Выделение и изучение свойств и стабильности ?-амилазы из культуры ткани Rauwolfia serpentina Benth

ДиссертацияПомощь в написанииУзнать стоимостьмоей работы

Научная новизна. Амилазы являются одними из ключевых ферментов метаболизма, как растений, так и клеточных культур растительного происхождения. Таким образом, фундаментальные исследования в этой области представляют несомненный научный интерес. Кроме того, незначительное количество литературных данных по изучению гидролаз именно растительных клеточных культур заставляет обратить пристальное… Читать ещё >

Содержание

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
- 1. 1. Практическая значимость а-амилазы
- 1. 2. Использование культивируемых тканей в биохимии и биотехнологии
- 1. 3. Структура а-амилаз
- 1. 4. Физико-химические свойства а-амилаз и специфичность их действия
- 1. 5. Механизм действия фермента
- 1. 6. Молекулярная гетерогенность а-амилазы
- 1. 7. Методы выделения и очистки а-амилазы
  - 1. 7. 1. Осаждение органическими растворителями и высаливание нейтральными солями
  - 1. 7. 2. Ионообменная хроматография
  - 1. 7. 3. Аффинная хроматография
2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
- 2. 1. Объекты исследования и методы культивирования
- 2. 2. Методы получения цитозольной фракции
- 2. 3. Методы определения активности а-амилазы
- 2. 4. Подбор оптимальных условий ферментативной реакции а-амилазы
- 2. 5. Определение концентрации белка
- 2. 6. Выделение и очистка
  - 2. 6. 1. Фракционное осаждение растворами солей
  - 2. 6. 2. Гель — хроматография
  - 2. 6. 3. Аффинная хроматография
- 2. 7. Электрофоретические методы анализа фермента
  - 2. 7. 1. Электрофорез в пластинах полиакриламидного геля
  - 2. 7. 2. Окраска полиакриламидных гелей для выявления белковых полос
  - 2. 7. 3. Окраска геля для выявления амилолитической активности
  - 2. 7. 4. Электрофорез с добавлением 8Б
- 2. 8. Иммунологические методы
  - 2. 8. 1. Получение антисыворотки к а-амилазе
  - 2. 8. 2. Радиальная иммунодиффузия в агаровом геле
  - 2. 8. 3. Радиоизотопный метод определения обмена а-амилазы и общего белка
- 2. 9. Статистическая обработка результатов
3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
- 3. 1. Динамика уровня активности а-амилазы, содержания белка и накопления биомассы культурой ткани И. вегреп^па
  - 3. 1. 1. Параметры контрольной культуры, выращенной на стандартной питательной среде
  - 3. 1. 2. Параметры культуры, выращенной на питательной среде с крахмалом
  - 3. 1. 3. Исследование влияния гибберелловой кислоты на синтез и секрецию а-амилазы культурой ткани раувольфии змеиной
- 3. 2. Определение изоферментного спектра а-амилазы из культуры ткани Rauwolfia serpentina на разные сроки культивирования
- 3. 3. Выделение а-амилазы из культуры ткани Rauwolfia serpentina
  - 3. 3. 1. Выделение а-амилазы методом гель-хроматографии
  - 3. 3. 2. Получение высокоочищенной а-амилазы методом аффинной хроматографии
- 3. 4. Влияние диметилсульфоксида на активность а-амилазы
- 3. 5. Влияние ингибиторов на активность а-амилазы раувольфии змеиной
- 3. 6. Изучение физико-химических свойств а-амилазы
  - 3. 6. 1. Влияние температуры и рН среды на активность фермента
  - 3. 6. 2. Кинетические параметры а-амилазы из культуры ткани раувольфии змеиной
  - 3. 6. 3. Определение молекулярной массы изоферментов а-амилазы
- 3. 7. Изучение кругооборота а-амилазы и общего белка в культивируемых клетках раувольфии змеиной
4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

Выделение и изучение свойств и стабильности ?-амилазы из культуры ткани Rauwolfia serpentina Benth (реферат, курсовая, диплом, контрольная)

Актуальность темы

Амилолитические ферменты были известны человеку уже в бронзовом веке. Первые упоминания о продуктах, полученных путем сбраживания крахмалсодержащего сырья, относятся к VI — VII векам до н.э. В настоящее время амилазы и родственные им ферменты широко используются в промышленности, медицине и биотехнологии.

Несмотря на тот факт, что именно растительные амилазы положили начало науке о ферментах, в последнее время амилолитическим ферментам растений уделяется значительно меньше внимания, чем грибным или бактериальным. Гидролазы культур растительных клеток вообще изучены недостаточно и в современной литературе имеются лишь единичные сведения о структурно — функциональных особенностях а-амилаз каллусных тканей.

Получение растительных гидролаз перспективно, прежде всего, для пищевой и медицинской промышленности. К сожалению, содержание амилаз в тканях взрослого растения невелико, а использование солода требует жесткого контроля зерна, как по микробиологическим показателям зараженности, так и по физико-химическим свойствам ферментативного комплекса. Одним из решений данной проблемы является использование высокопродуктивных культур клеток растений. Методами генной инженерии и целенаправленной селекции можно получать линии растительных клетоксуперпродуцентов, как по первичным метаболитам, например ферментам, так и по вторичным, таким как углеводы или алкалоиды.

Получение а-амилазы из раувольфии змеиной интересно еще и тем, что данная культура является продуцентом спектра алкалоидов, обладающих антиаритмическим действием. Таким образом, разработка оптимальных схем разделения и очистки ферментов и низкомолекулярных БАВ может значительно повысить экономическую эффективность промышленного культивирования каллусных клеток этого растения.

Таким образом, изучение обмена амилолитических ферментов в культурах растительных клеток не только пополнит скудную копилку знаний в данной области, но и сыграет немаловажную роль в промышленном использовании растительных гидролаз.

Задачи исследования.

1. Изучение динамики активности а-амилазы в культуре ткани R. serpentina, динамики накопления белка, биомассы ткани, обводненности клеток.

2. Разработка методов выделения и очистки а-амилазы из культуры ткани R.serpentina.

3. Изучение физико-химических и кинетических свойств фермента, разработка и оптимизация метода определения амилолитической активности применительно к культурам ткани.

4. Изучение изоферментного спектра а-амилазы из культуры ткани R.serpentina.

5. Изучение обмена а-амилазы в культуре ткани R.serpentina.

В настоящей работе представлены данные по кругообороту а-амилазы в штамме К-27 каллусной культуры ткани R. serpentina, определены константы синтеза и деградации, время полужизни и концентрация фермента в пассируемой культуре.

Кроме того, проведен ряд работ, направленных на увеличение синтеза а-амилазы культурой клеток Я. зегрепйпа путем субстратной индукции. Отмечена интересная особенность культуры к секреции в окружающую среду белка, обладающего декстриногенной активностью, предприняты попытки увеличения количества секретируемого белка.

Модифицирован и оптимизирован к особенностям а-амилазы из клеточных культур метод определения декстриногенной активности ферментов (метод Каравея).

Разработан ряд методов высокой очистки а-амилазы растительного происхождения, в том числе и с помощью колоночной хроматографии на аффинном сорбенте.

Теоретическая и практическая значимость. Наряду с теоретическим, диссертация имеет также и практическое значение. Первое связанно, прежде всего, с исследованиями метаболизма а-амилазы в штамме К-27 культуры ткани Я-Бегрепипа в плане изучения биохимии и молекулярной биологии клетки. Впервые было проведено исследование обмена а-амилазы в пассируемой культуре раувольфии, результаты которого углубляют наши знания об обмене индивидуальных белков в культурах растительных тканей. Результаты исследования физико-химических и кинетических свойств а-амилазы — одного из ключевых ферментов метаболизма растений, -дополняют наши представления о путях деградации крахмалоподобных полисахаридов в организмах растительного происхождения, а изолирование и изучение свойств гидролаз может стать необходимой предпосылкой для осуществления внеклеточных реакций по биотрансформации ряда биологически-активных веществ различного происхождения.

Практическая значимость работы заключена, прежде всего, в тех перспективах, которые открывает промышленное использование .' - .'>>.—л, , культивируемых растительных клеток — продуцентов гидролаз. Исследование способов увеличения синтеза амилаз растительными клетками способно свести на нет одно из главных преимуществ грибов и бактерий — более высокую амилолитическую активность в клетке, а разработка методов увеличения секреторной способности растительной клетки нанесет удар и по второму преимуществу суспензионных культур микроорганизмов. Кроме того, высокие органолептические показатели даже плохо очищенных препаратов амилаз растительного происхождения позволяют использовать их в производственном цикле, например пищевой промышленности, тогда как амилазы микробного и бактериального происхождения нуждаются в тщательной, и, зачастую, дорогостоящей очистке.

Установлено, что растительная а-амилаза является менее иммунотоксичной для человека, чем амилаза микробного происхождения, а методы выделения растительных амилаз из клеточных культур обходятся дешевле, чем получение высококачественной а-амилазы из тканей животного происхождения. Это является мощным стимулом для внедрения в медицину препаратов растительных амилаз, как для внутривенного введения, так и для создания мультиферментных препаратов для перорального использования.

Предложенные в данной работе методы выделения и очистки ос-амилазы позволяют существенно уменьшить число операций, требующих применения вредных органических растворителей, а так же повысить выход конечного продукта.

1. Обзор литературы.

Выводы.

1. Был разработан новый метод выделения а-амилазы из культуры ткани раувольфии змеиной, позволяющий получить 2.5 мг высокоочищенного фермента из 100 г сырой биомассы.

2. Изучена динамика изменения амилолитической активности в культуре ткани раувольфии змеиной, выращенной на коллекционной среде, и средах с различной степенью замещения сахарозы на крахмал.

3. Установлен факт секреции а-амилазы клеткам ткани раувольфии и изучено влияние некоторых веществ на секрецию а-амилазы клетками ткани в окружающую среду.

4. Предложены методы культивирования раувольфии змеиной на средах, содержащих в качестве источника углеродного питания частично гидролизованный крахмал.

5. Изучены физико-химические и кинетические свойства а-амилазы раувольфии змеиной, в том числе и молекулярная гетерогенность фермента. Установлено изменение молекулярной гетерогенности фермента в зависимости от срока культивирования. Максимальное количество изоформ (5) наюлюдалось на 39 сутки .

6. изучены синтез и стабильность а-амилазы на 60-е сутки культивирования. Определены константы скорости образования, распада и фремя функционирования фермента к клетках ткани раувольфии.

Показать весь текст

Список литературы

А.с. 1 084 297 СССР, МКИ С 12 N 1/20, 15/00. Штамм Bac. subtilis-82продуцент а-амилазы и питательная среда для культивирования Bac. subtilis-82. / И. Э. Бурцева, Е. А. Двадцатова и др. Опубл. 07.04.84, Бюл.№ 13.
А.с. 118 674 СССР, МКИ С 12 N 9/34. Способ стабилизацииглюкоамилазы, продуцируемой Aspergillus awamori в процессе хранения / Б. А. Устинникова, Е. А. Двадцатова и др. Опубл. 15.10.84, Бюл.№ 38.
А.с. 1 214 755 СССР, МКИ С 12 N 9/28. Способ выделения ферментов спротеолитической и амилолитической активностью из Aspergillus oryzae / И. П. Галич, Р. Я. Бейнарович и др. Опубл. 28.02.86, Бюл.№ 8.
А.с. 933 707 СССР, МКИ С 12 N 15/00. Штамм плесневого гриба
Aspergillus oryzae-3 продуцент а-амилазы / Р. В. Зуева, Н. М. Павлова и др. — Опубл. 07.06.82, Бюл.№ 21.
Беленький Д.М. Особенности ферментативного гидролиза а-1,4глюкозидных связей // Успехи биол.химии. 1971. 12. с.164−181
Билай В.И. Биологически активные вещества грибов, и их применение.
Киев: Наук. Думка, 1979, 266с.
Бутенко Р.Г. Клеточная технология для получения экономическиважных веществ растительного происхождения // Культура клеток растений и Биотехнология. М: Наука. 1986. с.3−20.
Бутенко Р.Г. Культура изолированных тканей и физиологоияморфогенеза. М.: Наука, 1964, с212.
Вайнер JI.M. Получение препарата амилазы и разделениеамилолитического и протеолитического комплекса ферментов сорбцией крахмалом. Автореф.дисс.канд.биол. наук. М. 1972. 27с.
Воллосович А.Г. Культура ткани раувольфии, как продуцентпротивоаритмических алкалоидов: автореф.дисс.докт.фарм.наук, СПб, 1992, 38 с.
Воллосович А.Г., Бутенко Р. Г. Культура ткани раувольфии змеиной, какпродуцент алкалоидов // Культура изолированных органов, тканей и клеток растений. 1970. с.253−264.
Галич И.П. Амилазы микроорганизмов. Киев. 1987.
Глемжа A.A. Использование аффинной хроматографии в очисткемикробных гидролаз // Прикл.Биохим.Микробиол. 1982. 18. № 6. с. 1517.
Горбатова К.К., Соломахин В. А., Погулина Г. Н. Фотометрический методопределения активности а-амилазы // Изв.высш.уч.завед. пищ.техн. 1969, 4, с. 169.
Грачева И.М. Технология ферментных препаратов. М.1. Пищ. Промышленность, 1975.
Диксон М., Уэбб Э. Ферменты. М.: Мир, 1982. Т.1, 899с.
Долежл И., Новак Ф. И. Кариологические изменения в ходедифференцировки клеток чеснока. // Культура клеток растений и биотехнология, 1986, с.20−25
Жеребцов H.A. Амилолитические ферменты в пищевойпромышленности. М. Пищ. Промышленность, 1984.
Запрометов М.Н. Вторичный метаболизм и его регуляция в культуреклеток и тканей растений // Культура клеток растений. 1981. с. 167−175
Иванова Г. П., Миргородская O.A., Москвичев Б. В. Стабильность осамилазы Bac.subtilis обратимо иммобилизованной гелем ионита КМТ // Прикл.Биохим.Микробиол. 1985. 57. № 1. с.33−36.
Калинин Ф.Л., Сарнацкая В. В., Полищук В. Е. Методы культуры тканейв физиологии и биохимии растений. Киев, 1980, 488 с.
Калинин Ф.Л., Полищук В. Е. Культивирование тканей растений //
Биохимический Журнал. Киев. 1981. с.24−40.
Квеситадзе Г. И. Грибные и бактериальные амилазы. Тбилиси.: 1984.
Комов В.П. Образование и обмен метаболитов в культуре клетокрастений // Культура клеток и тканей растений: тез.док. Кишинев. 1983 с. 86.
Кочетов Г. А. Практическое руководство по энзимологии. М.: 1986.
Кунах В.А., Каухова И. Е. Особенности поведения клеток в культуреткани раувольфии змеиной // Цитология и генетика. 1982. 16. № 5. с.6−12.
Курсанов A.JI., Дубинина И. М., Кудрявцева Л. Ф., Бураханова Е.А.
Некоторые особенности углеводного обмена в культуре дифференцированных тканей сахарной свеклы // Физиология растений 1976. Т.23. 6. с.6−12.
Миронова В.Ф., Таганкина П. П. Амилазы млекопитающих // Вестник
Биохимика. 1966. 5. № 2. с. 10−24
Михайловская В.Ц. Получение и биохимическая характеристикаочищенных ферментных преваратов из плесневых грибов.: Автореф.дисс.канд.биол. наук. М. 1966. 24с.
Молодова Г. А. Выделение амилазы Asp.oryzae. и изучение ееструктурных и функциональных особенностей.
Автореф.дисс.канд.биол. наук. М. 1966. 24с.
Негрук В.И., Эйстер Г. И., Редичкина Т. Д. Перестройкамитохондриального генома в длительно культивируемой суспензионной культуре клеток Vicia fabiio. // Физ. Раст., 1987, 34, N1, с.179−191.
Номенклатура ферментов. Под редакцией А. Е. Браунштейна. М. :1. ВИНИТИ, 1979, 320с.
Носов А.Н., Пауков В. Н., Китя П. И. Исследование стероидных фракцийкультуры клеток дискореи дельтовидной // // Культура клеток растений и Биотехнология. М: Наука. 1986. с.79−83.
Орещенко Л.И. Разделение и очистка амилолитических ипротеолитических ферментов гриба Asp.oryzae.: Автореф.дисс.канд.биол. наук. М. 1964. 24с.
Пронин С.И. Амилолитические ферменты и их роль в пищевойпромышленности. -М.: Наука, 1964, с. 158−169.
Рухлядева А.П. Полыгалина Г.В Методы определения активностигидролитических ферментов // М. Легк. и пищ. Пром., 1981, 288.
Трайнина Т.И. Условия культивирования грибов рода Aspergillus впроизводстве ферментных препаратов. Автореф.дисс.канд.биол. наук. Харьков. 1969. 22с.
Хорлин А .Я. Активные центры карбогидраз // Структура и функцииактивных центров ферментов. М.: 1974. с.39−69.
Циперович А.С., Галич И. П. Кристалл1защя а-амшази з радянскихферментних препарат1 В // Укр. бюх1м. журн. 1968. 40. N2. с. 14−22.
Цыперович А.С., Галич И. П. Биология и технический прогресс.
Настоящее и будущее. Киев: Наук. Думка, 1976, 233с.
Цыперович А.С., Галич И. П. Исследование молекулярнойгетерогенности кристаллической а-амилазы // Биохимия. 1967. 32. N6. с.1186−1194.
Цыперович А.С. Ферменты. (Основы химии и технологии). Киев :1. Техника, 1971, 351с.
Шамин А.Н. Биокатализ и биокатализаторы : Ист. очерк, М.: Наука, 1971, 196с.
Шульман М.С. Сорбция амилолитических ферментов. М. Пищ. пр-ть.1966. 52с.
Akabori S., Ikenaka T., Hagihara B. Isolation of crystalline Taka-amylase Afrom Takadiastase sankyo // J.Biochem. 1954. 41. N5. p.577−582.
Andjik J., Hagem A., Carlier A., Boute M. Isolement des isoenzymes del’amylase salyivare par isoelectrofocalisation // C.r.Acad.Sci. 1970. 270. N2. p.407.
Areas I.M., Doile D. Shimke R. Studies of endoplasmic reticulum of rat liver
J.Biol.chem. 1969, № 12, p.3303−3315.
Aw S.E., Hobbs J.E., Wootton J.D. Chromatographic purification of isosimesof human a-amylase // BBA. 1968. 168. N2. p.362−370.
Ball E. Differentiation in callus culture cells of sequoila sempervirens //
Groeth. 1950. V.14 p.295−325
Bernfeld P. Methods of enzymology. N.-Y 1955,1, p.149
Boel E., Brady L., Derewenda Z.S., Brzozowski A., Dodson G.G. Solution ofthe structure of Asp. niger acid a-amylase by combined molecular replacement and multiple isomorphus replacement methods // Acta Crystallogr. N47. p.527−535.
Bog-Hansen T.C., Humo F., Raendel H. Immunochemical quantitation ofisoenzymes. Alpha-amylase isoenzymes in barley malt // Anal Biochem. 1974. 61. N2. p.522−527.
Borger H. Uber die Kultur von isolierten Zellen und Gewebefragmenten. //
Arch, f .exp. Zellif, 1926, s.123−190.
Bradford M.M. a rapid and sensitive method for the quontitation ofmicrogramm quontaties of protein, using the principle of protein dying binding // Anal.bioch. 1976. N72 p.248−254.
Buisson C., Duee E., Hasser R., Rayan F. Three demensional structure ofporcine pancreatic a-amylase at 2.9 A resolution. Role Ca in structure and activity // EMBO J. 1987. N6. p.3909−3916.
Bush D.S., Norman G., The calcium requirement for stability and enzymaticactivity of two isoforms of barley aleurone alpha-amylase // J Biol Chem. 1989. 264 N32. p.19 392−19 398.
Caldwell M.L., Chester. R.M., Doebelling A.H. Furthet studies of thepurification and properties of the amylase of Asp. oryzae // J.Biol.Chem. 1945. 161. N1. p.361−365.
Chao S.E., Moritz D.A., Alpha-amylase of maize: differential allelicexpression at the Amy-1 gene locus, and some physiochemical properties of the isozymes // Genetics. 1971. 69 N1. p.47−61.
Chen X, Kuo A, Matsuura H. A gibberellin-stimulated ubiquitin-conjugatingenzyme gene is involved in alpha-amylase gene expression in rice aleurone // Plant Mol Biol. 1995. 29. N 4. p. 787−795.
Cozzone P., Pasero L., Beomfoil B. Characterisation of porcine pancreaticisoamylase // BBA. 1970. 207. N3. p.1940−1970.
Czech H. Kultur von pflanzlichen Gewebezellen. // Arch, f .exp. Zellif., N3,1926, s. 176−179.
Dale R.M.K., Duesing J.M., Keen D, Supercoiled mittohondrial DNA fromplant tissue culture cell.// Nucl. Acids Res., 1981, 9, N12, p.4583−4593.
Davis A.B. Hydrolysis of sorghum grain starch by rumen microorganisms andpurified porcine alpha-amylase as observed by scanning electron microscopy // J Anim Sci. 1995. 138. N.4. p. 900−907.
Fisher E.H., Stein E.A. a-Amylases // The Enzymes. N.Y. Acad.Press. 1960.4. p.313−343.
Gilroy S., McKidney F. T Gibberellic acid and abscisic acid coordinatelyregulate cytoplasmic calcium and secretory activity in barley aleurone protoplasts. // Proc Natl Acad Sci USA. 1992. 89. N 8. p. 3591−3595.
Gotz H., Wast H., Raies F. Agarelectrophretische studien zur Frage vonisaenzymen der Amylase//Clin.Chim.Acta. 1968. 19. N2. p.935−943.
Harada W., Tokuya N. Bacterial isoamylase and pullulanase. //
J.Jap.Soc.Starch Sci., 1984, 31, № 2, p.38−47
Heck G.R., Rott G.F., Gibberellin-repressible gene expression in the barleyaleurone layer // Plant Mol Biol. 1996. 30. N3. p. 611−623.
Hiromi K., Ohnishi M. Some comments about amylase classification // Ibid.1984, 31, № 2, p.74−82
Hooley R.G. Gibberellin perception and the Avena fatua aleurone: do ourmolecular keys fit the correct locks? // Biochem Soc Trans. 1992 20 N1. p. 85−89.
Jacobsen J.V. Control of transient expression of chimaeric genes bygibberellic acid and abscisic acid in protoplasts prepared from mature barley aleurone layers // Plant Mol Biol. 1991. 16. N4. p.713−724.
Jespersen H.M., Johnson F.A. Comparison of the domain-level organizationof starch hydrolases and related enzymes // Biochem J. 1991. V.280. N1 p.51−55.
Juge N, Smith H. Overexpression, purification, and characterization ofrecombinant barley alpha-amylases 1 and 2 secreted by the methylotrophic yeast Pichia pastoris // Protein Expr Purif. 1996. 8. N2. p. 204−214.
Juge N, Snob A. Isozyme hybrids within the protruding third loop domain ofthe barley alpha-amylase (beta/alpha)8-barrel. Implication for BASI sensitivity and substrate affinity // FEBS Lett. 1995. 363. N3. P.299−303.
Jun-Jei Sheu, Tien-Shin Yu, Wu-Fu Tong, Su-May Yui Carbohydrate
Starvation Stimulates Differential Expression of Rice A-Amylase Genes That Is Modulated through Complicated Transcriptional and Posttranscriptional Processes // The journal of biological chemistry 1996. 271. N43. p. 26 998−27 004.
Kadziolla A., Jun-Iche A., Svensson B., Hasser R. Crystall and molecularstructure of barley a-amylase // JMB. 1994. V.239. N1. p.104−130.
Kogel F., Haagen-Smith A. L, Erxleben M. Uber ein neues Auxin aus Harn. //
Z. Phusiol. Chem., 1934, 228, s.90−103.
Koshland M.C. On the mechanism of the glucosidic bondclearage in theenzyme hidrolisis of starch // BBA. 1953. 36. N.29. p.234−245.
Kotte W. Kulturversuche mit isolierten Wurzelspitzen. // Beitz. Z. Allgem.1. Bot., 1922, 2, s.413−434.
Kunkel W. Uber die Kultur von perianthgewebe. // Arch. f. exp. Zellif., N3,1926, s.405−428.
Kuo A, Jung S. Okadaic acid, a protein phosphatase inhibitor, blocks calciumchanges, gene expression, and cell death induced by gibberellin in wheat aleurone cells // Plant Cell. 1996 8 N2. p.259−269.
Kutney J.P., Awerin B., Chei L.S., Honda T., Lewis N.G. Studies in plunttissue culture synthesys and biosythesis of indole alkaloides. // Tetrahedron, 1983, 39, N22, p.3781−3795.
Laude F.A., Boetter B. Electrophoretic examination of human serum amylaseisoenzymes // Enzymologia. 1969. 37. N5−6. p335−342.
Lavodszky P., Elodi P. Structural investigation on pancreatic a-amylase //
Acta Bioch.Biophys. 1970. 5. N2. p.225−229.
Levitzky A., Heller J., Schramm M.S. Specific precipitation of enzyme by itssubstrate: the a-amylase-maltodextrin complex // BBA. 1964. 81. N1. p.101−107.
Livesley M.A., Khond F.G. alpha-Amylase isoenzymes in aged wheataleurone layers // Biochem Soc Trans. 1991. 19. N4. p. 360.
Lowry O.H., Rosenberg F., Farr A. Randall R. Protein mesurement with thefolin phenol reagent // J.biol.chem 1951. 193. p.165
Loyter A., Schramm M.S. The glycogen-amylase complex as a means ofobtaining highly purefied a-amylases // BBA. 1962. 65. N2. p.200−206.
Lue M.Y., Dawis G.F. Protein phosphatase inhibitors enhance the expressionof an alpha-amylase gene, alpha Amy3, in cultured rice cells // Biochem Biophys Res Commun. 1994. 205. N1. p. 807−816.
MacGregor E.A., Kadziolla A., Svensson B. Models for the action of barleyalpha-amylase isozymes on linear substrates // Carbohydr Res. 1994. 257. N2. p.249−268.
Markowitz A., Klein H.P. Purification, crystallization and properties of the aamylase of Pseudomonas saccharofilla// BBA. 1956. 19. N2. p.267−273.
Marshall D., Voloschuk F.G. Glycogen as biospecific sorbent of amylases //
Postepy Biochem. 1981. 27. N2. p. 181−196.
Matsuura Y., Kusunoki M. Data W. Low esolution crystall structure of takaamylase A and its complexes with inhibitors // J.Biochem. 1979. 86. N6. p.1773−1783.
Matsuura Y., Kusunoki M., Harada W., Kakudo M. Structure and possiblecatalitic residues of Taka-amylase A // Ibid. 1984. 95. N3. p.697−702.
Matsuura Y., Kusunoki M., Tanaka H. X-Ray structure and cataliticmechanism of Taka-amylase A // J.Jap.Soc.Starch.Sci. 1983. 30. N2. p.141−147.
McKarter D, Witters N.C. Modification of starch clevage mechanisme bydifferent hidrolases // Biochim Biophys Acta. 1994 1206. N.2. P.289−291.
Mirkov T.E. Syida D.D. Location of the active site of the bean alpha-amylaseinhibitor and involvement of a Trp, Arg, Tyr triad // Glycobiology. 1995. 5. N.l.p. 45−50.
Mitchell E.D., Riquetti P., Loring R.H. Quaternaru structure of Bac. subtilisa-amylase // BBA 1973. 295. N1. p.314−322
Morel G. La culture in vitro du meristeme apical de certaines Orchidees. // C.
R. Ac. Sc. 1963. 256. p.4955−4957.
Morel G., Martin C., Guersion de dahlias atteintes d’une maladie a virus. //
C. R. Ac. Ac. 1950. 235. p.1324−1325.
Morel G., Martin C., Guersion de pommes de terre atteintes demaladies avirus. // C. R. Ac. Agric. 1955. 41. p.470−475.
Mulimani V.H., Homistrak A.S. Alpha amylase inhibitors in sorghum
Sorghum bicolor) // Plant Foods Hum Nutr. 1993. 44. N3. p. 261−266.
Murachige T., Skoog F.A. Revised medium for rapid growth and bioassayswith tobacco tissue cultures. // Phys. Plant. 1962. 15. p.23−26.
Narita K., Murakami H., Ikenaka T. Reinvestigation on the amino acidcomposition and C-terminal group of taka-amylase A // J.Biochem. 1966. 59. N2. p.170−175
Nilson K. Mosbach K. General methodh for entrapment of cells in beaded polymers. // Biotech. 84 World Biotech. Rep. Proc. Conf. USA, Pinner, 1984. 2. p.217−231.
Oakley B. R, Kirch D.R., Morris N.R. // Anal.bioch. 1980, 105, p.361−366
Ono K, McGragor J. Purification of glucoamylase by acarbose (BAY g-5421)affinity chromatography // Biotechnol Appl Biochem. 1986. 8. N2−3. p. 201−209.
Ouchterlony O. Recent progress in microbioligy. Simp. Hels. VIII Inter.
Congr. for Microbiology. 1958. Stocholm. p.163−169
Overton K.H. Biosynthesis of mevaloniod derived compounds in cellcultures // Plant Tissue Culture and its biological application. B.: N.Y. 1977 p.66−75.
Pat.4 217 415 US IC C 12 N 9/34 Starch-degrading anzymes from
Cladosporum resinae / J.J.Marshall Publ 09.03.82.
Pen J., Smith D. Direct screening for high-level expression of an introducedalpha-amylase gene in plants // Plant Mol Biol. 1992. 18. N6. p. 11 331 139.
Quian M., Hasser R., Rayan F. Structere and molecular model refinement ofpig pancreatic a-amylase at 2.1 A resolution // JMB. 1993. N231. p.785−799.
Rechinger C. Untersuchungen uber die Grenzen der Teilbarkeit im
Pflanzenreichen. //Abh. d. Zool. Bot. Ges. Wien. 1893. 43. p.310−334.
Robbins W.J. Effect of autolized yest and peptons on grows of excisedcornroot tipsin the dark. // Bot. Gaz., 1922. 74. p.59−79.
Robyt J.F., Lee C.T. Separation of rat parotid isoamylase by preparative PAAG electrophoresis // Arch.Ozal.Biol. 1970. 15. N12. p.1381−1384.
Robyt J.F., Lee C.T. Structure and functions of amylase //
Arch.Bioch.Biophys. 1971. 144. N1. p. 160−167.
Rodenburg K.W., Hasser R. Domain B protruding at the third beta strand ofthe alpha/beta barrel in barley alpha-amylase confers distinct isozyme-specific properties // Eur J Biochem. 1994. 221. N1. p.277−284.
Sanders T., Rutter W. Molecular properties of rat pancreatic an parotid aamylase // Biochem. 1972. 11. N1. p.130−140.
Schleiden M.J. Beitrage zur phytogenesis. // Muller. Arch. Anat. Phys., 1838.p.137−176.
Schwann T. Mikroskopische Untersuchungen uber die Ubereinstimnung inder Struktur und Wachstum der Tire und pfranzen. // Nz. Oswalds. Berlin. 1939. 176p.
Schwimmer S., Balls A.K. Starch and their derivatives as adsorbents for malta-amylase // J.Biol.Chem. 1948. 180. N1. p.883−894.
Scoog F., Mitter C.O. Chemical regulation of growth and organ formation inplant tissuescultured in vitro. // Symp. Soc. Exp.Biol. «The Biological action of Growth substances». 1957. 11. p. 118−131.
Shimke R.T. Control of enzyme levels in mammalian tisues // Achv.enzymol.1973. v.37. p.135−137.
Sidenius U, Marcell F. Stopped-flow kinetic studies of the reaction of barleyalpha-amylase/subtilisin inhibitor and the high pi barley alpha-amylase // FEBS Lett. 1995. 361 N.2−3. p. 250−254.
Silvanovich M.P., Hill R.D. Affinity chromatography of cereal a-amylase //
Anal.Biochem. 1976. 73. N2. p.430−433.
Snow R. Activation of cambial growth by purehormones. // New phytol.1935. 35. N5. p.347−360.
Strindama A, James M.G. Characterization of the maize gene sugary 1, adeterminant of starch composition in kernels // Plant Cell. 1995. N.7. p. 417−429.
Swift H.J., Brady L., Derewenda Z.S., Dodson E.J., Dodson G.G. Structureand molecular refinement of taka-amylase: fn application of the simulated annealing method // Acta Crystallog. 1991. N47. p.535−544.
Takagi T., Toda H., Isemura T. Bacterial and miod amylase // Enzymes. 1971.5. p.235−271.
Telle J., Gautheret R.J., Sur la culture indefinie des tissus de la racine de
Jusguiame (Hyoscyamus niger L.) // C.R. Ac.Sc. 1949. V.224 p. 1653−1654.
Thama J., Wakim J., Steart L. Comparision of the active sites of a- and pamylase//Biochem.And Biophys.Res.Commun. 1963. 12. p.350−361.
Thielman N.M. Uber Kulturversuche mit Spalffnungszellen. // Ber. Dtsch.
Bot. Gesell. 1924. 4. s.429−433.
Tkachuk R. Competitive affinity chromatography of wheat alpha-amylase //
FEBS Lett. 1975. 52. N1. p. 66−68.
Toda H., Narita K. Replacement of the essential calcium in Taka-amylase A //1.id. 1967. 62. N6. p.767−769.
Toda H., Narita K., Kondo H. The complete amino acid sequence of Takaamylase A // Proc.Jap.Acad. 1982. 588. p.208−212.
Ueda S., Koba Y., Chaen H. Amylase absorbtion on raw starch and itsrelation to raw starch digestion // J.Jap.Soc.Starch.Sci. 1978. 25. N2. p. 124 131.
Veber H.G. Completly separation of a- P- and y-amylases by affinitychromatography on cross-linked amylose // Enzymes. 1983. 35. N4. p.321−329.
Vretblad P. Immobilisation of ligand for biospecific affinity chromatographyvia their hydroxyl group // FEBS Letters. 1974. 47. N1. p.86−89.
Wakhloo J.L. Variation in the total alkaloid content of Rauwolfia serpentinaroots: a concentration from ecological points of view. // J. Ind. Bot. Soc., 1963. 18. N3. p.374−392.
Went F.W. On growth accelerating substances in the coleoptile of Avenasativa. // Proc. Kon. Nedel. Acad. Weten. Amsterdam. 1926. 30. p. 10−23.
Zenin C.T., Park Y.K. Purification and characterisation of acid amylase from
Paecilomyces sp. // J.Ferment.Tecnology. 1983. 61. N1. p.109−112.

Заполнить форму текущей работой