Микробиоценоз кишечника человека при бластоцистной инвазии и воздействие Blastocystis hominis на макроорганизм

Актуальность проблемы.

Широко распространенное состояние дисбиоза кишечника свидетельствует о наметившемся сдвиге в микробном ценозе человека, и является отражением экологического неблагополучия внешней среды (Красноголовец, 1989; Куваева, Ладодо, 1991; Воробьев с соавт., 1996).

Учитывая значительную роль кишечной микрофлоры в защитных функциях макроорганизма, актуальным представляется изучение нарушения стабильности микробиоценоза кишечника при различных патологиях желудочно-кишечного тракта. Дисбиоз кишечника выявляется у 70% больных с патологией гастродуоденальной зоны и гепатобилиарной системы, в 100% случаях при заболеваниях кишечника (Дорофеев, Несвижский, 1997; Комаров, Рапопорт, 2000; Walker, 2005).

Дисбиотические расстройства характеризуются, как правило, снижением количественного содержания индигенных облигатно-анаэробных бактерий (бифидобактерий, лактобацилл, бактероидов и т. д.) и изменением количества других условно-патогенных микроорганизмов (стафилококков, синегнойной палочки, грибов рода Candida и др.). Среди условно-патогенных микроорганизмов, способствующих возникновению и поддержанию дисбиотического процесса, помимо бактерий и грибов, значительное место занимают кишечные простейшие, которые в небольшом количестве встречаются в кишечнике практически всех здоровых лиц (Воробьев с соавт., 1996; Бондаренко, 1999; Бухарин, 2000).

Известно, что кишечные паразитозы представляют актуальную эколого-медико-социальную проблему. По данным ВОЗ в России ежегодно регистрируется около 2 млн больных паразитарными болезнями (Сергиев, Лебедева, 1997; Онищенко, 2002).

Наиболее известными возбудителями кишечных расстройств протозойной природы являются Entamoeba hystolitica, Giardia lamblia и.

Criptosporidium (Генис, 1979; Крылов, 2004). Менее известна протозойная инфекция — бластоцистоз, обусловленная паразитированием преимущественно в толстой кишке простейших Blastocystis hominis (Reinthaler et al., 1988; Ziertd et al., 1988; Чайка, 1992).

Дисбиозы кишечника, обусловленные инвазией Blastocystis hominis, характеризуются длительным течением, особенно на фоне снижения резистентности макроорганизма (Потатуркина-Нестерова с соавт., 2001). С биологических позиций это одна из распространенных форм функционирования биологической системы «паразит — хозяин», которая представляет собой эволюционно прогрессивную форму симбиоза, определяющее развитие и взаимоадаптацию микроорганизма и макроорганизма (Одум, 1986; Нетрусов с соавт., 2004). При этом данная система с медицинской точки зрения проявляется в виде носительства — одна их форм инфекционного процесса, при которой наступает динамическое равновесие между микроорганизмами и макроорганизмом с развитием иммуноморфологических реакций и антительного ответа (Беляков с соавт., 1987; Бондаренко, Горская, 1992).

В связи с этим, актуальным представляется рассмотрение взаимной адаптации Blastocystis hominis и макроорганизма, а именно инвазии и персистенции патогеном экологической ниши и механизмов защиты макроорганизма. В этом плане особого внимания заслуживает изучение преодоления Blastocystis hominis «экологического барьера» противодействия со стороны представителей индигенной микрофлоры и формирования устойчивого биоценоза кишечника (Бухарин, 1990; Соколов, 1990; Леванова, Алешкин, 2002).

В ряде работ (Валышев, Зыкова, Коннова, 1994; Зыкова, Челпаненко, 1994) при расшифровке взаимодействия патогенов и макроорганизма, в частности для выявления причинно-следственных связей дисбиозов, активно обсуждаются факторы персистенции, обеспечивающие длительное выживание возбудителя в организме хозяина. Естественно, в зависимости от вида патогена, механизмы его персистирования и патогенности различны. Однако подавляющее большинство микроорганизмов продуцируют секретируемые факторы деградации защиты хозяина уклоняясь от нее, обеспечивая себе персистирование в организме (Сомов, Литвин, 1988; Бухарин, 1994; Прозоровский с соавт, 1994).

Одновременно важным является рассмотрение адаптаций организма хозяина при инвазии Blastocystis hominis. Одними из наиболее чувствительных к действию инфекционных агентов защитных систем организма являются системы крови и иммунитета. Существует достаточное количество сообщений (Борисов, Смирнов, 1994; Рязанцева, Новицкий, Степовая, 2003; Новицкий, Уразова, 2004; Рязанцева, Новицкий, 2004) о ключевой роли данных систем в обеспечении противоинфекционной защиты, однако значение их при бластоцистозе до сих пор не изучено.

Расшифровка механизмов реагирования и ответа (в том числе иммунного) со стороны макроорганизма на внедрение и персистирование Blastocystis hominis открывает перспективы решения фундаментальных проблем биологии — понимание природы носительства микроорганизмов, выявления причинно-следственных связей дисбиозов, совершенствования оценки микробного состава кишечника, наконец, создание основ микроэкологического мониторинга микробных сообществ макроорганизма.

Цель работы — теоретическое обоснование и разработка оценки микробиоценоза кишечника как «экологического барьера» при бластоцистозе и изучение взаимоадаптаций системы Blastocystis hominisмакроорганизм.

Для реализации поставленной цели были решены следующие задачи:

1. Разработать систему мониторинга микробного состава кишечника гастроэнтерологических больных при бластоцистозе и практически здоровых людей.

2. Охарактеризовать ' структуру микробиоценоза кишечника гастроэнтерологических больных и практически здоровых людей при инвазии Blastocystis hominis для анализа противодействия нормальной микрофлоры патогенам.

3. Произвести морфофизиологическую оценку выделенных штаммов Blastocystis hominis с целью определения биологически активной морфологической формы, способствующей длительной инвазии микроорганизма в кишечнике.

4. Определить степень вирулентности Blastocystis hominis путем выявления антиинтерфероновой, энтеротоксической активности и чувствительности к антипротозойным препаратам как механизмов реализации экологической ниши.

5. Выявить морфофункциональные свойства эритроцитов и количественные изменения лейкоцитов периферической крови при бластоцистозе на модели экспериментальных животных (кроликах, крысах) с целью расшифровки механизмов реагирования макроорганизма на внедрение и персистирование Blastocystis hominis.

6. Исследовать показатели клеточного и гуморального иммунитета на модели экспериментальных Животных при инвазии Blastocystis hominis для объяснения адаптаций макроорганизма к патогену.

Научная новизна.

Впервые разработана система мониторинга микробиоценоза кишечника, включающая комплексную оценку протоценоза и микрофлоры кишечника гастроэнтерологических больных, позволяющая повысить степень выявления дисбиозов, и получения унифицированных данных инвазивности Blastocystis hominis (Рационализаторское предложение № 1 от.

05.10.2005). Установлена высокая инвазивность кишечными паразитами -89,43%, что сопровождалось снижением обсемененности представителей индигенной микрофлоры и повышенным содержанием транзиторных микроорганизмов.

Впервые установлено нарушение состава микробиоценоза кишечника гастроэнтерологических больных при инвазии Blastocystis hominis, которое характеризовалось структурной перестройкой ценотипа, сопровождающейся сменой абсолютных доминант (бифидобактерий, лактобактерий, бактероидов) и появлением среди них грибов рода Candida. Одинаково высокий индекс постоянства эшерихий (С=100%), выделенных у гастроэнтерологических больных и практически здоровых людей свидетельствует об активности «экологического барьера» нормальной микрофлоры кишечника.

Впервые установлено, что степень выраженности дисбиотических изменений микрофлоры кишечника зависит от периода (обострение, ремиссия), продолжительности гастроэнтерологического заболевания и морфологических форм Blastocystis hominis, вегетирующих в кишечнике организма человека.

Впервые описаны безъядерные морфологические формы Blastocystis hominis в фекалиях гастроэнтерологических больных, инвазивность которых в кишечнике сопровождалась диарейным синдромом.

Впервые показана выраженность вирулентных свойств, таких как антиинтерфероновая, энтеротоксическая активности и степень чувствительности к антипротозойным препаратам клинических изолятов Blastocystis hominis, определяющая возможность колонизации экологической ниши и персистенции микроорганизма.

Впервые установлены фазные изменения морфофункциональных свойств эритроцитов и количественного содержания лейкоцитов при и экспериментальном бластоцистозе, свидетельствующие о специфичности адаптации макроорганизма к данному патогену.

Впервые установлено, что при экспериментальном бластоцистозе снижение показателей Т-клеточного иммунитета обусловлено преимущественно угнетением Т-хелперного звена, в основе же гуморального иммунитета лежит угнетение генеза IgG, что можно расценивать как форму иммунодефицита.

Практическая значимость.

Полученные в работе данные расширяют и углубляют теоретические представления взаимоадаптации Blastocystis hominis и макроорганизма, в частности расшифровывают механизмы выживания патогена в условиях экологического барьера нормальной флоры кишечника.

Разработанная система мониторинга микробиоценоза кишечника: БИ+КТ-ФЭО-ЦН-М рекомендована и внедрена в практику клинических и бактериологических лабораторий (Акт о внедрении в клиническую и бактериологическую лаборатории Городской больницы № 1 г. Ульяновска от 10.10.2005).

Создана твердая питательная среда для культивирования Blastocystis hominis, позволившая выявить основные типичные (вакуолярная, гранулярная и амебоидная) и атипичные (безъядерная) морфологические формы простейших (Патентная справка на изобретение РФ № 2 003 135 444 от 09.12.2003).

Выраженность вирулентных свойств: антиинтерфероновой, энтеротоксической активности и степени чувствительности к антипротозойным препаратам клинических изолятов Blastocystis hominis свидетельствует о реализации экологической ниши данных микроорганизмов, что сопровождается различной степенью дисбиоза кишечника гастроэнтерологических больных.

Разработана экспериментальная модель бластоцистоза с целью рассмотрение адаптаций организма хозяина при инвазии Blastocystis hominis (Патент на изобретение РФ № 2 224 465 от 05.06.2002).

Определение изменений в системе крови (морфофункциональных особенностей эритроцитов и количественных показателей лейкоцитов) в макроорганизме можно рекомендовать при проведении комплексного диагностического обследования гастроэнтерологических больных на бластоцистоз.

По материалам диссертационной работы написаны монография «Бластоцистная инвазия и дисбактериз кишечника». Ульяновск, 2003, 155 с. (соавт. Потатуркина-Нестерова Н.И., Красноперова Ю. Ю., Нестеров А.С.), практические рекомендации: «Микрофлора кишечника при бластоцистной инвазии» Ульяновск, 2003, 23 с. (соавт. Красноперова Ю. Ю., Потатуркина-Нестерова Н. И, Исаева И. Н., Нестеров А. С, Бурганова Р.Ф.) — «Экологическая характеристика микробиоценоза кишечника». Ульяновск, 2004, 23 с. (соавт. Исаева И. Н., Красноперова Ю. Ю., Потатуркина-Нестерова Н.И., Бугеро Н. В., Немова И. С., Фалова О. Е., Кулагина Г. М., Богомолова Л.К.) — «Методы выявления патогенных простейших кишечника человека». Ульяновск, 2004, 22 с. (соавт. Потатуркина-Нестерова Н.И., Валкина О.Н.).

Результаты исследования используются в процессе преподавания микробиологии, общей экологии и экологии микроорганизмов на естественно-географическом факультете ГОУ ВПО «Ульяновский государственный педагогический университет имени И.Н. Ульянова» (Акт о внедрении от 15.09.2005, утвержденный ректором ГОУ ВПО «Ульяновский государственный педагогический университет имени И.Н. Ульянова) и на кафедре микробиологии, иммунологии и вирусологии Института медицины, экологии и физической культуры Ульяновского государственного университета (Акт о внедрении от 21.10.2005, утвержденный директором.

Института Медицины, экологии и физической культуры Ульяновского государственного университета).

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Разработана система мониторинга микробного состава кишечника гастроэнтерологических больных, позволяющая выявлять весь спектр микроорганизмов, в том числе единичные клетки Blastocystis hominis.

2. На основании коэффициентов постоянства определена структура микробиоценоза кишечника гастроэнтерологических больных при инвазии Blastocystis hominis, в которой доминирующее положение занимали бифидобактерии, бактероиды и эшерихии, наряду с ними в группу постоянных микроорганизмов входили энтерококки, грибы рода Candida, тогда как у практически здоровых данные микроорганизмы являлись представителями транзиторной флоры.

3. В фекалиях и при культивировании В. hominis выявлены цисты, основные морфологические формы бластоцист: вакуолярные, реже гранулярные, амебоидные клетки обнаружены только в культуре и атипичные безъядерные клетки. Отмечен высокий уровень антиинтерфероновой активности среди штаммов гранулярной и амебоидной форм, что обеспечивает длительную персистенцию данных микроорганизмов.

4. Длительное персистирование в кишечнике макроорганизма Blastocystis hominis обусловлено выраженной степенью вирулентных свойств, таких как антиинтерфероновая, энтеротоксическая активность и степень чувствительности к антипротозойным препаратам.

5. При экспериментальном бластоцистозе показаны изменения морфофункциональных свойств эритроцитов и количественных показателей лейкоцитов, что свидетельствовало о специфическом реагировании макроорганизма на внедрение и персистирование Blastocystis hominis.

6. Персистенция Blastocystis hominis в организме экспериментальных животных сопровождается депрессией клеточного и гуморального звеньев иммунитета.

Апробация работы.

Результаты работы доложены и обсуждены на XVIII съезде физиологического общества имени И. П. Павлова РФ (Казань, 2001), XVIII Всероссийской научной конференции с международным участием «Физиология и патология пищеварения» (Геленджик, Краснодар, 2002), VIII Российской гастроэнтерологической неделе (Санкт-Петербург, 2002, 2003), Всероссийской научной конференции «Клещевые и паразитарные болезни» (Санкт-Петербург, 2002), Всероссийской научной конференции «Проблема инфекции в клинической медицине» и VIII съезде Итало-Российского общества по инфекционным болезням (Санкт-Петербург, 2002), Международном Фальк-симпозиуме «GI Inflammation and Disturbtd Gut Function: The Challenge of New Concepts» (Германия, Фрайбург, 2002), Всероссийской научно-практической конференции «Актуальные вопросы мониторинга экосистем антропогенно — нарушенных территорий» (Ульяновск, 2003), II Международной научно-практической конференции «Медицинская экология» (Пенза, 2003), IV Международной научно-практической конференции «Здоровье и образование в XXI веке» (Москва, 2003), V Славяно-Балтийском научном форуме «Санкт-Петербург — Гастро -2003» (Санкт-Петербург, 2003), Всероссийской научно-практической конференции «Роль социальных, гигиенических и биологических факторов в становлении возрастных особенностей здоровья населения» (Пенза, 2003), IV Всероссийской научно-практической конференции «Окружающая природная среда и экологическое образование и воспитание» (Пенза, 2004), Сибирской зоологической конференции (Новосибирск, 2004), региональной конференции «Экологические и фаунистические исследования в Поволжье».

Ульяновск, 2004), Выездном пленуме «Новые горизонты гастроэнтерологии» (Новосибирск, Москва, 2004), II Всероссийской научно-практической конференции «Проблемы экологии и охраны природы. Пути их решения» (Ульяновск, 2004), Заседании областного отделения Всероссийского общества эпидемиологов и микробиологов (Ульяновск, 2005).

Публикации.

По теме диссертации получены 1 патент на изобретение Российской Федерации, 1 приоритетная справка на изобретение Российской Федерации, 1 удостоверение на рационализаторское предложение, опубликовано 53 работы, в том числе 1 монография, 3 практические рекомендации и 27 статей (в том числе 10 в центральных журналах и 1 в зарубежной печати) и 22 тезиса (Российские и международные конференции, симпозиумы и съезды).

Структура и объем диссертации

.

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, 5 глав собственных исследований, заключения, выводов, списка использованной литературы, включающего 263 источника и приложений. Диссертация изложена на 307 страницах машинописного текста, иллюстрирована 53 таблицами и 49 рисунками.

ВЫВОДЫ.

Разработана система мониторинга микробного состава кишечника, включающая бактериальное исследование с последующей схемой выявления протоценоза: КТ-ФЭО-ЦН-М (Рационализаторское предложение № 1 от 05.10.2005), которая позволяет выявлять даже единичные клетки Blastocystis hominis в фекалиях гастроэнтерологических больных.

Структура микробиоценоза кишечника гастроэнтерологических больных при инвазии Blastocystis hominis по сравнению с практически здоровыми людьми характеризовалась снижением доминирования основных симбионтов, таких как Bifidobacterium (до С=61,76%), Lactobacillus (до С=36,4%) и Bacteroides (до С=65,67%) и увеличением индекса постоянства транзиторной микрофлоры (грибов рода Candida (до С=67,28%), Enterococcus (до С=72,06) и Proteus (до С=55,8%), при этом функция «экологического барьера» микрофлоры поддерживалась бактериями рода Escherichia (С=99,26%). Микроскопические исследования фекалий выявили цисты и разнообразные по морфометрическим и тинкториальным свойствам морфологические формы бластоцист: вакуолярные (в испражнениях (73,16% и в культуре 57,35%), гранулярные (в испражнениях 22,06% и в культуре 32,72%) и амебоидные (только в культуре 4,78%), причем высокой степенью антииитерфероновой активностью обладали гранулярные и амебоидные клетки. При культивировании Blastocystis hominis на твердой питательной среде (Патентная справка на изобретение РФ № 2 003 135 444 от 09.12.2003) и в фекалиях гастроэнтерологических больных обнаружена нетипичная безъядерная морфологическая форма клеток.

Реализация экологической ниши Blastocystis hominis за счет длительного персистирования обусловлено выраженной степенью вирулентных свойств, таких как антиинтерфероновая, энтеротоксическая активность и степень чувствительности к антипротозойным препаратам.

На модели экспериментальных животных показаны фазные изменения морфофункционального состояния эритроцитов, что свидетельствовало об адаптивном процессе, сопровождающемся усилением компенсаторных реакций (10, 20 сутки) с постепенным их истощением (40 и 75 сутки).

Кишечный бластоцистоз, воспроизводимый у экспериментальных животных (Патент на изобретение РФ № 2 224 465 от 05.06.2002) сопровождался снижением количества всех форм лейкоцитов в первые сутки инфекционного процесса, затем наступал значительный подъем данных показателей, что свидетельствовало об активации защитных механизмов макроорганизма.

Blastocystis hominis, паразитируя в кишечнике макроорганизма, вызывали динамично развивающиеся изменения количественных показателей клеточного и гуморального иммунитета, а также функциональной активности эффекторных и регуляторных механизмов иммунного ответа, свидетельствующих о формировании вторичного иммунодефицита.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

.

Организм человека — это экологическая ниша для множества разнообразных микроорганизмов, заселяющих его биотопы. Они составляют микробиоценозы, представляющие собой сложные системы, которые отличаются не только чрезвычайной многокомпонентностью, но и количественным разнообразием входящих в них представителей микрофлоры. При этом человек представляется открытой системой, в которую постоянно извне поступают разнообразные микроорганизмы, в то же время, он сам служит источником их поступления в Ькружающую среду (Несвижский с соавт., 2002).

При физиологической норме организм человека содержит сотни видов бактерий, а также вирусы и простейшие, составляющие в сумме нормальный микробиоценоз (Завгородняя, Зубова, Медведева, 1983; Бондаренко, 1997; Костюк с соавт., 1998; Воробьев с соавт., 1999). Основным общепринятым индикаторным микробиоценозом организма человека является нормальная микрофлора кишечника (Горская с соавт., 1995; Шептулин, 1999; Григорьев, Яковенко, 2000).

В настоящее время с нарастающим неблагополучием экологической ситуации в России обострились многие аспекты здравоохранения, в частности, проблема кишечных паразитозов. Регионы с населением, значительно пораженным паразитами приравниваются к зонам экологического бедствия. Ивестно, что кишечные паразиты оказывают выраженное действие на макроогрганизм, в частности снижают и угнетают формирование и сохранение иммунитета.

Литературные данные и результаты собственных исследований свидетельствуют, что паразитарная колонизация представляет собой сложное многофакторное явление (Коршунов, 1995; Корнева, 1999). Мониторинг паразитофауны кишечника гастроэнтерологических больных, с применением диагностической системы КТ-ФЭО-ЦН-М показал высокую зараженность кишечными паразитами 89,43%, в том числе простейшими — 83,72%, гельминтами — 9,14%.

Получены данные о видовом составе паразитофауны и ассоциациях паразитов кишечника у обследованных. Выявлены 14 видов кишечных паразитов: 9 видов простейших (5 видов саркодовых, 2 вида жгутиковых, 1 вид инфузорий и 1 вид кокцидий) и 4 вида гельминтов (1 вид трематод, 1 вид цестод, 2 вида нематод). Определены доминирующие в структуре пораженности больных виды паразитов: из простейших: Blastocystis hominis, Lamblia intestinalis, из гельминтов — Enterobius vermicularis, причем бластоцисты явились абсолютным преобладающим из всех выявленных видом.

Установлен высокий удельный вес (28,75%) моноиинвазий в структуре пораженности кишечными паразитами гастроэнтерологических больных, на двухчленные ассоциации приходится 63,9%, тогда как четырехчленные ассоциации встречаются крайне редко (0,6%). Среди диинвазий доминируют протозойно-грибковые ассоциации (48,56%), наиболее редки гельминто-гельминтные ассоциации (0,31%).

Инфицированность простейшими В. hominis среди лиц, страдающих заболеваниями органов пищеварения составила 77,71%. При этом существенных различий в обнаружении бластоцист у мужчин и женщин нами обнаружено не было. Вместе с тем прослеживается четкая тенденция роста инфицированности этими простейшими у лиц старших возрастных групп, что, вероятно, связано с инволюционными изменениями организма и снижением иммунорезистентности.

Говоря о нозологической структуре обследованных больных, следует отметить, что при всех хронических заболеваниях органов пищеварения бластоцисты обнаруживаются значительно чаще, чем у лиц контрольной группы. Причем наиболее высокие показатели инфицированности данными простейшими установлены при язвенной болезни — 72,22%, хроническом гастрите — 67,21% и хроническом холецистите — 71,42%. Достаточно высоким остается процент выделения бластоцист и у лиц с другими заболеваниями пищеварительной и гепатобилиарной систем, так, при циррозе печени он составляет 66,66%, при желчнокаменной болезни — 42,42%. Вместе с тем лица контрольной группы инвазированы В. hominis лишь в 6,3% случаев.

Изучение морфологических особенностей бластоцист выявило наличие в клиническом материале вакуолярной и гранулярной форм, а так же цист этих простейших, что согласуется с данными С.Н. Zierdta et al. (1967), Т. В. Сахаровой (1997). Так, в клиническом материале и культуре преобладали вакуолярные формы. На их долю приходилось 73,16% в препаратах, приготовленных из фекалий больных и 57,35% в препаратах из культуры. Аналогичные результаты были получены A. Escobedo et al. (1997). Гранулярная форма встречается в препаратах из кала реже (4,4%), чем в препаратах из культуры (17%). Она имеет сферическую форму, превалируют клетки размером 5−10 мкм (68% - в препаратах из кала и 79% - из культуры). Амебоидная форма обнаруживается преимущественно в культуре (5,5%). Наряду с типичными морфологическими формами В. hominis при выделении чистой культуры нами обнаружены атипичные клетки — безъядерные формы В. hominis.

В последние годы эпидемиологическая обстановка по паразитарным болезням в России стала особенно напряженной. В стране ежегодно официально регистрируется более 1,3 миллионов больных различными паразитозами, среди которых отмечается рост заболеваемости кишечными протозоозами (Романенко, 2001).

В связи с этим особую актуальность приобретает широко распространенная «новая» протозойная инвазия — бластоцистоз, обусловленная паразитированием преимущественно в толстой кишке простейших Blastocystis hominis (Чайка, 1992; Reinthaler et al., 1988; Zierdt et al., 1988).

Исследованиями С. Zierdt et al. (1967, 1978, 1988, 1991) была впервые установлена протозойная природа B. hominis, определено таксономическое положение и получены первые указания на их возможную этиологическую роль в возникновении кишечной инвазии — бластоцистоза у лиц с иммунной недостаточностью.

До недавнего времени этот возбудитель не рассматривался как этиологический фактор патологических состояний человека. Более того, некоторые исследователи вообще сомневались в патогенных потенциях В. hominis и считали бластоцистоз не заболеванием, а безвредным транзиторным носительством, непатогенных микроорганизмов (Johnson et al., 1989; Zierdt, 1991).

В настоящее время имеется достаточное количество эпидемиологических и клинических материалов, а также лабораторных данных, подтверждающих как потенциальную, так и реальную этиологическую роль В. hominis в патологии человека, развивающейся на фоне снижения резистентности макроорганизма (Garavelli et al., 1991; Cirioni et al., 1999).

Приведенные литературные данные о бластоцистах и их значении в патологии человека свидетельствуют о том, что, несмотря на, многочисленные исследования, проводимые, в последние годы, многие аспекты данной проблемы до сих пор не известны. Так, например, остаются не изученными их распространенность в популяции гастроэнтерологических больных, роль в формировании микробиоценоза человека, а также биологические свойства, определяющие участие бластоцист в патологическом процессе, что вообщем, может конкретизировать проблему взаимоадаптации микроорганизма, в частности, В. hominis и макроорганизма.

Анализ литературных данных и собственных исследований свидетельствуют о том, что микрофлора кишечника является индикатором состояния макроорганизма и при снижении защитных сил, наблюдаются изменения микробиоценоза (Гаврилова, 1987; Крамарь с соавт., 1993, 1994, 1998; Бондаренко с соавт., 1995; Бондаренко с соавт., 1998; Бухарина, 2002).

Нарушения микробиоценоза кишечника протекает по общим закономерностям: в результате снижения индигенной анаэробной флоры бифидо-, лактобактерии), участвующей в обеспечении колонизационной резистентности кишечника, нарушается контроль за количественным и качественным составом всей микрофлоры, что проявляется в повышении содержания гемолитических кишечных палочек, доминировании патогенных и условно-патогенных энтеробактерий, а также стафилококков и грибов (Билибин, 1961; Kleessen et al., 1981; Красноголовец, 1989; Крылов, 1994; Федянин, 1997; Багрянцева, 1999; Барановский, Кондрашин, 2000). Последние, при снижении резистентности макроорганизма могут проявлять свою патогенность. Это создает предрасположенность для развития как инфекционных, так и соматических заболеваний (Геллер, 1988; Веселова, 1988; Ван-дер-Ваай, 1992; Шендеров, 1994; Вертиев, 1996; Красноперова с соавт., 2002). В связи с этим, для расшифровки функции «экологического барьера» нормальной микрофлоры кишечника был проведен сравнительный анализ микробиоценоза практически здоровых людей и гастроэнтерологических больных при инвазии В. hominis.

Наиболее выраженные изменения зафиксированы со стороны анаэробной флоры. Из представителей облигатно-анаэробной флоры кишечника обследованных больных отмечается снижение бифидобактерий (61,76%) до значения lg 7,7±0,03 КОЕ/г (в контрольной группе lg 9,1 ±0,3 КОЕ/г у 100% обследованных), лактобактерий (36,4%) и бактероидов (65,07%) до lg 7,3 + 0,04 КОЕ/г и lg 8,5 ±0,04 КОЕ/г (в контроле — lg 8,4+0,2 КОЕ/г у 100% и lg 10,8± 0,3 КОЕ/г у 73,64%), соответственно. По сравнению с другими представителями эндогенной флоры эшерихии были выявлены почти у всех обследованных — 99,26% (в контроле — 100%), при этом обсемененность их снизилась до lg 5,2 ±0,2 КОЕ/г, тогда как в контрольной группе содержание данных бактерий составляло lg 7,7 ±0,3 КОЕ/г. Наряду с этим, характерным микроорганизмом для микробного пейзажа кишечника гастроэнтерологических больных, инвазированных Blastocysts hominis являлась кишечная палочка с гемолитическими свойствами (44,12% - lg 5,7±0,2 КОЕ/г (в контроле не обнаружена).

Для других представителей микробиоценоза кишечника больных, инвазированных Blastocystis hominis, таких как клебсиелл, стафилококков характерно повышенное содержание в 43,38% и 45,59% случаев (в контроле данные микроорганизмы выявлялись в 8,18% и 18,18% случаев). Уровень их содержания составил lg 5,1 ±0,2 КОЕ/г и lg 6,0 ±0,05 КОЕ/г соответственно (в контрольной группе lg 3,3 ± 0,1 КОЕ/г и lg 4,0± 0,4 КОЕ/г). Также, высевались в значительных количествах бактерии рода Proteus и Enterococcus, которые были выявлены у 55,88% и 72,06% больных, тогда как в контрольной группе они высевались у 10,9% и 25,45% людей (lg 5,4 ± 0,3 КОЕ/г и lg 7,6 ± 0,1 КОЕ/г, что превышало данные показатели в контрольной группе — lg 3,6±0,1 КОЕ/г и lg 4,8 ±0,4 КОЕ/г, соответственно). Дрожжеподобные грибы рода Candida в норме редко обнаруживались у здоровых (10,0% обследованных) с низким уровнем содержания. Однако, у людей с заболеваниями желудочно-кишечного тракта, инвазированных В. hominis, они были выявлены в количествах, превышающих 104 КОЕ/г в 67,28% случаев (lg 5,9± 0,06 КОЕ/г). Представители рода Clostridium обнаруживались у 23,9% (65 человек) обследованных больных, тогда как у здоровых этот показатель составил 7,7% (8 человек), однако уровень содержания данных микроорганизмов был относительно одинаков (lg 6,3 ± 0,1 КОЕ/г и lg 6,6 ± 0,2 КОЕ/г, соответственно).

Таким образом, сравнительный анализ микробиоценозов кишечника здоровых людей и гастроэнтерологических больных при инвазии Blastocystis hominis показал значительное сокращение частоты встречаемости анаэробов рода Bifidobacterium до 61,76%, Lactobacillus до 36,4%, Bacteroides до 65,07%, тогда как у практически здоровых людей эти показатели в основном составляли 100%, для бактероидов — 73,64%. Среди всех эндогенных бактерий кишечника только эшерии обладали высокой частотой обнаружения как у практически здоровых людей (100%), так и у гастроэнтерологических больных при инвазии В. hominis (99,26%).Обращает на себя внимание появление в группе больных гемолитической кишечной палочки у 44,12% обследованных (lg 5,7±0,2 КОЕ/г). При этом в данной группе больных выявлено возрастание высеваемости и частоты обнаружения следующих микроорганизмов: бактерий родов Enterococcus, Proteus, Klebsiella, Staphylococcus и грибов рода Candida, что свидетельствует о дисбиотическом нарушении микробиоценоза кишечника.

Таким образом, был проведен анализ микробного пейзажа кишечника с помощью разработанной нами системы мониторинга микробного состава кишечника, включающая бактериальное исследование с последующей схемой выявления протоценоза: КТ-ФЭО-ЦН-М (Рационализаторское предложение № 1 от 05.10.2005 г.), которая позволяет выявлять даже единичные клетки Blastocystis hominis в фекалиях гастроэнтерологических больных.

Для выяснения структуры симбиотических взаимоотношений были изучены индексы постоянства различных таксонов, формирующих микрофлору кишечника больных при инвазии В. hominis и практически здоровых людей. В зависимости от полученных значений все таксоны подразделили на постоянные (050%), добавочные (25%<С>50%) и случайные (С<25%) (Домбровский, Бодягина, 1986). Полученные данные позволили считать, что доминирующими видами в кишечной микрофлоре практически здоровых людей являлись бифидобактерии, лактобатерии и эшериихии с индексом постоянства 100%, также в данную группу входили бактероиды (С= 73,64%). Группа добавочных сочленов микробиоценоза была представлена одним родом — Enterococcus (С=25,45%). Большое разнообразие микроорганизмов наблюдалось в транзиторной группе, в которую входили следующие рода микробов Staphylococcus (С=18,18%), Proteus (С=10,9%), Candida (С=10,0%), Klebsiella (С=8,18%) и Clostridium (С=7,27%).

Анализ ценотипа кишечника больных, инвазированных В. hominis показал смену доминирующих и добавочных микроорганизмов. В состав доминирующей группы на фоне снижения показателей постоянства индигенной флоры (бифидобактерий до С=61,76%, бактероидов до С=65,07%) вошли представители микробиоценоза кишечника, индекс постоянства которых по сравнению с контролем значительно возрос: энтерококки (С=72,06%), грибы рода Candida (С=67,28%) и протеи (С=55,88%). Отмечался высокий показатель постоянства, как и в контрольной группе обследованных, так и в группе больных для эшерихий с нормальной ферментативной активностью (С=99,26%), по видимому, за счет которых поддерживается функция «экологического барьера» микрофлоры при внедрении и персистировании В. hominis. Появление среди резидентных видов у больных, инфицированных бластоцистами энтерококков, грибов Candida и протей в ассоциации с представителями облигатной флоры (бифидо-, эшерихии и бактероиды) свидетельствуют о развитии дисбиоза кишечника.

Изменение иерархии отмечали также в структуре добавочных видов. Так, показатель постоянства для рода стафилококков и клебсиелл возрос — от 18,18% до 45, 59% и от 8,18% до 43,38%, соответственно, в связи с этим для них характерен переход с транзиторной группы в добавочную. В данной группе появляются новые члены микробиоценоза — лактобактерии (С=36,4%), которые в контрольной группе были доминирующими и гемолитическая кишечная палочка (С=44,12%).

Транзиторная группа была представлена только клостридиями, индекс постоянства которых по сравнению с контрольной группой также повысился (С=23,9%), для остальных микроорганизмов характерен переход в доминирующую и добавочную группы.

Таким образом, проведенные исследования показали, что ценотип кишечника гастроэнтерологических больных при бластоцистной инвазии характеризовался снижением доминирования основных симбионтов, таких как Bifidobacterium (до С=61,76%), Lactobacillus (до С=36,4%) и Bacteroides (до С=65,07%) и увеличением индекса постоянства транзиторной микрофлоры грибов рода Candida (до С=67,28%), Enterococcus (до С=72,06%) и Proteus (до С=55,88%), при этом функция «экологического барьера» микрофлоры поддерживалась бактериями рода Escherichia (С=99,26%).

По данным Российской академии медицинских наук, дисбиотические изменения в организме людей имеются у более 60% населения России и в экологически неблагоприятных районах могут достигать 90%. Основное местообитание микроорганизмов — желудочно-кишечный тракт (ЖКТ), поэтому с нарушениями в нормофлоре ЖКТ связаны многочисленные заболевания человека (Сытник, 1989; Артемова, Яковлев, Кравец, 1999; Шендеров, 2001; Ардатская, Дубинин, Минушкин, 2001).

Нарушения микробиоценоза толстой кишки были выявлены при всех заболеваниях желудочно-кишечного тракта, однако, характер данных изменений варьировал в зависимости от диагноза заболевания. Наиболее выраженные дисбиотические сдвиги были характерны для лиц с язвенной болезнью, а также при неспецифическом язвенном колите и хроническом гепатите (В, С). В то время как у больных с опухолью ободочной кишки, ЖКБ, СОЖ и СРК дисбактериоз менее выражен. При этом анализ микрофлоры кишечника больных с патологией пищеварительного тракта при различной продолжительности заболевания не показал существенных различий ни в частоте, ни в степени выраженности дисбиотических сдвигов.

Для персистирования в организме хозяина микроорганизмам необходимы определенные биологические свойства, направленные на деградацию механизмов резистентности хозяина (Бухарин, 1994). К таким механизмам относятся энтеротоксическая, антиинтерфероновая активность и чувствительность к антипротозойным препаратам, характерные для большой группы патогенных и условно-патогенных бактерий, меняющих свою экологическую нишу и создающих предпосылки как для формирования, так и для хронизации инфекционного процесса (Бухарин, 1992).

С целью изучения механизмов воздействия Blastocystis hominis на макроорганизм, в частности, для выявления патогенности клинических изолятов вводили стандартную петлю взвеси бластоцист под нижнее веко морским свинкам. Если культура простейших была патогенна, то у животных развивался кератоконюнктивит. Патогенные свойства бластоцист определяли также путем внутрибрюшинного введения белым мышам. Из 174 клинических изолятов бластоцист, 102 (58,62%) обладали патогенностью, причем показатель LD50 в lg этих культур варьировал от 2,7±0,2 до 5,2±0,1. Наибольшее количество культур обладало выраженными патогенными свойствами, тогда как всего 8 культур имели слабо выраженную патогенность.

Таким образом, показано, что клинические изоляты бластоцист, выделенные у гастроэнтерологических больных обладают различной степенью выраженности патогенности, что, на наш взгляд, является одним из механизмов инвазивности, что определяет воздействие на макроорганизм.

В следующей серии опытов была изучена энтеротоксическая активность Blastocysts hominis. В первой серии опытов изучали влияние на тонкую кишку взвеси бластоцист, изолированных из организма здоровых людей. Во всех случаях заражения изолированных участков реакция была отрицательной. В следующей серии экспериментов в просвет изолированных сегментов вводили бластоцисты, выделенные у людей с заболеваниями желудочно-кишечного тракта. Из 49 штаммов, изолированных у больных, 18 вызывали резко выраженную реакцию (ИД>2,0), 14- выраженную реакцию (ИД>1,0), 7-отрицательную реакцию (ИД<1,0).

Таким образом, бластоцисты обладают энтеротоксигенной активностью, причем эта активность у штаммов, выделенных у больных, выражена сильнее, чем у штаммов, изолированных у здоровых, что определяет, длительное персистирование В. hominis в кишечнике больных и объясняет механизм воздействия на макроорганизм.

Микроорганизмы в силу своей высокой биологической пластичности и тесной интегрированное&tradeв процессы эволюции, одними из первых реагируют на изменение качества среды обитания (Бухарин, 1992). Приспособляемость простейших В. hominis к различным экологическим нишам, с учетом закона конкурентного исключения Вольтера-Гаузе (1926 — 1935) предполагает преимущества тех организмов, которые обладают определенными биологическими свойствами, обеспечивающими устойчивое существование микроорганизмов в соответствующей экологической нише. I.

Исходя из вышеизложенного, перспективным представляется изучение факторов персистенции бластоцист, поскольку именно эти свойства сообщают простейшим устойчивость к защитным механизмам хозяина, обеспечивают стабильность антагонистических отношений в биоценозах.

Принимая во внимание многообразие механизмов персистенции (Бухарин, 1990, 1992; Обгольц, 1992), остановимся на изучении секретируемого фактора бактериальной природы. Этот выбор был обусловлен работами исследователей школы О. В. Бухарина (с 1982 по настоящее время), в которых показано, что АИА встречается у широкого ряда микроорганизмов.

Одним из наиболее важных биологических свойств микроорганизмов, определяющих их способность выживать в условиях антимикробного прессинга макроорганизма и участвовать в патологическом процессе, является персистенция.

Проблема персистирования бактерий, как ключевое звено инфекционной патологии, представляет собой явление общебиологического характера (Бухарин, 1992) и имеет фундаментальное значение как одно из звеньев сложного процесса саморегуляции паразитарных систем (Беляков с соавт., 1987; Дерябин 1996, 1997).

Согласно классификации О. В. Бухарина (1990), в основу которой положен принцип структурно-функциональной адаптации бактерий, различают следующие механизмы персистенции: а) факторы, «экранирующие» клеточную стенку бактерийб) наличие общих гетерогенных антигенов («антигенная мимикрия») в системе «паразит-хозяин" — в) секретируемые факторы бактериальной природы, инактивирующие защитные механизмы хозяина-' г) образование форм с отсутствием (дефектом) клеточной стенки бактерий.

В целях защиты возбудителя, находящегося в макроорганизме, от бактерицидных факторов сыворотки или фагоцитов микробная клетка располагает набором секретируемых бактериями субстанций, направленных на инактивацию механизмов иммунного гомеостаза организма (Бондаренко, Яблочков, 1987). К секретируемым началам, обеспечивающим персистирование микробной клетки, следует отнести антиинтерфероновый признак, выявленный в лаборатории О. В. Бухарина в 1988 г.

Изучение свойства бактерий инактивировать систему человеческого лейкоцитарного интерферона определено как антиинтерфероновая активность микроорганизмов (Бухарин, Соколов, 1988; Усвяцов, 1994). Литературные данные свидетельствуют, что частота встречаемости антиинтерферонового признака бактерий находится в тесной зависимости от источника выделения микроорганизмов и мало коррелирует с его видовой принадлежностью (Сурикова, 1990).

Выявление АИА свидетельствует о таком варианте микроорганизма, для которого экологической ниШей является больной организм. Однако, до настоящего времени изучение этого признака было проведено только среди представителей бактериальной флоры, в то время как данное свойство у возбудителей протозоозов, в частности, бластоцистоза, остается не изученным. Антиинтерфероновая активность широко представлена у простейших В. hominis, изолированных у людей с патологией пищеварительного тракта с инвазией бластоцист (73,33%). Уровень АИА у бластоцист был неодинаков. Доля штаммов с низкими значениями АИА составила 53,53% (53 штамма), со средним и высоким уровнями — 27,27% (27 штаммов) и 19,19% (19 штаммов) соответственно. Отмечено, 4to АИА бластоцист зависела от определенной морфологической формы. Высоким уровнем АИА обладали штаммы гранулярной и амебоидной форм. Уровень антиинтерферонового признака коррелировал с показателями патогенности бластоцист. Таким образом, экспериментально-клинические материалы демонстрируют о том, что антиинтерфероновая активность является определяющим признаком вирулентных и иммуно-супрессивных свойств микроорганизмов, обусловливающим более длительное и тяжелое течение заболеваний с возможным развитием осложнений (Бондаренко с соавт., 2002). Поэтому, антиинтерфероновую активность рассматривают как маркер персистенции, позволяющий использовать этот признак с целью оценки возможного участия возбудителя в развитии патологического процесса.

Антибиотикорезистентность является одной из важнейших характеристик патогенности микроорганизмов (Чахава с соавт., 1982, 1987; Смирнова, Сиченко, Романова, 1989; Машковский, 2000). В связи с этим, следующим этапом нашей работы явилось изучение чувствительности к антипротозойным препаратам бластоцист, выделенных у больных с разной продолжительностью заболеваний, а также в зависимости от их стадии — обострение или ремиссия.

Все выделенные штаммы бластоцист обладали различной чувствительностью к антипротозойным препаратам. Наибольшее количество изолятов было чувствительно к тинидазолу (52,4%) и метронидазолу (47,8%), менее выражено данное свойство было по отношению к орнидазолу (21,6%). Это подтвердилось результатами определения минимальной ингибирующей концентрации, для тинидазола она составила 10″ 3 мг/мл, метронидазола — 10'4 мг/мл и орнидазола 10″ мг/мл. Однако, значительная часть изолятов обладала выраженной резистентностью к антипротозойным препаратам: к тинидазолу и метронидазолу — 20,7%, к орнидазолу — 45,0%.

Определение чувствительности бластоцист к изученным препаратам показало некоторые различия в периоды обострения и ремиссии заболеваний желудочно-кишечного тракта. Так, при обострении наибольшее количество чувствительных штаммов обнаружено к тинидазолу и метронидазолу 52,4% и 47,8% соответственно. В период ремиссии количество штаммов, проявивших чувствительность, увеличилось до 56,7% к тинидазолу и 54% к метронидазолу. Отмечена зависимость изученных свойств от вирулентности изолятов, проявивших умеренную устойчивость к антипротозойным препаратам (г = 0,62).

Одними из наиболее чувствительных к действию инфекционных агентов защитных систем организма является система крови и иммунитета. Известно, что различные по своей природе болезнетворные и условно-патогенные микроорганизмы могут оказывать структурно-функциональную дезорганизацию клеток крови. В связи с этим, следующим этапом нашей работы явилось изучение морфофункциональных и морфометрических характеристик клеток крови (Новицкий, Уразова, 2004).

Установлено, что эритроциты обладают большой чувствительностью к воздействию токсических веществ (Калинина, Чещевик, 1990). Следовательно, возможно было предположить, что бластоцисты могут оказывать на эритроциты значительное воздействие.

Изучение влияния простейших В. hominis на количество эритроцитов крови кроликов проводили в различные сроки от начала вскармливания животных: через 10, 20, 30, 40 и 75 суток. Проведенные исследования показали значительное изменение количества, объема эритроцитов, содержания гемоглобина, их осмотической резистентности, а также активности глутактионредуктазы и Na+, К± зависимой АТФ-азы эритроцитов под действием простейших В. hominis. Обращает на себя цикличность изменения этих показателей. Уже на 10 сутки от начала эксперимента у животных опытной группы наблюдалось увеличение количества эритроцитов -5,14±-0,83−109/л. На 20 сутки от начала эксперимента количество эритроцитов снизилось до 4,38±0,2М09/л (в контрольной группе — 4,23±-0,2−109/л). Снижение количества эритроцитов у животных продолжало и на 40 сутки.

3,56+0,08−10% (у контрольных кроликов — 4,07±0,07−10%.). На 75 сутки от начала исследования количество эритроцитов у опытных животных составляло лишь 2,79+0,16−10% (у кроликов контрольной группы оставалось в прежних пределах). Полученные данные свидетельствуют о резких изменениях количественных показателей популяции эритроцитов при длительном вегетировании бластоцист в толстой кишке животных.

Параллельно с изучением динамики количества эритроцитов, в те же сроки, было проведено изучение объема эритроцитов кроликов, то есть их качественной характеристики. Собственные исследования показали, что через.

20 суток от начала эксперимента наблюдалось увеличение объема эритроцитов животных опытной группы до 9,3+0,09 мкм3, а через 30 суток — снижение до 1.

7,4+0,14 мкм. В последующие сроки наблюдалось дальнейшее уменьшение объема эритроцитов: через 40 суток — до 6,7±0,13 мкм и через 75 — до 5,7±0,22 мкм3. Таким образом, вперавые было установлено, что при экспериментальном бластоцистозе происходит циклическое изменение морфометрических показателей эритроцитов. В доступной литературе аналогичных исследований не обнаружено, но известно, что эритроциты участвуют в нейтрализации токсических веществ, так как их оболочка играет роль универсального адсорбента (Владимиров, 1989; Рязанцева, Новицкий, Степовая, 2003; Рязанцева, Новицкий, 2004).

Длительное вегетирование простейших Blastocystis hominis в организме кроликов вызывало изменение количества гемоглобина в эритроцитах этих животных. Данные свидетельствуют о снижении гемоглобина на 10 сутки от начала эксперимента у опытных животных по сравнению с контрольными (11,60±0,05 г/% и 13,32±0,05 г/% соответственно). Затем количество I гемоглобина у кроликов опытной группы резко увеличивалось и на 20 сутки достигало максимума (15,80±0,68 г/%), в то время как количество гемоглобина у контрольных животных не изменялось (13,30±0,36 г/%). Через 75 суток от начала эксперимента количество гемоглобина у опытных животных снижалось почти в 2 раза (5,81±1,09 г/%), как по сравнению с началом эксперимента, так и в отношении к показателям контрольной группы 13,33±0,28 г/%).

Таким образом, в первые 20 суток наблюдалось увеличение количества, I размеров, объема эритроцитов и содержания в них гемоглобина, что, по-видимому, возможно объяснить компенсаторными реакциями, проявляющимися, в частности, в усилении гемопоэза.

В основе снижения вышеперечисленных параметров, наступающего через 30 суток и продолжающегося до конца эксперимента, лежат, видимо, изменения биохимических процессов в мембранах эритроцитов, а также снижение их резистентности.

Известно, что за осмотическую устойчивость эритроцитов принимают то значение осмомолярности среды, при котором степень гемолиза достигает 50% (Петренко, Владимиров, 1987). Результаты проведенных исследований выявили снижение осмотической резистентности эритроцитов у животных опытной группы в первые 10 суток. Затем, наступало резкое увеличение показателей осмотической резистентности, и через 20 суток от начала эксперимента они достигали максимума. С 30 суток и до конца эксперимента наблюдалось снижение осмотической резистентности, тогда как у контрольных животных она на протяжении всего опыта не изменялась. Однако, одна лишь резистентность не является в полной мере показателем свойств структуры мембраны без параллельных биохимических измерений.

Для понимания физиологических процессов, протекающих в эритроцитах, несомненную важность имеет изучение активности Na+, К±АТФ-азы и глутатионредуктазы. С ферментом Ыа+, К±АТФ-азы связана скорость гликолиза, а именно обеспечение активного обмена через мембрану ионов Na+ и К+. В течение всего периода наблюдения активность Ыа+, К±АТФ-азы падала и на 75 сутки достигала 0,022±0,002 нмоль, что почти в 3 раза меньше по сравнению с началом опыта и почти в 4 раза меньше по сравнению с контролем.

0,089±0,001 нмоль), что, по-видимому, объясняется нарушением работы «натриевого насоса». В результате снижения активности Na+, K±ATO-a3bi уменьшается скорость гликолиза, нарушается энергетический обмен клеток. Следствием этого является раннее старение эритроцитов, что приводит к увеличению их объема.

В реакциях гликолиза участвует и глутатионредуктаза, являющаяся ферментом антиокислительной защиты, при ее недостаточности также уменьшается продолжительность жизни эритроцитов. Поэтому в собственных исследованиях определяли активность глутатионредуктазы эритроцитов кроликов при экспериментальном бластоцистозе. Изменение активности данного фермента отличалось от динамики предыдущих показателей тем, что не носило циклический характер. Уменьшение активности глутатионредуктазы отмечалось уже на 10 сутки. На 75 сутки активность глутатионредуктазы эритроцитов животных опытной группы резко снижалась и достигала 1,63±0,20 нмоль, что почти в 5 раз меньше по сравнению с началом эксперимента и почти в 8 раз меньше по сравнению с контролем (12,98±0,35 нмоль).

Поскольку в системе крови высоко чувствительны к персистированию простейших не только эритроциты, но и лейкоциты, в следующей главе было изучено воздействие бластоцист на эти форменные элементы. В результате исследований установлено наличие трехфазного изменения динамики количественного содержания лейкоцитов у экспериментальных животных. В течение первой недели от начала введения простейших В. hominis наблюдалось формирование абсолютной лейкопении. С четвертой по двенадцатую недели отмечался период абсолютного лейкоцитоза, который, по-видимому, объясняется мобилизацией компенсаторных механизмов организма животных. К четырнадцатой неделе формируется повторный период лейкопении у животных опытной группы, который можно объяснить истощением механизмов компенсации.

Учитывая важную роль лимфоцитов, как клеток эффекторов иммунологического ответа определяли их содержание в периферической крови опытных животных. В ходе эксперимента выяснилось, что динамика абсолютного и относительного количества лимфоцитов в целом повторяет колебания количественных значений лейкоцитов.

В связи с тем, что важную роль в механизмах реализации неспецифической резистентности организма играют нейтрофильные гранулоциты, была изучена динамика их количества в периферической крови. Установлено, что, начиная с 1 недели и до конца эксперимента, у животных формировалась стойкая нейтропения, подтвержденная показателями лимфоцитарно-нейтрофильного индекса.