Устойчивость. 
Возбудитель пастереллеза птиц

Устойчивость во внешней среде невысокая. При нагревании до 60єс погибают через 20 минут, до 70 — 80єс — через 5 — 10 минут, при 90єс — за 10 минут. Солнечные лучи убивают их в течение нескольких минут. При высушивании на открытом воздухе гибнут за 2−3 суток. Выдерживают замораживание до — 70єс. В трупах, воде, навозе и почве сохраняется 1−3 месяца, иногда до года. Дезинфицирующие вещества (3% -ный раствор медного купороса, 13% -ный раствор перекиси водорода, 3% -ный раствор карболовой кислоты) убивают возбудителя за несколько минут. [16,17].

возбудитель пастереллез птица терапия Диагностика Постановка диагноза на пастереллез птиц в случаях острого течения не представляет трудностей, особенно при положительных результатах бактериологического исследования.

Диагноз на пастереллез у птиц ставят только на основании комплекса эпизоотологических, клинических, особенно патологоанатомических данных с обязательным проведением для окончательного установления диагноза бактериологического исследования и заражения опытных животных или птиц. Каждый из методов диагностики имеет ценность лишь в совокупности с другими методами, в особенности с результатами патологоморфологических и бактериологических исследований, результаты же бактериологических и биологических исследований позволяют окончательно поставить диагноз.

При эпизоотическом обследовании выясняется благополучие в прошлом этого хозяйства, а также благополучие соседних ферм и птицы, находящейся у населения, ввозимых в хозяйство птиц, кормов (особенно животного происхождения), ящиков и другой тары для перевозки птиц и т. д. При уточнении эпизоотологических особенностей пастереллеза диагностическое значение имеют: восприимчивость всех видов домашних и многих видов диких птиц, быстрое развитие эпизоотии при остром течении и высокая смертность. В ранее неблагополучных пунктах перед вспышкой болезни обычно регистрируют резкое ухудшение кормления, условий содержания, резкую перемену погоды и т. п., либо устанавливают пополнение ранее неблагополучных стад вновь приобретенной птицей или выращенным молодняком или смешивание разных в санитарном отношении по пастереллезу групп птицы. [2].

Клинические признаки не имеют большого диагностического значения.

Исключительно ценные данные для правильной постановки диагноза при остром и подостром пастереллезе дает патологоанатомическое исследование. Наиболее важны следующие признаки: кровоизлияния на сердце и серозных покровах, а часто и на слизистой кишечника, сильнейший геморрагический энтерит особенно в двенадцатиперстной кишке, характерные некротические очаги в печени и перерождение ее, в легких — отек или пневмония, особенно в случаях, когда заражение произошло через органы дыхания. Патологоанатомические изменения при хроническом пастереллезе разнообразны и имеют меньшее диагностическое значение. Всё же следует отметить фиброзно-некротиские процессы в органах дыхания и нередко фиброзный перикардит, плеврит, хронический катар кишечника. Поражения суставов ног и крыльев нельзя считать постоянным признаком.

Прижизненная бактериологическая диагностика пастереллеза не имеет большого значения, чаще исследуют материал от павших птиц. Результаты лабораторного исследования этого материала дают возможность уточнить первоначальный диагноз. [2].

Бактериологическая диагностика Бактериологическое исследование состоит из следующих моментов:

• 1) микроскопия мазков из крови или мазков-отпечатков из пораженных органов;
• 2) выделение культуры возбудителя путем посева крови сердца, суспензии из органов костного мозга на питательные среды;
• 3) выделение культуры пастерелл путем заражения лабораторных животных и птиц; идентификация выделенной культуры и изучение ее вирулентности, которое особенно необходимо при выделении культуры пастерелл от птиц болеющих хроническим пастереллезом, и бактерионосителей.

Схема лабораторной диагностки.

• 1. Бактериологическая диагностика
• 2. Серологическая диагностика (РА) [13]

Биологическую пробу на пастереллез ставят на белых мышах, либо на голубях, или на курах. Кролики также очень восприимчивы к пастереллам, но ставить биопробу на них вряд ли целесообразно, так как они часто являются спонтанными пастерелло-носителями.

Лабораторных животных и птиц заражают суспензией из паренхиматозных органов подкожно или внутримышечно в дозе 0,2−0,5 мл.

В мазках из патологического материала и особенно крови (ценно для дифференциации от тифа, чумы и других болезней) при пастереллезе находят короткие с закругленными краями овоидные палочки с выраженной биполярностью. Обнаружение в мазках биполярных овоидов — ценный диагностический признак, но, кроме пастерелл, биполярную окраску могут давать и другие бактерии (E. Coli и д. р.), в то же время в некоторых случаях пастереллы не дают четкой биполярности при окраске. Необходимо также строго соблюдать технику окраски.

Учет результатов биопробы проводят в срок до двух-трех дней предварительный и окончательный не позже 5 дней после гибели опытных животных (птиц). Отрицательный ответ — после 10-дневного наблюдения за подопытными животными (птицами). Важно правильно оценить рост культуры на МПА, так как это позволяет судить об антигенных и вирулентных свойствах изучаемой культуры еще до проведения точных исследований. Морфологию колоний целесообразно учитывать так, как указано выше (S-формы, M-формы, R-формы). [2].

Гибель животных, зараженных суспензией патологического материала из паренхиматозных органов или чистой культурой возбудителя, в зависимости от вирулентности штамма наступает в разные сроки. Достаточно вирулентные штаммы вызывают гибель голубей, кур, белых мышей чаще в течении первых суток, редко — двух суток.

Павших подопытных животных и птиц вскрывают, делают посевы из крови сердца, паренхиматозных органов на простые среды, готовят и окрашивают мазки, микроскопируют их с последующей идентификацией культуры.

У подопытных животных и птиц при патологоанатомическом исследовании обнаруживают типичные для пастереллеза признаки, особенно у птиц; у белых мышей — воспалительный очаг на месте инъекции, отечности подкожной клетчатки и мускулатуры, кровоизлияний на эпикарде, увеличенные и отечные лимфатические узлы.

Изолированные и идентифицированные культуры пастерелл необходимо проверять на патогенность и вирулентность, которая у различных штаммов неодинакова.

Особенно важно вирулентность выделенных штаммов установить у птиц-пастереллоносителей, имеющих большое эпизоотическое значение. С этой целью подопытных птиц или белых мышей заражают подкожно или внутримышечно разными дозами изучаемого штамма и в результате определяют среднюю летальную дозу, при которой погибает 50% птиц или белых мышей, взятых в опыт (LD50), при разных способах заражения. Голубей или цыплят целесообразнее заражать внутримышечно, а белых мышей подкожно, различными разведениями пастереллезных культур. [2].

3. Серологическая диагностика Применяется реакция агглютинации.

Ценные данные реакции агглютинации получают при идентификации пастерелл и установлении их различных серотипов, в особенности если в реакции используют высокоактивные сыворотки, полученные гипериммунизацией кроликов или крупного рогатого скота штаммами пастерелл, выделенными от птиц.

РА ставят по общепринятой методике в пробирках на формалинизированном фос-фатном буфере с разведением сывороток 1: 10, 1: 20 и т. д. дозировка компонентов для реакции такова: 0.5 мл сыворотки + 1 мл взвеси антигена. Реакцию учитывают после инкубирования в течение 18 часов при 37⁰ и выдерживания в термостате в течение 4−5 часов при комнатной температуре. Контролями антигена служат буферный раствор и нормальная кроличья сыворотка. Антиген считается непригодным для реакции, если в одном из контролей наблюдают агглютинацию. [2].

Аллергическая диагностика Для прижизненной диагностики хронически протекающего пастереллеза птиц микробоносительства этого микроба некоторыми авторами были испытаны аллергические препараты, но положительных результатов в производственных условиях не было получено.

В последнее время вопросы аллергической диагностики пастереллеза птиц не изучаются, и в связи с ежегодной заменой поголовья маточных стад вновь выращенным молодняком вряд ли в этом есть необходимость. [2].

4. Дифференциальная диагностика Важное значение имеет правильная идентификация выделенной культуры и дифференциация ее от сходных микроорганизмов, главным образом от возбудителя пуллороза, тифа, паратифа водоплавающей птицы, листериоза. [2].

Таблица 1.

При постановке диагноза необходимо пастереллез птиц дифференцировать от других заболеваний. При сверхостром и остром течении нужно отличить пастереллез от чумы, тифа, спирохетоза, острых отравлений, иногда от туберкулеза, листериоза, пуллороза, псевдотуберкулеза, сальмонеллезов (особенно у уток), колибактериоза. Хронический генерализованный или локальный пастереллез необходимо дифферен-цировать от туберкулеза, микоплазмоза, заразного насморка, авитаминоза А, плеврита, перикардита, артритов непастереллезовой этиологии.

При постановке диагноза надо помнить о возможности смешанной инфекции у птиц (пастереллез и листериоз, пастереллез и оспа, пастереллез и чума, пастереллез и пуллороз, пастереллез и туберкулез и т. д.).

Надежная дифференциация пастереллеза от других болезней возможна лишь при оценке комплекса данных по эпизоотологии, клинической и особенно патологоморфо-логической картине, бактериологическому и другим лабораторным методам исследо-вания. Причем для дифференциальной от других болезней акцент должен быть сделан на результаты бактериологического исследования, от других — клинического и патологоморфологического, эпизоотологческого или иных методов исследования.

Чума. Основными отличительными признаками ее от пастереллеза является то, что чумой болеют только куриные, а пастереллезом — все виды птиц. При пастереллезе не бывает параличей ног и крыльев и на вскрытии не обнаруживают (за редким исключением) характерным для чумы кровоизлияний на границе железистого и мускульного желудков. Микроскопическим исследованием при пастереллезе обнаруживают биполярно окрашенные овоиды в мазках крови и из органов, также характерный рост культуры на средах. При подкожном заражении кур, уток и белых мышей можно уточнить диагноз — при содержании в патологическом материале чумного вируса погибнут в течение 12−48 часов только куры, а при содержании в материале возбудителя пастереллеза погибают и утки, и мыши. [2].

Тиф птиц отличается более медленным течением, меньшей смертностью, сильным увеличением селезенки, отсутствием геморрагий. Окончательный дифференциальный диагноз ставят по результатам микроскопического исследования мазков крови (обнаружение биполярно окрашенных овоидов), бактериологического исследования и постановки РА со специфическими для сальмонеллезов сыворотками.

Дяков (1966) нашел и патоморфологические отличия острого пастереллеза от тифа. При пастереллезе находят только единичные некротические очаги, а при гистологических исследованиях не находят инфильтрацию псевдоэозинофильными лейкоцитами. В селезенке при тифе птиц наблюдается гиперплазия РЭС, главным образом в синусах, в миокарде — инфаркт, чего не бывает при пастереллезе.

Спирохетоз птиц отличается от пастереллеза тем, что при исследовании мазков крови под микроскопом при спирохетозе находят спирохеты, а при пастереллезе биополярно окрашенные овоиды. Различны также результаты бактериологического исследования, биопроб. При спирохетозе не находят картину сепсиса на вскрытии. Распространение этой болезни ограниченно (в зоне с теплым климатом). В отдельных случаях пастереллез приходится дифференцировать от других болезней: листериоза, туберкулеза, псевдотуберкулеза, колибактериоза, пуллороза, микоплазмоза, заразного насморка и других болезней верхних дыхательных путей.

Листериоз. В дифференциальном диагнозе от листериоза, кроме эпизоотологических данных, решающее значение имеет биопроба: выделенную культуру наносят на конъюнктиву морской свинки (или кролика) — листерии конъюнктивит и кератит. Необходимо иметь ввиду возможность смешанной инфекции подострого или хронического пастереллеза и листериоза.

Туберкулез. Некоторые паталогоанатомические признаки хронического генерализованного пастереллеза могут напоминать туберкулез, например, некротические поражения в печени, легких, селезенке и т. д. решающим для дифференциального диагноза должно быть микроскопическое исследование мазков-отпечатков из органов с окраской их на биполярность и по Циль-Нильсону на туберкулез и результаты бактериологического исследования и биопробы.

Псевдотуберкулез птиц по некоторым клиническим признакам сходен с пастереллезом, особенно при септическом течении, а при подостром и хроническом течении — по патологоанатомическим изменениям в печени, легких, кишечнике и т. д. точно отдефференцировать его можно лишь по результатам полного бактериологического исследования. Одного микроскопического исследования недостаточно, так как возбудитель псевдотуберкулеза часто окрашивается биполярно обычными анилиновыми красками. [2].

Колибактериоз. При дифференциальной диагностике пастереллеза у молодняка птиц нужно иметь в виду еще колибактериоз, особенно септическое его течение. В дифференциальном отношении главным будут результаты бактериологического исследования — выделение чистой культуры возбудителя и его идентификация, а при вскрытии — увеличение селезенки при колибактериозе, а также и некоторые эпизоотологические данные (поражение только молодняка раннего возраста при колибактериозе и птицы всех возрастов при пастереллезе и т. д.).

Пуллороз. У цыплят старшего возраста пастереллез протекает несколько сходно с пуллорозом. Дифференциальную диагностику нужно проводить, учитывая эпизоотологические данные, клиническую и патологоанатомическую картину, особенно результаты бактериологического исследования с использованием «пестрого ряда» .

Паратиф. При постановке диагноза, особенно утят, нужно иметь в виду еще и паратиф, при котором на вскрытии также могут быть обнаружены некротические очаги в печени, энтерит, гиперемия, а иногда и кровоизлияния на слизистой оболочке кишечника и сердце, сердечно-фиброзная пневмония, характерные для пастереллеза. Полное бактериологическое исследование с обязательным изучением биохимических свойств возбудителей дает возможность отличить эти болезни. [2].

В стационарно неблагополучных по пастереллезу хозяйствах, особенно при хроническом течении инфекции с поражением органов дыхания, весьма важно дифференцировать эту болезнь от микоплазмоза, колисептицемии, заразного насморка и других болезней, протекающих с признаками поражения дыхательных путей.

Микоплазмоз. В дифференциальном отношении от микоплазмоза основное значение имеет полное гистологическое исследование. В легочной ткани при микоплазмозе обнаруживают лимфоидную ткань гиперплазию фолликулярного типа, экссудативную пневмонию с гигантскими клетками в экссудате. В срезах верхних дыхательных путей и бронхов находят гиперплазию и десквамацию мерцательного эпителия слизистых оболочек, трубчатое удлинение слизистых желез эпителия. Обнаруживают также, особенно в трахее, «папиломатозные» выросты слизистой оболочки. Для пастереллеза характерны изменения в легких в виде некротизации стенки сосудов, периваскулярной и интерстициальной ткани.

Только по дифтеритическому воспалению воздухоносных мешков дифференцировать эти болезни нельзя, так как эти изменения одинаковы, но при микоплазмозе они встречаются чаще. В случаях обнаружения на вскрытии крупозного воспаления легких отличить микоплазмоз от хронического пастереллеза по патологоморфологическим изменениям невозможно. Некоторое значение может иметь бактериологическое исследование с биопробой, но надо иметь в виду возможное пастереллоносительство у кур в период вспышки микоплазмоза, особенно в хозяйствах, где пастереллез встречается стационарно и где возникает необходимость в дифференциации этих двух весьма сходных на вскрытии болезней (микоплазмоз и хронический пастереллез с поражением органов дыхания). Возможно и смешанное течение этих двух болезней.

Колисептицемия. Нередко в хозяйствах, неблагополучных по пастереллезу, распространен не только микоплазмоз, но и колисептицемия, поэтому при диагностировании хронического пастереллеза нужно исключить обе эти болезни, для чего исследуют только что убитую птицу, типируют выделенную культуру в РА со специфическими колибактериозными сыворотками и ставят биопробу на 30−60-дневных цыплятах. [2].

Заразный насморк. Сходство усиливается в случаях высокой вирулентности возбудителя заразного насморка и при распространении воспалительного процесса на трахею, бронхи, легкие и воздухоносные мешки. Заразный насморк в отличии от хронического пастереллеза распространяется значительно быстрее, чаще отмечается серозно-фибринозный конъюнктивит. Бактериологическим исследованием при пастереллезе изолируют культуру пастерелл, чаще с пониженной вирулентностью, а при вирусологическом исследовании — вирус.

Инфлюэнца. У утят и гусят острый пастереллез нужно дифференцировать от инфлюэнцы, которая часто поражает гусят. У павших гусей обнаруживают серозно-фибринозный перикардит, фиброзный перитонит и перигепатит, увеличение селезенки, а иногда и аэросаккулиты. В отличии от пастерелл возбудитель инфлюэнцы в первых генерациях не растет или очень плохо растет на простых питательных средах. Кролики и мыши не восприимчивы к инфлюэнце.

Стрептококкоз. Острый стрептококкоз может протекать по типу геморрагической септицемии, а хронический — с поражением бородавок и подошв. Эти признаки сходны с таковыми при пастереллезе. Выделение при бактериологическом исследовании стрептококков и проверка их вирулентности на цыплятах позволяют уточнить диагноз.

Дифференциальная диагностика хронического пастереллеза и его локализованных форм (ринит, артрит, конъюнктивит и т. п.) от аналогичных незаразных болезней не вызывает трудностей. [2].

Иммунитет, средства специфической профилактики и специфическая терапия У переболевших животных и птиц образуется нестерильный иммунитет. После вакцинации птицы могут оставаться пастереллоносителями. Специфическая терапия при пастереллезе птиц не разработана. [16].

Для лечения и профилактики используют вакцины, антибиотики, сульфаниламиды и другие препараты. [12].

Иммунопрофилактика пастереллезов занимает одно из основных мест в системе противоэпизотологических мероприятий. По данным ООН, в борьбе с пастереллезами сельскохозяйственных животных и птиц ветеринария располагает большим арсеналом вакцин. В нашей стране против пастереллеза птиц выпускают следующие:

инактивированные и живые вакцины против пастереллеза птиц;

сухие вакцины против пастереллеза водоплавающих птиц из штаммов «АВ» и «К» Краснодарской НИВС;

сухую вакцину против пастереллеза птиц из пастеровского штамма. [9,16].

Инактивированная вакцина. Представляет капельную фракцию пастерелл. Препарат обладает выраженным противоэпизоотическим эффектом в течении 10 месяцев после вакцинации.

Чаще всего для инактивирования пастерелл используют формалин в концентра-ции 0,1−0,3%. Наряду с формалином испытаны мертиолят, бетапропилактат, неомицин, глутаральдегид, азид натрия, спирт, йод, красители.

Исследована стабильность и иммуногенность инактивированных формальдегидом и ультрафиолетовым облучением вакцин против пастереллеза птиц. Инактивация сублетальной концентрацией формальдегида (0,02%) с ультрафиолетовым облучением или повышенной температурой в 5−6 раз сокращала продолжительность процесса по сравнению с контролем (формалин) и не изменяла ультраструктуры пастерелл. По иммуногенности суспензии пастерелл, инактивированные в экспериментальных режимах, превосходили контроль. Использование димера этиленимина в 0,1% -ной концентрации для инактивации пастерелл позволило получить антиген, превосходящий по иммуногенности пастереллезный антиген, инактивированный формалином. [5].

В опытах по вакцинации против пастереллеза бройлеров в производственных условиях установлено, что инактивированные препараты безвредны, ноне всегда эффективны, если встречаются негомологичные серовары пастерелл. [3,6].

В опытах при внутривенном и внутрибрюшинном введении лимфойдных клеток селезенки двукратно иммунизированных цыплят неимунной птице показана ее невосприимчивость к 100 и 200 LD P. multocida. In vitro и in vivo на макрофагах установлено, что ведущим звеном в защите цыплят против поражения P. multocida был Т-лимфоцидный ответ.

Таким образом, применение инактивированных вакцин безвредно, обеспечивает создание иммунитета у птиц, однако не всегда достаточно напряженного. [1,16].

Живые вакцины. В результате селекции был отобран авирулентный штамм, который использовали в качестве вакцины в виде нативной полужидкой культуры, выращенной глубинным способом в реакторе. Опытным путем установили, что этот штамм формирует у кур иммунитет продолжительностью до 3 месяцев. Из данного штамма изготовили вакцину для практического применения с ограниченным сроком годности (45 дней). Поскольку в условиях реализации срок годности вакцины и выпуску ее в сухом виде. В результате был разработан глубинный метод культивирования пастерелл в реакторах в питательной среде на основе перевара Хоттингера с периодическим добавлением источников питания, последующей концентрацией бактериальной суспензии и лиофилизацией. На основе этих разработок внедрена в ветеринарную практику сухая авирулентная вакцина против пастереллеза со сроком годности 10 месяцев.

С 1962 года приняты для практики живые ослабленные вакцины из аттенуированных штаммов «АВ» и «К» Краснодарской НИВС. Вакцины готовят глубинным методом в питательной среде из мясного бульона. Срок выращивания пастерелл 16 часов. Лиофилизированные вакцины из этих штаммов применяют для вакцинации водоплавающих птиц в неблагополучных и угрожаемых по пастереллезу хозяйствах. [7,11,14,16].

В США применяют и другие эффективные вакцины. Предложена живая вакцина против P. multocida, включающая новый авирулентный штамм P. multocida М-3-G. Генетически стабильные мутанты получают воздействием на пастереллы 5-бром-урацилом, сульфонатом метилметанола. Вакцина, применяемая аэрозольно и перорально, не вызывает падежа у птиц, пораженных микоплазмозом, и создает длительный (до 10 недель) иммунитет не только к гомологичным, но и гетерологичным штаммам пастерелл. Также существует высокоэффективная живая вакцина для перорального введения из штамма-мутанта М-9 с низкой остаточной вирулентностью для профилактики пастереллезной инфекции индеек, вызывающей тяжелую пневмонию с высоким отходом. Испытана безвредность коммерческих живых вакцин и бактерионов из разных сероваров P. multocida. индеек прививали живой вакциной из авирулентного штамма с питьевой водой дважды с 3-нед. интервалом, бактерин (из типов 1,3,4) вводили подкожно в верхнюю треть шеи. Среди вакцинированных птиц гибели от пастереллеза не было, в контроле наблюдали отход. Также используют штамм Клемсонского университета со слабой вирулентностью, выделенной от птиц. Он стабилен по свойствам и эффективен при иммунизации индеек. Напряженный иммунитет у птиц сохраняется более 3 месяцев. В зависимости от эпизоотической обстановки вакцинируют или в 6 — и 10-недельном, или только 10-недельном возрасте. [11,16].

Совсем не давно учеными было выявлено положительное влияние вилозена, который добавляли в суспензию вакцины (не влияет на концентрацию жизнеспособных пастерелл). Аэрозоли этого препарата не вызывали у кур видимой клинической реакции. Устойчивость кур контрольному заражению через 15 суток после вакцинации составила 100%. [7,11].

Также имеются сведенья о получении формолвакцины против пастереллеза птиц. При культивировании штаммов приготавливали разные комбинации ферментативных (панкреатических) гидролизатов — казеина (ПГК), рыбной муки (ПГРМ) и крови крупного рогатого скота (ПГКр) с солевыми добавками. Об эффективности питательных сред судили по наращиванию биомассы через определенные отрезки времени. Посевы каждого штамма делали после соответствующего контроля на МПА.

Подобраны режимы подпитки. Установлены метаболические характеристики по углеводам, азоту и аминокислотным комплексам, определены оптимальные режимы перемешивания культуральной жидкости в процессе роста пастерелл.

В результате проведенных исследований создана относительно дешевая питательная среда на основе гидролизатов рыбной муки, казеина, крови, пептона и солей, позволяющая получить довольно стабильный выход биомассы в количестве 18−20 млрд. ж. к. /см³.

Наработано три серии вакцины общим объемом 500 л., которые проверены на безвредность и иммуногенную активность в опытах на белых мышах, кроликах, индюшатах, цыплятах. Гибель животных после заражения вирулентным штаммом пастерелл в опытных группах не наблюдалось или была минимальной, в то время как в контрольных группах достигла, как правило, 100%. Это свидетельствует о высокой иммуногенной активности испытанной вакцины. Осложнений после иммунизации не отмечено. [3].

Также в 2005 году Таджикский НИВИ разработал и изготовил новый синтезированный препарат САП-2 — смесь S (7-метил-5-оксо-5Н-1,3,4-тиадизоло [3,2-а] пиримидин-2-ил) — изотиурон гидробромида с сахарозой (1:

1), обладающий антибактериальной активностью.

Изучение профилактической эффективности САП-2 при пастереллезе показало, что применение САП-2 и норфосульфазола способствовало улучшению общего состояния цыплят, повышению аппетита, нормализации температуры тела. [12].