Цитохимия циркулирующих нейтрофилов у ожоговых больных

Цитохимия циркулирующих нейтрофилов у ожоговых больных

Шахбанов Р.К.

Изучение цитохимических показателей циркулирующих нейтрофилов у ожоговых больных в динамике развития процесса имеет не только общетеоретическое, но и клиническое значение. Оно позволяет оценить состояние всей неспецифической противомикробной резистентности организма.

Материалом исследования были нейтрофилы лейкомассы ожоговых больных с площадью более 30% поверхности тела.

Гликоген. В течение 1-ой недели заболевания отмечается снижение интенсивности окрашивания цитоплазмы сегментоядерных нейтрофилов. Одновременно в мазках увеличено количество молодых форм с умеренным содержанием ШИК — положительного материала.

На 2-ой неделе патологического процесса наряду с указанной картиной имеет место появление и постепенное увеличение паралейкобластных форм миелоидного ряда — гигантских и малого размера клеток. Продуктов цитохимической реакции в них значительно меньше и они имеют диффузный характер. Значительно больше сегментоядерных клеток со слабым и умеренным содержанием гранул.

В конце 2-ой недели заболевания отмеченная картина цитохимических изменений еще более выражена. Появляются паралейкобластные клетки моноцитарного ряда. В цитоплазме которых единичные разбросанные окрашенные гранулы на слабо-розовом диффузном фоне. Общее содержание гликогена в разных формах НЛ наименьшее — 1,12 0,08.

На 4-ой неделе значительно больше сегментоядерных нейтрофилов, насыщенных продуктами реакции и соответственно меньше клеток с умеренным и слабым их содержанием. В мазках видны лишь единичные паралейкобластные (в основном моноцитарного ряда) клетки с небольшим содержанием гранул в околоядерной зоне. Общее количество гликогена в клетках близко к контролю (1,630,02).

Липиды. На 2-ые сутки содержание окрашенного материала в НЛ не изменено. Большинство сегментоядерных клеток насыщено продуктами реакции.

Картина изменена на 2-ой неделе болезни. Примерно половина выявляемых нейтрофилов имеет умеренное и малое количество окрашенного суданом материала. Паралейкобластные формы слабо окрашены. Содержание суданоположительных гранул в молодых и незрелых формах нейтрофильного ряда не отличаются от контроля.

На 3-ей неделе в мазках преобладают клетки с умеренным и малым количеством продуктов реакции. Гранулы плохо контурируются; преобладает диффузный фон. При этом общее содержание липидов наименьшее (1,400,04, при контроле — 2,100,05).

Катионные белки. При поступлении в мазках лейкомассы появляются сегментоядерные нейтрофилы частично дегранулированные; концентрация гранул больше на периферии, а в центральных участках определяется заметная неравномерность их распределения. В незрелых формах распределение окрашенных гранул равномерное. Выявляются единичные незрелые (прои миелоциты), а также миелоидные паралейкобласты, в цитоплазме которых продукты реакции контурируются весьма слабо.

На 7−10 сутки в мазках преобладают с разной степенью дегрануляции; периферические зоны большинства из них свободны от гранул, а в центральных участках последние располагаются в виде отдельных сгущений. Хорошо заметен диффузный фон по всей цитоплазме клеток.

В конце 2-ой недели наряду со значительным количеством дегранулированных форм резко увеличивается число паралейкобластных клеток, которые полностью лишены окрашенных гранул. Одновременно в мазках много молодых форм нейтрофилов с умеренным содержанием гранул. Между ними нередко очаги вакуолизации. Общее содержание белков примерно в 2 раза меньше по сравнению с контролем (0,460,03, при контроле-0,900,08).

На 3-ей и особенно на 4-ой неделе процесса постепенно уменьшается число дегранулированных клеток с параллельным увеличением сегментоядерных и молодых форм нейтрофилов со значительным содержанием равномерно распределенных гранул.

МПО. На вторые сутки пребывания в стационаре в мазках часто встречаются дегранулированные и молодые (юные и палочкоядерные) нейтрофилы, которые насыщены ПО-гранулами. Мало незрелых клеток (промиелоцитов и миелоцитов) с большим количеством ферментосодержащих гранул. Многие сегментоядерные клетки вакуолизированы, но не имеют признаков дегрануляции. Общая активность фермента, определяемая цитохимически, имеет тенденцию к повышению (2,170,09). Однако она статистически не достоверна (р0,05).

На 4-ые сутки признаки дегрануляции определяются лишь в части НЛ, среди которых имеются клетки с четкой агрегацией и изреженностью пероксидазоодержащих гранул с умеренной или даже сильной ферментативной активностью. В тоже время количество вакуолизированных клеток сохраняется на высоком уровне, как и в предыдущие сроки; среди них преобладают формы моноцитарного ряда с единичными, четко очерченными гранулами, которые разбросаны равномерно по всей цитоплазме клеток.

К концу 1-ой недели клетки с четкой изреженностью и агрегацией гранул чередуются с равномерным их распределением. Однако в мазках встречаются и единичные незрелые, а также паралейкобластные формы со следами диффузной или гранулярной активности. Общая активность фермента в клетках ниже контрольных значений.

При биохимическом определении активности МПО в гомогенате лейкомассы отмечено снижение в первые сутки болезни. Так, в течение 2-х суток она на 10 — 12% ниже, чем при цитохимическом определении, а на 7-ые сутки происходит выравнивание активностей. В последующем биохимически определяемая активность всегда ниже цитохимической.

Сравнивая кривые активности фермента в нейтрофилах и в сыворотке крови можно заметить их отрицательную корреляцию, т. е. снижение активности в клетках в основном соответствует его росту в сыворотке. Однако наибольший пик роста содержания фермента в сыворотке крови приходится на 4−6 сутки (Рис 1).

Рис. 1 — Динамика активности МПО НЛ крови у больных ожоговой болезнью (в % от нормы). Активность МПО выявлена цитохимически и биохимически

На 2-ой неделе заболевания в мазках лейкомассы периферической крови больных гранулярная активность распределена в цитоплазме нейтрофилов равномерно, но плотность расположения гранул на периферии клеток больше, чем в центральных участках, где у части нейтрофилов почти полностью отсутствуют гранулы. В периферических «ободках» последние распределены равномерно. Общая активность МПО — 1,680,08.

На 2-ой неделе заболевания гранулы в клетках очерчены умеренно или слабо, преобладает диффузный компонент фермента. Четко просматривается сегментарная их изреженность, особенно периферических зонах клеток. Сегменты ядер расположены эксцентрично и часто контактируют с цитолеммой. Общая активность фермента снижена. (СЦП — 1,570,05).

В течение 3-ей недели гранулы в цитоплазме клеток слабо контурируются вследствие умеренного, но часто малого содержания продуктов цитохимической реакции. В тоже время сильно выражен диффузный компонент фермента. В большей части НЛ просматривается четкая агрегация и сегментарная изреженность гранул. Большой процент клеток со следами диффузной или слабой гранулярной активностью. Однако для данного периода заболевания наиболее характерным следует считать выраженное разнообразие нейтрофилов по количеству гранул в них. В частности, в мазках обнаруживаются гранулы малого размера, насыщенных гранулярной активностью на фоне диффузного компонента, вследствие чего ядра клеток контурируются весьма слабо.

Рис. 2 — Показатели содержания гликогена, липидов, катионных белков и активности МПО в нейтрофилах крови при ожоговой болезни

ожоговый болезнь нейтрофил гликоген В конце 3-ей недели сегментарная изреженность периферической зоны выражена у значительно большего процента клеток, характерно наличие четкого гранулярного компонента фермента при слабом диффузном. В мазках выявляются единичные незрелые формы миелоидного ряда, чрезмерно насыщенные пероксидазосодержащими гранулами, большой процент паралейкобластных форм моноцитарного ряда со следами диффузной ферментной активности и вакуолизированных сегментоядерных клеток. Общая активность снижена значительно. (СЦП — 1,360,07).

В течение 4-ой недели заболевания признаки дегрануляции — агрегация и периферическая изреженность гранул заметны особенно четко.

Как правило, нет клеток с полными «ободками», т. е. насыщенных гранулами. Количество паралейкобластных форм моноцитарного ряда гораздо больше, чем в предыдущих случаях. В цитоплазме последних обычно слабая диффузная активность, концентрированная на одном из ее полюсов.

В конце 4-ой и в течение всей 5-ой недели снижается количество приближается к цифрам, характерным для контроля (Рис. 2).

Указанные цитохимические изменения, по нашему мнению, являются следствием резкого увеличения концентрации как растворенного (продукты распада тканей), так и корпускулярного (микробы) антигенов и демонстрируют изменение активности неспецифических противомикробных систем сегментоядерных нейтрофилов с признаками дегрануляции. Уменьшается постепенно процент незрелых и паралейкобластных форм лейкоцитов. Указанные качественные изменения сопровождаются ростом общей активности фермента.