Разработка вирусных частиц AAVP

Ограничения промотора CMV при использовании в фаге: заглушение экспрессии генов

Несмотря на то, что использование промотора CMV в генной терапии, основанной на аденовирусных векторах было хорошо характеризовано за его надежную активность как in vitro, так и in vivo, промотор остается высокоактивным в широком ряду тканей млекопитающих. К тому же, заглушение экспрессии генов, связанных с данным промотором, возможно в тканях млекопитающих благодаря нескольким механизмам: метилирование ДНК и деацетилирование гистонов. Активность промотора CMV было полностью подавлена при метилировании цитозина в 5'CpG динуклеотидов внутри последовательности ДНК метилтрансферазы Sssl спироплазм (Spiroplasma). Гиперметилирование — феномен, наблюдаемый во многих опухолях и влияющий на гены, ответственные за регулирование клеточного цикла (p16^INK4a, p15^INK4a), починку ДНК (BRCA1, MGMT), апоптоз (DAPK, TMS1), устойчивость к лекарствам, ангиогенез и метастазирование. Склонность раковых клеток к гиперметилированию, скорее всего, играет роль в метилировании промотора CMV.

Деацетилирование гистонов — еще один механизм подавления промотора CMV, в итоге приводящий к появлению участков конденсированного, неспособного к транскрипции хроматина. Репрессия хроматина, и его транскрипционное ремоделирование гена LacZ в клетках HeLa, трансдуцированных вектором rAAV-CMV-LacZ произошло после устранения ингибитора деацетилазы гистонов — trichostatin-A. Эта, и другая информация, показывает, что заглушение промотора CMV со временем может стать препятствием в генной терапии с использованием вирусных векторов, т. к приводит к снижению экспрессии желаемого трансгена в клетках млекопитающих. Это приводит нас к необходимости разработки вектора, гарантирующего долгосрочную экспрессию генов, а значит и высокую противоопухолевую активность.