°Π±ΠΎΡΠΊΠΈ ΡΠ½Π΄ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π·ΠΎΠΉ Eco RI Π΄Π²ΡΡ ΡΠ°Π·Π½ΡΡ ΠΠΠ, ΠΌΠΎΠ³ΡΡ ΡΠΎΠ΅Π΄ΠΈΠ½ΡΡΡΡΡ Ρ ΠΏΠΎΠΌΠΎΡΡΡ Π»ΠΈΠΏΠΊΠΈΡ ΠΊΠΎΠ½ΡΠΎΠ². ΠΡΠΈ ΡΡΠΎΠΌ ΡΠ°Π·Π»ΠΈΡΠΈΡ, Π·Π°ΡΡΠ°Π³ΠΈΠ²Π°ΡΡΠΈΠ΅ Π΄Π²ΡΡ ΡΠ΅ΠΏΠΎΡΠ΅ΡΠ½ΡΠ΅ ΡΠΏΠΈΡΠ°Π»ΡΠ½ΡΠ΅ ΡΠ΅Π³ΠΌΠ΅Π½ΡΡ ΡΠΊΠ°Π·Π°Π½Π½ΡΡ ΠΠΠ, Π½Π° ΠΏΡΠΎΡΠ΅ΡΡ ΡΠΎΠ΅Π΄ΠΈΠ½Π΅Π½ΠΈΡ Π½Π΅ Π²Π»ΠΈΡΡΡ.
Π€Π΅ΡΠΌΠ΅Π½Ρ. Π ΠΎΡΠ»ΠΈΡΠΈΠ΅ ΠΎΡ ΡΠ΅ΡΡΡΠΈΠΊΡΠΈΡΡΡΡΠΈΡ ΡΠ½Π΄ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π· ΡΠΈΠΏΠΎΠ² I ΠΈ III ΡΠ΅ΡΠΌΠ΅Π½ΡΡ ΡΠΈΠΏΠ° II, ΠΏΠΎΠ΄ΠΎΠ±Π½ΡΠ΅ Eco RI, Π½Π΅ ΠΊΠ°ΡΠ°Π»ΠΈΠ·ΠΈΡΡΡΡ ΠΌΠ΅ΡΠΈΠ»ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΡ. ΠΠ΅ΡΠΈΠ»Π°Π·Π½ΡΡ Π°ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎΡΡΡ ΠΏΡΠΎΡΠ²Π»ΡΠ΅Ρ Π΄ΡΡΠ³ΠΎΠΉ Π±Π΅Π»ΠΎΠΊ. ΠΠΊΡΠΈΠ²Π½Π°Ρ ΡΠ½Π΄ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π·Π° Eco RI ΠΏΡΠ΅Π΄ΡΡΠ°Π²Π»ΡΠ΅Ρ ΡΠΎΠ±ΠΎΠΉ Π΄ΠΈΠΌΠ΅Ρ, ΡΠΎΡΡΠΎΡΡΠΈΠΉ ΠΈΠ· Π΄Π²ΡΡ ΠΈΠ΄Π΅Π½ΡΠΈΡΠ½ΡΡ ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠΏΠ΅ΠΏΡΠΈΠ΄Π½ΡΡ ΡΠ΅ΠΏΠ΅ΠΉ Ρ ΠΌΠΎΠ». ΠΌΠ°ΡΡΠΎΠΉ 31 000. ΠΡΡ ΠΎΠ΄Ρ ΠΈΠ· Π³ΠΎΠΌΠΎΠ΄ΠΈΠΌΠ΅ΡΠ½ΠΎΠΉ ΡΡΡΡΠΊΡΡΡΡ ΠΌΠΎΠΆΠ½ΠΎ Π±ΡΠ»ΠΎ Π±Ρ ΠΎΠΆΠΈΠ΄Π°ΡΡ, ΡΡΠΎ ΡΠ΅ΡΠΌΠ΅Π½Ρ Π±ΡΠ΄Π΅Ρ Π΄Π΅ΠΉΡΡΠ²ΠΎΠ²Π°ΡΡ ΡΠΈΠΌΠΌΠ΅ΡΡΠΈΡΠ½ΠΎ Π½Π° ΠΈΠ΄Π΅Π½ΡΠΈΡΠ½ΡΠ΅ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΠΈ Π΄Π²ΡΡ ΡΠ°ΡΡΠ΅ΠΉ ΡΠ°ΠΉΡΠ° ΡΠ·Π½Π°Π²Π°Π½ΠΈΡ ΠΈ ΡΠ°Π·ΡΠ΅Π·Π°ΡΡ ΠΎΠ±Π΅ ΡΠ΅ΠΏΠΈ ΠΎΠ΄Π½ΠΎΠ²ΡΠ΅ΠΌΠ΅Π½Π½ΠΎ. ΠΠ΄Π½Π°ΠΊΠΎ Π½Π° ΡΠ°ΠΌΠΎΠΌ Π΄Π΅Π»Π΅ Π³ΠΈΠ΄ΡΠΎΠ»ΠΈΠ· ΠΏΡΠΎΠΈΡΡ ΠΎΠ΄ΠΈΡ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎ.
ΠΠ΅Π»ΠΎΠΊ Π²Π·Π°ΠΈΠΌΠΎΠ΄Π΅ΠΉΡΡΠ²ΡΠ΅Ρ Ρ ΡΡΠ°ΡΡΠΊΠΎΠΌ ΠΎΠΊΠΎΠ»ΠΎ Π΄Π΅ΡΡΡΠΈ ΠΏΠ°Ρ ΠΎΡΠ½ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠΉ; ΡΠ΅ΡΡΡ ΠΈΠ· Π½ΠΈΡ Π½Π°Ρ ΠΎΠ΄ΡΡΡΡ Π² ΠΏΡΠ΅Π΄Π΅Π»Π°Ρ ΡΠ°ΠΉΡΠ° ΡΠ·Π½Π°Π²Π°Π½ΠΈΡ, ΠΎΡΡΠ°Π»ΡΠ½ΡΠ΅ ΡΠ²Π»ΡΡΡΡΡ ΡΠ»Π°Π½ΠΊΠΈΡΡΡΡΠΈΠΌΠΈ. ΠΠΌΠ΅Π½Π½ΠΎ ΡΡΠΈ ΡΠ»Π°Π½ΠΊΠΈΡΡΡΡΠΈΠ΅ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΠΈ, ΠΏΠΎ-Π²ΠΈΠ΄ΠΈΠΌΠΎΠΌΡ, ΠΎΠΏΡΠ΅Π΄Π΅Π»ΡΡΡ Π²ΡΠ±ΠΎΡ ΡΠ΅ΠΏΠΈ, ΠΊΠΎΡΠΎΡΠ°Ρ Π±ΡΠ΄Π΅Ρ ΡΠ°Π·ΡΠ΅Π·Π°Π½Π° ΠΏΠ΅ΡΠ²ΠΎΠΉ. ΠΡΠΎΠΌΠ΅ ΡΠΎΠ³ΠΎ, ΡΠ»Π°Π½ΠΊΠΈΡΡΡΡΠΈΠ΅ ΠΏΠ°ΡΡ ΠΎΡΠ½ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠΉ Π²Π»ΠΈΡΡΡ Π½Π° ΠΎΠ±ΡΡΡ ΡΠΊΠΎΡΠΎΡΡΡ ΡΠ°Π·ΡΠ΅Π·Π°Π½ΠΈΡ Π² Π΄Π°Π½Π½ΠΎΠΌ ΡΠ°ΠΉΡΠ΅ ΡΠ·Π½Π°Π²Π°Π½ΠΈΡ, ΡΠ°ΠΊ ΡΡΠΎ Π² ΡΠ°Π·Π½ΡΡ ΡΠ°ΠΉΡΠ°Ρ ΠΎΠ΄Π½ΠΎΠΉ ΠΌΠΎΠ»Π΅ΠΊΡΠ»Ρ ΠΠΠ Π³ΠΈΠ΄ΡΠΎΠ»ΠΈΠ· ΠΎΡΡΡΠ΅ΡΡΠ²Π»ΡΠ΅ΡΡΡ Ρ ΡΠ°Π·Π½ΠΎΠΉ ΡΠΊΠΎΡΠΎΡΡΡΡ. ΠΡΠ»ΠΈ ΠΏΠΎΠ»ΡΡΠ΅Π½Ρ ΠΊΡΠΈΡΡΠ°Π»Π»Ρ ΠΊΠΎΠΌΠΏΠ»Π΅ΠΊΡΠ° Eco RI ΠΈ ΠΎΠ»ΠΈΠ³ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄Π° 5'-TCGCGAATTCGCG3' ΠΈ ΠΏΡΠΎΠ²Π΅Π΄Π΅Π½ ΠΈΡ ΡΠ΅Π½ΡΠ³Π΅Π½ΠΎΡΡΡΡΠΊΡΡΡΠ½ΡΠΉ Π°Π½Π°Π»ΠΈΠ·. ΠΡΠΎ ΠΏΠΎΠ·Π²ΠΎΠ»ΠΈΠ»ΠΎ Π² Π΄Π΅ΡΠ°Π»ΡΡ Π²ΡΡΡΠ½ΠΈΡΡ ΡΠΏΠΎΡΠΎΠ± Π²Π·Π°ΠΈΠΌΠΎΠ΄Π΅ΠΉΡΡΠ²ΠΈΡ Π΄Π°Π½Π½ΠΎΠ³ΠΎ ΡΠ΅ΡΠΌΠ΅Π½ΡΠ° ΠΈ ΠΠΠ. ΠΡΠ»ΠΎ ΡΡΡΠ°Π½ΠΎΠ²Π»Π΅Π½ΠΎ, ΡΡΠΎ ΠΌΠ΅ΠΆΠ΄Ρ Π΄Π²ΡΠΌΡ ΠΎΡΡΠ°ΡΠΊΠ°ΠΌΠΈ Π°ΡΠ³ΠΈΠ½ΠΈΠ½Π° ΠΈ ΠΎΠ΄Π½ΠΈΠΌ Π³Π»ΡΡΠ°ΠΌΠ°ΡΠΎΠΌ, Ρ ΠΎΠ΄Π½ΠΎΠΉ ΡΡΠΎΡΠΎΠ½Ρ, ΠΈ ΠΏΠ°ΡΠ°ΠΌΠΈ ΠΎΡΠ½ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠΉ Π² ΡΠ°ΠΉΡΠ΅ ΡΠ·Π½Π°Π²Π°Π½ΠΈΡ _ Ρ Π΄ΡΡΠ³ΠΎΠΉ, ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΡΡΡΡΡ Π²ΠΎΠ΄ΠΎΡΠΎΠ΄Π½ΡΠ΅ ΡΠ²ΡΠ·ΠΈ, Π² ΡΠ΅Π·ΡΠ»ΡΡΠ°ΡΠ΅ ΡΠ΅Π³ΠΎ ΠΏΡΠΎΠΈΡΡ ΠΎΠ΄ΠΈΡ ΡΠ°ΡΡΠΈΡΠ½ΠΎΠ΅ ΡΠ°ΡΠΊΡΡΡΠΈΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ Π-ΠΠΠ. Π ΡΠ²ΠΎΠΉΡΡΠ²Π°Ρ Π΄ΡΡΠ³ΠΈΡ ΡΠ΅ΡΡΡΠΈΠΊΡΠΈΡΡΡΡΠΈΡ ΡΠ½Π΄ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π· ΡΠΈΠΏΠ° II ΠΈΠ·Π²Π΅ΡΡΠ½ΠΎ Π·Π½Π°ΡΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎ ΠΌΠ΅Π½ΡΡΠ΅, Π½ΠΎ, ΠΏΠΎ-Π²ΠΈΠ΄ΠΈΠΌΠΎΠΌΡ, ΠΎΠ½ΠΈ Π°Π½Π°Π»ΠΎΠ³ΠΈΡΠ½Ρ ΡΠ²ΠΎΠΉΡΡΠ²Π°ΠΌ Eco RI.
Π². Π Π°Π·Π»ΠΈΡΠ½ΡΠ΅ Π³ΡΡΠΏΠΏΡ ΡΠ΅ΡΡΡΠΈΠΊΡΠΈΡΡΡΡΠΈΡ ΡΠ½Π΄ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π· ΡΠΈΠΏΠ° II
ΠΠΎΠ»ΡΡΠΎΠΉ ΠΊΠ°ΡΠ°Π»ΠΎΠ³ ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠ²ΠΎΠ². Π£ Π²ΡΠ΅Ρ ΡΠ΅ΡΠΌΠ΅Π½ΡΠΎΠ² ΠΎΠ±Π½Π°ΡΡΠΆΠ΅Π½ΠΎ ΠΎΠΊΠΎΠ»ΠΎ 90 ΡΠ°Π·Π½ΡΡ ΡΠ°ΠΉΡΠΎΠ² ΡΠ·Π½Π°Π²Π°Π½ΠΈΡ. ΠΠ°ΠΆΠ΄ΡΠΉ ΠΈΠ· ΡΠ΅ΡΠΌΠ΅Π½ΡΠΎΠ² ΠΏΠΎΠ»ΡΡΠ΅Π½ ΠΈΠ· ΠΎΠΏΡΠ΅Π΄Π΅Π»Π΅Π½Π½ΠΎΠ³ΠΎ ΠΏΡΠΎΠΊΠ°ΡΠΈΠΎΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΎΠ³ΠΎ ΠΎΡΠ³Π°Π½ΠΈΠ·ΠΌΠ°, ΡΡΠΎ ΠΈ ΠΎΡΡΠ°ΠΆΠ΅Π½ΠΎ Π² Π΅Π³ΠΎ Π½Π°Π·Π²Π°Π½ΠΈΠΈ. Π’Π°ΠΊ, Eco RI Π²Π΅Π΄Π΅Ρ ΡΠ²ΠΎΠ΅ ΠΏΡΠΎΠΈΡΡ ΠΎΠΆΠ΄Π΅Π½ΠΈΠ΅ ΠΈΠ· ΡΡΠ°ΠΌΠΌΠ° Escherichia coli Π12; Hae II ΠΈ HaeIII — ΠΈΠ· Haemophilus aegyptius; Bam HI — ΠΈΠ· Bacillus amyloliquefaciens ΡΡΠ°ΠΌΠΌΠ° H; Mbo I ΠΈ Mbo II — ΠΈΠ· Moraxella bovis ΠΈ Ρ. Π΄. ΠΠ²Π° ΡΠ°Π·Π½ΡΡ ΡΠ΅ΡΠΌΠ΅Π½ΡΠ°, ΠΈΠΌΠ΅ΡΡΠΈΠ΅ ΠΎΠ΄ΠΈΠ½Π°ΠΊΠΎΠ²ΡΠ΅ ΡΠ°ΠΉΡΡ ΡΠ·Π½Π°Π²Π°Π½ΠΈΡ, Π½Π°Π·ΡΠ²Π°ΡΡΡΡ ΠΈΠ·ΠΎΡΠΈΠ·ΠΎΠΌΠ΅ΡΠ°ΠΌΠΈ. ΠΠ΄Π½Π°ΠΊΠΎ ΠΈΠ·ΠΎΡΠΈΠ·ΠΎΠΌΠ΅ΡΡ Π½Π΅ ΠΎΠ±ΡΠ·Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎ Π΄Π΅Π»Π°ΡΡ ΡΠ°Π·ΡΠ΅Π· Π² ΠΎΠ΄Π½ΠΎΠΌ ΠΈ ΡΠΎΠΌ ΠΆΠ΅ ΠΌΠ΅ΡΡΠ΅; ΡΡΠ°Π²Π½ΠΈΡΠ΅, Π½Π°ΠΏΡΠΈΠΌΠ΅Ρ, Xma I ΠΈ Sma I.
ΠΠ°Π»ΠΈΠ½Π΄ΡΠΎΠΌΠ½ΡΠ΅ ΡΠ°ΠΉΡΡ ΡΠ·Π½Π°Π²Π°Π½ΠΈΡ ΠΈ ΡΠ°Π·ΡΠ΅Π·Π°Π½ΠΈΡ. ΠΠ½Π΄ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π·Π° Eco RI — ΠΎΠ΄Π½Π° ΠΈΠ· ΠΌΠ½ΠΎΠ³ΠΈΡ ΡΠ΅ΡΡΡΠΈΠΊΡΠΈΡΡΡΡΠΈΡ ΡΠ½Π΄ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π· ΡΠΈΠΏΠ° II, ΠΊΠΎΡΠΎΡΡΠ΅ ΡΠ·Π½Π°ΡΡ ΡΠ°Π·Π»ΠΈΡΠ½ΡΠ΅ ΠΏΠ°Π»ΠΈΠ½Π΄ΡΠΎΠΌΠ½ΡΠ΅ Π½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄Π½ΡΠ΅ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΠΈ ΠΈ Π΄Π΅Π»Π°ΡΡ ΡΠ°Π·ΡΠ΅Π·Ρ, Π² ΡΠ΅Π·ΡΠ»ΡΡΠ°ΡΠ΅ ΡΠ΅Π³ΠΎ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΡΡΡΡΡ ΡΡΠ°Π³ΠΌΠ΅Π½ΡΡ Ρ ΠΊΠΎΠΌΠΏΠ»Π΅ΠΌΠ΅Π½ΡΠ°ΡΠ½ΡΠΌΠΈ ΠΎΠ΄Π½ΠΎΡΠ΅ΠΏΠΎΡΠ΅ΡΠ½ΡΠΌΠΈ Ρ Π²ΠΎΡΡΠ°ΠΌΠΈ. Π ΠΏΡΠ΅Π΄Π΅Π»Π°Ρ ΡΡΠΎΠΉ Π³ΡΡΠΏΠΏΡ ΠΌΠΎΠΆΠ½ΠΎ Π²ΡΠ΄Π΅Π»ΠΈΡΡ Π½Π΅ΡΠΊΠΎΠ»ΡΠΊΠΎ ΡΠ°Π·Π½ΠΎΠ²ΠΈΠ΄Π½ΠΎΡΡΠ΅ΠΉ ΡΠ΅ΡΠΌΠ΅Π½ΡΠΎΠ². ΠΠ°ΠΏΡΠΈΠΌΠ΅Ρ, Eco RI, Hind III ΠΈ Π½Π΅ΠΊΠΎΡΠΎΡΡΠ΅ Π΄ΡΡΠ³ΠΈΠ΅ ΡΠ½Π΄ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π·Ρ ΡΠ·Π½Π°ΡΡ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΠΈ ΠΈΠ· ΡΠ΅ΡΡΠΈ ΠΏΠ°Ρ ΠΎΡΠ½ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠΉ; ΡΠ½Π΄ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π·Π° Hinf I ΡΠ·Π½Π°Π΅Ρ ΠΏΡΡΡ ΠΏΠ°Ρ ΠΎΡΠ½ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠΉ, ΠΈΠ· ΠΊΠΎΡΠΎΡΡΡ ΡΠ΅Π½ΡΡΠ°Π»ΡΠ½ΡΠΌ ΠΎΡΡΠ°ΡΠΊΠΎΠΌ ΠΌΠΎΠΆΠ΅Ρ Π±ΡΡΡ Π»ΡΠ±ΠΎΠΉ ΠΈΠ· ΡΠ΅ΡΡΡΠ΅Ρ Π½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄ΠΎΠ². ΠΠ΄Π½ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π·Π° Bgl I ΡΠ·Π½Π°Π΅Ρ ΡΠ΅ΡΡΡ ΡΠΏΠ΅ΡΠΈΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈΡ Π½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄Π½ΡΡ ΠΎΡΡΠ°ΡΠΊΠΎΠ², Π½ΠΎ ΠΎΠ½ΠΈ Π΄ΠΎΠ»ΠΆΠ½Ρ Π±ΡΡΡ ΡΠ°Π·Π΄Π΅Π»Π΅Π½Ρ Π² ΡΠ΅ΡΠ΅Π΄ΠΈΠ½Π΅ Π»ΡΠ±ΡΠΌΠΈ Π΄ΡΡΠ³ΠΈΠΌΠΈ ΠΏΡΡΡΡ ΠΏΠ°ΡΠ°ΠΌΠΈ ΠΎΡΠ½ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠΉ. ΠΠ½Π΄ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π·Π° Not I ΠΈΠΌΠ΅Π΅Ρ ΡΠ°ΠΉΡ ΡΠ·Π½Π°Π²Π°Π½ΠΈΡ ΠΏΡΠΎΡΡΠΆΠ΅Π½Π½ΠΎΡΡΡΡ Π²ΠΎΡΠ΅ΠΌΡ ΠΏΠ°Ρ ΠΎΡΠ½ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠΉ; ΡΠ°ΠΊΠΈΠ΅ ΡΠ΅ΡΠΌΠ΅Π½ΡΡ, ΠΊΠ°ΠΊ Taq I ΠΈ Mbo I, ΠΈΠΌΠ΅ΡΡ ΡΠ°ΠΉΡΡ ΡΠ·Π½Π°Π²Π°Π½ΠΈΡ ΠΈΠ· ΡΠ΅ΡΡΡΠ΅Ρ Π½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄ΠΎΠ². ΠΡΡΠ³Π°Ρ ΠΈΠ·Π²Π΅ΡΡΠ½Π°Ρ ΠΎΡΠΎΠ±Π΅Π½Π½ΠΎΡΡΡ ΠΊΠ°ΡΠ°Π΅ΡΡΡ ΡΠ²ΠΎΠΉΡΡΠ² ΠΎΠ΄Π½ΠΎΡΠ΅ΠΏΠΎΡΠ΅ΡΠ½ΡΡ ΠΊΠΎΠ½ΡΠΎΠ², ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΡΡΡΠΈΡ ΡΡ ΠΏΡΠΈ Π΄Π΅ΠΉΡΡΠ²ΠΈΠΈ ΡΠ°Π·Π»ΠΈΡΠ½ΡΡ ΡΠ΅ΡΡΡΠΈΠΊΡΠΈΡΡΡΡΠΈΡ ΡΠ½Π΄ΠΎΠ½ΡΠΊ-Π»Π΅Π°Π·. ΠΠ½Π΄ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π·Ρ Eco RI, Hind III, Mbo I ΠΈ ΠΠ° I ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΡΡΡ ΠΎΠ΄Π½ΠΎΡΠ΅ΠΏΠΎΡΠ΅ΡΠ½ΡΠ΅ Ρ Π²ΠΎΡΡΡ, ΡΠΎΡΡΠΎΡΡΠΈΠ΅ ΠΈΠ· 5'-ΠΊΠΎΠ½ΡΠ΅Π²ΡΡ ΠΎΡΡΠ°ΡΠΊΠΎΠ² ΠΊΠ°ΠΆΠ΄ΠΎΠΉ ΡΠ΅ΠΏΠΈ, Π° ΡΠ½Π΄ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π·Ρ Pst I ΠΈ Hae II — ΠΈΠ· 3'-ΠΎΡΡΠ°ΡΠΊΠΎΠ².
ΠΠ½Π΄ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π·Ρ, ΠΈΠΌΠ΅ΡΡΠΈΠ΅ ΡΠ°Π·Π»ΠΈΡΠ½ΡΠ΅ ΡΠ°ΠΉΡΡ ΡΠ·Π½Π°Π²Π°Π½ΠΈΡ ΠΈ ΡΠ°Π·ΡΠ΅Π·Π°Π½ΠΈΡ, ΡΠ°ΡΡΠΎ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΡΡΡ ΠΈΠ΄Π΅Π½ΡΠΈΡΠ½ΡΠ΅ Π»ΠΈΠΏΠΊΠΈΠ΅ ΠΊΠΎΠ½ΡΡ. ΠΠ°ΠΏΡΠΈΠΌΠ΅Ρ, ΠΏΠΎΠ΄ Π΄Π΅ΠΉΡΡΠ²ΠΈΠ΅ΠΌ ΡΠ½Π΄ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π· Mbo I, Bcl I ΠΈ Bam HI ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΡΡΡΡΡ 5'-ΠΊΠΎΠ½ΡΠ΅Π²ΡΠ΅ 5'-GATC3'. Π ΡΠ΅Π·ΡΠ»ΡΡΠ°ΡΠ΅ ΡΡΠ°Π³ΠΌΠ΅Π½ΡΡ, ΠΏΠΎΠ»ΡΡΠ°ΡΡΠΈΠ΅ΡΡ ΠΏΡΠΈ ΡΠ°ΡΡΠ΅ΠΏΠ»Π΅Π½ΠΈΠΈ Π΄Π°Π½Π½ΠΎΠΉ ΠΠΠ Π»ΡΠ±ΡΠΌ ΠΈΠ· ΡΡΠΈΡ ΡΠ΅ΡΠΌΠ΅Π½ΡΠΎΠ², ΠΏΡΠΈ ΡΠΌΠ΅ΡΠΈΠ²Π°Π½ΠΈΠΈ ΠΈ ΠΎΡΠΆΠΈΠ³Π΅ Π±ΡΠ΄ΡΡ ΡΠΎΠ΅Π΄ΠΈΠ½ΡΡΡΡΡ Π΄ΡΡΠ³ Ρ Π΄ΡΡΠ³ΠΎΠΌ. ΠΠ΄Π½Π°ΠΊΠΎ ΡΡΠ°Π³ΠΌΠ΅Π½ΡΡ, ΠΏΠΎΠ»ΡΡΠ°ΡΡΠΈΠ΅ΡΡ ΠΈΠ· ΡΠ°Π·Π»ΠΈΡΠ½ΡΡ ΠΠΠ ΠΏΡΠΈ ΡΠ°Π·ΡΠ΅Π·Π°Π½ΠΈΠΈ ΡΠ½Π΄ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π·ΠΎΠΉ Bgl I, Π²ΡΡΠ΄ Π»ΠΈ Π±ΡΠ΄ΡΡ ΡΠΎΠ΅Π΄ΠΈΠ½ΡΡΡΡΡ ΠΏΡΠΈ ΠΎΡΠΆΠΈΠ³Π΅, ΠΏΠΎΡΠΊΠΎΠ»ΡΠΊΡ ΠΎΠ΄Π½ΠΎΡΠ΅ΠΏΠΎΡΠ΅ΡΠ½ΡΠ΅ Ρ Π²ΠΎΡΡΡ ΠΌΠΎΠ³ΡΡ ΡΠΎΠ΄Π΅ΡΠΆΠ°ΡΡ Π»ΡΠ±ΡΡ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΡ ΠΈΠ· ΡΡΠ΅Ρ Π½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄ΠΎΠ².
ΠΡΡΠ³ΠΈΠ΅ ΡΠ΅ΡΡΡΠΈΠΊΡΠΈΡΡΡΡΠΈΠ΅ ΡΠ½Π΄ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π·Ρ ΡΠΈΠΏΠ° II ΡΠ°ΠΊΠΆΠ΅ ΡΠ·Π½Π°ΡΡ ΡΠΏΠ΅ΡΠΈΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈΠ΅ ΠΏΠ°Π»ΠΈΠ½Π΄ΡΠΎΠΌΠ½ΡΠ΅ Π½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄Π½ΡΠ΅ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΠΈ, Π½ΠΎ ΡΠ°Π·ΡΠ΅Π·Π°ΡΡ ΡΠΎΡΡΠΎΠ΄ΠΈΡΡΠΈΡΠ½ΡΠΉ ΠΌΠΎΡΡΠΈΠΊ Π² ΡΠ΅ΡΠ΅Π΄ΠΈΠ½Π΅ ΡΠ·Π½Π°Π²Π°Π΅ΠΌΠΎΠΉ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΠΈ, Π² ΡΠ΅Π·ΡΠ»ΡΡΠ°ΡΠ΅ ΡΠ΅Π³ΠΎ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΡΡΡΡΡ ΡΡΠ°Π³ΠΌΠ΅Π½ΡΡ ΠΠΠ Ρ ΡΡΠΏΡΠΌΠΈ Π΄Π²ΡΡ ΡΠ΅ΠΏΠΎΡΠ΅ΡΠ½ΡΠΌΠΈ ΠΊΠΎΠ½ΡΠ°ΠΌΠΈ.
ΠΠ΅ΠΏΠ°Π»ΠΈΠ½Π΄ΡΠΎΠΌΠ½ΡΠ΅ ΡΠ°ΠΉΡΡ ΡΠ·Π½Π°Π²Π°Π½ΠΈΡ Ρ ΡΠ°Π·ΡΠ΅Π·Π°Π½ΠΈΠ΅ΠΌ Π½Π° Π½Π΅ΠΊΠΎΡΠΎΡΠΎΠΌ ΡΠ°ΡΡΡΠΎΡΠ½ΠΈΠΈ ΠΎΡ Π½ΠΈΡ . Π€Π΅ΡΠΌΠ΅Π½ΡΡ ΡΠΈΠΏΠ° II, Π½ΠΎ Π΄ΡΡΠ³ΠΎΠΉ ΡΠ°Π·Π½ΠΎΠ²ΠΈΠ΄Π½ΠΎΡΡΠΈ ΡΠΎΠΆΠ΅ ΡΠ·Π½Π°ΡΡ ΡΠΏΠ΅ΡΠΈΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈΠ΅ Π½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄Π½ΡΠ΅ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΠΈ, Π½ΠΎ Π³ΠΈΠ΄ΡΠΎΠ»ΠΈΠ·ΡΡΡ ΡΠΎΡΡΠΎΠ΄ΠΈΡΡΠΈΡΠ½ΡΠ΅ ΠΌΠΎΡΡΠΈΠΊΠΈ Π²Π½Π΅ ΡΡΠΈΡ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΠ΅ΠΉ. ΠΡΠΈ ΡΡΠΎΠΌ ΡΠ·Π½Π°Π²Π°Π΅ΠΌΠ°Ρ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΡ Π½Π΅ ΡΠ²Π»ΡΠ΅ΡΡΡ ΠΏΠ°Π»ΠΈΠ½Π΄ΡΠΎΠΌΠΎΠΌ. Π ΡΡΠΈΡ ΡΠ»ΡΡΠ°ΡΡ ΡΠ΅ΡΡΡΠΈΠΊΡΠΈΡΡΡΡΠΈΠ΅ ΡΠ½Π΄ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π·Ρ, ΠΏΠΎ-Π²ΠΈΠ΄ΠΈΠΌΠΎΠΌΡ, «ΠΎΡΡΡΠΈΡΡΠ²Π°ΡΡ» ΡΠΎΡΠ½ΠΎΠ΅ ΡΠΈΡΠ»ΠΎ ΠΏΠ°Ρ ΠΎΡΠ½ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠΉ ΠΎΡ ΡΠ·Π½Π°Π²Π°Π΅ΠΌΠΎΠΉ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΠΈ ΠΈ Π·Π°ΡΠ΅ΠΌ ΡΠ°Π·ΡΠ΅Π·Π°ΡΡ ΡΠ΅ΠΏΠΈ. ΠΠ΅Ρ Π°Π½ΠΈΠ·ΠΌ ΠΎΡΡΡΠ΅ΡΠ° ΡΠ°ΠΊΠΎΠ², ΡΡΠΎ ΠΌΠ΅ΡΡΠ° Π³ΠΈΠ΄ΡΠΎΠ»ΠΈΠ·Π° ΡΠ°Π·Π½ΡΡ ΡΠ΅ΠΏΠ΅ΠΉ ΡΠΌΠ΅ΡΠ΅Π½Ρ ΠΎΠ΄Π½ΠΎ ΠΎΡΠ½ΠΎΡΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎ Π΄ΡΡΠ³ΠΎΠ³ΠΎ Π½Π° ΠΎΠ΄ΠΈΠ½ Π½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄. Π ΡΠ΅Π·ΡΠ»ΡΡΠ°ΡΠ΅ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΡΡΡΡΡ ΡΡΠ°Π³ΠΌΠ΅Π½ΡΡ ΠΠΠ Ρ ΠΎΠ΄Π½ΠΎΡΠ΅ΠΏΠΎΡΠ΅ΡΠ½ΡΠΌΠΈ Π²ΡΡΡΡΠΏΠ°ΠΌΠΈ Π΄Π»ΠΈΠ½ΠΎΠΉ ΡΠΎΠ»ΡΠΊΠΎ Π² ΠΎΠ΄ΠΈΠ½ Π½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄Π½ΡΠΉ ΠΎΡΡΠ°ΡΠΎΠΊ.
Π³. ΠΠ°ΡΡΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ ΡΠ΅Π³ΠΌΠ΅Π½ΡΠΎΠ² ΠΠΠ Ρ ΠΏΠΎΠΌΠΎΡΡΡ ΡΠ΅ΡΡΡΠΈΠΊΡΠΈΡΡΡΡΠΈΡ ΡΠ½Π΄ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π· ΡΠΈΠΏΠ° II
Π‘ ΠΏΠΎΠΌΠΎΡΡΡ ΡΠ΅ΡΡΡΠΈΠΊΡΠΈΡΡΡΡΠΈΡ ΡΠ½Π΄ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π· ΠΌΠΎΠΆΠ½ΠΎ ΡΠ°Π·ΡΠ΅Π·Π°ΡΡ ΡΠ»ΠΎΠΆΠ½ΡΠ΅ Π³Π΅Π½ΠΎΠΌΡ ΠΈΠ»ΠΈ Π΄Π»ΠΈΠ½Π½ΡΠ΅ ΡΠ΅Π³ΠΌΠ΅Π½ΡΡ ΠΠΠ Π½Π° Π²ΠΎΡΠΏΡΠΎΠΈΠ·Π²ΠΎΠ΄ΠΈΠΌΡΠ΅ Π½Π°Π±ΠΎΡΡ Π±ΠΎΠ»Π΅Π΅ ΠΌΠ΅Π»ΠΊΠΈΡ Π΅Π΄ΠΈΠ½ΠΈΡ. Π ΡΠ²ΠΎΡ ΠΎΡΠ΅ΡΠ΅Π΄Ρ ΡΠ°ΠΊΠΈΠ΅ Π΅Π΄ΠΈΠ½ΠΈΡΡ ΠΌΠΎΠΆΠ½ΠΎ ΡΠ°Π·Π΄Π΅Π»ΠΈΡΡ ΠΏΠΎ ΡΠ°Π·ΠΌΠ΅ΡΠ°ΠΌ Ρ ΠΏΠΎΠΌΠΎΡΡΡ Π½Π΅ΡΠΊΠΎΠ»ΡΠΊΠΈΡ ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄ΠΎΠ². Π§Π°ΡΠ΅ Π²ΡΠ΅Π³ΠΎ Π΄Π»Ρ ΡΡΠΎΠ³ΠΎ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΡΡΡ ΡΠ»Π΅ΠΊΡΡΠΎΡΠΎΡΠ΅Π· ΡΡΠ°Π³ΠΌΠ΅Π½ΡΠΎΠ² ΠΠΠ Π² ΠΏΠΎΠ»ΡΠΆΠΈΠ΄ΠΊΠΎΠΌ Π³Π΅Π»Π΅, ΠΏΡΠΈΠ³ΠΎΡΠΎΠ²Π»Π΅Π½Π½ΠΎΠΌ Π½Π° ΠΎΡΠ½ΠΎΠ²Π΅ Π°Π³Π°ΡΠΎΠ·Ρ ΠΈΠ»ΠΈ ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠ°ΠΊΡΠΈΠ»Π°ΠΌΠΈΠ΄Π°. ΠΠ±ΡΡΠ½ΠΎ ΠΏΠΎΠ΄Π²ΠΈΠΆΠ½ΠΎΡΡΡ Π΄Π²ΡΡ ΡΠ΅ΠΏΠΎΡΠ΅ΡΠ½ΠΎΠ³ΠΎ ΡΡΠ°Π³ΠΌΠ΅Π½ΡΠ° Π² ΡΠ»Π΅ΠΊΡΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΎΠΌ ΠΏΠΎΠ»Π΅ ΠΎΠ±ΡΠ°ΡΠ½ΠΎ ΠΏΡΠΎΠΏΠΎΡΡΠΈΠΎΠ½Π°Π»ΡΠ½Π° Π»ΠΎΠ³Π°ΡΠΈΡΠΌΡ Π΅Π³ΠΎ ΡΠ°Π·ΠΌΠ΅ΡΠ°. ΠΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΡΡ Π² ΠΊΠ°ΡΠ΅ΡΡΠ²Π΅ ΠΌΠ°ΡΠΊΠ΅ΡΠΎΠ² ΡΡΠ°Π³ΠΌΠ΅Π½ΡΡ ΠΈΠ·Π²Π΅ΡΡΠ½ΠΎΠΉ Π΄Π»ΠΈΠ½Ρ, Π»Π΅Π³ΠΊΠΎ ΠΎΠΏΡΠ΅Π΄Π΅Π»ΠΈΡΡ ΡΠ°Π·ΠΌΠ΅Ρ ΠΈΠ½ΡΠ΅ΡΠ΅ΡΡΡΡΠ΅Π³ΠΎ Π½Π°Ρ ΡΡΠ°Π³ΠΌΠ΅Π½ΡΠ° Ρ ΠΏΠΎΠΌΠΎΡΡΡ Π»ΠΈΠ½Π΅ΠΉΠΊΠΈ ΠΈ ΠΏΡΠΎΡΡΠΎΠ³ΠΎ Π³ΡΠ°ΡΠΈΠΊΠ°. ΠΠ»Ρ ΠΏΡΠΎΠ²Π΅Π΄Π΅Π½ΠΈΡ ΡΠ°ΠΊΠΎΠ³ΠΎ Π°Π½Π°Π»ΠΈΠ·Π° ΠΎΠ±ΡΡΠ½ΠΎ Π΄ΠΎΡΡΠ°ΡΠΎΡΠ½ΠΎ ΠΌΠ΅Π½Π΅Π΅ 1 ΠΌΠΊΠ³ ΠΠΠ, ΠΏΠΎΡΠΊΠΎΠ»ΡΠΊΡ ΡΡΠ°Π³ΠΌΠ΅Π½ΡΡ Π»Π΅Π³ΠΊΠΎ Π²ΡΡΠ²Π»ΡΡΡΡΡ ΠΏΡΠΈ ΠΎΠΊΡΠ°ΡΠΈΠ²Π°Π½ΠΈΠΈ ΡΠΎΠΎΡΠ²Π΅ΡΡΡΠ²ΡΡΡΠΈΠΌ ΠΊΡΠ°ΡΠΈΡΠ΅Π»Π΅ΠΌ, Π½Π°ΠΏΡΠΈΠΌΠ΅Ρ Π±ΡΠΎΠΌΠΈΡΡΡΠΌ ΡΡΠΈΠ΄ΠΈΠ΅ΠΌ.
ΠΠ°Π±ΠΎΡ ΡΡΠ°Π³ΠΌΠ΅Π½ΡΠΎΠ², ΠΏΠΎΠ»ΡΡΠ°ΡΡΠΈΡ ΡΡ ΠΏΡΠΈ ΡΠ°ΡΡΠ΅ΠΏΠ»Π΅Π½ΠΈΠΈ ΠΠΠ ΠΎΠΏΡΠ΅Π΄Π΅Π»Π΅Π½Π½ΠΎΠΉ ΡΠ΅ΡΡΡΠΈΠΊΡΠΈΡΡΡΡΠ΅ΠΉ ΡΠ½Π΄ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π·ΠΎΠΉ, ΡΠ²Π»ΡΠ΅ΡΡΡ ΡΠ²ΠΎΠ΅ΠΎΠ±ΡΠ°Π·Π½ΡΠΌ «ΠΎΡΠΏΠ΅ΡΠ°ΡΠΊΠΎΠΌ ΠΏΠ°Π»ΡΡΠ΅Π²» ΡΡΠΎΠΉ ΠΠΠ. ΠΠΏΡΠ΅Π΄Π΅Π»ΡΡ, ΠΊΠ°ΠΊΠΈΠ΅ ΡΡΠ°Π³ΠΌΠ΅Π½ΡΡ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΡΡΡΡΡ ΠΏΡΠΈ ΡΠ°ΡΡΠ΅ΠΏΠ»Π΅Π½ΠΈΠΈ ΠΠΠ Π½Π΅ΡΠΊΠΎΠ»ΡΠΊΠΈΠΌΠΈ ΡΠ΅ΡΡΡΠΈΠΊΡΠ°Π·Π°ΠΌΠΈ ΠΏΠΎ ΠΎΡΠ΄Π΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΠΈ ΠΈ Π² ΡΠ°Π·Π½ΡΡ ΠΊΠΎΠΌΠ±ΠΈΠ½Π°ΡΠΈΡΡ , ΡΠ°ΡΡΠΎ ΡΠ΄Π°Π΅ΡΡΡ ΡΡΡΠ°Π½ΠΎΠ²ΠΈΡΡ ΠΏΠΎΡΡΠ΄ΠΎΠΊ ΡΠ°ΡΠΏΠΎΠ»ΠΎΠΆΠ΅Π½ΠΈΡ ΡΠ΅Π³ΠΌΠ΅Π½ΡΠΎΠ² Π² ΠΈΡΡ ΠΎΠ΄Π½ΠΎΠΉ ΠΌΠΎΠ»Π΅ΠΊΡΠ»Π΅, Ρ. Π΅. ΠΏΠΎΡΡΡΠΎΠΈΡΡ ΡΠΈΠ·ΠΈΡΠ΅ΡΠΊΡΡ ΠΊΠ°ΡΡΡ ΠΠΠ, Π³Π΄Π΅ ΡΠΊΠ°Π·Π°Π½ΠΎ ΠΏΠΎΠ»ΠΎΠΆΠ΅Π½ΠΈΠ΅ ΠΊΠ°ΠΆΠ΄ΠΎΠ³ΠΎ ΡΠ΅Π³ΠΌΠ΅Π½ΡΠ°. Π‘Π»ΠΎΠΆΠ½ΡΠ΅ Π³Π΅Π½ΠΎΠΌΡ ΠΈΠ»ΠΈ Π±ΠΎΠ»ΡΡΠΈΠ΅ ΠΌΠΎΠ»Π΅ΠΊΡΠ»Ρ ΠΠΠ Π΄Π°ΡΡ ΠΏΡΠΈ ΠΎΠ±ΡΠ°Π±ΠΎΡΠΊΠ΅ ΡΠ΅ΡΡΡΠΈΠΊΡΠΈΡΡΡΡΠΈΠΌΠΈ ΡΠ½Π΄ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π·Π°ΠΌΠΈ ΡΠ»ΠΎΠΆΠ½ΡΠ΅ Π½Π°Π±ΠΎΡΡ ΡΡΠ°Π³ΠΌΠ΅Π½ΡΠΎΠ², ΠΈ Π΄Π»Ρ ΠΈΡ Π°Π½Π°Π»ΠΈΠ·Π° ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΡΡΡ ΡΠΏΠ΅ΡΠΈΠ°Π»ΡΠ½ΡΠ΅ ΠΊΠΎΠΌΠΏΡΡΡΠ΅ΡΠ½ΡΠ΅ ΠΏΡΠΎΠ³ΡΠ°ΠΌΠΌΡ.
Π΄. ΠΠ°ΡΠΈΡΠ° ΠΠΠ ΠΏΠΎΡΡΠ΅Π΄ΡΡΠ²ΠΎΠΌ ΠΌΠ΅ΡΠΈΠ»ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΡ
Π ΠΎΠ΄ΡΡΠ²Π΅Π½Π½ΡΠ΅ ΠΌΠ΅ΡΠΈΠ»Π°Π·Ρ. ΠΠ΅Π½ΠΎΠΌΡ Π±Π°ΠΊΡΠ΅ΡΠΈΠΉ, ΠΊΠΎΠ΄ΠΈΡΡΡΡΠΈΠ΅ ΡΠ΅ΡΡΡΠΈΠΊΡΠΈΡΡΡΡΠΈΠ΅ ΡΠ½Π΄ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π·Ρ, Π·Π°ΡΠΈΡΠ΅Π½Ρ ΠΎΡ ΡΠ°ΠΌΠΎΠ΄Π΅Π³ΡΠ°Π΄Π°ΡΠΈΠΈ Ρ ΠΏΠΎΠΌΠΎΡΡΡ ΡΠΏΠ΅ΡΠΈΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈΡ ΡΠΈΡΡΠ΅ΠΌ ΠΌΠΎΠ΄ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΠΈ. ΠΠ΅ΡΠΈΠ»Π°Π·Ρ, ΠΎΡΡΡΠ΅ΡΡΠ²Π»ΡΡΡΠΈΠ΅ ΡΠΏΠ΅ΡΠΈΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΡΡ ΠΌΠΎΠ΄ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΡ, ΡΠ·Π½Π°ΡΡ ΡΠ΅ ΠΆΠ΅ Π½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠ΅ΡΡΡΠΈΠΊΡΠΈΠΈ Π² ΠΠΠ ΠΏΡΠΎΡΠ²Π»ΡΡΡ ΡΡΡΠΎΠΉΡΠΈΠ²ΠΎΡΡΡ ΠΊ Π΄Π΅ΠΉΡΡΠ²ΠΈΡ ΠΎΠΏΡΠ΅Π΄Π΅Π»Π΅Π½Π½ΡΡ ΡΠ½Π΄ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π·. ΠΠ°ΠΏΡΠΈΠΌΠ΅Ρ, Π² ΠΠΠ ΠΏΠΎΠ·Π²ΠΎΠ½ΠΎΡΠ½ΡΡ ΡΠ°ΡΡΠΎ Π²ΡΡΡΠ΅ΡΠ°ΡΡΡΡ Π΄ΠΈΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄Ρ 5'-meCG3'. ΠΡΠ»ΠΈ ΡΠ°ΠΉΡ ΡΠ΅ΡΡΡΠΈΠΊΡΠΈΠΈ ΡΠ½Π΄ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π·Ρ Hpa II ΡΠΎΠ΄Π΅ΡΠΆΠΈΡ ΡΠ°ΠΊΠΎΠΉ ΠΌΠ΅ΡΠΈΠ»ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΡΠΉ Π΄ΠΈΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄, ΡΠΎ ΡΠ΅ΡΠΌΠ΅Π½Ρ Π½Π΅ ΠΌΠΎΠΆΠ΅Ρ ΡΠ°Π·ΡΠ΅Π·Π°ΡΡ ΠΠΠ Π² ΡΡΠΎΠΌ ΠΌΠ΅ΡΡΠ΅. ΠΡΠΎΡ ΡΠ°ΠΊΡ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΡΠ΅ΡΡΡ Π΄Π»Ρ ΠΎΠΏΡΠ΅Π΄Π΅Π»Π΅Π½ΠΈΡ Π² ΡΠ»ΠΎΠΆΠ½ΡΡ Π³Π΅Π½ΠΎΠΌΠ°Ρ ΡΠΎΡΡΠΎΡΠ½ΠΈΡ ΠΌΠ΅ΡΠΈΠ»ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΡ ΡΠ°ΠΊΠΈΡ Π΄ΠΈΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄ΠΎΠ² 5'-CG3', ΠΊΠΎΡΠΎΡΡΠ΅ Π½Π°Ρ ΠΎΠ΄ΡΡΡΡ Π² ΡΠ°ΠΉΡΠ°Ρ ΡΠ·Π½Π°Π²Π°Π½ΠΈΡ Hpa II. ΠΠ΅ΡΠΌΠΎΡΡΡ Π½Π° Π½Π΅ΡΠΏΠΎΡΠΎΠ±Π½ΠΎΡΡΡ ΡΠ½Π΄ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π·Ρ Hpa II ΡΠ°Π·ΡΠ΅Π·Π°ΡΡ Π΄ΠΈΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄ 5'-CmeCGG3', Π΅Π΅ ΠΈΠ·ΠΎΡΠΈΠ·ΠΎΠΌΠ΅Ρ, ΡΠ½Π΄ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π·Π° Msp I, ΠΎΡΡΡΠ΅ΡΡΠ²Π»ΡΠ΅Ρ ΡΠ°ΠΊΠΎΠ΅ ΡΠ°Π·ΡΠ΅Π·Π°Π½ΠΈΠ΅. Π‘ΡΠ°Π²Π½ΠΈΠ²Π°Ρ ΡΡΠ²ΡΡΠ²ΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΡ ΡΡΠ°Π³ΠΌΠ΅Π½ΡΠΎΠ² ΠΠΠ ΠΊ Π΄Π²ΡΠΌ ΡΠΊΠ°Π·Π°Π½Π½ΡΠΌ ΡΠ΅ΡΠΌΠ΅Π½ΡΠ°ΠΌ, ΠΌΠΎΠΆΠ½ΠΎ Π»ΠΎΠΊΠ°Π»ΠΈΠ·ΠΎΠ²Π°ΡΡ ΠΌΠ΅ΡΠΈΠ»ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΡΠΉ ΡΠΈΡΠΎΠ·ΠΈΠ½ Π½Π° ΠΊΠ°ΡΡΠ΅. ΠΠΎΠ΄ΠΎΠ±Π½ΡΠΌ ΠΆΠ΅ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΠΎΠΌ ΡΠ°ΡΡΠΎ Π²ΡΡΡΠ΅ΡΠ°ΡΡΡΡΡΡ Π² ΠΠΠ ΡΠ°ΡΡΠ΅Π½ΠΈΠΉ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΡ 5'-Π‘mΠ΅Π‘TAGG3' ΠΌΠΎΠΆΠ½ΠΎ ΠΎΡΠ»ΠΈΡΠΈΡΡ ΠΎΡ Π½Π΅ΠΌΠ΅ΡΠΈΠ»ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΠΎΠΉ ΡΠΎΡΠΌΡ, 5'-Π‘Π‘3', Π΅ΡΠ»ΠΈ ΡΡΠ°Π²Π½ΠΈΡΡ ΠΏΡΠΎΠ΄ΡΠΊΡΡ, ΠΏΠΎΠ»ΡΡΠ°ΡΡΠΈΠ΅ΡΡ ΠΏΡΠΈ ΡΠ°ΡΡΠ΅ΠΏΠ»Π΅Π½ΠΈΠΈ ΠΠΠ Ρ ΠΏΠΎΠΌΠΎΡΡΡ ΠΈΠ·ΠΎ-ΡΠΈΠ·ΠΎΠΌΠ΅ΡΠΎΠ² Bst NI ΠΈ Eco RII.
ΠΠ΅Π·Π°Π²ΠΈΡΠΈΠΌΡΠ΅ ΠΌΠ΅ΡΠΈΠ»Π°Π·Ρ E. coli. ΠΡΠΈ Π²ΠΊΠ»ΡΡΠ΅Π½ΠΈΠΈ ΡΡΠ°Π³ΠΌΠ΅Π½ΡΠΎΠ² ΡΡΠΊΠ°ΡΠΈΠΎΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΎΠΉ ΠΠΠ Π² Π±Π°ΠΊΡΠ΅ΡΠΈΠ°Π»ΡΠ½ΡΠ΅ Π²Π΅ΠΊΡΠΎΡΡ ΠΈ ΠΈΡ ΡΠ΅ΠΏΠ»ΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΠΈ Π² ΠΊΠ»Π΅ΡΠΊΠ°Ρ Π. coli ΠΈΠ»ΠΈ Π΄ΡΡΠ³ΠΈΡ ΠΏΡΠΎΠΊΠ°ΡΠΈΠΎΡ Ρ Π°ΡΠ°ΠΊΡΠ΅ΡΠ½ΡΠΉ Π΄Π»Ρ Π½ΠΈΡ ΡΠΈΠΏ ΠΌΠ΅ΡΠΈΠ»ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΡ ΡΡΡΠ°ΡΠΈΠ²Π°Π΅ΡΡΡ ΠΈ ΠΎΠ½ΠΈ ΠΌΠ΅ΡΠΈΠ»ΠΈΡΡΡΡΡΡ ΡΠΏΠΎΡΠΎΠ±ΠΎΠΌ, ΡΠΏΠ΅ΡΠΈΡΠΈΡΠ½ΡΠΌ Π΄Π»Ρ Π½ΠΎΠ²ΠΎΠΉ ΠΊΠ»Π΅ΡΠΊΠΈ-Ρ ΠΎΠ·ΡΠΈΠ½Π°. ΠΠ°ΠΏΡΠΈΠΌΠ΅Ρ, Π² ΠΊΠ»Π΅ΡΠΊΠ°Ρ Π. coli Π΄ΠΈΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄Ρ 5'-CG3' Π½Π΅ ΠΌΠ΅ΡΠΈΠ»ΠΈΡΡΡΡΡΡ, ΠΈ Π² ΡΠ΅Π·ΡΠ»ΡΡΠ°ΡΠ΅ ΡΠ°ΠΉΡΡ, ΡΠ°Π½Π΅Π΅ Π·Π°ΡΠΈΡΠ΅Π½Π½ΡΠ΅ ΠΎΡ Π΄Π΅ΠΉΡΡΠ²ΠΈΡ ΡΠ½Π΄ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π·Ρ Hpa II, ΡΡΠ°Π½ΠΎΠ²ΡΡΡΡ ΡΡΠ²ΡΡΠ²ΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΡΠΌΠΈ ΠΊ Π½Π΅ΠΉ. ΠΠ΄Π½Π°ΠΊΠΎ Π΄Π²Π° ΠΎΠ±ΡΡΠ½ΡΡ ΡΠ΅ΡΠΌΠ΅Π½ΡΠ° E. coli: dam ΠΠΠ-ΠΌΠ΅ΡΠΈΠ»ΡΡΠ°Π½ΡΡΠ΅ΡΠ°Π·Π°, ΠΊΠΎΡΠΎΡΠ°Ρ ΠΌΠ΅ΡΠΈΠ»ΠΈΡΡΠ΅Ρ ΠΎΡΡΠ°ΡΠΎΠΊ, Π Π² ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΠΈ 5'-GATC3', ΠΈ dcm ΠΠΠ-ΠΌΠ΅ΡΠΈΠ»ΡΡΠ°Π½ΡΡΠ΅ΡΠ°Π·Π°, ΠΌΠ΅ΡΠΈΠ»ΠΈΡΡΡΡΠ°Ρ ΠΎΡΡΠ°ΡΠΎΠΊ Π‘ Π² ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΠΈ 5'-Π‘Π‘3', — ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΡΡΡ Π½ΠΎΠ²ΡΠ΅ ΡΡΡΠΎΠΉΡΠΈΠ²ΡΠ΅ ΡΠ°ΠΉΡΡ; Π½ΠΈ ΠΎΠ΄Π½Π° ΠΈΠ· ΡΡΠΈΡ ΠΌΠ΅ΡΠΈΠ»Π°Π· Π½Π΅ ΡΠ²Π»ΡΠ΅ΡΡΡ ΡΠ°ΡΡΡΡ ΡΠΈΡΡΠ΅ΠΌΡ ΡΠ΅ΡΡΡΠΈΠΊΡΠΈΠΈ-ΠΌΠΎΠ΄ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΠΈ. ΠΡΠΎΠΌΠ΅ ΡΠΎΠ³ΠΎ, ΡΡΠΊΠ°ΡΠΈΠΎΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠ°Ρ ΠΠΠ, ΡΠ΅ΠΏΠ»ΠΈΡΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½Π°Ρ Π² E. coli, ΡΡΠ°Π½ΠΎΠ²ΠΈΡΡΡ ΡΡΡΠΎΠΉΡΠΈΠ²ΠΎΠΉ ΠΊ ΡΠ½Π΄ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π·Π°ΠΌ Mbo I ΠΈ Bcl I Π±Π»Π°Π³ΠΎΠ΄Π°ΡΡ ΡΠΎΠΌΡ, ΡΡΠΎ Π² ΠΏΡΠ΅Π΄Π΅Π»Π°Ρ ΠΈΡ ΡΠ°ΠΉΡΠΎΠ² ΡΠ·Π½Π°Π²Π°Π½ΠΈΡ Π½Π°Ρ ΠΎΠ΄ΠΈΡΡΡ 6_ΠΌΠ΅ΡΠΈΠ»Π°Π΄Π΅Π½ΠΈΠ½. ΠΠ°ΠΌΠ΅ΡΠΈΠΌ, ΡΡΠΎ ΡΠΎΡ ΠΆΠ΅ ΡΠ°ΠΌΡΠΉ 6_ΠΌΠ΅ΡΠΈΠ»Π°Π΄Π΅Π½ΠΈΠ½ Π² ΡΠ°ΠΉΡΠ΅ 5'-GATC3' Π½Π΅ ΠΌΠ΅ΡΠ°Π΅Ρ ΡΠ°Π±ΠΎΡΠ΅ ΡΠ½Π΄ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π· Bam HI, Bgl I ΠΈΠ»ΠΈ Sau 3Π; ΠΎΠ΄Π½Π°ΠΊΠΎ ΡΠ°Π·ΡΠ΅Π·Π°Π½ΠΈΠ΅ Ρ ΠΏΠΎΠΌΠΎΡΡΡ Sau 3Π Π±Π»ΠΎΠΊΠΈΡΡΠ΅ΡΡΡ, Π΅ΡΠ»ΠΈ ΠΌΠ΅ΡΠΈΠ»ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½ ΠΎΡΡΠ°ΡΠΎΠΊ Π‘.
Π€ΠΎΡΡΠΎΠΌΠΎΠ½ΠΎΡΡΡΠ΅ΡΠ°Π·Ρ
Π§Π°ΡΡΠΎ ΠΏΡΠΈ ΠΏΡΠΎΠ²Π΅Π΄Π΅Π½ΠΈΠΈ ΡΠΊΡΠΏΠ΅ΡΠΈΠΌΠ΅Π½ΡΠΎΠ² Ρ ΡΠ΅ΠΊΠΎΠΌΠ±ΠΈΠ½Π°Π½ΡΠ½ΡΠΌΠΈ ΠΠΠ ΠΈΠ»ΠΈ ΠΏΡΠΈ Π°Π½Π°Π»ΠΈΠ·Π΅ ΡΡΡΡΠΊΡΡΡΡ ΠΠΠ ΠΏΡΠΈΡ ΠΎΠ΄ΠΈΡΡΡ ΠΎΡΡΠ΅ΠΏΠ»ΡΡΡ ΠΊΠΎΠ½ΡΠ΅Π²ΡΠ΅ ΡΠΎΡΡΠΎΠΌΠΎΠ½ΠΎΡΡΠΈΡΠ½ΡΠ΅ Π³ΡΡΠΏΠΏΡ. ΠΠ·Π²Π΅ΡΡΠ½ΠΎ ΠΌΠ½ΠΎΠΆΠ΅ΡΡΠ²ΠΎ Π½Π΅ΡΠΏΠ΅ΡΠΈΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈΡ ΡΠΎΡΡΠΎΠΌΠΎΠ½ΠΎΡΡΡΠ΅ΡΠ°Π·. ΠΡΠΈ ΡΠ΅ΡΠΌΠ΅Π½ΡΡ, Π²ΡΠ΄Π΅Π»Π΅Π½Π½ΡΠ΅ ΠΈΠ· ΠΊΠ»Π΅ΡΠΎΠΊ Π. coli ΠΈ ΠΊΠΈΡΠ΅ΡΠ½ΠΈΠΊΠ° ΡΠ΅Π»Π΅Π½ΠΊΠ°, Π±ΡΠ»ΠΈ ΠΏΠΎΠ»ΡΡΠ΅Π½Ρ Π² Π²ΡΡΠΎΠΊΠΎΠΎΡΠΈΡΠ΅Π½Π½ΠΎΠΌ Π²ΠΈΠ΄Π΅. Π€ΠΎΡΡΠ°ΡΠ°Π·Ρ Π³ΠΈΠ΄ΡΠΎΠ»ΠΈΠ·ΡΡΡ ΠΊΠ°ΠΊ 5'-, ΡΠ°ΠΊ ΠΈ 3'-ΠΊΠΎΠ½ΡΠ΅Π²ΡΠ΅ ΡΠΎΡΡΠΎΠΌΠΎΠ½ΠΎΡΡΠΈΡΡ Π² ΠΠΠ ΠΈ Π ΠΠ.
Π€ΠΎΡΡΠΎΠΌΠΎΠ½ΠΎΡΡΠΈΡΠ½ΡΠ΅ Π³ΡΡΠΏΠΏΡ, Π½Π°Ρ ΠΎΠ΄ΡΡΠΈΠ΅ΡΡ Π½Π° ΠΊΠΎΠ½ΡΠ΅ ΠΎΠ΄Π½ΠΎΡΠ΅ΠΏΠΎΡΠ΅ΡΠ½ΡΡ ΡΠ°Π·ΡΡΠ²ΠΎΠ² Π² Π΄ΡΠΏΠ»Π΅ΠΊΡΠ½ΠΎΠΉ ΠΠΠ ΠΈΠ»ΠΈ ΡΠΊΡΠ°Π½ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΡΠ΅ Π½Π°Π²ΠΈΡΠ°ΡΡΠ΅ΠΉ Π½Π°Π΄ Π½ΠΈΠΌΠΈ Π²ΡΠΎΡΠΎΠΉ ΡΠ΅ΠΏΡΡ, ΠΏΠΎΠ΄ΠΎΠ±Π½ΡΠ΅ ΡΠ΅ΠΌ, ΠΊΠΎΡΠΎΡΡΠ΅ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΡΡΡΡΡ ΠΏΡΠΈ ΡΠ°Π·ΡΠ΅Π·Π°Π½ΠΈΠΈ ΡΠ½Π΄ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π·ΠΎΠΉ Pst I, ΡΠ΄Π°Π»ΡΡΡΡΡ Ρ ΠΏΠΎΠΌΠΎΡΡΡ ΡΠΎΡΡΠ°ΡΠ°Π·Ρ ΡΠΎΠ»ΡΠΊΠΎ ΠΏΡΠΈ ΡΠ»Π°Π±ΠΎΠ΄Π΅Π½Π°ΡΡΡΠΈΡΡΡΡΠΈΡ ΡΡΠ»ΠΎΠ²ΠΈΡΡ .
ΠΠΎΠ»ΠΈΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄ΠΊΠΈΠ½Π°Π·Π°
ΠΠΈΠ½Π°Π·Ρ ΡΠΎΡΡΠ°Π²Π»ΡΡΡ Π±ΠΎΠ»ΡΡΠΎΠΉ ΠΊΠ»Π°ΡΡ ΡΠ΅ΡΠΌΠ΅Π½ΡΠΎΠ², ΠΊΠ°ΡΠ°Π»ΠΈΠ·ΠΈΡΡΡΡΠΈΡ ΡΠΎΡΡΠΎΡΠΈΠ»ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ ΠΌΠ½ΠΎΠ³ΠΈΡ Π±ΠΈΠΎΡ ΠΈΠΌΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈΡ ΡΠΎΠ΅Π΄ΠΈΠ½Π΅Π½ΠΈΠΉ — ΠΎΡ Π½Π΅Π±ΠΎΠ»ΡΡΠΈΡ ΠΌΠΎΠ»Π΅ΠΊΡΠ» Π΄ΠΎ ΠΎΡΠ΅Π½Ρ ΠΊΡΡΠΏΠ½ΡΡ ΠΌΠ°ΠΊΡΠΎΠΌΠΎΠ»Π΅ΠΊΡΠ», Π²ΠΊΠ»ΡΡΠ°Ρ ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠΏΠ΅ΠΏΡΠΈΠ΄Ρ ΠΈ ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄Ρ.
ΠΠΎΠ»ΠΈΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄ΠΊΠΈΠ½Π°Π·Π°, ΡΠΈΡΠΎΠΊΠΎ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΡΠ΅ΠΌΠ°Ρ Π² ΠΊΠ°ΡΠ΅ΡΡΠ²Π΅ ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠ²Π° Π² ΡΠΊΡΠΏΠ΅ΡΠΈΠΌΠ΅Π½ΡΠ°Ρ Ρ ΡΠ΅ΠΊΠΎΠΌΠ±ΠΈΠ½Π°Π½ΡΠ½ΡΠΌΠΈ ΠΠΠ, Π±ΡΠ»Π° Π²ΡΠ΄Π΅Π»Π΅Π½Π° ΠΈ ΠΎΡΠΈΡΠ΅Π½Π° ΠΈΠ· ΠΊΠ»Π΅ΡΠΎΠΊ E. coli, ΠΈΠ½ΡΠΈΡΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΡΡ Π±Π°ΠΊΡΠ΅ΡΠΈΠΎΡΠ°Π³ΠΎΠΌ Π’4. Π€Π΅ΡΠΌΠ΅Π½Ρ ΠΊΠΎΠ΄ΠΈΡΡΠ΅ΡΡΡ Π³Π΅Π½ΠΎΠΌΠΎΠΌ Π±Π°ΠΊΡΠ΅ΡΠΈΠΎΡΠ°Π³Π°. ΠΠΎΠ½ΠΎΡΠΎΠΌ ΡΠΎΡΡΠ°ΡΠ° ΡΠ»ΡΠΆΠΈΡ ΠΠ’Π , Π° ΠΎΠ΄Π½ΠΈΠΌ ΠΈΠ· ΠΏΡΠΎΠ΄ΡΠΊΡΠΎΠ² ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠΈ ΡΠ²Π»ΡΠ΅ΡΡΡ ADP. Π Ρ ΠΎΠ΄Π΅ ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠΈ ΡΠΏΠ΅ΡΠΈΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈ ΡΠΎΡΡΠΎΡΠΈΠ»ΠΈΡΡΡΡΡΡ 5'-ΠΊΠΎΠ½ΡΠ΅Π²ΡΠ΅ Π³ΠΈΠ΄ΡΠΎΠΊΡΠΈΠ»ΡΠ½ΡΠ΅ Π³ΡΡΠΏΠΏΡ ΠΌΠΎΠ»Π΅ΠΊΡΠ» ΠΠΠ ΠΈ Π ΠΠ; 3'-ΠΊΠΎΠ½ΡΠ΅Π²ΡΠ΅ Π³ΠΈΠ΄ΡΠΎΠΊΡΠΈΠ»ΡΠ½ΡΠ΅ Π³ΡΡΠΏΠΏΡ Π½Π΅ ΡΠΎΡΡΠΎΡΠΈΠ»ΠΈΡΡΡΡΡΡ. ΠΠ΄Π½ΠΎΠΉ ΠΈΠ· Π²Π°ΠΆΠ½ΡΡ ΡΡΠ΅Ρ ΠΏΡΠΈΠΌΠ΅Π½Π΅Π½ΠΈΡ ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄ΠΊΠΈΠ½Π°Π·Ρ ΡΠ²Π»ΡΠ΅ΡΡΡ ΠΌΠ΅ΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅ 5'-ΠΊΠΎΠ½ΡΠ° ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄Π½ΠΎΠΉ ΡΠ΅ΠΏΠΈ Ρ ΠΏΠΎΠΌΠΎΡΡΡ ΡΠ°Π΄ΠΈΠΎΠ°ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎΠ³ΠΎ 32Π Ρ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ΠΌ ΠΠ’Π , ΠΌΠ΅ΡΠ΅Π½Π½ΠΎΠΉ ΠΏΠΎ Ρ-ΡΠΎΡΡΠ°ΡΡ. ΠΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΠ΅ Π΄Π΅ΠΉΡΡΠ²ΠΈΠ΅ ΡΠΎΡΡΠ°ΡΠ°Π·Ρ ΠΈ ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄ΠΊΠΈΠ½Π°Π·Ρ ΠΏΡΠΈΠ²ΠΎΠ΄ΠΈΡ ΠΊ Π·Π°ΠΌΠ΅ΡΠ΅Π½ΠΈΡ Π½Π΅ΠΌΠ΅ΡΠ΅Π½ΠΎΠ³ΠΎ 5'-ΠΊΠΎΠ½ΡΠ΅Π²ΠΎΠ³ΠΎ ΡΠΎΡΡΠΎΠΌΠΎΠ½ΠΎΡΡΠΈΡΠ° Π½Π° ΡΠ°Π΄ΠΈΠΎΠ°ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΡΠΉ Π±Π΅Π· ΠΊΠ°ΠΊΠΈΡ -Π»ΠΈΠ±ΠΎ Π΄ΡΡΠ³ΠΈΡ ΠΈΠ·ΠΌΠ΅Π½Π΅Π½ΠΈΠΉ Π² ΡΠ΅ΠΏΠΈ.
ΠΠΠ-Π»ΠΈΠ³Π°Π·Π°
ΠΠΎΠ»ΡΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅ ΡΠ΅ΠΊΠΎΠΌΠ±ΠΈΠ½Π°Π½ΡΠ½ΡΡ ΠΌΠΎΠ»Π΅ΠΊΡΠ» ΠΠΠ Π²ΠΊΠ»ΡΡΠ°Π΅Ρ ΠΎΠ±ΡΠ΅Π΄ΠΈΠ½Π΅Π½ΠΈΠ΅ in vitro ΡΠ΅Π³ΠΌΠ΅Π½ΡΠΎΠ² ΠΠΠ ΠΈΠ· ΡΠ°Π·Π»ΠΈΡΠ½ΡΡ ΠΈΡΡΠΎΡΠ½ΠΈΠΊΠΎΠ². ΠΠ»Π°Π³ΠΎΠ΄Π°ΡΡ ΡΠΎΠΌΡ, ΡΡΠΎ ΠΏΡΠΈ ΡΠ°ΡΡΠ΅ΠΏΠ»Π΅Π½ΠΈΠΈ ΠΠΠ ΠΎΠΏΡΠ΅Π΄Π΅Π»Π΅Π½Π½ΡΠΌΠΈ ΡΠ½Π΄ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π·Π°ΠΌΠΈ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΡΡΡΡΡ ΡΡΠ°Π³ΠΌΠ΅Π½ΡΡ Ρ Π»ΠΈΠΏΠΊΠΈΠΌΠΈ ΠΊΠΎΠ½ΡΠ°ΠΌΠΈ, ΠΏΡΠΈ ΠΎΡΠΆΠΈΠ³Π΅ ΡΡΠΈ ΡΡΠ°Π³ΠΌΠ΅Π½ΡΡ Π΄ΠΎΠ²ΠΎΠ»ΡΠ½ΠΎ Π»Π΅Π³ΠΊΠΎ ΡΠΎΠ΅Π΄ΠΈΠ½ΡΡΡΡΡ, ΠΎΠ΄Π½Π°ΠΊΠΎ Π²ΠΎΠ΄ΠΎΡΠΎΠ΄Π½ΡΠ΅ ΡΠ²ΡΠ·ΠΈ, ΡΠ΄Π΅ΡΠΆΠΈΠ²Π°ΡΡΠΈΠ΅ ΠΈΡ Π²ΠΌΠ΅ΡΡΠ΅, Π² ΠΎΠ±ΡΡΠ½ΡΡ ΡΡΠ»ΠΎΠ²ΠΈΡΡ ΠΎΠΊΠ°Π·ΡΠ²Π°ΡΡΡΡ ΠΎΡΠ½ΠΎΡΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎ ΡΠ»Π°Π±ΡΠΌΠΈ ΠΈ Π»Π΅Π³ΠΊΠΎ ΡΠ°Π·ΡΡΡΠ°ΡΡΡΡ. ΠΠ»Ρ ΠΊΠΎΠ²Π°Π»Π΅Π½ΡΠ½ΠΎΠ³ΠΎ ΡΡΠΈΠ²Π°Π½ΠΈΡ ΡΡΠ°Π³ΠΌΠ΅Π½ΡΠΎΠ² ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΡΡΡ ΠΠΠ-Π»ΠΈΠ³Π°Π·Ρ, ΠΊΠΎΡΠΎΡΠ°Ρ ΠΊΠ°ΡΠ°Π»ΠΈΠ·ΠΈΡΡΠ΅Ρ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ ΡΠΎΡΡΠΎΠ΄ΠΈΡΡΠΈΡΠ½ΡΡ ΡΠ²ΡΠ·Π΅ΠΉ ΠΌΠ΅ΠΆΠ΄Ρ ΡΠΎΡΠ΅Π΄Π½ΠΈΠΌΠΈ Π½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄Π°ΠΌΠΈ.
Π§ΡΠΎΠ±Ρ Π»ΠΈΠ³ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ Π±ΡΠ»ΠΎ ΡΡΠΏΠ΅ΡΠ½ΡΠΌ, Π² ΠΎΠ±ΡΠ΅Π΄ΠΈΠ½ΡΠ΅ΠΌΡΡ ΡΠ΅ΠΏΡΡ Π΄ΠΎΠ»ΠΆΠ΅Π½ ΠΏΡΠΎΠΈΠ·ΠΎΠΉΡΠΈ ΠΎΡΠΆΠΈΠ³ ΠΊΠΎΠΌΠΏΠ»Π΅ΠΌΠ΅Π½ΡΠ°ΡΠ½ΡΡ ΠΊΠΎΠ½ΡΠΎΠ²; Π² ΡΡΠΎΠΌ ΡΠ»ΡΡΠ°Π΅ ΠΏΡΠΎΠΈΡΡ ΠΎΠ΄ΠΈΡ Π»ΠΈΠ³ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ ΠΎΠ±Π΅ΠΈΡ ΡΠ΅ΠΏΠ΅ΠΉ. ΠΡΠ»ΠΈ Π΄Π²Π° ΠΎΠ΄Π½ΠΎΡΠ΅ΠΏΠΎΡΠ΅ΡΠ½ΡΡ ΡΠ΅Π³ΠΌΠ΅Π½ΡΠ° ΡΠ΄Π΅ΡΠΆΠΈΠ²Π°ΡΡΡΡ ΡΡΠ΄ΠΎΠΌ Π·Π° ΡΡΠ΅Ρ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΡ Π²ΠΎΠ΄ΠΎΡΠΎΠ΄Π½ΡΡ ΡΠ²ΡΠ·Π΅ΠΉ Ρ ΠΈΠ½ΡΠ°ΠΊΡΠ½ΠΎΠΉ ΠΊΠΎΠΌΠΏΠ»Π΅ΠΌΠ΅Π½ΡΠ°ΡΠ½ΠΎΠΉ ΡΠ΅ΠΏΡΡ, ΡΠΎ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ ΡΠΎΡΡΠΎΠ΄ΠΈΡΡΠΈΡΠ½ΠΎΠΉ ΡΠ²ΡΠ·ΠΈ ΠΏΡΠΎΠΈΡΡ ΠΎΠ΄ΠΈΡ ΡΠΎΠ»ΡΠΊΠΎ Π² ΠΎΠ΄Π½ΠΎΠΉ ΡΠ΅ΠΏΠΈ. ΠΠΠ-Π»ΠΈΠ³Π°Π·Π° ΡΠ°Π³Π° Π’4 ΡΠΏΠΎΡΠΎΠ±Π½Π° ΡΠ°ΠΊΠΆΠ΅ ΡΠΎΠ΅Π΄ΠΈΠ½ΠΈΡΡ Π΄Π²ΡΡ ΡΠ΅ΠΏΠΎΡΠ΅ΡΠ½ΡΠ΅ ΠΌΠΎΠ»Π΅ΠΊΡΠ»Ρ Ρ ΡΡΠΏΡΠΌΠΈ ΠΊΠΎΠ½ΡΠ°ΠΌΠΈ, ΠΊΠ°ΡΠ°Π»ΠΈΠ·ΠΈΡΡΡ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ ΡΠΎΡΡΠΎ-Π΄ΠΈΡΡΠΈΡΠ½ΡΡ ΡΠ²ΡΠ·Π΅ΠΉ Π² ΠΎΠ±Π΅ΠΈΡ ΡΠ΅ΠΏΡΡ .
Π¦Π΅ΠΏΠΈ ΡΠ΄Π»ΠΈΠ½ΡΡΡΡΡ ΠΏΡΡΠ΅ΠΌ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΠ³ΠΎ ΠΏΡΠΈΡΠΎΠ΅Π΄ΠΈΠ½Π΅Π½ΠΈΡ Π½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄ΠΎΠ² ΠΊ ΠΏΡΠ°ΠΉΠΌΠ΅ΡΡ ΡΠΎ ΡΠ²ΠΎΠ±ΠΎΠ΄Π½ΠΎΠΉ 3'-Π³ΠΈΠ΄-ΡΠΎΠΊΡΠΈΠ»ΡΠ½ΠΎΠΉ Π³ΡΡΠΏΠΏΠΎΠΉ; Π²ΡΠ±ΠΎΡ Π½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄Π½ΠΎΠ³ΠΎ ΠΎΡΡΠ°ΡΠΊΠ° Π½Π° ΠΊΠ°ΠΆΠ΄ΠΎΠΌ ΡΡΠ°ΠΏΠ΅ ΠΎΠΏΡΠ΅Π΄Π΅Π»ΡΠ΅ΡΡΡ ΠΠΠ-ΠΌΠ°ΡΡΠΈΡΠ΅ΠΉ. ΠΠΠ-ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠΌΠ΅ΡΠ°Π·Π° I E. coli ΠΊΠ°ΡΠ°Π»ΠΈΠ·ΠΈΡΡΠ΅Ρ ΠΈ Π½Π΅ΠΊΠΎΡΠΎΡΡΠ΅ Π΄ΡΡΠ³ΠΈΠ΅ Π²Π°ΠΆΠ½ΡΠ΅ ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠΈ. ΠΠ²Π΅ ΠΈΠ· Π½ΠΈΡ ΠΈΠΌΠ΅ΡΡ ΠΎΡΠΎΠ±ΠΎΠ΅ Π·Π½Π°ΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅ Π΄Π»Ρ ΡΠΊΡΠΏΠ΅ΡΠΈΠΌΠ΅Π½ΡΠΎΠ² Ρ ΡΠ΅ΠΊΠΎΠΌΠ±ΠΈΠ½Π°Π½ΡΠ½ΡΠΌΠΈ ΠΠΠ: ΡΡΠΎ 3'->5'- ΠΈ 5'->3'-ΡΠΊΠ·ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π·Π½ΡΠ΅ ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠΈ. Π ΠΎΠ±ΠΎΠΈΡ ΡΠ»ΡΡΠ°ΡΡ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΡΡΡΡΡ ΠΏΡΠΎΠ΄ΡΠΊΡΡ Ρ 5'-ΡΠΎΡΡΠΎΠΌΠΎΠ½ΠΎΡΡΠΈΡΠ½ΡΠΌΠΈ ΠΊΠΎΠ½ΡΠ°ΠΌΠΈ. ΠΠ²Π΅ ΡΠΊΠ°Π·Π°Π½Π½ΡΠ΅ ΡΠΊΠ·ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π·Π½ΡΠ΅ Π°ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎΡΡΠΈ ΠΏΡΠΈΡΡΡΠΈ ΡΠ°Π·Π½ΡΠΌ ΡΡΠ°ΡΡΠΊΠ°ΠΌ ΠΌΠΎΠ»Π΅ΠΊΡΠ»Ρ ΠΠΠ-ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠΌΠ΅ΡΠ°Π·Ρ I, ΠΊΠΎΡΠΎΡΡΠ΅ ΠΌΠΎΠΆΠ½ΠΎ ΡΠ°Π·Π΄Π΅Π»ΠΈΡΡ, ΠΎΠ±ΡΠ°Π±ΠΎΡΠ°Π² Π±Π΅Π»ΠΎΠΊ ΠΏΡΠΎΡΠ΅ΠΎΠ»ΠΈΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈΠΌΠΈ ΡΠ΅ΡΠΌΠ΅Π½ΡΠ°ΠΌΠΈ. ΠΠΎΡΠ»Π΅ ΡΠ°Π·Π΄Π΅Π»Π΅Π½ΠΈΡ ΠΎΠ±Π½Π°ΡΡΠΆΠΈΠ²Π°Π΅ΡΡΡ, ΡΡΠΎ 3'->5'-ΡΠΊΠ·ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π·Π½Π°Ρ ΠΈ ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠΌΠ΅ΡΠ°Π·Π½Π°Ρ Π°ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎΡΡΠΈ ΡΠ²ΡΠ·Π°Π½Ρ Ρ Π±ΠΎΠ»ΡΡΠΈΠΌ ΠΏΠΎ ΡΠ°Π·ΠΌΠ΅ΡΡ ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠΏΠ΅ΠΏΡΠΈΠ΄ΠΎΠΌ, ΡΠΎΠ΄Π΅ΡΠΆΠ°ΡΠΈΠΌ ΠΊΠ°ΡΠ±ΠΎΠΊΡΠΈΠ»ΡΠ½ΡΡ Π³ΡΡΠΏΠΏΡ Π½Π° ΠΊΠΎΠ½ΡΠ΅, Π° 5'->3'-ΡΠΊΠ·ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π·Π½Π°Ρ Π°ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎΡΡΡ — ΡΠΎ Π²ΡΠΎΡΡΠΌ, Π±ΠΎΠ»Π΅Π΅ ΠΌΠ΅Π»ΠΊΠΈΠΌ ΡΡΠ°Π³ΠΌΠ΅Π½ΡΠΎΠΌ.
Π±. ΠΠΈΠΊΡΡΠ°Π½ΡΠ»ΡΡΠΈΡ Π Π΅Π°ΠΊΡΠΈΠΈ, ΠΊΠ°ΡΠ°Π»ΠΈΠ·ΠΈΡΡΠ΅ΠΌΡΠ΅ ΠΠΠ-ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠΌΠ΅ΡΠ°Π·ΠΎΠΉ I, Π½Π°ΡΠ»ΠΈ ΡΠΈΡΠΎΠΊΠΎΠ΅ ΠΏΡΠΈΠΌΠ΅Π½Π΅Π½ΠΈΠ΅. ΠΠ°ΠΏΡΠΈΠΌΠ΅Ρ, ΡΠ°ΡΡΠΎ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΡΠ΅ΡΡΡ ΡΠΏΠΎΡΠΎΠ±Π½ΠΎΡΡΡ ΠΠΠ-ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠΌΠ΅ΡΠ°Π·Ρ I ΠΊΠ°ΡΠ°Π»ΠΈΠ·ΠΈΡΠΎΠ²Π°ΡΡ ΠΎΠ΄Π½ΠΎΠ²ΡΠ΅ΠΌΠ΅Π½Π½ΠΎ ΠΊΠ°ΠΊ ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠΌΠ΅ΡΠΈΠ·Π°ΡΠΈΡ, ΡΠ°ΠΊ ΠΈ 5'->3'-ΡΠΊΠ·ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π·Π½ΠΎΠ΅ ΡΠ°ΡΡΠ΅ΠΏΠ»Π΅Π½ΠΈΠ΅. Π€Π΅ΡΠΌΠ΅Π½Ρ, Π²ΡΡΡΡΠΏΠ°Ρ Π² ΡΠΎΠ»ΠΈ ΡΠΊΠ·ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π·Ρ, ΠΎΡΡΡΠ΅ΡΡΠ²Π»ΡΠ΅Ρ Π΄Π΅Π³ΡΠ°Π΄Π°ΡΠΈΡ ΡΠ΅ΠΏΠΈ Π² 5'->3'-Π½Π°ΠΏΡΠ°Π²Π»Π΅Π½ΠΈΠΈ, Π½Π°ΡΠΈΠ½Π°Ρ Ρ 5'-ΠΊΠΎΠ½ΡΠ° ΠΎΠ΄Π½ΠΎΡΠ΅ΠΏΠΎΡΠ΅ΡΠ½ΠΎΠΉ Π±ΡΠ΅ΡΠΈ Π² Π΄Π²ΡΡ ΡΠ΅ΠΏΠΎΡΠ΅ΡΠ½ΠΎΠΉ ΠΠΠ, Π° Π²ΡΡΡΡΠΏΠ°Ρ Π² ΡΠΎΠ»ΠΈ ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠΌΠ΅ΡΠ°Π·Ρ, Π²ΠΎΡΡΡΠ°Π½Π°Π²Π»ΠΈΠ²Π°Π΅Ρ ΡΠ΅ΠΏΡ ΠΏΡΡΠ΅ΠΌ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΠ³ΠΎ ΠΏΡΠΈΡΠΎΠ΅Π΄ΠΈΠ½Π΅Π½ΠΈΡ ΠΌΠΎΠ½ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄Π½ΡΡ ΠΎΡΡΠ°ΡΠΊΠΎΠ² ΠΊ ΡΠ²ΠΎΠ±ΠΎΠ΄Π½ΠΎΠΉ 3'-Π³ΠΈΠ΄ΡΠΎΠΊΡΠΈΠ»ΡΠ½ΠΎΠΉ Π³ΡΡΠΏΠΏΠ΅ Π½Π° Π΄ΡΡΠ³ΠΎΠΌ ΠΊΠΎΠ½ΡΠ΅ Π±ΡΠ΅ΡΠΈ. Π‘ΠΎΠ±ΡΡΠ²Π΅Π½Π½ΠΎ ΡΠΈΠ½ΡΠ΅Π·Π° ΠΠΠ Π½Π΅ ΠΏΡΠΎΠΈΡΡ ΠΎΠ΄ΠΈΡ: Π±ΡΠ΅ΡΡ Π»ΠΈΡΡ ΠΏΠ΅ΡΠ΅ΠΌΠ΅ΡΠ°Π΅ΡΡΡ Π²Π΄ΠΎΠ»Ρ ΡΠ΅ΠΏΠΈ, ΡΠ΅ΠΌ ΠΈ ΠΎΠ±ΡΡΡΠ½ΡΠ΅ΡΡΡ Π½Π°Π·Π²Π°Π½ΠΈΠ΅ ΡΡΠΎΠ³ΠΎ ΠΏΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ° — Π½ΠΈΠΊΡΡΠ°Π½ΡΠ»ΡΡΠΈΡ. ΠΡΠΎΠ²ΠΎΠ΄Ρ Π½ΠΈΠΊΡΡΠ°Π½ΡΠ»ΡΡΠΈΡ Π² ΠΏΡΠΈΡΡΡΡΡΠ²ΠΈΠΈ Π°-32Π -ΠΌΠ΅ΡΠ΅Π½Π½ΡΡ Π΄Π΅Π·ΠΎΠΊΡΠΈΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΠ·ΠΈΠ΄ΡΡΠΈΡΠΎΡΡΠ°ΡΠΎΠ², Π² ΠΊΠ°ΡΠ΅ΡΡΠ²Π΅ ΡΡΠ±ΡΡΡΠ°ΡΠΎΠ² ΠΏΠΎΠ»ΡΡΠ°ΡΡ ΠΌΠ΅ΡΠ΅Π½ΡΠ΅ ΡΡΠ°Π³ΠΌΠ΅Π½ΡΡ ΠΠΠ Ρ Π²ΡΡΠΎΠΊΠΎΠΉ ΡΠ΄Π΅Π»ΡΠ½ΠΎΠΉ Π°ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎΡΡΡΡ.
Π². ΠΠ°ΠΏΠΎΠ»Π½Π΅Π½ΠΈΠ΅ Π±ΡΠ΅ΡΠ΅ΠΉ ΠΠΠ-ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠΌΠ΅ΡΠ°Π·Π° ΡΠΏΠΎΡΠΎΠ±Π½Π° ΠΏΡΠ΅Π²ΡΠ°ΡΠ°ΡΡ ΡΡΠ°Π³ΠΌΠ΅Π½ΡΡ ΠΠΠ Ρ Π»ΠΈΠΏΠΊΠΈΠΌΠΈ ΠΊΠΎΠ½ΡΠ°ΠΌΠΈ Π²ΠΎ ΡΡΠ°Π³ΠΌΠ΅Π½ΡΡ Ρ ΡΡΠΏΡΠΌΠΈ ΠΊΠΎΠ½ΡΠ°ΠΌΠΈ ΠΏΡΠΈ Π½Π°Π»ΠΈΡΠΈΠΈ Π²ΡΡΡΡΠΏΠ°ΡΡΠ΅Π³ΠΎ 5'-ΠΊΠΎΠ½ΡΠ°. 3'-Π³ΠΈΠ΄ΡΠΎΠΊΡΠΈΠ»ΡΠ½ΡΠΉ ΠΊΠΎΠ½Π΅Ρ ΡΠ»ΡΠΆΠΈΡ ΠΏΡΠ°ΠΉΠΌΠ΅ΡΠΎΠΌ, 5'-Π²ΡΡΡΡΠΏ — ΠΌΠ°ΡΡΠΈΡΠ΅ΠΉ; ΠΏΡΠΎΠ±Π΅Π» Π½Π° 3'-ΠΊΠΎΠ½ΡΠ΅ Π·Π°ΠΏΠΎΠ»Π½ΡΠ΅ΡΡΡ ΠΏΡΡΠ΅ΠΌ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΠ³ΠΎ ΠΏΡΠΈΡΠΎΠ΅Π΄ΠΈΠ½Π΅Π½ΠΈΡ Π΄Π΅Π·ΠΎΠΊΡΠΈΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄Π½ΡΡ ΠΎΡΡΠ°ΡΠΊΠΎΠ². ΠΠ»Ρ Π·Π°ΠΏΠΎΠ»Π½Π΅Π½ΠΈΡ Π»ΡΡΡΠ΅ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°ΡΡ Π±ΠΎΠ»ΡΡΠΎΠΉ ΠΊΠ°ΡΠ±ΠΎΠΊΡΠΈΠΊΠΎΠ½ΡΠ΅Π²ΠΎΠΉ ΡΡΠ°Π³ΠΌΠ΅Π½Ρ ΠΠΠ-ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠΌΠ΅ΡΠ°Π·Ρ I, ΠΏΠΎΠ»ΡΡΠ°Π΅ΠΌΡΠΉ Π² ΡΠ΅Π·ΡΠ»ΡΡΠ°ΡΠ΅ ΠΏΡΠΎΡΠ΅ΠΎΠ»ΠΈΠ·Π°; ΡΡΠΎ ΠΏΠΎΠ·Π²ΠΎΠ»ΡΠ΅Ρ ΠΈΠ·Π±Π΅ΠΆΠ°ΡΡ 5'->3'-ΡΠΊΠ·ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π·Π½ΠΎΠ³ΠΎ ΡΠ°ΡΡΠ΅ΠΏΠ»Π΅Π½ΠΈΡ ΠΌΠ°ΡΡΠΈΡΡ. ΠΠΈΠΏΠΊΠΈΠ΅ ΠΊΠΎΠ½ΡΡ ΠΌΠΎΠΆΠ½ΠΎ ΠΏΡΠ΅Π²ΡΠ°ΡΠΈΡΡ Π² ΡΡΠΏΡΠ΅ ΠΈ Ρ ΠΏΠΎΠΌΠΎΡΡΡ ΡΠΏΠ΅ΡΠΈΡΠΈΡΠ½ΠΎΠΉ ΠΊ ΠΎΠ΄Π½ΠΎΡΠ΅ΠΏΠΎΡΠ΅ΡΠ½ΠΎΠΉ ΠΠΠ Π½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π·Ρ, ΠΎΠ΄Π½Π°ΠΊΠΎ Π² ΡΡΠΎΠΌ ΡΠ»ΡΡΠ°Π΅ ΡΡΡΠ°ΡΠΈΠ²Π°Π΅ΡΡΡ Π½Π΅ΡΠΊΠΎΠ»ΡΠΊΠΎ Π½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄Π½ΡΡ ΠΎΡΡΠ°ΡΠΊΠΎΠ².
Π ΠΠ-Π·Π°Π²ΠΈΡΠΈΠΌΡΠ΅ ΠΠΠ-ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠΌΠ΅ΡΠ°Π·Ρ
ΠΡΠΈ ΡΠ΅ΡΠΌΠ΅Π½ΡΡ Π±ΡΠ»ΠΈ Π²ΡΠ΄Π΅Π»Π΅Π½Ρ ΠΈΠ· Π ΠΠ-ΡΠΎΠ΄Π΅ΡΠΆΠ°ΡΠΈΡ ΠΎΠΏΡΡ ΠΎΠ»Π΅ΡΠΎΠ΄Π½ΡΡ Π²ΠΈΡΡΡΠΎΠ². ΠΠ½ΠΈ ΠΏΠΎΠ·Π²ΠΎΠ»ΡΡΡ ΡΠΈΠ½ΡΠ΅Π·ΠΈΡΠΎΠ²Π°ΡΡ ΠΠΠ Π½Π° Π ΠΠ-ΠΌΠ°ΡΡΠΈΡΠ΅ in vitro. Π Π΅Π°ΠΊΡΠΈΡ, ΠΊΠ°ΡΠ°Π»ΠΈΠ·ΠΈΡΡΠ΅ΠΌΠ°Ρ ΠΎΠ±ΡΠ°ΡΠ½ΡΠΌΠΈ ΡΡΠ°Π½ΡΠΊΡΠΈΠΏΡΠ°Π·Π°ΠΌΠΈ, Π°Π½Π°Π»ΠΎΠ³ΠΈΡΠ½Π° ΡΡΠ°Π½Π΄Π°ΡΡΠ½ΡΠΌ ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΡΠΌ Ρ ΡΡΠ°ΡΡΠΈΠ΅ΠΌ ΠΠΠ-ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠΌΠ΅ΡΠ°Π· ΠΈ, ΠΊΠ°ΠΊ Π² ΡΠ»ΡΡΠ°Π΅ Ρ Π΄ΡΡΠ³ΠΈΠΌΠΈ ΠΠΠ-ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠΌΠ΅ΡΠ°Π·Π°ΠΌΠΈ, Π½ΡΠΆΠ΄Π°Π΅ΡΡΡ Π² Π·Π°ΡΡΠ°Π²ΠΊΠ΅. Π ΠΊΠ°ΡΠ΅ΡΡΠ²Π΅ ΠΌΠ°ΡΡΠΈΡΡ ΠΎΠ±ΡΡΠ½ΠΎ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΡΠ΅ΡΡΡ ΠΎΠ΄Π½Π° ΡΠ΅ΠΏΡ Π ΠΠ, Π½Π° ΠΊΠΎΡΠΎΡΠΎΠΉ ΡΠΈΠ½ΡΠ΅Π·ΠΈΡΡΠ΅ΡΡΡ ΠΊΠΎΠΌΠΏΠ»Π΅ΠΌΠ΅Π½ΡΠ°ΡΠ½Π°Ρ ΡΠ΅ΠΏΡ ΠΠΠ. Π ΡΠ΅Π·ΡΠ»ΡΡΠ°ΡΠ΅ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΡΠ΅ΡΡΡ Π³ΠΈΠ±ΡΠΈΠ΄Π½Π°Ρ ΠΌΠΎΠ»Π΅ΠΊΡΠ»Π° Π ΠΠ-ΠΠΠ. Π§Π°ΡΡΠΎ ΡΠ΄ΠΎΠ±Π½ΡΠΌ ΠΏΡΠ°ΠΉΠΌΠ΅ΡΠΎΠΌ ΡΠ»ΡΠΆΠΈΡ ΠΊΠΎΡΠΎΡΠΊΠ°Ρ ΡΠ΅ΠΏΠΎΡΠΊΠ° ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠ΄Π΅Π·ΠΎΠΊΡΠΈΡΠΈΠ±ΠΎΡΠΈΠΌΠΈΠ΄ΠΈΠ»ΠΎΠ²ΠΎΠΉ ΠΊΠΈΡΠ»ΠΎΡΡ, ΠΏΠΎΡΠΊΠΎΠ»ΡΠΊΡ ΠΎΠ½Π° ΡΠΏΠΎΡΠΎΠ±Π½Π° ΡΠΏΠ°ΡΠΈΠ²Π°ΡΡΡΡ Ρ ΠΏΠΎΠ»ΠΈΡΠΈΠ±ΠΎΠ°Π΄Π΅-Π½ΠΈΠ»ΠΎΠ²ΠΎΠΉ ΠΊΠΈΡΠ»ΠΎΡΠΎΠΉ, ΠΎΠ±ΡΡΠ½ΠΎ Π½Π°Ρ ΠΎΠ΄ΡΡΠ΅ΠΉΡΡ Π½Π° ΠΊΠΎΠ½ΡΠ°Ρ ΡΡΠΊΠ°ΡΠΈΠΎΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈΡ ΠΌΠ ΠΠ; Π² ΡΠ΅Π·ΡΠ»ΡΡΠ°ΡΠ΅ ΡΠ°ΠΊΠΎΠ³ΠΎ ΡΠΏΠ°ΡΠΈΠ²Π°Π½ΠΈΡ ΠΈΠ½ΠΈΡΠΈΠΈΡΡΠ΅ΡΡΡ ΡΠΈΠ½ΡΠ΅Π· ΠΠΠ-ΠΊΠΎΠΏΠΈΠΈ ΡΡΠΎΠΉ Π ΠΠ.
ΠΊΠΠΠ-ΠΊΠΎΠΏΠΈΡ ΠΌΠΎΠ»Π΅ΠΊΡΠ»Ρ ΠΌΠ ΠΠ ΠΌΠΎΠΆΠ΅Ρ Π±ΡΡΡ ΠΏΡΠ΅Π²ΡΠ°ΡΠ΅Π½Π° Π² Π΄Π²ΡΡ ΡΠ΅ΠΏΠΎΡΠ΅ΡΠ½ΡΡ ΠΠΠ. ΠΠ»Ρ ΡΡΠΎΠ³ΠΎ, ΠΏΡΠ΅ΠΆΠ΄Π΅ Π²ΡΠ΅Π³ΠΎ, Ρ ΠΏΠΎΠΌΠΎΡΡΡ Π ΠΠΠ°Π·Ρ Π ΠΈΠ»ΠΈ ΡΠ΅Π»ΠΎΡΠ½ΠΎΠ³ΠΎ Π³ΠΈΠ΄ΡΠΎΠ»ΠΈΠ·Π° ΡΠ΄Π°Π»ΡΡΡ ΠΈΡΡ ΠΎΠ΄Π½ΡΡ ΠΌΠ°ΡΡΠΈΡΠ½ΡΡ Π ΠΠ. ΠΡΡΠ°Π²ΡΠ°ΡΡΡ ΠΎΠ΄Π½ΠΎΡΠ΅ΠΏΠΎΡΠ΅ΡΠ½Π°Ρ ΠΊΠΠΠ ΡΠ»ΡΠΆΠΈΡ ΡΠΎΠ±ΡΡΠ²Π΅Π½Π½ΡΠΌ ΠΏΡΠ°ΠΉΠΌΠ΅ΡΠΎΠΌ ΠΏΡΠΈ ΡΠΈΠ½ΡΠ΅Π·Π΅ Π²ΡΠΎΡΠΎΠΉ ΠΊΠΎΠΌΠΏΠ»Π΅ΠΌΠ΅Π½ΡΠ°ΡΠ½ΠΎΠΉ ΡΠ΅ΠΏΠΈ ΠΠΠ. ΠΠ°ΠΊ ΡΡΠΎ ΠΏΡΠΎΠΈΡΡ ΠΎΠ΄ΠΈΡ, Π½Π΅ ΡΠΎΠ²ΡΠ΅ΠΌ ΡΡΠ½ΠΎ. ΠΠΎΡΠ»Π΅Π΄Π½ΡΡ ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΡ ΠΌΠΎΠΆΠ΅Ρ ΠΊΠ°ΡΠ°Π»ΠΈΠ·ΠΈΡΠΎΠ²Π°ΡΡΡΡ Π»ΠΈΠ±ΠΎ ΠΠΠ-ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠΌΠ΅ΡΠ°Π·ΠΎΠΉ I, Π»ΠΈΠ±ΠΎ ΠΎΠ±ΡΠ°ΡΠ½ΠΎΠΉ ΡΡΠ°Π½ΡΠΊΡΠΈΠΏΡΠ°Π·ΠΎΠΉ. ΠΠΎ-Π²ΠΈΠ΄ΠΈΠΌΠΎΠΌΡ, ΠΏΡΠ°ΠΉΠΌΠ΅ΡΠΎΠΌ ΡΠ»ΡΠΆΠΈΡ ΠΊΠΎΡΠΎΡΠΊΠ°Ρ ΡΠΏΠΈΠ»Π΅ΡΠ½Π°Ρ ΡΡΡΡΠΊΡΡΡΠ°, ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΡΡΡΠ°ΡΡΡ Π²Π±Π»ΠΈΠ·ΠΈ 3'-Π³ΠΈΠ΄ΡΠΎΠΊΡΠΈΠ»ΡΠ½ΠΎΠ³ΠΎ ΠΊΠΎΠ½ΡΠ° ΠΏΠ΅ΡΠ²ΠΎΠΉ ΡΠ΅ΠΏΠΈ. ΠΠΎΠ½Π΅ΡΠ½ΡΠΉ Π΄ΡΠΏΠ»Π΅ΠΊΡ Π²ΡΠ΅ Π΅ΡΠ΅ ΡΠΎΠ΄Π΅ΡΠΆΠΈΡ ΡΠΏΠΈΠ»ΡΠΊΡ Π½Π° ΠΎΠ΄Π½ΠΎΠΌ ΠΈΠ· ΠΊΠΎΠ½ΡΠΎΠ², ΠΊΠΎΡΠΎΡΠ°Ρ ΡΠ°Π·ΡΠ΅Π·Π°Π΅ΡΡΡ ΡΠΏΠ΅ΡΠΈΡΠΈΡΠ½ΠΎΠΉ Π² ΠΎΡΠ½ΠΎΡΠ΅Π½ΠΈΠΈ ΠΎΠ΄Π½ΠΎΡΠ΅ΠΏΠΎΡΠ΅ΡΠ½ΠΎΠΉ ΠΠΠ Π½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π·ΠΎΠΉ Ρ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ΠΌ Π΄Π²ΡΡ ΠΏΠΎΠ»Π½ΠΎΡΡΡΡ ΠΊΠΎΠΌΠΏΠ»Π΅ΠΌΠ΅Π½ΡΠ°ΡΠ½ΡΡ ΡΠ΅ΠΏΠ΅ΠΉ ΠΠΠ.
Π’Π΅ΡΠΌΠΈΠ½Π°Π»ΡΠ½Π°Ρ Π΄Π΅Π·ΠΎΠΊΡΠΈΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄ΠΈΠ»-ΡΡΠ°Π½ΡΡΠ΅ΡΠ°Π·Π°
Π°. ΠΠΎΠ»ΠΈΠΌΠ΅ΡΠΈΠ·Π°ΡΠΈΡ Π±Π΅Π· ΠΌΠ°ΡΡΠΈΡΡ Π’Π΅ΡΠΌΠΈΠ½Π°Π»ΡΠ½Π°Ρ Π΄Π΅Π·ΠΎΠΊΡΠΈΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄ΠΈΠ»ΡΡΠ°Π½ΡΡΠ΅ΡΠ°Π·Π° ΡΠ²Π»ΡΠ΅ΡΡΡ Π² ΠΎΠΏΡΠ΅Π΄Π΅Π»Π΅Π½Π½ΠΎΠΌ ΡΠΌΡΡΠ»Π΅ ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠΌΠ΅ΡΠ°Π·ΠΎΠΉ, ΠΏΠΎΡΠΊΠΎΠ»ΡΠΊΡ ΠΎΠ½Π° ΠΊΠ°ΡΠ°Π»ΠΈΠ·ΠΈΡΡΠ΅Ρ ΡΠΈΠ½ΡΠ΅Π· ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠ΄Π΅Π·ΠΎΠΊΡΠΈΡΠΈΠ±ΠΎ-Π½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄ΠΎΠ² ΠΈΠ· Π΄Π΅Π·ΠΎΠΊΡΠΈΡΠΈΠ±ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΠ·ΠΈΠ΄ΡΡΠΈΡΠΎΡΡΠ°ΡΠΎΠ² Ρ Π²ΡΡΠ²ΠΎΠ±ΠΎΠΆΠ΄Π΅Π½ΠΈΠ΅ΠΌ Π½Π΅ΠΎΡΠ³Π°Π½ΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΎΠ³ΠΎ ΠΏΠΈΡΠΎΡΠΎΡΡΠ°ΡΠ°. ΠΠΎΠ΄ΠΎΠ±Π½ΠΎ ΠΠΠ-ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠΌΠ΅ΡΠ°Π·Π°ΠΌ, ΠΎΠ½Π° Π½Π΅ ΡΠΏΠΎΡΠΎΠ±Π½Π° ΠΈΠ½ΠΈΡΠΈΠΈΡΠΎΠ²Π°ΡΡ ΡΠΈΠ½ΡΠ΅Π· Π½ΠΎΠ²ΠΎΠΉ ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠΌΠ΅ΡΠ½ΠΎΠΉ ΡΠ΅ΠΏΠΈ ΠΈ ΠΏΠΎΡΡΠΎΠΌΡ ΡΡΠ΅Π±ΡΠ΅Ρ ΠΏΡΠΈΡΡΡΡΡΠ²ΠΈΡ ΠΏΡΠ°ΠΉΠΌΠ΅ΡΠ° ΡΠΎ ΡΠ²ΠΎΠ±ΠΎΠ΄Π½ΠΎΠΉ ΠΊΠΎΠ½ΡΠ΅Π²ΠΎΠΉ 3'-Π³ΠΈΠ΄ΡΠΎΠΊΡΠΈΠ»ΡΠ½ΠΎΠΉ Π³ΡΡΠΏΠΏΠΎΠΉ. ΠΠ΄Π½Π°ΠΊΠΎ Π² ΠΎΡΠ»ΠΈΡΠΈΠ΅ ΠΎΡ ΠΈΡΡΠΈΠ½Π½ΡΡ ΠΠΠ-ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠΌΠ΅ΡΠ°Π· ΠΎΠ½Π° Π½Π΅ Π½ΡΠΆΠ΄Π°Π΅ΡΡΡ Π² ΠΌΠ°ΡΡΠΈΡΠ΅ ΠΈ Π½Π΅ ΡΠΏΠΎΡΠΎΠ±Π½Π° ΡΡΠΎ-Π»ΠΈΠ±ΠΎ ΠΊΠΎΠΏΠΈΡΠΎΠ²Π°ΡΡ Π²ΠΎΠΎΠ±ΡΠ΅. ΠΡΠΎΠ΄ΡΠΊΡ ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠΌΠ΅ΡΠΈΠ·Π°ΡΠΈΠΈ ΡΠΎΠΎΡΠ²Π΅ΡΡΡΠ²ΡΠ΅Ρ Π΄Π΅Π·ΠΎΠΊΡΠΈ-Π½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΠ·ΠΈΠ΄ΡΡΠΈΡΠΎΡΡΠ°ΡΠ°ΠΌ, ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΡΠ΅ΠΌΡΠΌ Π² ΠΊΠ°ΡΠ΅ΡΡΠ²Π΅ ΡΡΠ±ΡΡΡΠ°ΡΠ°. ΠΡΠ»ΠΈ Π² ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠΈ ΡΡΠ°ΡΡΠ²ΡΠ΅Ρ dATP, ΡΠΎ ΠΏΡΠΎΠ΄ΡΠΊΡΠΎΠΌ ΡΠ²Π»ΡΠ΅ΡΡΡ ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠ΄Π΅Π·ΠΎΠΊΡΠΈΠ°Π΄Π΅Π½ΠΈΠ»ΠΎΠ²Π°Ρ ΠΊΠΈΡΠ»ΠΎΡΠ°, Π½Π°Ρ ΠΎΠ΄ΡΡΠ°ΡΡΡ Π½Π° 3'-ΠΊΠΎΠ½ΡΠ΅ ΠΏΡΠ°ΠΉΠΌΠ΅ΡΠ°; Π΅ΡΠ»ΠΈ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΡΠ΅ΡΡΡ dGTP, ΡΠΎ ΠΊ ΠΏΡΠ°ΠΉΠΌΠ΅ΡΡ ΠΎΠΊΠ°Π·ΡΠ²Π°Π΅ΡΡΡ ΠΏΡΠΈΡΠΎΠ΅Π΄ΠΈΠ½Π΅Π½Π½ΠΎΠΉ poly. ΠΠΎΡΠΊΠΎΠ»ΡΠΊΡ ΡΠ΅ΡΠΌΠΈΠ½Π°Π»ΡΠ½Π°Ρ Π΄Π΅Π·ΠΎΠΊΡΠΈΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄ΠΈΠ»ΡΡΠ°Π½ΡΡΠ΅ΡΠ°Π·Π° Π½Π΅ ΠΊΠΎΠΏΠΈΡΡΠ΅Ρ ΠΌΠ°ΡΡΠΈΡΡ, ΠΏΡΠΎΠ΄ΡΠΊΡΠΎΠΌ ΡΠΈΠ½ΡΠ΅Π·Π° ΡΠ²Π»ΡΠ΅ΡΡΡ ΠΎΠ΄Π½ΠΎΡΠ΅ΠΏΠΎΡΠ΅ΡΠ½ΡΠΉ ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠΌΠ΅Ρ. ΠΡΠΈ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠΈ Π² ΠΊΠ°ΡΠ΅ΡΡΠ²Π΅ ΠΏΡΠ°ΠΉΠΌΠ΅ΡΠ° Π΄Π²ΡΡ ΡΠ΅ΠΏΠΎΡΠ΅ΡΠ½ΠΎΠΉ ΠΌΠΎΠ»Π΅ΠΊΡΠ»Ρ Π½Π° ΠΊΠ°ΠΆΠ΄ΠΎΠΌ ΠΊΠΎΠ½ΡΠ΅ Π΄ΡΠΏΠ»Π΅ΠΊΡΠ° ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΡΡΡΡΡ ΠΎΠ΄ΠΈΠ½Π°ΠΊΠΎΠ²ΡΠ΅ 3'-Ρ Π²ΠΎΡΡΡ. ΠΠ° ΡΠ°ΠΌΠΎΠΌ Π΄Π΅Π»Π΅ ΡΠ΅ΡΠΌΠΈΠ½Π°Π»ΡΠ½Π°Ρ Π΄Π΅Π·ΠΎΠΊΡΠΈΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈ-Π΄ΠΈΠ»ΡΡΠ°Π½ΡΡΠ΅ΡΠ°Π·Π° ΠΏΡΠ΅Π΄ΠΏΠΎΡΠΈΡΠ°Π΅Ρ ΠΎΠ΄Π½ΠΎΡΠ΅ΠΏΠΎΡΠ΅ΡΠ½ΡΠ΅, Π° Π½Π΅ Π΄Π²ΡΡ ΡΠ΅ΠΏΠΎΡΠ΅ΡΠ½ΡΠ΅ ΠΏΡΠ°ΠΉΠΌΠ΅ΡΡ. ΠΡΠ»ΠΈ ΠΈΠΌΠ΅Π΅ΡΡΡ ΠΏΠΎΠ»Π½ΠΎΡΡΡΡ Π΄Π²ΡΡ ΡΠ΅ΠΏΠΎΡΠ΅ΡΠ½ΡΠΉ ΡΡΠ°Π³ΠΌΠ΅Π½Ρ ΠΠΠ, ΠΊ ΠΊΠΎΡΠΎΡΠΎΠΌΡ Π½ΡΠΆΠ½ΠΎ ΠΏΡΠΈΡΠΎΠ΅Π΄ΠΈΠ½ΠΈΡΡ ΠΎΠ΄Π½ΠΎΡΠ΅ΠΏΠΎΡΠ΅ΡΠ½ΡΠ΅ Ρ Π²ΠΎΡΡΡ, ΠΌΠΎΠΆΠ½ΠΎ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°ΡΡ ΡΠ°Π·Π»ΠΈΡΠ½ΡΠ΅ ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄Ρ ΠΏΠΎΠ»ΡΡΠ΅Π½ΠΈΡ ΠΎΠ΄Π½ΠΎΡΠ΅ΠΏΠΎΡΠ΅ΡΠ½ΡΡ ΠΊΠΎΠ½ΡΠΎΠ², ΡΠΏΠΎΡΠΎΠ±Π½ΡΡ ΡΠ»ΡΠΆΠΈΡΡ ΠΏΡΠ°ΠΉΠΌΠ΅ΡΠ°ΠΌΠΈ.
Π±. Π‘ΠΈΠ½ΡΠ΅Π· Π»ΠΈΠΏΠΊΠΈΡ ΠΊΠΎΠ½ΡΠΎΠ² Π‘ ΠΏΠΎΠΌΠΎΡΡΡ Π΄Π΅Π·ΠΎΠΊΡΠΈΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄ΠΈΠ»ΡΡΠ°Π½ΡΡΠ΅ΡΠ°Π·Ρ ΠΊ ΠΌΠΎΠ»Π΅ΠΊΡΠ»Π°ΠΌ ΠΠΠ, Π½Π΅ ΠΈΠΌΠ΅ΡΡΠΈΠΌ Π»ΠΈΠΏΠΊΠΈΡ ΠΊΠΎΠ½ΡΠΎΠ², ΠΌΠΎΠΆΠ½ΠΎ ΠΏΡΠΈΡΠΎΠ΅Π΄ΠΈΠ½ΠΈΡΡ ΡΠ°ΠΊΠΈΠ΅ ΠΊΠΎΠ½ΡΡ. Π’ΡΠΏΡΠ΅ ΠΊΠΎΠ½ΡΡ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΡΡΡΡΡ ΠΏΡΠΈ ΠΌΠ΅Ρ Π°Π½ΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΎΠΌ ΡΠ°Π·ΡΡΠ²Π΅ Π±ΠΎΠ»ΡΡΠΈΡ ΠΌΠΎΠ»Π΅ΠΊΡΠ» ΠΠΠ, ΠΏΡΠΈ ΠΎΠ±ΡΠ°Π±ΠΎΡΠΊΠ΅ ΠΠΠ Ρ ΠΏΠΎΠΌΠΎΡΡΡ ΡΠ΅ΡΡΡΠΈΠΊΡΠΈΡΡΡΡΠΈΡ ΡΠ½Π΄ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π·, Π΄Π°ΡΡΠΈΡ ΡΡΠΏΡΠ΅ ΠΊΠΎΠ½ΡΡ, ΠΈΠ»ΠΈ ΠΏΡΠΈ Π΄Π΅ΠΉΡΡΠ²ΠΈΠΈ Π½Π΅ΡΠΏΠ΅ΡΠΈΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈΡ ΠΠΠΠ°Π·. ΠΠ°ΠΏΡΠΈΠΌΠ΅Ρ, Π΅ΡΠ»ΠΈ ΠΊ ΠΎΠ΄Π½ΠΎΠΌΡ Π½Π°Π±ΠΎΡΡ ΡΡΠ°Π³ΠΌΠ΅Π½ΡΠΎΠ² ΠΠΠ ΠΏΡΠΈΡΠΎΠ΅Π΄ΠΈΠ½ΠΈΡΡ poly, Π° ΠΊ Π΄ΡΡΠ³ΠΎΠΌΡ — poly ΠΈ ΡΠΌΠ΅ΡΠ°ΡΡ ΡΡΠΈ ΡΡΠ°Π³ΠΌΠ΅Π½ΡΡ, ΡΠΎ ΠΏΡΠΎΠΈΠ·ΠΎΠΉΠ΄Π΅Ρ ΠΈΡ ΡΠΎΠ΅Π΄ΠΈΠ½Π΅Π½ΠΈΠ΅ Π΄ΡΡΠ³ Ρ Π΄ΡΡΠ³ΠΎΠΌ. ΠΡΠΎΠ±Π΅Π»Ρ, ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΡΡΡΠΈΠ΅ΡΡ ΠΈΠ·-Π·Π° Π½Π΅ΡΠ°Π²Π½ΠΎΠΉ Π΄Π»ΠΈΠ½Ρ polyΠΈ ΡΠΎ1ΡΠ) — Ρ Π²ΠΎΡΡΠΎΠ², ΠΌΠΎΠ³ΡΡ Π±ΡΡΡ Π·Π°ΠΏΠΎΠ»Π½Π΅Π½Ρ Ρ ΠΏΠΎΠΌΠΎΡΡΡ ΠΠΠ-ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠΌΠ΅ΡΠ°Π·Ρ I, Π° ΠΊΠΎΠ½ΡΡ ΡΠΎΠ΅Π΄ΠΈΠ½Π΅Π½Ρ ΠΠΠ-Π»ΠΈΠ³Π°Π·ΠΎΠΉ. Π’Π°ΠΊΠΎΠΉ ΠΏΠΎΠ΄Ρ ΠΎΠ΄ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π»ΡΡ ΠΏΡΠΈ ΠΊΠΎΠ½ΡΡΡΡΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠΈ ΠΏΠ΅ΡΠ²ΠΎΠΉ ΡΠ΅ΠΊΠΎΠΌΠ±ΠΈΠ½Π°Π½ΡΠ½ΠΎΠΉ ΠΌΠΎΠ»Π΅ΠΊΡΠ»Ρ ΠΠΠ. Π Ρ ΠΎΡΡ ΠΎΡΠΊΡΡΡΠΈΠ΅ ΡΠ΅ΡΡΡΠΈΠΊΡΠΈΡΡΡΡΠΈΡ ΡΠ½Π΄ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π· ΡΠΈΠ»ΡΠ½ΠΎ ΡΠΏΡΠΎΡΡΠΈΠ»ΠΎ ΠΏΡΠΎΡΠ΅Π΄ΡΡΡ ΠΏΠΎΠ»ΡΡΠ΅Π½ΠΈΡ Π»ΠΈΠΏΠΊΠΈΡ ΠΊΠΎΠ½ΡΠΎΠ² ΠΏΡΠΈ ΡΠ΅ΠΊΠΎΠΌΠ±ΠΈΠ½Π°ΡΠΈΠΈ ΠΌΠΎΠ»Π΅ΠΊΡΠ» ΠΠΠ in vitro, ΠΈΠ½ΠΎΠ³Π΄Π° Π΄Π»Ρ ΠΈΡ ΡΠΎΠ·Π΄Π°Π½ΠΈΡ Π²ΡΠ΅ Π΅ΡΠ΅ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΡΠ΅ΡΡΡ ΡΠ΅ΡΠΌΠΈΠ½Π°Π»ΡΠ½Π°Ρ Π΄Π΅Π·ΠΎΠΊΡΠΈΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄ΠΈΠ»-ΡΡΠ°Π½ΡΡΠ΅ΡΠ°Π·Π°.
Π OLY-ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠΌΠ΅ΡΠ°Π·Π°
ΠΠΎΠ΄ΠΎΠ±Π½ΠΎ ΡΠ΅ΡΠΌΠΈΠ½Π°Π»ΡΠ½ΠΎΠΉ Π΄Π΅Π·ΠΎΠΊΡΠΈΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄ΠΈΠ»-ΡΡΠ°Π½ΡΡΠ΅ΡΠ°Π·Π΅, po1y-ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠΌΠ΅ΡΠ°Π·Π° ΠΏΡΠΈΡΠΎΠ΅Π΄ΠΈΠ½ΡΠ΅Ρ Π½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄Π½ΡΠ΅ ΠΎΡΡΠ°ΡΠΊΠΈ ΠΊ 3'-ΠΊΠΎΠ½ΡΡ ΡΠ΅ΠΏΠΈ Π±Π΅Π· ΡΡΠ°ΡΡΠΈΡ ΠΌΠ°ΡΡΠΈΡΡ. ΠΠ΄Π½Π°ΠΊΠΎ po1y-ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠΌΠ΅ΡΠ°Π·Π° ΠΏΡΠΎΡΠ²Π»ΡΠ΅Ρ ΡΠΏΠ΅ΡΠΈΡΠΈΡΠ½ΠΎΡΡΡ Π² ΠΎΡΠ½ΠΎΡΠ΅Π½ΠΈΠΈ Π ΠΠ. ΠΡΠ°ΠΉΠΌΠ΅ΡΠΎΠΌ ΡΠ²Π»ΡΠ΅ΡΡΡ ΠΏΠΎΠ»ΠΈΡΠΈΠ±ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄, Π° ΡΡΠ±ΡΡΡΠ°ΡΠΎΠΌ — ΠΠ’Π . ΠΡΠΈ ΡΡΠΎΠΌ GTP, Π‘Π’Π , UTP ΠΈΠ»ΠΈ dATP Π½Π΅ ΠΌΠΎΠ³ΡΡ Π·Π°ΠΌΠ΅Π½ΠΈΡΡ ATP. Po1y-ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠΌΠ΅ΡΠ°Π·Π° Π²ΡΠΏΠΎΠ»Π½ΡΠ΅Ρ Π²ΡΡΠΎΠΊΠΎΡΠΏΠ΅ΡΠΈΠ°Π»ΠΈΠ·ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΡΡ ΠΈ Π²Π°ΠΆΠ½ΡΡ ΡΡΠ½ΠΊΡΠΈΡ Π² ΡΠΊΡΠΏΠ΅ΡΠΈΠΌΠ΅Π½ΡΠ°Ρ Ρ ΡΠ΅ΠΊΠΎΠΌΠ±ΠΈΠ½Π°Π½ΡΠ½ΡΠΌΠΈ ΠΠΠ: Π΅Π΅ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΡΡΡ Π΄Π»Ρ ΠΏΡΠΈΡΠΎΠ΅Π΄ΠΈΠ½Π΅Π½ΠΈΡ po1y-ΠΊΠΎΠ½ΡΠΎΠ² ΠΊ ΠΌΠΎΠ»Π΅ΠΊΡΠ»Π°ΠΌ Π ΠΠ ΠΏΡΠΈ ΡΠΈΠ½ΡΠ΅Π·Π΅ ΠΊΠΠΠ.