Градиентный вариант высокоэффективной жидкостной хроматографии как унифицированный метод определения наркотических средств, психотропных и сильнодействующих веществ
Благодаря таким возможностям метола ВЭЖХ его внедрение в рутинную практику фармацевтического анализа происходит весьма быстро, Еще несколько лег назад в фармакопейных статьях хроматографические методы исследования ограничивались тонкослойной, и даже бумажной хроматографией, значительно реже применяли ВЭЖХ лли качественного н количественного определения как примесей, так и основных веществ… Читать ещё >
Содержание
- ВШШ Ht."
- Глава 1. Обзор литературы J |
- 1. 1. Градиентный вариант высокоэффективной жидкостной хроматографии как универсальный метол анализа
- МЛ. Хроматография как один из наиболее распространенных методой анализа. II
- 1. 1. 2. Проблемы унификации методик ВЭЖХ
- 1. 1. 3. Универсальные подвижные фазы в обрашено-фаэовой высокоэффективной жидкостной хроматографии
- 1. 1. 4. Детекторы в высокоэффективной жидкостной хроматографии
- 1. 1. 5. Преимущества и недостатки градиентного варианта высокоэффективной жидкостной хроматографии
- 12. Скриннговыс методы анализа наркотических средств, психотропных и сильнодействующих веществ
- 1. 3. Анализ многокомпонентных лекарственных средств, содержащих кодеин."
- 1. 3. 1. Состав многокомпонентных лекарственных средств, содержащих кодеин.,.-.,
- 1. 3. 2. Фармакопейные методы анализа многокомпонентных лекарственных средств, содержащих кодеин
- 1. 4. Химическая структура и физические свойства исследуемых веществ
- 2. 1,11рнборы, материалы и объекты исслсдоваиия
- 2. 1. 1. Объекты исследования
- 2. 1. 2. Реактивы
- 2. IJ. Приборы
- 2. 1. 4. Стандартные образцы,".,."",.,",&bdquo-.&bdquo-&bdquo-.,
- 2. 1. 5. Хроматографнческие системы
- 2. 1. 6. Подготовка хроматографическнх систем к анализу
- 2. Л .7. Тест при годности хроматографичсеких систем.6 ]
- 2. 2. t, Условия хроматографировлння и детектировали я
- 2. 2. 2. Профподготовка
- 2. 2. 3. Скрннннговое определение наркотических средств, сильнодействующих и психотропных веществ
- 22. 4. Определение компонентов лекарственных средств, содержащи х кодеин
- 22. 5. Применение разработанного метода в анализе биологически-активных добавок к пнще
- 3. 2. Унифицированный метод определения компонентов лекарственных средств, содержащих м>дсян."
- 3. 3. Анализ биологически-активных добавок к пнще
- 3. 4. Переход с системы градиентного злюировання на систему нзократнческого элюнровання. SO
Градиентный вариант высокоэффективной жидкостной хроматографии как унифицированный метод определения наркотических средств, психотропных и сильнодействующих веществ (реферат, курсовая, диплом, контрольная)
Актуальность проблемы. Высокоэффективная жидкостная хроматография в настоящее время стала одним из самых мощных аналитических методов, главным преимуществом которого является, прежде всего, возможность определения максимально широкого диапазона веществ, Потенциальные возможности ВЭЖХ создали в фармацевтической химии реальные предпосылки для широчайшей унификации всего химического анализа путемзамены во многих случаях большого числа других методов и их вариантов,.
Определение нарколшсских средств, психотропных и сильнодействующих веществ остается одной из наиболее актуальных проблем современного анализа: за последние 20 лет произошел взрывной рост числа злоупотреблений веществами этих групп, существенно расширился диапазон используемых для этих целей веществ.
При этом списки наркотических средств и психотропных веществ за последнее время претерпели относительно небольшие изменения (последний раз в 1998 году), Однако списки сильнодействующих веществ меняются достаточно регулярно в сторону добавления новых наименований И после каждого такого изменения необходимо создавать и утверждать новые методические рекомендации по качественному и количественному определению вновь добавленных веществ. Принимая во вин манне большую номенклатуру наркотических средств, психотропных и сильнодействующих веществ такой подход не всегда является рациональным,.
Другой не менее актуальной проблемой является разработка и внедрение скрннннговых методов анализа сложных смесей веществ. Важность этой проблемы связала со значительным увеличением количества фальсифицированной продукции на рынке России, Особенно опасно появление такой продукции в сфере обращения лекарственных средств и продуктов питания {в т.ч. биологически активных добавок).
Биологически активные добавки является отдельной проблемой. За последнее время (начиная с 1998 г.) на российском рынке начали активно регистрироваться и продвигаться Б АД, причем по темпам роста регистрации за последние 2−3 года они уже сравнимы с готовыми лекарственными средствами. Основной причиной такого бурного развития рынка БАД является то, что для БАД по сравнению с лекарственными средствами применяется существенно меньше регуляторных ограничений.
Кроме этого, при определение подлинности БАД к пище химик-аналитик сталкивается с рядом затруднений: если для лекарственных средств состав, действующие вещества и методы их анализа, как правило, хорошо изучены и доступны, то для БАД возможен такой диапазон веществ как природного, так и синтетического происхождения, что ситуация, когда аналитик не может проконтролировать состав БАД полностью не является исключительной Это позволяет недобросовестным производителям официально производить н реализовать населению БАД ненадлежащего качества.
Сейчас основным нормативным документом, регламе"ггнрующим порядок определения состава БАД является «Руководство по методам контроля качества н безопасности биологически активных добавок к пище», P4J .1672−03. Однако предложенные в этом руководстве методики описывают незначительную часть наиболее распространенных БАД. Это требует не только проведения научных изысканий по выявлению индикаторных компонентов БАД, но и новых подходов по качественному н количественному определению БАД.
Учитывая вышесказанное, актуальной является разработка унифицированных подходов к анализу наркотических средств, психотропных н сильнодействующих веществ, а также многокомпонентных лекарственных средств, биологически активных добавок к пнше,.
Одним Из таких унифицированных подходов является градиентный вариант ВЭЖХ, так как в условиях этого метода возможен качественный и количественный анализ максимально большого количества всшеств различных классов и групп [] 15,116].
Благодаря таким возможностям метола ВЭЖХ его внедрение в рутинную практику фармацевтического анализа происходит весьма быстро, Еще несколько лег назад в фармакопейных статьях хроматографические методы исследования ограничивались тонкослойной, и даже бумажной хроматографией, значительно реже применяли ВЭЖХ лли качественного н количественного определения как примесей, так и основных веществ, Сегодня большинство фармакопейных статей содержит методики ВЭЖХ В зарубежных фармакопеях (BP, USP) ВЭЖХ стала настолько рутинным общим метолом, что в частных ФС кратко даются лишь самые необходимые сведения для анализа конкретного вещества нлн веществ.
Следует отметить, что до сих нор во многих лабораториях отдается предпочтение пусть менее совершенным, менее производительным и менее достоверным, но более традиционным методам исследования (титрование, качественные реакции, фотозлектроколорнметрня, спектрофотометрия, тонкослойная хроматография и др.). По нашему мнению главными причинами, сдерживающими применение ВЭЖХ на практике, являются: высокая стоимость основного и вспомогательного оборудования, повышенные требования К реактивам и материалам, а также в определенной степени потребность в квалифицированных специалистах в области хроматографии.
Таким образом, градиентный вариант ВЭЖХ как унифицированный метод анализа наркотических средств, психотропных и сильнодействующих веществ, а также многокомпонентных лекарственных средств, биологически активных добавок к пнше должен обладать определенным набором свойств |5, 39J:
— быстрой и недорогой подготовкой пробы;
— недорогими реактивами;
— оптимальным сочетанием универсальности н селективности детектирования- • относительной простотой исполнения.
Цель и задачи исследования
Целью настоящей работы являлась разработка унифицированных методик анализа наркотических средств, психотропных и сильнодействующих веществ, а также многокомпонентных лекарственных средств, содержащих кодеин, и биологически активных добавок к пище.
Задачи исследования: I Разработка методик нробоподготовкн исследуемых вешеств наркотических средств, психотропных и сильнодействующих веществ, а также многокомпонентных лекарственных средств, содержащих кодеин, и БЛД к пище.
2. Разработка состава подвижной фазы и условий градиентного элюироааиня.
3. Выбор оптимального подхода к детектированию наркотических средств, психотропных и сильнодействующих веществ, а также многокомпонентных лекарственных средств, еодержащик кодеин, и БАЛ к пище.
Расчет и оценка параметров пригодности хроматографнческой системы в выбранных условнях. 5. Использование разработанных методик в анализе наркотических средств, психотропных н сильнодействующих веществ, а также многокомпонентных лекарственных средств, содержащих кодеин, и БАД к пище.
Научная новизна. Впервые разработана методика ВЭЖХ, позволяющая за один анализ выявлять и оценивать содержание некоторых наркотических средств, психотропных и сильнодействующих вешеств (26 веществ), качественно и количественно определять состав ряда многокомпонентных лекарственных средств (20 торговых наименований, содержащих 14 компонентов), определить содержание индикаторных компонентов ряда БАД к пище (более 20 веществ).
Практическая значимость. Предложена и внедрена методика, позволяющая в течение часа определить:
— присутствие или отсутствие в образце ряда наркотических средств, психотропных и сильнодействующих веществ, а также их содержание;
— качественный и количественный состав многокомпонентного лекарственного средства содержащего кодеин;
— подтвердить подлинность н оценить качество некоторых БАД к пище посредством определения индикаторных веществ различных компонентов БАД к пище.
Методика внедрена в экс пертно-криминалистическом центре (ЭКЦ) при ГУВД г Москвы и ЭКЦ МВД РФ лля решения тадач по определению наркотических средств, психотропных и сильнодействующих веществ и выявлению фальсифнпировалпых лекарственных средств. Разработаны методические рекомендации по определению наркотических средств, сильнодействующих и психотропных веществ ЭКЦ при ОУВД и ЭКЦ при УВД на метрополитене: «Общие рекомендации по использованию системы „Breeze“ в ЭКЦ при ОУВД и УВД на Метрополитене».
Также методика была успешно применена в ГУ НИИ питания РАМИ для определения различных веществ в составе БАД к нише: антоцмининов и антоцианндинов, органических кислот, витаминов (Bt, Q, Br" РР, Вс (фолневая кислота)), и других веществ (кофеин, теобромин, тсофеллнн. гннгерол, гуп’улостероны Е и 7. бетулин, фидлантин. цитрин и и и охратоксин, А и др.).
Положении, выносимыс на защиту,.
1. Методика пробонодготовкн наркотических средств, психотропных н сильнодействующих веществ, а также многокомпонентных лекарственных средств, содержащих кодеин, и БЛД к пище.
2. Составы подвижной фазы и условия градиентного элюкрования.
3. Способы детектирования исследуемых веществ.
4. Пригодность предложенных хроматографическнх систем.
5. Возможность использования разработанных методик в анализе наркотических средств* психотропных и сильнодействующих веществ, а также многокомпонентных лекарственных средств, содержащих кодеин" и Б АД к пище.
ВЫВОДЫ.
1. При подготовке к анализу наркотических средств, психотропных к сильнодействующих веществ, лекарственных средств и биологически активных добавок к пище рационально использовать такие универсальные растворители как вода, метанол и нх смеси, Выбор растворителя также должен определяться не только растворяющей способностью исследуемых веществ, но и общим составом образца.
2. При создании унифицированных методик ВЭЖХ рационально использовать в качестве подвижной фазы смеси типа ацетоинтрил-водньгй буферный раствор (или подкисленную воду) с рН 3,0−4.0 (как наиболее универсазьный элюэнт) — а в качестве неподвижной фазы — сорбенты типа CIS (как наиболее универсальный сорбент). Для совместного определения веществ с сильно различающимся хромато|-рафн чески ы поведением необходимо применение широкого градиента концентрации органической составляющей подвижной фазы: от 5 до 90%.
3. Для надежной идентификации в скрининг оных методах анализа необходимо совпадение с библиотекой двух характеристических параметров: времени удерживания н УФ-спсктра компонента.
4. В разработанных унифицированных хроматографнческнх условиях эффективность колонок составила от 3000 т. т, до 250 000 т.т. Относительное стандартное отклонение прн 5 повторных введениях не более 4,]%. Пределы обнаружения исследуемых веществ составили от 0,081 мг/л и до 2,3 мг/л, пределы количественного определения — от 0,5 мг/л и до 6,1 мг/л. Это соответствует современным требованиям к параметрам пригодности хроматографнческой системы.
5. Разработанные методики анализа успешно применены для екрннингового качественного и количественного анализа наркотических средств, психотропных и сильнодействующих веществ, а также для установления подлинности и количественного определения многокомпонентных лекарственных средств, содержащих кодеин, и биологически активных добавок к пнще. Время разделения исследуемых веществ на хроматограмме составило не более 30 минут.
Список литературы
- И, Глоссарий терминов по обеспечению качества и надлежащей лабораторной практики. Программа ООН по международному контролю над наркотиками, — Нью-Йорк. 2000.
- Государственная Фармакопея XI СССР- Вып, 1,2 — М: Медицина" 1987 (выпуск .), 1989 (выпуск 2).
- Граннк ВТ, Основы мсдннинекой xiimhii М.: Вузовская книга, 2001.
- Е, М, Сснченкова. М. С. Цвет создатель хроматографии. — М.: Янус-К, 1997.-440 с.
- Еремин С.К., Изотов Б. Н., Веселовская Н. В. Анализ наркотических средств. Ру ководство, М.: Мысль, 1993.
- Идентификация органических соединений: Перевод с англ. / Р Шрайнер, Р. Фьтон, Д. Ксртнн, Т. Морилл. Мл Мир, 1983. -704 с.
- Изотов Б.Н. и др, Анализ опиатов в моче. Пособие для врачей. М: ММА, 2002.
- Изотов Б. Н, и др Пособие для врачей «Современные методы нммукохимнческого обнаружения наркотических средств и психотропных веществ в нетрадиционных объектах». М.: ММА, 2002.
- Методика количественного определения фенобарбитала и цнклобарбитала в виде нх метиловых эфиров в крови методом газовой хроматографии с масс- селективным детектором- Челябинское областное бюро СМЭ, 2003
- Методические рекомендации. Экспертное исследование производных амфетамина, ЭКЦ МВД России, ФСБ. М.: 1998,38, Муравьева Д. А., Самылнна И. А., Яковлев Г, П. Фармакогнозия: Учебник. М.: Медицина, 2002.
- Постановление Правительства РФ от 30 нюня 1998 г. № 68! «Об утверждении перечня наркотических средств, психотропных веществ н их прекурсоров, подлежащих контролю в Российской Федерации»
- Практическая газовая и жидкостная хроматография / Б. В. Столяров. И. М. Савинов, А. В. Витенбсрг и Др. СПб.: С.-Петербургский университет, 199®, — 457 с.
- Практическое руководство, но скринингу лекарственных, наркотических веществ н их метаболитов методом газожидкостной хроматографии с масс-сслектнвным детектором. Челябинское областное бюро СМЭ, 2003.
- Рудаков О.Б. и др. Спутник хроматографиста. Воронеж: Водолей, 2004.5(.Рудснко Б. А, Руденко Г. И. Высокоэффективные хроматографнческнепроцессы М: 2002.
- Руководство для национальных лабораторий экспертизы (ООН) Методы экспрссс-знзлнза наркотиков, являющихся предметом злоупотребления, -Нью-Йорк, 2000.
- Руководство для национальных лабораторий экспертизы (ООН) Рекомендуемые методы обнаружения и анализа героина, каннабиноидов, кокаина, амфетамина, метамфетамнна и замещенных по циклу производных амфетамина в биологических пробах, Нью-Йорк, 2001.
- Руководство для национальных лабораторий экспертизы наркотиков (ООН). Рекомендуемые методы анализа амфетамина н метамфетамнна, -Нью-Йорк, 2000.
- Руководство для национальных лабораторий экспертизы наркотиков (ООН). Рекомендуемые методы анализа барбитуратпых производных, находящихся под международным контролем. Нью-Йорк, 2000.
- Руководство для национальных лабораторий экспертизы наркотиков (ООН), Рекомендуемые методы анализа каннабнеа. Нью-Йорк, 2000.
- Сакодымский К.И., Бражников В. В., н др. Аналитическая хроматография. М: Химия, 1993,
- Сборник методических рекомендаций по криминалистическому исследованию наркотических средств и психотропных веществ, М: ЭКЦ МВД 200 462, Сиггна С&bdquo- Хана Дж, Г., Количественный органический анализ по функциональным группам. М.: Химия, 1983.
- Симонов Е-А. и др. Наркотики: методы анализа на коже в еб придатках и выделениях. М.: Акахарснс, 2000
- Сорокин В. И, Алексеев И. Г., Кимстач Т. Е., Дроздов МЛ, Любецкнй Г. В., Симонов Е А, Количественное определение некоторых наркотических средств методами газовой, жидкостной хроматографии и УФ-спектроскопнн М.: ЭКЦ МВД РФ. 2000,
- Сорокин В Л., Гаевский, А В. Методика экспресс-определения новых наркотических средств (информационное письмо ЭКЦ МВД РФ- исх. Ка. от .03.1997.)
- Сорокин В Л, Орлова О. С., Любецкнй Г. В, Макаров М. А., Дроздов М. А., Симонов Е. А. Установление общности источника происхождения героина М .: ГУ ЭКЦ МВД РФ 2002,
- Сорокин В.И., Савенко В. Г., Семкнн EJL, Воронков Ю.М., Зелеиецкий B.C. Пучкова Т. М. Определение вида наркотических средств, получаемых из конопли и мака М.: ЭКЦ МВД РФ. 1995.
- Сорокни В.И., Семкнн ЕЛ, Беляев, А В. Отбор проб при исследовании наркотических средств М, — ЭКЦ МВД РФ. 994.
- Списки сильнодействующих и ядовитых веществ Постоям йога комитета по контролю наркотиков, вступившие в силу с 01 марта 2003 года,
- Стыскин Е.Л. и др. Практическая высокоэффективная жидкостная хроматография. Москва, 1986,
- Сычев К С., Сычев С. Н. Универсальные элюенты в обращенно-фазовой ВЭЖХ. Я Заводская лаборатория. Диагностика матери адов.- 2003.- Т-69. -Кг 10.—СЛ6.— 17.
- Сычев C, H. t Методы совершенствования хроматографичсскнх систем и механизмы удерживания в ВЭЖХ / С- Н. Сычев. Орел: ГТУ, 2000. — 211,
- Сычев С.Н., Сычев К, С. Универсальные элюенты в нормально-фазовой и обращенно-фазовой ВЭЖХ, И Сорбдионные и хроматографнчсскне процессы", 2003. Т 3. — вып. 6 — С. 23 — 25.
- Фармацевтическая химия. Практикум. Под редакцией академика РАМН, профессора АЛ Арзамасцева М, 2005.
- Фармацевтический анализ лекарственных средств. Под ред. В. А. Шаповаловой. Харьков: ИМП Рубикон, 1995.
- Федеральный закон от 31 мая 2001 г. № 73-ФЗ 'О государственной судебно-экспертной деятельности, а Российской Федерации" (с изменениями от 30 декабря 2001 г.)
- Федеральный закон от 8 января 1998 г, № 3-Ф3 «О наркотических средствах и психотропных веществах&trade-.
- Хмельницкий Р.А., Бродский Е, С, Хромато-масс спектрометрия (Методы аналитической химии), М: Химия, 1984. — 216 с.
- Хубер Л. Применение днодио-матричного детектирования в ВЭЖХ / Л. Хубер- Перевод с англ. Р. Ф. Зайнуллнна- Под ред. В. Г. Бсрезкнна. М,: Мир, 1993. — 92 с.
- Шати В, Д., Сахартова О. В. Высокоэффективная жидкостная хроматография. Рига: Зинатне, 1988.
- S4 Я. И Яшин. Основные достижения хроматографии в XX веке // Лабораторный журнал, 2002. -№ 1 (июль). С. 8−9,
- A combined HPLC-immunoenzymatic comprehensive screening for suspected drug poisoning in the emergency department / A Fabbri, S Ruggeri, G Marehesini, and A Vandelti if Emeig. Med, J., May 2004- 21: 317 322.
- A textbook of modem toxicology / Ernest Hodgson.—3rd, ed, 1932. 582 p,
- Clarkes isolation and identification of drugs ^ Second edition. London. The pharmaceutical press, J 996. 1654 p.
- DW Hill and AJ Kind, Reversed-phase solvent-gradient HPLC retention indexes of drugs // Journal of Analytical Toxicology, 1994- -Vol. 18(5} (September I). P. 233- 242.
- Ira S, Lurio. High-performance liquid chromatography of seized drugs at elevated pressure with 1.7 pm hybrid CIS stationary phase columns И Journal of Chromatography A. Volume 1100, Issue 2, 30 December 2005T Pages 168 175
- M J. Bogusz. Hyphenated liquid chromatographic techniques in forensic toxicology // Journal of Chromatography B: Biomedical Sciences and Applications, Volume 733, Issues t-2,15 October 1999, Pages 65−91
- Manfred R. Moeller, Stefan Steinmeyer and Thomas Kraemer. Determination of drugs of abuse in blood It Journal of Chromatography Br
- Biomedical Sciences and Applications, Volume 713, Issue I, 21 August 1998, Pages 91−109
- P Marquet and G. Lachatre. Liquid cKromatography-mass spectrometry: potential in forensic and clinical toxicology I/ Journal of Chromatography B: Biomedical Sciences and Applications, Volume 733, Issues 1−2, 15 October 1999, Pages 93−118
- Principles of toxicologyl environmental and industrial applications / edited by Phillip L. Williams. Robert C. James, Stephen M. Roberts, 2nd ed., 2000. -606 p.
- IS, Wu Zhanpin. A simple and rapid method for the extraction of Five major alkaloids from opium // Forensic Science International, Volume 64, Issues 2−3. February 1994, Pages 103−106,