Количественный анализ густых экстрактов

Методика определения содержания хлорофилла а, хлорофилла b и каротиноидов. Количественное определение пигментов основано на их способности к поглощению лучей определенной длины волны. Регистрацию оптической плотности раствора пигментов проводят на спектрофотометре. При использовании спектрофотометрии для определения концентрации хлорофилла a и b в растворе без их разделения вопрос осложняется тем, что спектры хлорофиллов a и b сильно перекрываются и невозможно найти две длины волны, в которых поглощение обуславливалось бы полностью одним пигментом. Однако имеющиеся различия в спектрах поглощения обоих хлорофиллов все же позволяют выбрать точки, где поглощение одного пигмента заметно превышает поглощение другого. Это обстоятельство и используется при проведении количественного определения хлорофилла a и b без их разделения. Концентрацию хлорофилла a и b в вытяжке рассчитывают по формуле Вернона:

В 100%-ном ацетоне:

C_a(мг/л) = 9,784•D₆₆₂ — 0,990•D₆₄₄, (3.1).

C_b(мг/л) = 21,426•D₆₄₄ — 4,650•D₆₆₂; (3.2).

Для определения концентрации каротиноидов (мг/л) в суммарной вытяжке пигментов может быть использована формула Веттштейна:

С_кар = 4,695•D_440,5 — 0,268(C_a+b), [45] (3.3).

Поскольку у нас имеются экспериментальные данные значений оптической плотности густого экстракта в 100%-ном ацетоне при длине волны 662 и 664 нм, то мы можем воспользоваться данным методом:

Ацетоновый экстракт:

C_a = 9,784• 0,7 854- 0,990• 0,2 197= 0,7467 (мг/л),.

C_b= 21,426•0,2 197- 4,650•0,7 854= 0,1055 (мг/л),.

С_кар = 4,695•0,11 036- 0,268(0,7467 +0,1055) = 0,2897 (мг/л);

Гексановый экстракт:

C_a = 9,784•0,2 876- 0,990•0,6 884 = 0,2746 (мг/л),.

C_b= 21,426•0,6 884 — 4,650•0,2 876= 0,1 376 (мг/л),.

С_кар = 4,695•0,5 139- 0,268(0,2746 +0,1 376) = 0,16 399 (мг/л);

Установив концентрацию пигментов в вытяжке, определяли их содержание в исследуемом материале с учетом объема вытяжки и навески пробы:

A = V•C/(P•1000), (3.4).

где С — концентрация пигментов в мг/л; V — объем вытяжки в мл; P — навеска экстракта в г; А — содержание пигмента в растительном материале в мг/г экстракта.

Ацетоновый экстракт:

A_a = 8•0,7467 /(0,323•1000) = 1,849 мг/г,.

A_b = 8•0,1055 /(0,323•1000) = 0,261 мг/г, А_кар =8•0,2897 /(0,323•1000) = 0,718 мг/г.

Гексановый экстракт:

A_a = 8•0,2746 /(0,0035•1000) = 0,628 мг/г,.

A_b = 8•0,1 376 /(0,0035•1000) = 0,0315 мг/г, А_кар =8•0,16 399 /(0,0035•1000) = 0,375 мг/г.

Таким образом, мы установили, что в 1 г ацетонового экстракта содержится 1,849 мг хлорофилла а, 0,261 мг хлорофилла b и 0,718 мг каротиноидов, а в 1 г гексанового экстракта — 0,628 мг хлорофилла а, 0,0315 мг хлорофилла b и 0,375 мг каротиноидов. Таким образом, можно сделать вывод, что ацетон обладает большим экстрагирующим действием, нежели гексан.

Методика определения суммарного содержания каротиноидов в пересчете на в-каротин.

Оптическую плотность раствора измеряют на спектрофотометре при длине волны 450 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм. В качестве раствора сравнения используют гексан. Содержание суммы каротиноидов (Х) в мг% в пересчете на в-каротин и абсолютно сухом сырье рассчитывают по формуле:

где D — оптическая плотность исследуемого раствора; V — объем раствора, мл (100 мл); m — масса сырья, г; W — потеря в массе при высушивании сырья, %; 2592 — удельный показатель поглощения 1% 1 см E в-каротина при длине волны 450 нм в гексане.

Гексановый экстракт мг%.

Ацетоновый экстракт.

мг%.

Определение массовой доли каротина.

Раствор перемешать и колориметрировать на спектрофотометре при длине волны 450 им в кювете с рабочей длиной 10 мм. Параллельно измерить оптическую плотность раствора стандартного образца — дихромата калия. В качестве раствора сравнения использовать экстрагент (соответственно гексан).

Содержание каротиноидов в пересчете на в-каротин (X_кар, мкг%) вычислить по формуле.

где D — оптическая плотность исследуемого раствора;

D₀ — оптическая плотность раствора стандартного образца;

0,0208 — количество в-каротина, соответствующие по окраске 1 мл стандартного раствора калия дихромата, мкг;

V— объем экстракта, мл; 0,53 643 968.

m — масса навески, г;

100—коэффициент пересчета в проценты Гексановый экстракт.

1,567 мг%.

Ацетоновый экстракт мг%.