Дипломы, курсовые, рефераты, контрольные...
Срочная помощь в учёбе

Изучение структуры и механизма действия актинопорина RTX-S II из актинии Radianthus macrodactylus

Диссертация: Изучение структуры и механизма действия актинопорина RTX-S II из актинии Radianthus macrodactylus
ДиссертацияПомощь в написанииУзнать стоимостьмоей работы

Благодаря своему мембранотропному действию, цитолизины выступают в качестве цитоплазматических маркеров, являются незаменимым инструментом исследования структурной организации и механизмов функционирования биологических мембран. Знание первичной структуры и пространственной организации этих соединений позволяет делать выводы о центрах связывания с мембранными рецепторами и приводит к пониманию… Читать ещё >

Содержание

  • 1. Введение
  • 2. Литературный обзор. Цитолитические полипептиды актиний: структура, свойства, механизм действия
    • 2. 1. Кишечнополостные — богатый источник биологически активных полипептидов. Цитолизины актиний
    • 2. 2. Некоторые биологические аспекты в изучении цитолизинов актиний
    • 2. 3. Биохимические и функциональные характеристики цитолизинов актиний I-IV групп
      • 2. 3. 1. Низкомолекулярные цитолизины актиний
      • 2. 3. 2. Цитолизины актиний II группы. Актинопорины
        • 2. 3. 2. 1. Первичная структура актинопоринов
        • 2. 3. 2. 2. Пространственная структура актинопоринов
        • 2. 3. 2. 3. Взаимодействие актинопоринов с липидными мембранами
        • 2. 3. 2. 4. Молекулярный механизм порообразования
  • А 2.3.2.5. Фармакологические исследования актинопоринов
    • 2. 3. 3. Цитолизины актиний III группы
    • 2. 3. 4. Цитолизины актиний IV группы
    • 2. 4. Перспективы исследования цитолизинов актиний
  • 3. Результаты и обсуждение
    • 3. 1. Выделение и некоторые физико-химические характеристики цитолизинов R. ф macrodactylus
    • 3. 2. Взаимодействие RTX-S II с липидами и бислойными липидными мембранами
    • 3. 3. Установление первичной структуры актинопорина RTX-S II
      • 3. 3. 1. Определение N-концевой аминокислотной последовательности
      • 3. 3. 2. Определение нуклеотидной последовательности участка гена, кодирующего зрелый актинопорин
    • 3. 4. Исследование конформационной стабильности и гемолитической активности актинопорина RTX-S II
      • 3. 4. 1. Исследование пространственной организации актинопорина RTX-S II
      • 3. 4. 2. Исследование конформационных изменений в структуре актинопорина при действии различных факторов (температуры, рН среды, ионной силы раствора)
      • 3. 4. 3. Исследование влияния различных факторов (температуры, рН среды, ионной силы раствора) на гемолитическую активность RTX-S II
    • 3. 5. Влияние RTX-S II на развитие ооцитов морского ежа Strongylocentrotus intermedius
    • 3. 6. Сравнительное изучение структуры комплексов актинопорина с G-актином и гельзолина с G-актином методами компьютерного моделирования
      • 3. 6. 1. Построение модели пространственной структуры RTX-S II
      • 3. 6. 2. Теоретическое предсказание структур комплексов актинопорин-актин в сравнении с комплексом актин-S 1 гельзолин
    • 3. 7. Исследование межмолекулярного взаимодействия RTX-S II и G-актина
  • 4. Экспериментальная часть
    • 4. 1. Материалы
    • 4. 2. Методы
  • 5. Выводы

Изучение структуры и механизма действия актинопорина RTX-S II из актинии Radianthus macrodactylus (реферат, курсовая, диплом, контрольная)

Поиск высокоспецифичных биологически активных соединений (потенциальных компонентов для создания фармакологических препаратов или биодобавок), исследование механизма их действия, изучение структурно-функциональных отношений, являются важнейшими задачами биоорганической химии. Особый интерес представляют цитолитические токсины белковой природыуникальный по химической структуре и физиологическому действию класс биологически активных соединений, продуцируемых ядовитым аппаратом некоторых насекомых, рептилий, морских беспозвоночных, а также микроорганизмами.

Благодаря своему мембранотропному действию, цитолизины выступают в качестве цитоплазматических маркеров, являются незаменимым инструментом исследования структурной организации и механизмов функционирования биологических мембран. Знание первичной структуры и пространственной организации этих соединений позволяет делать выводы о центрах связывания с мембранными рецепторами и приводит к пониманию ряда процессов, происходящих на клеточном уровне. Несмотря на большой интерес к цитолитическим полипептидам различных микрои макроорганизмов, структурная организация и механизм их действия остаются недостаточно изученными.

Бурное развитие как физических, биохимических, молекулярнобиологических методов исследования, так и методов компьютерного моделирования, позволяет в настоящее время успешно определять структуры первичных и вторичных метаболитов, изучать свойства и механизмы действия этих соединений in vitro, in vivo и in silica.

Настоящая работа представляет собой часть исследований, проводимых в Тихоокеанском институте биоорганической химии ДВО РАН по изучению структурно-функциональных взаимодействий биологически активных полипептидов морских беспозвоночных. Данная диссертационная работа посвящена изучению физико-химических свойств актинопорина, выделенного из тропической актинии Radianthus macrodactylus, установлению его первичной структуры, исследованию его пространственной организации, а также изучению механизма действия этого полипептида.

102 5. Выводы.

1. Из актинии Radianthus macrodactylus выделен и охарактеризован новый цитолитический полипептид RTX-S II. Изучено его действие на проницаемость модельных мембран. Установлено, что RTX-S II относится к классу сфингомиелинингибируемых цитолизинов актиний — актинопоринам.

2. Установлена первичная структура актинопорина RTX-S II, полипептидная цепь которого состоит из 177 аминокислотных остатков. Обнаружена высокая степень гомологии аминокислотных последовательностей актинопоринов актиний, принадлежащих к одному семейству Stichodactylidae.

3. Исследована пространственная организация актинопорина на уровне его вторичной и третичной структур. Показано, что RTX-S II имеет достаточно жесткую третичную структуру и упорядоченную вторичную структуру с высоким содержанием Р-структуры.

4. Исследовано влияние различных факторов (температуры, рН среды, ионной силы раствора) на конформационную стабильность и гемолитическую активность актинопорина. Установлено, что вторичная и третичная структуры RTX-S II сохраняются практически неизменными в широком диапазоне рН (от 2,0 до 11,7), при этом в щелочной среде наблюдается резкое увеличение активности, что связано, вероятно, с ионизацией остатков тирозина. Показано, что необратимая денатурация полипептида, приводящая к полной потере его активности, происходит при температуре выше 53 °C. Обнаружено, что увеличение ионной силы раствора приводит к изменениям в его третичной структуре и увеличению гемолитической активности актинопорина. Установлено, что остатки тирозина в молекуле RTX-S II вносят существенный вклад в эмиссию полипептида, и их флуоресценция более зависима от температуры и ионной силы раствора, чем триптофановая.

5. Исследовано действие актинопорина на развитие ооцитов морского ежа Strongylocentrotus intermedius. Установлено, что RTX-S II оказывает влияние на процессы пролиферации клеток.

6. Рассчитаны кинетические и термодинамические характеристики комплекса актинопорин-актин. Установлено, что актинопорины, помимо взаимодействия с липидными компонентами мембраны, взаимодействуют также и со структурным белком цитоскелета актином, и, таким образом, могут быть отнесены к группе актинсвязывающих белков.

Показать весь текст

Список литературы

  1. .Н., Гелашвили Д. Б. Зоотоксинология. Ядовитые животные и их яды // М.: Высшая школа. 1985. 280 с.
  2. Hessinger D.A., Lenhoff Н.М. The Biology of Nematocysts // Academic Press. Inc. San Diego. 1988. 764 p.
  3. Calton G.J., Burnett J.W. Characterization of nematocyst venoms // In: Hessinger D.A., Lenhoff H.M. (Eds.). The Biology of Nematocysts. Academic Press. Inc. San Diego. 1988. P. 369−374.
  4. Nagai H., Takuwa K., Nakao M., Ito E., Miyake M., Noda M., Nakajima T. Novel proteinaceous toxins from the box jellyfish (sea wasp) Carybdea rastoni II Biochem. Biophys. Res. Commun. 2000. V. 28. P. 582−588.
  5. Nagai H., Takuwa K., Nakao M., Sakamoto В., Crow G.L., Nakajima T. Isolation and characterization of a novel protein toxin from Hawaiian box jellyfish (sea wasp) Carybdea alata И Biochem. Biophys. Res. Commun. 2000. V. 28. P. 589−594.
  6. Norton R.S. Structure and structure-function relationships of sea anemone proteins that interact with the sodium channel //Toxicon. 1991. V. 29. P. 1051−1084.
  7. Norton R.S. Structure and function of peptide and protein toxins from marine organisms // J. Toxicol. Toxin Rev. 1998. V. 17. P. 99−130.
  8. Mahnir V.M., Shumilov U.N., Kovalevskaya A.M., Romanenko L.A., Grebelny S.D. Evidence of several types of biologically active substances in North Pacific sea anemones//Сотр. Biochem. Physiol. 1993. V. 106C. P. 661−665.
  9. Bernheimer A.W. Cytolytic peptide of sea anemones // In: Hall S., Strichartz G. (Eds.). Marine Toxins: Origin, Structure and Molecular Pharmacology ACS. Washington. DC. 1990. P. 304−311.
  10. Turk T. Cytolytic toxins from sea anemones // J. Toxicol. Toxin. Rev. 1991. V. 10. P. 223−262.
  11. Macek P. Polypeptide cytolytic toxins from sea anemones (Actiniaria) // FEMS Microbiol. Immunol. 1992. V. 105. P. 121−130.
  12. Blanquet R. Propeties and composition of the nematocyst toxin of the sea anemone Aiptasia palliada II Сотр. Biochem. Physiol. 1968. V. 25. P. 893−902.
  13. Hessinger D.A., Lenhoff H.M. Assay and properties of the hemolysis activity of pure venom from the nematocysts of the acontia of the sea anemone Aiptasia palliada II Arch. Biochem. Biophys. 1973. V. 159. P. 629−638.
  14. Ferlan I., Lebez D. Equinatoxin, a lethal protein from Actinia equina L. Purification and characterization // Toxicon. 1974. V. 12. P. 57−61.
  15. Devlin J.P. Isolation and partial purification of hemolytic toxin from sea anemone Stoichactis helianthus И J. Pharmac. Sci. 1974. V. 63. P. 1478−1480.
  16. Bernheimer A.W., Avigad L.S. Properties of a toxin from the sea anemone Stoichactis helianthus, including specific binding to sphingomyelin // Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 1976. V. 73. P. 467−471.
  17. Anderluh G., Macek P. Cytolytic peptide and protein toxins from sea anemones (Anthozoa: Actiniaria) // Toxicon. 2002. V. 40. P. 111−124.
  18. Т.А., Монастырная M.M., Апаликова O.B., Швец Т. В., Козловская Э. П. Низкомолекулярные цитолизины и ингибиторы трипсина из морской актинии Radianthus macrodactylus. Выделение и частичная характеристика // Биоорг. химия. 1997. Т. 24. С. 509−516.
  19. Macek P., Lebez D. Isolation and characterization of three lethal and hemolytic toxins from sea anemone, Actinia equina L // Toxicon. 1988. V. 26. P. 441−451.
  20. Hessinger D.A., Lenhoff H.M. Membrane structure and function. Mechanism of hemolysis induced by nematocyst venom: role of phospholipase A and direct lytic factor// Arch. Biochem. Biophys. 1976. V. 173. P. 603−613.
  21. Cline E.I., Weibe L.I., Young J.D., Samuel D. Toxic effect of the novel protein Upl from the sea anemone Urticina piscivora II Pharm. Res. 1995. V. 32. P. 309−314.
  22. Bernheimer A.W., Avigad L.S. A cholesterol-inhibitable cytolytic protein from the sea anemone Metridium senile II Biochem. Biophys. Acta. 1978. V. 541. P. 96−106.
  23. Grotendorst G.R., Hessinger D.A. Purification and partial characterization of the phospholipase A2 and co-lytic factor from sea anemone {Aiptasia pallida) nematocyst venom//Toxicon. 1999. V. 37. P. 1779−1796.
  24. Calton G.J., Burnett J.W., Vader W. A study of the nematocyst venoms of the sea anemone, Bolocera tuediae // Toxicon. 1978. V. 16. P. 443−451.
  25. Meinardi E., Azcurra J.M., Florin-Christensen M., Florin-Christensen J. Coelenterolysin: a hemolytic polypeptide associated with the coelenteric fluid of sea anemones//Сотр. Biochem. Physiol. 1994. V. 109B. P. 348−354.
  26. Malpezzi E.L.A., Freitas J.C. Hemolytic activity of the nematocyst venom from the sea anemone Bunodosoma caissarum II Braz. J. Med. Biol. Res. 1991. V. 24. P. 1245−1249.
  27. Cline E.I., Wolowyk M.W., Weibe L.I., George R., Samuel J. Isolation and characterization of a novel cardiac stimulatory and hemolytic protein from sea anemone Urticina piscivora (Sebens and Laakso) // Pharm. Sci. 1995. V. 1. P. 155 162.
  28. Khoo K.S., Kam W.K., Khoo H.E., Gopalakrishnakone P., Chung M.C.M. Purification and partial characterization of two cytolysins from a tropical sea anemone, Heteractis magnifica II Toxicon. 1993. V. 31. P. 1567−1579.
  29. M.M., Зыкова T.A., Козловская Э. П. Выделение и характеристика высокомолекулярных цитолизинов из морской актинии Radianthus macrodactylus II Биоорг. химия. 1998. Т. 25. С. 733−741.
  30. Shik J.M. A Functional Biology of Sea Anemones // In: Calow P. (Ed.). Functional Biology Series Chapman & Hall. London. 1991. 342 p.
  31. G., Krizaj I., Strukelj В., Gubensek F., Мабек P., Pungercar J. Equinatoxins, pore-forming proteins from sea anemone Actinia equina, belong to a multigene family//Toxicon. 1999. V. 37. P. 1391−1401.
  32. Lotan A., Fishman L., Zlotkin E. Toxin compartmentation and delivery in the cnidaria: The nematocyst’s tubule as a multiheaded poisonous arrow // J. Exp. Zool. 1996. V. 275. P. 444−451.
  33. Sencic L., Macek P. New method for isolation of venom from the sea anemone Actinia cari. Purification and characterization of cytolytic toxins // Сотр. Biochem. Physiol. 1990. V. 97B. P. 687−693.
  34. Klug M., Weber J., Tardent P. Direct observation of hemolytic activity associated with single nematocysts // In: Hessinger D.A., Lenhoff H.M. (Eds.). The Biology of Nematocysts. Academic Press. Inc. San Diego. 1988. P. 543−550.
  35. Maretic Z., Russel F.E. Stings by the sea anemone Anemonia sulcata in the Adriatic sea//Am. J. Trop. Med. Hyg. 1983. V. 32. P. 891−896.
  36. Mebs D. Anemonefish symbiosis: vulnerability and resistance of fish to the toxin of the sea anemone// Toxicon. 1994. V. 32. P. 1059−1068.
  37. Giese C., Mebs D., Werding B. Resistance and vulnerability of crustaceans to cytolytic sea anemone toxins // Toxicon. 1996. V. 34. P. 955−958.
  38. Meinardi E., Florin-Christensen M., Paratcha G., Azcurra J.M., Florin-Christensen J. The molecular basis of the self non self selectivity of a coelenterate toxin // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1995. V. 216. P. 348−354.
  39. Elliot R.C., Konya R.S., Vickneshwara K. Isolation of a toxin from the dahlia sea anemone, Tealia feline L. // Toxicon. 1986. V. 24. P. 117−122.
  40. Kem W.R. Sea anemone toxins: Structure and action // In: Hessinger D.A., Lenhoff H.M. (Eds.). The Biology of Nematocysts. Academic Press, Inc. San Diego. 1988. P. 375−405.
  41. Saier Jr.M.H. A functional-phylogenetic classification system for transmembrane solute transporters // Microbiol. Mol. Biol. Rev. 2000. V. 64. P. 354−411.
  42. Macek P., Belmonte G., Pederzolli C., Menestrina G. Mechanism of action of equinatoxin II, a cytolysin from the sea anemone Actinia equina L. belonging to the family of actinoporins // Toxicology. 1994. V. 87. P. 205−227.
  43. A.C., Мольнар A.A., Козловская Э. П., Монастырная М. М. Действие токсина из Radianthus macrodactylus на проницаемость биологических и модельных мембран // Биол. мембраны. 1987. Т. 4. № 3. С. 243−248.
  44. Norton R.S., Bobek G., Ivanov J.O., Thomson M., Beer E.F., Mortiz R.L., Simpson R.J. Purification and characterization of proteins with cardiac stimulatory and hemolytic activity from the sea anemone Actinia tenebrosa II Toxicon. 1990. V. 28. P. 29−41.
  45. Athanasiadis A., Anderluh G., Macek P., Turk D. Crystal structure of the soluble form of equinatoxin II, a pore-forming toxin from the sea anemone Actinia equina И Structute. 2001. V. 9. P. 341−346.
  46. Mancheno J.M., Martin-Benito J., Martinez-Ripol M., Gavilanes J.G. Hermoso J.A. Crystal and electron microscopy structures of sticholysin II actinoporin reveal insights into the mechanism of membrane pore formation // Structure. 2003. V. 11. P. 1−20.
  47. Heuck A.P., Hotze E.M., Tweten R.K., Johnson A.E. Mechanism of membrane insertion of a multimeric beta-barrel protein. Perfringolysin О creates a pore using ordered and coupled conformational changes // Mol. Cell. 2000. V. 6. P. 1233−1242.
  48. Anderluh G., Pungercar J., Strukelj В., Macek P., Gubensek F. Cloning, sequencing and expression of equinatoxin II // Biochem. Biophys. Res. Comm. 1996. V. 220. P. 437−442.
  49. Wang Y., Chua K.L., Khoo H.E. A new cytolysin from the sea anemone Heteractis magnifica: isolation cDNA cloning and functional expression // Biochem. Biophys. Acta. 2000. V. 1478. P. 9−18.
  50. Anderluh G., Podlesek Z., Macek P. A common motif in proparts of Cnidarian toxins and nematocyst collagens and its putative role // Biochim. Biophis. Acta. 2000. V. 1476. P. 372−376.
  51. Pungercar J., Anderluh G., Gubensek F., Strukelj B. Sequence analysis of the cDNA encoding the precursor of equinatoxin V, a newly discovered hemolysin from the sea anemone Actinia equina И Biochem. Biophys. Acta. 1997. V. 1341. P. 105−107.
  52. Anderluh G., Pungercar J., Strukelj В., Macek P., Gubensek F. The coding region of the equinatoxin II gene lacks introns // Croat. Chem. Acta. 1995. V. 68. P. 533−542.
  53. Anderluh G., Pungercar J., Krizaj I., Strukelj В., Gubensek F., Macek P. N-terminal truncation mutagenesis of equinatoxin II, a pore-forming polypeptide from the sea anemone Actinia equina II Protein Eng. 1997. V. 10. P. 751−755.
  54. Anderluh G., Barlic A., Krizaj I., Menestrina G., Gubensek F., Macek P. Avidin-FITC topological studies with three cysteine mutants of equinatoxin II, a sea anemone pore-forming protein // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1998. V. 242. P. 187−190.
  55. Menestrina G., Cabiaux V., Tejuca M. Secondary structure of sea anemone cytolysins in soluble and membrane bound from by infared spectroscopy // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1999. V. 254. P. 174−180.
  56. Killian J.A., Heijne G. How proteins adapt to a membrane-water interface // Trends Biochem. Sci. 2000. V. 25. P. 429−434.
  57. Song L., Hobaugh M.R., Shustak C., Cheley S., Bayley H., Gouaux J.E. Structure of staphylococcal alpha-hemolysin, a heptameric transmembrane pore // Science. 1996. V. 274. P. 1859−1866.
  58. Parker M.W., Buckley J.T., Postma J.P., Tucker A.D., Leonard K., Pattus F., Tsernoglou D. Structure of the Aeromonas toxin proaerolysin in its water-soluble and membrane-channel states // Nature. 1994. V. 367. P. 292−295.
  59. Belmonte G., Pederzolli C., Macek P., Menestrina G. Pore formation by the sea anemone cytolysin equinatoxin II in red blood cells and model lipid membranes // J. Membrane Biol. 1993. V. 131. P. 11−22.
  60. Caaveiro J.M., Echabe I., Gutierrez-Aguierre I., Nieva J.L., Arrondo J.L.R., Gonzales-Manas J. Differential interaction of equinatoxin II with model membranes in response to lipid composition // Biophys. J. 2001. V. 80. P. 1343−1353.
  61. Turk Т., Macek P., Gubensek F. Chemical modification of equinatoxin II, a lethal and cytolytic toxin from the sea anemone Actinia equina L. // Toxicon. 1989. V. 27. N. 3. P. 375−384.
  62. Narat M., Macek P., Kotnik V., Sedmak B. The humoral and cellular immune-response to a lipid attenuated pore-forming toxin from the sea anemone Actinia equina II Toxicon. 1994. V. 32. P. 65−71.
  63. Э.П., Иванов A.C., Мольнар A.A., Григорьев П. А., Монастырная М. М., Халилов Э. М., Еляков Г. Б. Ионные каналы в мембранах, индуцированные гемолизином из актинии Radianthus macrodactylus Н ДАН СССР. 1984. Т. 277. С. 1491−1493.
  64. Doyle J.W., Kem W.R., Vilallonga F.A. Interfacial activity of an ion channel-generating protein cytolysin from the sea anemone Stichodactyla helianthus II Toxicon. 1989. V. 27. P. 465−471.
  65. Zorec R., Tester M., Macek P., Mason W.T. Cytotoxicity of equinatoxin II from the sea anemone Actinia equina involves ion channel formation and increase in intracellular calcium activity I I J. Membrane Biol. 1990. V. 118. P. 243−249.
  66. Michaels D.W. Membrane damage by a toxin from the sea anemone Stichodactyla helianthus. I. Formation of transmembrane channels in lipid bilayers // Biochim. Biophys. Acta. 1979. V. 555. P. 67−78.
  67. Tejuca M., Serra M.D., Ferraras M., Lanio M.E., Menestrina G. Mechanism of membrane permeabilisation by sticholysin I, a cytolysin isolated from the venom of the sea anemone Stichodactyla helianthus // Biochemistry. 1996. V. 35. P. 1 493 714 957.
  68. Shin M.L., Michaels D.W., Mayer M.M. Membrane damage by a toxin from the sea anemone Stoichactis helianthus. II. Effect of membrane lipid composition in a liposome system // Biochim. Biophys. Acta. 1979. V. 555. P. 79−88.
  69. B.C., Лихацкая Г. Н., Козловская Э. П., Монастырная M.M., Еляков Г. Б. Влияние гемолизина из морской актинии Radianthus macrodactylus на проводимость липидных мембран // Биол. мембраны. 1984. Т. 1. № 10. С. 10 191 024.
  70. Poklar N., Fritz J., Macek P., Vesnaver G., Chalikian T.V. Interaction of the pore-forming protein equinatoxin II with model lipid membranes: A calorimetric and spectroscopic study // Biochemistry. 1999. V. 38. N. 45. P.14 999−15 008.
  71. Macek P., Zecchini M., Stanek K., Menestrina G. Effect of membrane-partitioned n-alcohols and fatty acids on pore-forming activity of a sea anemone toxin // Eur. Biophys. J. 1997. V. 25. P. 155−162.
  72. Hinds M.G., Zhang W., Anderluh G., Hansen P.E., Norton R.S. Solution structure of the eukaryotic pore-forming cytolysin equinatoxin II: implications for pore formation //J. Mol. Biol. 2002. V. 315 P. 1219−1229.
  73. Anderluh G., Barlic A., Potrich C., Macek P., Menestrina G. Lysine 77 is a key residue in aggregation of equinatoxin II, a pore-forming toxin from the sea anemone Actinia equina II J. Membrane Biol. 2000. V. 173. P. 47−55.
  74. Gallivan J.P., Dougherty D.A. Cation-pi interactions in structural biology // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1999. V. 96. P. 9459−9464.
  75. Olson R., Nariya H., Yokota K., Kamio Y., Gouaux E. Crystal structure of staphylococcal LukF delineates conformational changes accompanying formation of a transmembrane channel // Nat. Struct. Biol. 1999. V. 6. N. 2. P. 134−140.
  76. Bellamy H.D., Lim L.W., Mathews F.S., Dunham W.R. Studies of crystalline trimethylamine dehydrogenase in three oxidation states and in the presence of substrate and inhibitor // J. Biol. Chem. 1989. V. 264. N. 20. P. 11 887−11 892.
  77. Sussman J.L., Harel M., Frolow F., Oefner C., Goldman A., Toker L., Silman I. Atomic structure of acetylcholinesterase from Torpedo californica: a prototypic acetylcholine-binding protein // Science. 1991. V. 253. N. 5022. P. 872−879.
  78. Gouaux E. Channel-forming toxins: tales of transformation // Curr. Opin. Struc. Biol. 1997. V. 7. P. 566−573.
  79. Parker M.W., Pattus F., Tucker A.D., Tsernoglou D. Structure of the membrane-pore-forming fragment of colicin A // Nature. 1989. V. 337. P. 93−96.
  80. Allured V.S., Collier R.J., Carroll S.F., McKay D.B. Structure of exotoxin A of Pseudomonas aeruginosa 3.0 A at resolution // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1986. V. 83. P. 1310−1324.
  81. Li J., Carrol J., Ellar D.J. Crystal structure of insecticidal delta-endotoxin from Bacillus thuringiensis at 2.5 A resolution // Nature. 1991. V. 353. P. 815−821.
  82. Van der Goot F.G., Gonzalez-Manas J.M., Lakey J.H., Pattus F. A 'molten-globule' membrane-insertion intermediate of the pore-forming domain of colicin A // Nature. 1991. V. 354. P. 408−410.
  83. Shatursky O., Heuck A.P., Shepard L.A., Rossjohn J., Parker M.W., Johnson A.E., Tweten R.K. The mechanism of membrane insertion for a cholesterol-dependent cytolysin: a novel paradigm for pore-forming toxins // Cell. 1999. V. 99. N 3. P. 293 299.
  84. Malovrh P., Barlic A., Podlesek Z., Macek P., Menestrina G., Anderluh G. Structure-function studies of tiyptophan mutants of equinatoxin II, a sea anemone pore-forming protein // Biochem. J. 2000. V. 346. P. 223−232.
  85. Varanda W., Finkelstein A. Ion and nonelectrolyte permeability properties of channels formed in planar lipid bilayer membranes by the cytolytic toxin from the sea anemone, Stoichactis helianthus II J. Membrane Biol. 1980. V. 55. P. 203−211.
  86. Tejuca M., Serra M.D., Ferraras M., Lanio M.E., Menestrina G. Mechanism of membrane permeabilisation by sticholysin I, a cytolysin isolated from the venom of the sea anemone Stichodactyla helianthus II Biochemistry. 1996. V. 35. P. 1 493 714 957.
  87. П.Д., Монастырная M.M., Козловская Э. П., Еляков Г. Б. Действие гемолизина из морской анемоны Radianthus macrodactylus на эритроцитарную мембрану //ДАН СССР. 1988. Т. 299. С. 748−750.
  88. Chanturiya A.N. Detection of transient capacitance increase associated with channel formation in lipid bilayers // Biochim. Biophys. Acta. 1990. V. 1026. P. 248−250.
  89. Turk Т., Macek P., Gubensek F. The role of tryptophan in structural and functional properties of equinatoxin II // Biochem. Biophys. Acta. 1992. V. 1119. P. 1−4.
  90. Khoo H.E., Fong C.L., Yuen R., Chen D.S. Stimulation of hemolytic activity of sea anemone cytolysins by 8-anilino-l-naphtaIenesulphonate // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1997. V. 232. P. 422−426.
  91. Campos A.M., Lissi E.A., Vergara C., Lanio M.E., Alvarez C., Pazos I., Morera V., Garcia Y., Martinez D. Kinetics and mechanism of St I modification by peroxyl radicals Hi. Protein Chem. 1999. V. 18. P. 297−306.
  92. Parker M.W., Feil S.C. Pore-forming protein toxins: from structure to function // Prog. Biophys. Mol. Biol. 2005. V. 88. P. 91−142.
  93. Yang L., Weiss T.M., Harroun T.A., Heller W.T., Huang H.W. Supramolecular structures of peptide assemblies in membranes by neutron off-plane scattering: method of analysis // Biophys. J. 1999. V. 77. N. 5. P. 2648−2656.
  94. Sket D., Draslar K., Ferlan I., Lebez D. Equinatoxin, a lethal protein from Actinia equina II. Pathophysiological action // Toxicon. 1974. V. 12. P. 63−68.
  95. Ho C.L., Ко J.L., Lue H.M., Lee C.Y., Ferlan I. Effects of equinatoxin on the guinea-pig atrium // Toxicon. 1987. V. 25. P. 659−664.
  96. Drevensek G., Budihna M., Suput D., Bunc M. Nicardipine dose dependency reduces the effect of equinatoxin II on coronary flow in isolated porcine heart // Pflugers. Arch. 2000. V. 440. P. 145−146.
  97. Drevensek G., Bunc M., Budihna M., Suput D. Lowering of the coronary flow in isolated rat heart by equinatoxin II depends upon extracellular Ca2+ concentration // Pflugers. Arch. 2000. V. 439. P. 150−151.
  98. Bunc M., Drevensek G., Budihna M., Suput D. Effects of equinatoxin II from Actinia equina (L.) on isolated rat heart: The role of direct cardiotoxic effects in equinatoxin II lethality//Toxicon. 1999. V. 37. P. 109−123.
  99. Teng C.M., Lee L.G., Lee C.Y., Ferlan I. Platelet aggregation induced by equinatoxin //Thromb. Res. 1988. V. 52. P. 401−411.
  100. Thomson M., Moritz R.L., Simpson R.J., Norton R.S. Tenebrosin-A, a new cardiostimulant protein from the Australian sea anemone Actinia tenebrosa II Biochem. Intl. 1987. V. 15. P. 711−718.
  101. Galettis P., Norton R.S. Biochemical and pharmacological studies of the mechanism of action of tenebrosin C, a cardiac stimulatory and hemolytic protein from the sea anemone, Actinia tenebrosa И Toxicon. 1990. V. 28. P. 695−706.
  102. Khoo H.E., Lim J.P.C., Tan C.H. Effects of sea anemone (Heteractis magnifica and Actinia equina) cytolysins on synaptosomal uptake of GABA and choline // Toxicon. 1995. V. 33. P. 1365−1371.
  103. Migues P.V., Leal R.B., Mantovanni M., Nicolau M., Gabilan N.H. Synaptosomal glutamate release induced by the fraction Be 2 from the venom of the sea anemone Bunodosoma caissarum // NeiroReport. 1999. V. 10. P. 67−70.
  104. Bunc M., Frangez R., Horvat I., Turk Т., Suput D. Effects of Equinatoxins in vivo. Possible role of degranulation of thrombocytes and granulocytes // Ann. NY Acad. Sci. 1994. V. 710. P. 162−167.
  105. Suput D., Frangez R., Bunc M. Cardiovascular effects of equinatoxin III from the sea anemone Actinia equina (L.) // Toxicon. 2001. V. 39. P. 1421−1427.
  106. Batista U., Jezernik K., Macek P., Sedmak B. Morphological evidence of cytotoxic and cytolytic activity of equinatoxin II // Period. Biol. 1987. V. 89. P. 347−348.
  107. Avila A.D., Mateo de Acosta C., Lage A. A new immunotoxin built by linking a hemolytic toxin to a monoclonal antibody specific for immature T lymphocytes // Int. J. Cancer. 1988. V. 142. P. 568−571.
  108. Pederzolli C., Belmonte G., Dalla Sera M., Macek P., Menestrina G. Biochemical and cytotoxic properties of conjugates of transeferrin with equinatoxin II, a cytolysin from a sea anemone // Bioconjugate Chem. 1995. V. 6. P. 166−173.
  109. Batista U., Macek P., Sedmak B. The cytotoxic and cytolytic activity of equinatoxin II from the sea anemone Actinia equina II Cell Biol. Int. Rep. 1990. V. 14. N. 11. P. 1013−1024.
  110. Batista U., Jezernik K. Morphological changes of V-79 cells after equinatoxin II treatment//Cell Biol. Int. Rep. 1992. V. 16. N. 2. P. 115−123.
  111. Meunier F.A., Frangez R., Benoit E., Ouanounou G., Rouzaire-Dubois В., Suput D., Molgo J. Ca (2+) and Na (+) contribute to the swelling of differentiated neuroblastoma cells induced by equinatoxin-II // Toxicon. 2000. V. 38 P. 1547−1560
  112. Hessinger D.A., Lenhoff H.M. Degradation of red cell membrane phospholipids by sea anemone nematocyst venom//Toxicon. 1974. V. 12. P. 379−383.
  113. D.A. 1988. Nematocyst venoms and toxins // In: Hessinger D.A., Lenhoff H.M. (Eds.). The Biology of Nematocysts. Academic Press Inc. San Diego. P. 369 374.
  114. Grotendorst G.R., Hessinger D.A. Enzymatic characterization of the major phospholipase A2 component of sea anemone (Aiptasia pallida) nematocyst venom // Toxicon. 2000. V. 38. N. 7. P. 931−943.
  115. Cline E.I. Upl: In vivo studies involving the potent cardiac stimulant and heamolysin from the sea anemone Urticinia piscivora II Phytother. Res. 1997. V. 11. P. 348−353.
  116. M.M., Козловская Э. П., Иванов A.C., Мольнар А. А., Халилов Э. М., Еляков Г. Б. Действие метридиолизина из морской анемоны Metridium senile на биологические и модельные мембраны // Биол. мембраны 1988. Т. 5. № 8. С. 830−835.
  117. Bernheimer A.W., Avigad L.S., Kim K.S. Comparison of metridiolysin from the sea anemone with thiol-activated cytolysins from bacteria // Toxicon. 1979. V. 17. P. 6975.
  118. Gaphurov J.M., Bulgakov A.A., Galkin V.V., Rasskazov V.A. Some properties of alkaline Dnases of tentacles of actinia Radianthus macrodactylus and their hemolytic activity // Toxicon. 1999. V. 37. P. 1591−1604.
  119. Harvey H.L. Cytolytic toxins // In: Shier W.T., Mebs D. (Eds.). Handbook of Toxicology. Marcel Dekker. New York. 1990. P. 1−66.
  120. Menestrina G., Schiavo G., Montecucco C. Molecular mechanisms of action of bacterial protein toxins // Mol. Aspects Med. 1994. V. 15. N. 2. P. 79−193.
  121. Panchal R.G. Novel therapeutic strategies to selectively kill cancer cells // Biochem. Pharmacol. 1998. V. 55. P. 247−252.
  122. Anderluh G. and Menestrina G. Pore-forming proteins from sea anemones and the construction of immunotoxins for selective killing of harmful cells // In: Fingerman M. and Nagabhushanam R. (Eds.). Bioorganic Compounds: Chemistry and
  123. Biochemistry Applications. Enfield (NH) USA Science Publishers Inc. 2001. P.13I-148.
  124. M.M. Гемолизины морских актиний Radianthus macrodactylus и Metridium senile: выделение, свойства и механизм действия // Диссертация. к.х.н., Владивосток. 1988. 149 с.
  125. Monastyrnaya М.М., Zykova Т.А., Apalikova O.W., Shwets T.W., Kozlovskaya E.P. Biologically active polypeptides from the tropical sea anemone Radianthus macrodactylus II Toxicon. V. 40. P. 1197−1217.
  126. Kem W.R., Dunn B.M. Separation and characterization of four different amino acid sequence variants of a sea anemone (Stichodactyla helianthus) protein cytolysin // Toxicon. 1988. V. 26. P. 997−1008.
  127. Bernheimer A.W., Lai C.Y. Properties of a cytolytic toxin from the sea anemone, Stoichactis kenti II Toxicon. 1985. V. 23. P. 791−799.
  128. Ferlan I., Jackson K.W. Partial amino acid sequence of equinatoxin // Toxicon. 1983. V. 21. N. 3. P. 141−144.
  129. Thompson J.D., Higgins D.G., Gibson T.J. CLUSTLW: improving the sensitivity of progressive multiple sequence alignment through sequence weighting, position specific gap penalties and weight matrix choice // Nucleic Acid Res. 1994. V. 22. P. 4673−4680.
  130. Ichikawa Т., Terada H., Determination of phenylalanine, tryptophan and tyrosine in a mixture of amino acid by 2nd derivative spectrophotometry // Chem. Pharm. Bull. 1981. V. 29. P. 438−444.
  131. Provencher S.W., Glockner J. Estimation of globular protein secondary structure from circular dichroism// Biochemistry. 1981. V. 20. N. 1. P. 33−37.
  132. Malavasic M., Poklar N., Macek P., Vesnaver G. Fluorescence studies of the effect of pH, guanidine hydrochloride and urea on equinatoxin II conformation // Biochim. Biophys. Acta. 1996. V. 1280. P. 65−72.
  133. Poklar N., Volker J., Anderluh G., Macek P., Chalikia T.V. Acid- and base-induced conformational transitions of equinatoxin II // Biophys. Chem. 2001. V. 90. P. 103 121.149150,151.152.153.154,155.156 157 158 159 160 160
  134. Mancheno J.M., De Los Rios V., Martinez Del Pozo A., Lanio M.E., Onaderra M., Gavilanes J.G. Partially folded states of the cytolytic protein sticholysin II // Biochim. Biophys. Acta. 2001. V. 1545. P. 122−131.
  135. С.Ю., Косых В. Г., Холодков O.A., Бурьянов Я. И. УФ- и КД-спектры рестрикционной эндонуклеазы? coRII и ДНК-метилазы EcoRII // Биоорган, химия. 1990. Т. 16. № 1. С. 47−51.
  136. L.L., Kieleczawa J.J., Dunn J.J., Hind G., Sutherland J.C. // Biochim. Biophys. Acta. 1992. V. 1120. P. 59−68.
  137. Д. Основы флуоресцентной спектроскопии // М.: Мир. 1986. 351 с.
  138. М.Р. Использование флуоресцентных методов для изученияразворачивания белков // Биохимия. 1998. Т. 63. № 3. С. 327−337.
  139. Alvarez С., Lanio М.Е., Tejuca М., Martinez D., Pazos F., Campos A.M., Encinas
  140. M.V., Pertinhez Т., Schreier S., Lissi E.A. The role of ionic strength on theenhancement of the hemolytic activity of sticholysin I, a cytolysin from
  141. Stichodactyla helianthus II Toxicon. 1998. V. 36. N. 1. P. 165−178.
  142. Macek P., Lebez D. Kinetics of hemolysis induced by equinatoxin, a cytolytic toxinfrom the sea anemone Actinia equina. Effect of some ions and pH // Toxicon. 1981.1. V. 19. N. 2. P. 233−240.
  143. Костецкий Э. Я, Герасименко Н. И. Фосфолипидный состав и филогения иглокожих//Биология моря. 1984. № 1. С. 39−46.
  144. Korn E.D., Carlier M.F., Pantaloni D. Actin polymerization and ATP hydrolysis // Science. 1987. V. 238. P. 638−644.
  145. Smith P.R., Fowler W.E., Pollard T.D., Aebi U. Structure of the actin molecule determined from electron micrographs of crystalline actin sheets with a tentative alighnment of the molecule in the actin filament // J. Mol. Biol. 1983. V. 167. P. 641 660.
  146. Ishikawa H., Bischoff R., Holtzer H. Formation of arrowhead complexes with heavy meromyosin in a variety of cell types // J. Cell Biol. 1969. V. 43. P. 312−328.164. IAsys manual. 1993.
  147. Gremm D. and Wegner A. Co-operative binding of Ca2+ ions to the regulatory binding sites of gelsolin // Eur. J. Biochem. 1999. V. 262. P. 330−334.
  148. Lowiy O.H., Rosebrough N.J., Fearr A.L., Randall R.J. Protein measurement with Folin phenol reagent//J. Biol. Chem. 1951. V. 193. P. 265−275.
  149. Laemmli U.K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4 // Nature. 1970. V. 227. P. 680−682.
  150. Grey W.R. End-group analysis using dansyl chloride // In: Hirs C.H.W., Timasheff S.N. (Eds.). Methods in Enzymology. 1972. V. 25B. Acad. Press. New York. London. P. 121−139.
  151. .Г., Ганкина E.C., Нестеров B.B. Экспрессный ультрачувствительный метод идентификации N-концевых аминокислот в белках и пептидах с помощью тонкослойной хроматографии // ДАН СССР. 1967. Т. 172. С. 91−93.
  152. Allen G. Amino acid analyses // In: Burdon R.H., Van Knippenberg P.H. (Eds.). Laboratory Techniques in Biochemistry and Molecular Biology. Sequencing of Proteins and Peptides. Elsevier. Amsterdam. New York. Oxford. 1989. 40 p.
  153. Hunkapiller M.W., Hood L.E. Direct microsequence analysis of polypeptides using an improved sequenator, a nonprotein carrier (polybrene), and high pressure liquid chromatography // Biochemistry. 1978. V. 17. N. 11. P. 2124−2133.
  154. Awdeh Z.L., Williamson A.R., Askonas B.A. Isoelectric focusing in polyacrylamide gel and its application to immunoglobulins // Nature. 1968. V. 219. P. 66−68.
  155. Vascovsky V.E., Suppes Z.S. Phospholipases of marine invertebrates. I. Distribution of phospholipase A // Сотр. Biochem. Physiol. 1972. V. 43. P. 601−609.
  156. Muller P., Rudin D.O., Tien H.T., Wescott W.C. Methods for the formation of single bimolecular lipid membranes in aqueous solution // J. Phis. Chem. 1963. V. 67. P. 534−535.
  157. Г. А., Подмарев B.K. Методы биологии развития // М.: Наука. 1975. С. 188−222.
  158. Blin N., Stafford D.W. A general method for isolation of high molecular weight DNA from eukaryotes // Nucleic Acids Res. 1976. V. 3. P. 2303−2308.
  159. Sanger F., Nicklen S., Coulson A.R. DNA sequencing with chain-terminating inhibitors // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1977. V. 74. P. 5463−5467.
  160. Altschul S.F., Gish W., Miller W., Myers E.W., Lipman D.J. Basic local alignment search tool // J. Mol. Biol. 1990. V. 215. P. 403−410.
  161. Winder A.F. and Gent W.L.G. Correction of light-scattering errors in spectrophotometric protein determinations // Biopolymers. 1971. V. 10. N. 7. P. 1243−1251.
  162. Schwede Т., Kopp J., Guex N., Peitsch M.C. SWISS-MODEL: an automated protein homology-modeling server//Nucleic Acids Research. 2003. V. 31. P. 3381−3385.
  163. Stayton P. S., Sligar S.G. The cytochrome P-450cam binding surface as defined by site-directed mutagenesis and electrostatic modeling // Biochemistry. 1990. V. 29. N. 32. P. 7381−7386.
  164. Schuck P. Use of surface plasmon resonance to probe the equilibrium and dynamic aspects of interactions between biological macromolecules // Annu. Rev. Biophys. Biomol. Struct. 1997. V. 26. P. 541−566.
Заполнить форму текущей работой

Заказал и сдал!