Синтез и изучение свойств поликатионных липофильных агентов трансфекции
Исследование проникновения FITC-меченного олигонуклеотида в клетки НЕК 293 проводили с помощью проточной цитофлоуметрии. Эффективность доставки оценивали по количеству трансфицированных клеток от общего количества клеток в образце. Клетки высаживали в 24-луночные планшеты (2×105 клеток на лунку) и культивировали в течение суток при 37 °C в атмосфере, содержащей 5% С02. Перед проведением… Читать ещё >
Содержание
- Список сокращений
- 1. Введение
- 2. Литературный обзор
- 2. 1. Введение и основные положения генной терапии
- 2. 2. Невирусные векторы на основе поликатионных амфифилов
- 2. 3. Свойства и эффективность гемини-сурфактантов
- 2. 4. рН чувствительные конъюгаты для биомедицинского применения
- 2. 5. Полимеры, липиды и биоконъюгаты, чувствительные к восстановлению
- 2. 5. 1. Катионные полимеры, чувствительные к действию восстанавливающих агентов для внутриклеточной доставки НК
- 2. 5. 2. Полипептиды и белки, чувствительные к восстановлению
- 2. 5. 3. Липосомы, чувствительные к действию восстановливающих агентов
- 3. 1. Получение избирательно защищенных-производных спермина
- 3. 2. Получение производных холестерина с различными линкерными группами
- 3. 2. 1. Синтез бромпроизводных холестерина со сложноэфирным и уретановым линкером
- 3. 2. 2. Синтез галогенпроизводных холестерина с кислотолабильным 0,0-ацетальным линкером
- 3. 2. 3. Синтез амино- и карбоксипроизводных холестерина — с дисульфидной группой в составе спейсера
- 3. 3. Конденсация холестериновой и сперминовой компонент. Получение целевых поликатионых амфифилов
- 3. 3. 1. Синтез амфифилов типа «голова-хвост» и гемини-амфифилов со сложноэфирным и уретановым линкером
- 3. 3. 2. Синтез поликатионных амфифилов с ацетальным линкером
- 3. 3. 3. Получение поликатионных амфифилов с дисульфидной связью
- 3. 4. Биологические исследования поликатионных амфифилов
- 3. 4. 1. Изучение токсичности синтезированных амфифилов
- 3. 4. 2. Доставка Р1ТС-меченного дезоксирибонуклеотида (РГГС-СЮМ) комплексами на основе амфифилЮОРЕ
- 3. 4. 2. Доставка плазмидной ДНК комплексами на основе амфифилЮОРЕ
Синтез и изучение свойств поликатионных липофильных агентов трансфекции (реферат, курсовая, диплом, контрольная)
Стремительное развитие молекулярной биологии и расширение представлений о молекулярных механизмах, лежащих в основе патогенеза различных заболеваний, привели к значительным изменениям в терапевтических подходах. К настоящему времени известны многие заболевания, не поддающиеся лечению методами традиционной терапии, так как они обусловлены нарушениями в клеточном геноме. Для их лечения развивается одна из перспективных областей медицины — генная терапия. Эта форма терапии заключается в устранении причины заболевания путем введения терапевтического гена, обеспечивающего синтез недостающего белка с последующим восстановлением метаболического равновесия.
Как концептуально перспективный терапевтический подход, генная терапия интенсивно развивается по многим направлениям, которые определяются разнообразием методов введения терапевтического гена в эукариотические клетки (трансфекция). Известны различные методы доставки генетического материала в клетки, в основе которых лежат электропорация, бомбардировка заряженными частицами, инъекция ДНК, использование вирусов, липосом и полимеров. Среди них заметное место занимает метод липофекции, использующий в качестве средства доставки генетической информации в клетки катионные липосомы, обладающими такими преимуществами, как защита ДНК, мРНК и олигонуклеотидов от инактивации и деградации под действием клеточных ферментов, неинфекционность, неиммуногенность, доступность и простота в изготовлении.
В настоящее время для повышения эффективности доставки НК с помощью липидных векторов разрабатываются и изучаются различные модификации структуры катионных липидов, формирующих катионные липосомы, которые отличаются компановкой структурных доменов, природой катионной головки и гидрофобной области, спейсером.
Данная работа является продолжением исследований в области катионных амфифилов липидной природы, предназначенных для генетической трансфекции, и посвящена синтезу и изучению свойств поликатионных амфифилов на основе спермина и холестерина.
2. Литературный обзор
4. Выводы:
1. Разработана новая универсальная схема синтеза поликатионных амфифилов, на основе холестерина и спермина, предназначенных для доставки генетического материала в эукариотические клетки.
2. Синтезирован ряд поликатионных амфифилов, отличающихся линкером (сложноэфирный, уретановый), длиной спейсера и количеством гидрофобных доменов.
3. Синтезированы кислотолабильные поликатионные амфифилы ацетального типа на основе холестерина и спермина.
4. Впервые получены дисульфидные поликатионные липиды на основе холестерина и спермина, чувствительные к действию внутриклеточных восстановителей.
5. Биологические испытания показали, что липосомальные композиции на основе амфифилов с уретановым линкером 26Ь и 29с обладают высокой эффективностью доставки коротких и протяженных НК в клетки млекопитающих, как в присутствии, так и в отсутствие сыворотки в ростовой среде, что позволяет рассматривать их в качестве перспективных коммерческих агентов трансфекции.
6. Показано, что включение в состав амфифилов дисульфидной связи ведет к увеличению эффективности трансфекции.
5. Экспериментальная часть.
В работе использовались перегнанные растворители, реагенты отечественного (Химмед) и зарубежного производства (Merck, Fluka, Aldrich, Acros). CH2CI2 и Et3N кипятили с СаН2 и перегоняли перед реакцией. ДМФА выдерживали над прокаленными молекулярными ситами 4 А. Л/1,Л/4,Л/9-три-трет-бутоксикарбонил-1,12-диамино-4,9-диазадодекан [39] (4а) и ДЛл^-ди-трет-бутоксикарбонил-1,12-диамино-4,9-диазадодекан [149] (11), метилтиометиловый эфир холестерина (18) [156], соединение 22а [158] получали согласно известным методикам.
Тонкослойную хроматографию проводили на пластинках Kieselgel 60 F254 (Merck) в системах растворителей: петролейный эфир-ЕЮАс, 4: 1 (А) — CHCI3-МеОН, 40: 1 (Б) — 36: 1 (В) — 25: 1 (Г) — 20: 1 (Д) — 13:1 (Е) — CHCI3-MeOH-Pr1NH2, 4:1:2 (Ж), 3:1:2 (3), CHCI3 (И) — толуол (К) — петролейный эфирЕЮАс, 1 :2 (Л) — CHCI3-MeOH-25% водн. NH3, 1:0.1:0.05 (M) — CHCI3-MeOH, 10:1 (H) — CHCI3-МеОН-СН3СООН, 200: 1 :0.3 (О), CHCI3-MeOH, 10 :0.6 (П) — CHCI3-MeOH-СНзСООН, 1: 0.16: 0.05 (Р) — 1: 0.12: 0.05 ©.
Обнаружение пятен на хроматограммах проводили действием хлора с последующим проявлением раствором бензидина [160], реактива Драгендорфа [160], раствора фосформолибденовая кислота — сульфат церия (IV) с последующим прогреванием [161] и с помощью УФ-лампы (254 нм). Колоночную хроматографию осуществляли на силикагеле Kieselgel 60 (0.040 — 0.063 mm, Merck). Спектры ЯМР1Н и 13С регистрировали на импульсном Фурье-спектрометре Bruker DPX-300 (Германия), в CDCI3, если не указано другое (внутренний стандарт SiMe4). Значения химических сдвигов (5) приведены в миллионных долях (м.д.), КССВ (J) в герцах (Гц). Масс-спектры получали на время-пролетном масс-спектрометре Bruker Ultraflex (Германия) методом лазерно-десорбционной ионизации с использованием 2,5-дигидроксибензойной или цианогидроксикоричной кислот в качестве матрицы. Для соединений 25а, с, 26а-с, 29Ь, с масс-спектры записаны на хромато-масс-спектрометре Agilent 1100 (Agilent Technologies) (США) методом химической ионизации при атмосферном давлении. ИК-спектры регистрировались на спектрофотометре Shimadzu IR-435 (Япония). Температуруплавления определялина приборе «Boetius» (Германия). Соединения 26а-с, 29а-с, 32а-с, 34а, Ь, 36 разлагаются без плавления свыше 230 °C. лЛлЛм12-Три-бензилоксикарбонил-1,12-диамино-4,9-диазадодекан (4b): Раствор 1.00 г (5.17ммоль) спермина (1) в 40 мл абсолютного метанола, охладили до -78°С (жидкий азот + изопропанол) и в течение 10 минут прикапывали охлажденный до 0 °C этилтрифторацетат (0.7 мл, 5.7 ммоль). Реакционную смесь перемешивали, пока температура не поднялась до -10°С (30 минут) и добавили по каплям бензилоксикарбонилхлорид (6.64 мл, 46.5 ммоль) и Et3N (7.20 мл, 51.7 ммоль). Реакционную смесь выдерживали при 25 °C в течение 36 часов. (Rf0.85(Jl) для полностью защищенного полиамина ЗЬ). Метанол удаляли в вакууме, остаток растворяли в CH2CI2 (35 мл) и промывали 3% водным раствором HCl (3×10 мл), водой (2×10 мл), сушили над Na2S04, упаривали. Проводили деблокирование трифторацетильной защиты действием раствора NaOH (2.06 г, 51.7 ммоль) в метаноле (15 мл) при комнатной температуре в течение 36 часов. После удаления растворителя в вакууме, остаток растворяли в хлористом метилене (30 мл) и промывали водой (2×30 мл), сушили над Na2S04 и упаривали. После хроматографии на силикагеле (CHCI3-MeOH-25% водн. NH3, (25: 1 :0.1)) получили соединение 4Ь в виде масла желтоватого цвета (0.633 г, 30%). Rf 0.51 (Б). Масс-спектр, m/z (/отн (%)): 605.1 [М + Н]+ (100). Вычислено для C34H44N4O6: 604.326 [М]+. Спектр ЯМР 1Н. 1.30−1.55 (м, 4 Н, NCH2(CH2)2CH2N), 1.551.80 (м, 4 Н, 2 ЫСНгСНгСНгЫ), 2.50−2.76 (м, 2 Н, СНгЫНг), 2.93−3.45 (м, ЮН, 5 NCH2), 4.95−5.17 (м, 6 Н, 3 ChbPh), 7.20−7.40 (м, 15 Н, 3 Ph). Спектр ЯМР 13С: 25.55, 25.92, 28.70, 31.20, 37.99, 39.38, 44.36, 44.69, 46.76, 66.68, 67.21, 67.34, 128.03, 128.16, 128.64, 136.87, 137.04, 156.44, 156.63.
Л/4,Л/9,Л/12-Три-(трет-бутоксикарбонил)-Л/1-(2-нитрофенилсульфонил)-1,12-диамино-4,9-диазадодекан (5а): К охлажденному до 0 °C раствору соединения 4а (0.431 г, 0.858 ммоль) в безводном CH2CI2 (5 мл) добавили молекулярные сита 4 А (1.0 г) Et3N (0.239 мл, 1.716 ммоль) и 2-нитробензолсульфонилхлорид (0.228 г, 1.02 ммоль). Реакционную смесь перемешивали 1 ч при 24 °C. Молекулярные сита отфильтровали, промывали CH2CI2, растворители удаляли в вакууме. Остаток хроматографировали на колонке с силикагелем, элюируя смесью CHCI3-MeOH (50: 1). Получили соединение 5а в виде кристаллизующегося масла (0.507 г, 88%). Rf 0.40 (Г). Масс-спектр, m/z (/отн (%)): 710.341 [М + Na]+ (100). Вычислено для CsiHssNsOkjS: 687.351 [М]+. Спектр ЯМР 1Н: 1.27 (уш. с, 31 Н, 3 С (СН3)3 и NCH2(CH2)2CH2N), 1.52−1.71 (м, 4 Н, 2 NCH2ch2ch2N), 2.92−3.11 (м, 8 Н, 4 NCH2), 3.11−3.30 (м, 4 Н, 2 NHChb), 7.597.71 (м, 2 Н), 7.71−8.89 (м, 1 Н) и 8.00−8.11 (м, 1 Н, С6Н4). Спектр ЯМР 13С: 25.96,.
28.54, 28.59, 28.93, 37.91, 41.03, 43.78, 44.23, 46.82, 47.05, 79.16, 79.74, 80.02, 125.25, 130.93, 132.68, 133.51, 148.29, 156.17.
Л^.Л^.Л/^-Три-бензилоксикарбонил-^^г-нитрофенилсульфонил)-!,^-диамино-4,9-диазадодекан (5b): К охлажденному до 0 °C раствору соединения 4а (0.918 г, 1.152 ммоль) в безводном CH2CI2 (7 мл) добавили Et3N (0.422 мл, 3.04 ммоль), а затем двумя равными порциями 2-нитробензолсульфонилхлорид (0.403 г, 1.82 ммоль). Реакционную смесь перемешивали 1ч при 24 °C. Затем добавили 3% HCl (10 мл) и перемешивали 3 ч. Реакционную смесь переносили в делительную воронку, промывали CH2CI2 (10 мл), органическую фазу промывали насыщенным раствором NaCI (2×15 мл), сушили над Na2S04, фильтровали и упаривали. Остаток хроматографировали на колонке с силикагелем, элюируя смесью CHCI3-MeOH (100:1). Получили соединение 5Ь в виде масла (1.091 г, 91%). Rf 0.40 (Н). Спектр ЯМР 1Н: 1.30−1.60 (м, 4 Н, NCH^ChbbCHzN), 1.60−1.75 (м, 4 Н, 2 NCH2CH2CH2N), 3.00−3.45 (м, 12 Н, 6 NCH2), 5.05−5.25 (м, 6 Н, 3 CI±>Ph) 7.207.40 (м, 15 Н, 3 Ph), 7.60−7.70 (м, 2 Н), 7.70−7.80 (м, 2 Н) и 8.03−8.13 (м, 1 Н, С6Н4). Спектр ЯМР 13С: 25.10, 25.65, 28.06, 28.51, 37.67, 40.76, 44.09, 46.53, 46.69, 66.47, 67.16, 67.19, 125.11, 127.85, 127.98, 128.45, 130.73, 132.54, 133.31, 136.57, 148.03, 155.99, 156.40, 156.62.
Метип-й-^^^^-три^трет-бутоксшарбонмгЦ-^-аммно-ЛЯ-диазадодец-1-ил]-М-(2-нитрофенилсульфонил)аминоацетат (6): К раствору соединения 5а (0.271 г, 0.394 ммоль) в безводном ДМФА (3 мл) последовательно добавили Cs2C03 (0.128 г, 0.394 ммоль) и метиловый эфир бромуксусной кислоты (0.149 мл, 1.58 ммоль). Реакционную смесь перемешивали Зч при 75 °C. К реакционной массе добавляли 15 мл CH2CI2, промывали 5% лимонной килотой (3×20 мл), сушили над Na2S04, упаривали. Остаток хроматографировали на колонке с силикагелем, элюируя смесью CHCI3-MeOH (175:1). Получили соединение 6 в виде кристаллизующегося масла желтоватого цвета (0.270 г, 90%). Rf 0.51 (В). Спектр ЯМР 1Н: 1.26−1.46 (м, 4 Н, NCH2(CH2)2CH2N), 1.32 (с, 18 Н), 1.35 (с, 93СМе3) 1.46−1.60 (м, 2 Н), 1.60−1.75 (м, 2 Н, 2 NCH2CH2CH2N), 2.90−3.23 (м, 10 Н, 2 СЬЩВосЭСНг, NH (Boc)CH2), 3.23−3.37 (м, 2 Н, N (Nps)CH2CH2), 3−54 (с> 3 Н, ОСН3), 4.10 (с, 2 Н, 0С (0)СН2), 7.46−7.68 (м, 3 Н), 7.87−8.02 (м, 1 Н, С6Н4). Спектр ЯМР 13С: 25.87, 26.92, 28.46, 28.48, 37.63, 43.96, 44.49, 46.42, 46.75, 47.81, 52.27, 78.96, 79.59, 124.20, 130.86, 131.74, 133.13, 133.70, 148.04, 155.46, 156.07, 169.14.
Метил-Л/-[Л/4,А/9,М12-три-(шре/Т1-бутоксикарбонил)-12-амино-4,9-диазадодец-1-ил]аминоацетат (7): К раствору соединения 6 (0.178 г, 0.235 ммоль) в ДМФА (2 мл) при перемешивании добавили К2С03 (0.036 г, 0.258 ммоль), а затем PhSH (0.241 мл, 2.35 ммоль). Через 1 ч к реакционной массе добавляли 10 мл CH2CI2, промывали водой (15 мл), сушили над Na2S04, упаривали. После хроматографии на силикагеле CHCI3-MeOH-25% водн. NH3, (5: 0.1: 0.01) получили соединение 7 в виде кристаллизующегося масла (0.116 г, 86%). Rf 0.33 (П). Масс-спектр, m/z (/от&bdquo-(%)): 575.456 [М+Н]+ (100). Вычислено для C28H54N4O8: 574.394 [М]+. Спектр ЯМР 1Н: 1.25−1.48 (м, 4 Н, NCH2(ch2hch2N), 1.34 (с, 9 Н), 1.35 (с, 9 Н), 1.36 (с, 93 СМе3) 1.48−1.70 (м, 4 Н, 2 NCH2CH2CH2N), 2.51 (т, 2 Н, J = 7.0, NHCH2CH2), 2.91−3.25 (м, 10 Н, 2 CHaNiBocJChh, NH (Boc)ch2), 3.31 (с, 2 Н, 0С (0)СН2), 3.63 (с, 3 Н, ОСН3). Спектр ЯМР 13С: 25.52, 25.93, 28.39, 28.93, 37.36, 43.75, 44.10, 44.82, 46.80, 50.73,51.66, 78.77, 79.20, 79.43, 155.51, 155.99, 172.79.
2-[Л/4,Л/9,Л/12-три-(трет-бутоксикарбонил)-12-амино-4,9-диазадодец-1-ил]аминоуксусной кислоты гидрохлорид (8): К раствору соединения 7 (0.100 г, 0.174 ммоль) в МеОН (Змл) при перемешивании добавили NaOH (0.031 г, 0.783 ммоль) в 0.5 мл воды. Через 2ч к реакционной массе добавляли 10 мл CH2CI2, промывали 3% водным раствором HCl (15 мл), сушили над Na2S04, упаривали. Получили соединение 8 в виде кристаллов белого цвета (105 мг, 100%). Kf0.33(P). Масс-спектр, m/z (10тн (%)): 561.476 [M-Cl]+ (100). Вычислено для C27H53CIN408: 561.386 [М — Cl]+. Спектр ЯМР 1Н (MD3OD — CDCI3, 1: 5): 1.171.40 (уш. с, 31 Н, NCH^CbUbC^N, 3 СМе3) 1.40−1.60 (м, 2 Н), 1.70−1.93 (м, 2 Н, 2 NCH2CH2CH2N) 2.63−2.82 (м, 2 Н, CH2NH2CH2CO), 2.83−3.18 (м, ЮН, 2 СНЩВо^СНг, NH (Boc)CH2), 3.30 (с, 2 Н, 0С (0)СН2). Спектр ЯМР 13С: 24.21, 25.10, 27.59, 27.64, 28.16, 36.74, 42.78, 43.29, 43.67, 44.19, 45.79, 46.29, 49.07, 78.47, 79.18, 79.60, 155.73, 155.80, 155.85, 169.73. лЛл^-Ди^трет-бутоксикарбонилН, 12-бис (2-нитрофенилсульфониламино)-4,9-диазадодекан (12): К охлажденному до 0 °C раствору соединения 11 (0.676 г, 1.68 ммоль) в безводном CH2CI2 (5 мл) последовательно добавили молекулярные сита 4 А (0.5 г), Et3N (1.0 мл, 6.72 ммоль) и 2-нитробензолсульфонилхлорид (0.893 г, 4.03 ммоль). Реакционную смесь перемешивали 5 ч при 24 °C. Молекулярные сита отфильтровали, промывали СН2С12, растворители удаляли в вакууме. Остаток хроматографировали на колонке с силикагелем, элюируя СНС13 с последующим увеличением полярности до СНС13-МеОН (50: 1). Получили соединение 12 в виде кристаллизующегося масла желтоватого цвета (1.01 г, 78%). f? f0.35(I~). Спектр ЯМР 1Н: 1.35 (уш. с, 22 Н, 2 С (СН3)3, СН^СНгЬСНг), 1.48−1.70 (м, 4 Н,.
2 СН2СН2СН2), 2.86−3.10 (м, 8 Н, 4 NCH2) 3.10−3.38 (м, 4 Н, 2 NCH2), 7.50−7.75 (м, 4 Н), 7.95−8.05 (м, 2 Н) и 8.05−8.20 (м, 2 Н, 2 С6Н4). Спектр ЯМР 13С: 25.42, 25.83, 28.38, 28.86, 29.22, 40.66, 43.32, 44.25, 46.46, 46.90, 79.84, 124.47, 130.62, 132.41, 135.69, 148.02, 148.18, 155.42, 156.38.
5-Бромпентаноил)холестерин (14). К охлажденному до 0 °C раствору холестерина (13) (2.18 г, 5.6 ммоль) в безводном CH2CI2 (15 мл) добавили Ру (3 мл), а затем раствор хлорангидрида бромвалериановой кислоты (2.25 г, 11.3 ммоль) в CH2CI2 (2.5 мл). Реакционную смесь перемешивали 1 ч при 24 °C, промывали 10%-ным водным раствором HCl (3×5 мл), водой (1×5 мл), сушили над Na2S04, растворитель упаривали. Остаток хроматографировали на колонке с силикагелем, элюируя вещество смесью CHCI3-MeOH (40:1). Получили соединение 14 в виде белых кристаллов (2.955 г, 96%). f? f0.48(A), т.пл. 112−114°С. Найдено (%): С, 70.30- Н, 10.00. С32Н53Вг02. Вычислено (%): С, 69.92- Н, 9.72. ИК-спектр, v/cm-1: 2830, 1736, 1460, 1370, 1240, 670. Спектр ЯМР 1Н: 0.68 (с,.
3 Н, С (13)Ме), 0.79 (д, 3 H, J = 6.5, С (25)Ме), 0.80 (д, 3 H, J = 6.5, С (25)Ме), 0.86 (д, ЗН, J =6.5, С (20)Ме), 1.02 (с, 3 Н, С (Ю)Ме), 0.88−1.65 (м, 23 Н, протоны Chol, 0С (0)СН2(СН2)2), 1.68−2.00 (м, 7 Н, протоны Chol), 2.13−2.34 (м, 2 Н, Н2С (4)), 3.063.19 (м, 2 Н, 0С (0)СН2), 3.40 (т, 2 H, J = 6.7, СН2Вг), 4.34−4.49 (м, 1 Н, Н (3)), 5.275.34 (м, 1 Н, Н (6)).
Холест-5-ен-ЗЭ-ил)имидазол-1-карбоксилат (15): К раствору холестерина (13) (4.00 г, 10.35 ммоль) в безводном CH2CI2 (20 мл) добавили карбонилдиимидазол (1.678 г, 10.35 ммоль), триэтиламин (2 мл, 3.74 ммоль) и кипятили 16 ч при перемешивании. Реакционную смесь промывали 10%-ным водным раствором HCl (3×5 мл), водой (1×5 мл), сушили над Na2S04, растворитель упаривали. Получили соединение 15 в виде белых кристаллов (4 904 г, 99%). Rf 0.7 (Б), т.пл. 124−126°С. Найдено (%): С, 76.26- Н, 10.40- N, 5.56.
2 C35H61N03xH20. Вычислено (%): С, 76.03- Н, 10.08- N, 5.72. ИК-спектр, v/cm" 1: 2840, 1730, 1640, 1520, 1460, 1380. Спектр ЯМР 1Н: 0.61 (с, 3 Н, С (13)Ме), 0.79 (д,.
3 H, J = 6.5, С (25)Ме), 0.80 (д, 3 H, J = 6.5, С (25)Ме), 0.84 (д, 3 H, J = 6.5, С (20)Ме), 0.99 (с, 3 Н, С (Ю)Ме), 0.90−1.58 (м, 19 Н, протоны Chol), 1.58−2.02 (м, 7 Н, протоны.
Chol), 2.38−2.47 (м, 2 H, Н2С (4)), 4.69−4.83 (м, 1 Н, Н (3)), 5.34−5.40 (м, 1 Н, Н (6)), 7.00, 7.36, 8.09 (все с, по 1 Н Im). Спектр ЯМР 13С: 11.88, 18.88, 19.35, 21.21, 22.63, 22.87, 23.98, 24.44, 27.81, 28.19, 28.38, 31.98, 35.96, 36.33, 36.71, 36.92, 38.03, 39.67, 39.83, 42.47, 50.11, 56.27, 56.81, 79.20, 117.44, 123.95, 130.05, 137.14, 138.74, 148.05.
Холест-5-ен-33-ил)-М-(4-гидроксибутил)карбамат (16а): К раствору соединения 15 (1.00 г, 2.08 ммоль) в безводном CH2CI2 (10 мл) добавили 4-амино-1-бутанол (0.287 г, 2.78 ммоль) и кипятили 18 ч при перемешивании. Реакционную смесь промывали 3%-ным водным раствором HCl (1*8 мл), водой (5*5 мл), органический растворитель упаривали. Остаток хроматографировали на колонке с силикагелем, элюируя смесью CHCI3-MeOH (30: 1). Получили соединение 16а в виде белых кристаллов (0.895 г, 87%). Rf0.45(fl), т.пл. 154−156°С. Масс-спектр, m/z (/отн (%)): 524.314 [М + Na]+ (100). Вычислено для Сз2Н56МОз: 501.418 [М]+. Спектр ЯМР 1Н: 0.61 (с, 3 Н, С (13)Ме), 0.79 (д, 3 Н, J = 6.5, С (25)Ме), 0.80 (д, 3 Н, J = 6.5, С (25)Ме), 0.85 (д, 3 Н, J = 6.5, С (20)Ме), 0.94 (с, 3 Н, С (Ю)Ме), 0.98−1.57 (м, 23 Н, протоны Chol, NHCH^Chbb), 1.68−2.02 (м, 7 Н, протоны Chol), 2.14−2.38 (м, 2 Н, Н2С (4)), 3.05−3.20 (м, 2 Н, CH2N), 3.59 (т, 2 Н, J = 5.9, СН2ОН), 4.36−4.48 (м, 1 Н, Н (3)), 4.48−4.62 (м, 1 Н, NH), 5.27−5.35 (м, 1 Н, Н (6)). Спектр ЯМР 13С: 12.10, 18.99, 19.56, 21.14, 22.79, 23.07, 23.93, 24.38, 26.54, 28.12, 28.26, 29.64, 31.96, 35.91, 36.27, 36.65, 37.06, 38.65, 39.61, 39.82, 40.70, 42.40, 49.94, 56.21, 56.77, 62.10, 74.57, 122.63, 139.89, 156.72.
Холест-5-ен-Зр-ил)-№(6-гидроксигексил)карбамат (16Ь): Получали как соединение 16а исходя из соединения 15 (1.00 г, 2.08 ммоль), 6-амино-1-гексанола (0.366 г, 3.12 ммоль). После хроматографии на силикагеле CHCI3-МеОН (50: 1), получили соединение 16Ь в виде белых кристаллов (0.992 г, 90%). Rf 0.48 (Д), т.пл. 186−188°С. Найдено (%): С 76.96- Н 11.22- N 2.57. C35H6iN03. Вычислено (%): С, 77.29- Н, 11.30- N, 2.58. Спектр ЯМР 1Н: 0.61 (с, 3 Н, С (13)Ме), 0.79 (д, 3 Н, J = 6.5, С (25)Ме), 0.80 (д, 3 Н, J = 6.5, С (25)Ме), 0.85 (д, 3 Н, J = 6.5, С (20)Ме), 0.94 (с, 3 Н, С (Ю)Ме), 0.98−1.57 (м, 27 Н, протоны Chol, NHCH2(CH2)4), 1.68−2.00 (м, 7 Н, протоны Chol), 2.13−2.35 (м, 2 Н, Н2С (4)), 3.03−3.16 (м, 2 Н, CH2N), 3.57 (т, 2 Н, J = 6.4, СН2ОН), 4.34−4.49 (м, 1 Н, Н (3)), 5.27−5.34 (м, 1 Н, Н (6)). Спектр ЯМР 13С: 12.03, 18.89, 19.51, 21.21, 22.73, 22.99, 24.00, 24.46, 25.48, 26.57, 28.19, 28.35, 28.41, 30.19, 32.06, 35.97, 36.36, 36.73, 37.17, 38.76, 39.69,' 39.91, 40.87, 42.49, 50.18, 56.30, 56.86, 62.90, 74.39, 122.64, 140.03, 156.40.
Холест-5-ен-ЗЭ-ил)-Л^-(4-бромбутил)карбамат (17а): К охлажденному до О °С раствору соединения 16а (0.843 г, 1.68ммоль) в безводном CH2CI2 (10 мл) добавили Ph3P (0.793 г, 3.02 ммоль), а затем порциями СВг4 (1.0 г, 3.02 ммоль) и перемешивали 1 ч при 24 °C. К реакционной смеси добавили 5 мл МеОН, растворитель упарили. Остаток хроматографировали на колонке с силикагелем, элюируя CHCI3. Получили соединение 17а в виде белых кристаллов (0.400г, 84%). Rf 0.8 (Д), т.пл. 92−94°С. Найдено (%): С, 68.10- Н, 9.90- N, 2.48. C32H54BrN02. Вычислено (%): С, 68.06- Н, 9.64- N, 2.48. Спектр ЯМР 1Н: 0.61 (с, 3 Н, С (13)Ме), 0.79 (д, 3 Н, J = 6.5, С (25)Ме), 0.80 (д, 3 Н, J = 6.5, С (25)Ме), 0.85 (д, 3 Н, J = 6.5, С (20)Ме), 0.94 (с, 3 Н, С (Ю)Ме), 0.98−1.57 (м, 23 Н, протоны Chol, NHCH2(CH2)2), 1.70−2.00 (м, 7 Н, протоны Chol), 2.15−2.38 (м, 2 Н, Н2С (4)), 3.05−3.16 (м, 2 Н, CH2N), 3.35 (т, 2 Н, J = 6.5, СН2Вг), 4.36−4.48 (м, 1 Н, Н-3), 4.48−4.62 (м, 1 Н, NH), 5.27−5.34 (м, 1 Н, Н-6). Спектр ЯМР 13С: 12.17, 18.74, 19.37, 21.20, 22.87, 23.14, 24.00, 24.44, 28.18, 28.33, 28.90, 30.00, 32.02, 33.43, 35.97, 36.33, 36.71, 37.12, 38.72, 39.67, 39.88, 40.12, 42.46, 50.02, 56.27, 56.83, 74.48, 122.69, 139.93, 156.34.
Холест-5-ен-ЗЭ-ил)-Л/-(6-бромгексил)карбамат (17Ь): Получали как соединение 17а, исходя из соединения 16Ь (0.585 г, 1.1 ммоль), Ph3P (0.579 г, 2.2 ммоль) и СВг4 (0.945 г, 2.89 ммоль). Получили соединение 17Ь в виде белых кристаллов (0.548 г, 84%). f? f0.85(fl), т.пл. 106−108 °С. Найдено (%): С, 69.24- Н, 10.15- N, 2.31. C35H6oBrN02. Вычислено (%): С, 69.28- Н, 9.97- N, 2.31. Спектр ЯМР 1Н: 0.61 (с, 3 Н, С (13)Ме), 0.79 (д, 3 Н, J = 6.5, С (25)Ме), 0.80 (д, 3 Н, J = 6.5, С (25)Ме), 0.85 (д, 3 Н, J = 6.5, С (20)Ме), 0.94 (с, 3 Н, С (Ю)Ме), 0.98−1.57 (м, 27 Н, протоны Chol, NHCH2(CH2)4), 1.68−1.98 (м, 7 Н, протоны’Chol), 2.12−2.34 (м, 2 Н, Н2С (4)), 3.03−3.15 (м, 2 Н, CH2N), 3.34 (т, 2 Н, J = 6.8, СН2Вг), 4.35−4.48 (м, 1 Н, Н (3)), 4.48−4.62 (м, 1 Н, NH), 5.28−5.33 (м, 1 Н, Н (6)). Спектр ЯМР 13С: 12.04, 18.90- 19.52, 21.23, 22.74, 23.00, 24.01, 24.47, 26.08, 27.99, 28.19, 28.37, 28.42, 30.08, 32.07, 32.81, 33.91, 35.98, 36.37, 36.75, 37.18, 38.76, 39.70, 39.92, 40.94, 42.50, 50.20, 56.32, 56.87, 74.40, 122.66, 140.03, 156.35.
Зр-[(2-Бромэтокси)метокси]холест-5-ен (20а): К раствору метилтиометилового эфира (18) (0.115 г, 0.26 ммоль) в безводном дихлорэтане (Змл) в атмосфере аргона добавили 2,6-лутидин (0.120 мл, 1.03 ммоль), 2-бромэтанол (0.073 мл, 1.03 ммоль) и через 5 мин. бром (0.026 мл, 0.51 ммоль). Через 20 мин к реакционной массе прилили дихлорэтан (10 мл), промывали водой (3×10 мл), сушили над Na2S04, упаривали. Остаток хроматографировали на колонке с силикагелем, элюируя толуолом. Получили соединение 20а в виде кристаллизующегося светло-желтого масла (0.074 г, 55%). /?f 0.40 (К). Масс-спектр, m/z (/отн (%)): 562.2 [М]+. Вычислено для СзоН51Вг02: 562.274 [М]+. Спектр ЯМР 1Н: 0.60 (с, 3 Н, С (13)Ме), 0.79 (д, 3 Н, J = 6.5, С (25)Ме), 0.80 (д, 3 Н, J = 6.5, С (25)Ме), 0.84 (д, 3 Н, J =6.5, С (20)Ме), 0.93(с, 3 Н, С (Ю)Ме), 0.93−1.63 (м, 21 Н, протоны Chol), 1.65−2.05 (м, 5 Н, протоны Chol), 2.10−2.35 (м, 2 Н, Н2С (4)), 3.33−3.48 (м, 1 Н, Н (3)), 3.43 (т, 2 Н, J = 6.1, СН2СН2О), 3.81 (т, 2 Н, J = 6.1, СН2Вг), 4.72 (с, 2 Н, 0СН20), 5.23−5.33 (м, 1 Н, Н (6)). Спектр ЯМР 13С: 11.82, 18.68, 19.32, 21.00, 22.54, 22.81, 23.79, 24.24, 27.96, 28.20, 28.78, 30.82, 31.80, 31.87, 35.75, 36.13, 36.65, 37.13, 39.37, 39.46, 39.69, 42.24, 50.05, 56.07, 56.67, 67.72, 77.06, 93.43, 121.84, 140.44.
Зр-[(4-Хлорбутокси)метокси]холест-5-ен (20Ь): Получали как соединение 20а исходя из 18 (0.400 г, 0.90 ммоль), дихлорэтана (9 мл), 2,6-лутидина (0.313 мл, 2.69 ммоль), 4-хлорбутан-1-ола (1.22 мл, 8.95 ммоль), брома (0.091мл,.
I.79 ммоль). Получили соединение 20Ь в виде кристаллизующегося светло-желтого масла (0.340 г, 75%). Rf0.42(K). Масс-спектр, m/z (/0Тн (%)): 506.861 [М]+ (100). Вычислено для C32H55CI02: 506.389 [М]+. Спектр ЯМР 1Н: 0.67 (с, 3 Н, С (13)Ме), 0.86 (д, 3 Н, J = 6.5, С (25)Ме), 0.87 (д, 3 Н, J = 6.5, С (25)Ме), 0.91 (д, 3 Н, J =6.5, С (20)Ме), 1.00 (с, 3 Н, С (Ю)Ме), 0.93−1.63 (м, 23 Н, протоны Chol, CH2CH2CH2CH2CI), 1.65−2.05 (м, 7 Н, протоны Chol, (CH2)2CH2CH2CI), 2.15−2.43 (м, 2 Н, Н2С (4)), 3.34−3.50 (м, 1 Н, Н (3)), 3.57 (т, 2 Н, J = 6.1, СНгСНгО), 3.58 (т, 2 Н, 6.1, J = 6.5, CH2CI), 4.73 (с, 2 Н, 0СН20), 5.30−5.40 (м, 1 Н, Н (6)). Спектр ЯМР 13С:
II.84, 18.69, 19.35, 21.03, 22.56, 22.82, 23.80, 24.27, 27.06, 28.01, 28.23, 28.87, 29.49, 31.85, 31.91, 35.78, 36.16, 36.72, 37.21, 39.49, 39.52, 39.74, 42.29, 44.91, 50.11, 56.10, 56.72, 66.81, 76.88, 93.40, 121.78, 140.682.
ЗР-[(6-Хлоргексилокси)метокси]холест-5-ен (20с): Получали как соединение 20а исходя из 18 (1.00 г, 2.25 ммоль), дихлорэтана (14 мл), 2,6-лутидина (0.786 мл, 6.75 ммоль), 6-хлоргексан-1-ола (1.50 мл, 11.25 ммоль), брома (0.231 мл, 4.50 ммоль). Получили соединение 20с в виде бесцветного масла 0.800 г (66%). f? f0.44(K). Масс-спектр, m/z (/0™(%)): 534.499 [М]+ (100). Вычислено для C34H59CI02: 534. 420 [М]+. Спектр ЯМР 1Н: 0.67 (с, 3 Н, С (13)Ме), 0.86 (д, 3 Н, J = 6.5, С (25)Ме), 0.87 (д, 3 Н, J = 6.5, С (25)Ме), 0.91 (д, 3 Н, J = 6.5, С (20)Ме), 1.00 (с, 3 Н, С (Ю)Ме), 0.93−1.63 (м, 27 Н, протоны Chol, (CH2)3CH2CH2CI), 1.65−2.05 (м, 7 Н, протоны Chol, (CH2)4CH2CH2CI), 2.15−2.43 (м, 2 Н, Н2С (4)), 3.54.
3.50 (м, 1 Н, Н (3)), 3.54 (т, 2 Н, J = 6.4, СНгСНгО), 3.55 (т, 2 Н, 6.1, J = 6.7, CH2CI), 4.73 (с, 2 Н, 0СН20), 5.31−5.40 (м, 1 Н, Н (6)). Спектр ЯМР 13С: 12.29, 19.14, 19.81, 21.48, 23.01, 23.27, 24.25, 24.72, 26.00, 27.14, 28.45, 28.67, 29.31, 29.98, 32.30, 32.36, 33.00, 36 22, 36.61, 37.17, 37.67, 39.94, 39.97, 40.18, 42.74, 45.49, 50.56, 56.55, 57.17, 68.01, 77.21, 93.84, 122.16, 141.18.
3-[3-(Холест-5-ен-Зр-илоксикарбонил)пропил]дитиопропионовая кислота (22Ь). К раствору холестерина (13) (1.0 г, 2.59 ммоль) в безводном этилацетате (40 мл) в атмосфере аргона добавили дитиодипропионовую кислоту (1.09 г, 5.17 ммоль) и при 0 °C добавили DCC (1.067 мг, 5.17 ммоль), а затем DMAP (0.158 мл, 1.29 ммоль) и Et3N (0.54 мл, 3.88 ммоль). Через 12 ч реакционную массу фильтровали, промывали 3% раствором соляной кислоты (3×30 мл), сушили над Na2S04, упаривали. После хроматографии на силикагеле (CHCI3-MeOH-CH3COOH, (25: 0.1: 0.03)) получили соединение 22Ь в виде кристаллов белого цвета (0.681 г, 45%). Rf 0.40 (О). Масс-спектр, m/z (/отн (%)): 601.217 [М + Na]+ (100). Вычислено для C33H5404S2: 578.346 [М]+. Спектр ЯМР 1Н: 0.67 (с, 3 Н, С (13)Ме), 0.85 (д, 3 Н, J = 6.6, С (25)Ме), 0.86 (д, 3 Н, J = 6.6, С (25)Ме), 0.91 (д, 3 Н, J = 6.5, С (20)Ме), 1.01 (с, ЗН, С (Ю)Ме), 0.95−1.70 (м, 21 Н, протоны Chol), 1.75−2.10 (м, 5 Н, протоны Chol), 2.26−2.40 (м, 2 Н, Н2С (4)), 2.70 (т, 2 Н, J =7.1, ChbCOOChol), 2.79 (т, 2 Н, J = 7.5, СНзСООН), 2.92 (т, 2 Н, J = 7.1, CH2S), 2.92 (т, 3 Н, J = 7.5, CH2S), 4.52−4.78 (м, 1 Н, Н (3)), 5.30−5.45 (м, 1 Н, Н (6)). Спектр ЯМР 13С: 11.83, 18.69, 19.28, 21.00, 22.54, 22.80, 23.81, 24.26, 27.73, 27.98, 28.20, 31.82, 31.87, 32.70, 33.31, 33.86, 34.42, 35.76, 36.16, 36.54, 36.92, 38.04, 39.49, 39.69, 49.98, 56.11, 56.65, 74.54, 122.74, 139.45, 171.08, 177.59.
Холест-5-ен-ЗР-ил)-Л/-{2-[(2-аминоэтил)дитио]этил}карбамат (23): К суспензии цистамина (1.98 г, 13 ммоль), в безводной смеси растворителей CH2CI2-Et3N-flHOKcaH (30:10:10 мл) добавили соединение 15 (0.782 г, 1,63 ммоль) и перемешивали при кипении в течение 35 ч. Реакционную массу фильтровали, промывали 3% водным раствором HCl (3×30 мл), сушили над Na2S04, фильтровали, упаривали. После хроматографии на силикагеле (CHCI3-MeOH, (10: 1)) получили соединение 23 в виде кристаллов светло коричневого цвета (0.580 г, 59%). Kf0.30(H). Масс-спектр, m/z (/от «(%)): 565.456 [М — С1]+ (100). Вычислено для C32H57CIN202S2: 601.390 [М]+. Спектр ЯМР 1Н: 0.61 (с, 3 Н, С (13)Ме), 0.79 (д, 3 Н, J = 6.6, С (25)Ме), 0.80 (д, 3 Н, J = 6.6, С (25)Ме), 0.85 (д, 3 Н, J =6.2, С (20)Ме), 0.94 (с, 3 Н, С (Ю)Ме), 0.87−1.62 (м, 21 Н, протоны Chol), 1.65.
2.07 (м, 5 Н, протоны Chol), 2.17−2.40 (м, 2 Н, Н2С (4)), 2.70−2.90 (м, 2 Н, CHaNHa), 2.90−3.17 (м, 2 Н, ChbNHCOOChol), 3.17−3.60 (м, 4 Н, 2 CHzS), 2.79 (т, 2 Н, J =7.5, CHzCOOH), 2.92 (т, 2 Н, J = 7.1, CH2S), 2.92 (т, 3 Н, J = 7.5, CH2S), 4.20−4.58 (м, 1 Н, Н (3)), 5.22−5.40 (м, 1 Н, Н (6)), 5.43−5.70 (м, 1 Н, NHCO), 7.00−7.50 (м, 3 Н, NH3). Спектр ЯМР 13С: 11.98, 18.84, 19.49, 21.19, 22.65, 22.90, 24.06, 24.41, 28.09, 28.35, 32.00, 35.81, 35.95, 36.34, 36.68, 37.14, 38.21, 38.75, 39.29, 39.63, 39.89, 50.11, 56.39, 56.81, 74.69, 122.65, 139.89, 156.44.
Л/9,М14,Л/17-Три-(трет-бутоксикарбонил)-Л/5-(2-нитрофенилсульфонил)-1-(холест-5-ен-ЗР-илоксикарбонил)-17-амино-5,9,14-триазагептадекан (24а): К раствору соединения 5а (0.175 г, 0.254 ммоль) в безводном ДМФА (Змл) последовательно добавили Cs2C03 (0.083 г, 0.254 ммоль) и бромид 14 (0.168 г, 0.306 ммоль). Реакционную смесь перемешивали 1 ч при 60 °C. Осадок отфильтровывали через Cellte® 545, промывали CH2CI2. После удаления растворителей в вакууме остаток хроматографировали на колонке с силикагелем, элюируя смесью CHCI3-MeOH (100:1). Получили соединение 24а в виде кристаллизующегося масла (0.253 г, 86%). Rf 0.38 (В). Масс-спектр, m/z (/0™(%)): 1178.741 [М + Na]+ (100). Вычислено для CesH^NsO^S: 1155.748 [М]+. Спектр ЯМР 1Н: 0.61 (с, 3 Н, С (13)Ме), 0.79 (д, 3 Н, J = 6.5, С (25)Ме), 0.80 (д, 3 Н, J = 6.5, С (25)Ме), 0.83 (д, 3 Н, J = 6.5, С (20)Ме), 0.94 (с, 3 Н, С (Ю)Ме), 0.90−2.00 (м, 38 Н, протоны Chol, 2 СН2(СН2)2СН2, 2 NCH2ch2ch2N), 1.36 (уш. с, 18 Н) и 1.39 (уш. с, 9 Н, ЗС (СНз)з), 2.11−2.33 (м, 4 Н, Н2С (4), 0С (0)СН2), 2.95−3.12 (м, 8 Н, 4 NCH2), 3.12−3.30 (м, 6 Н, CHzNH, 2 NCH2), 4.43−4.59 (м, 1 Н, Н (3)), 5.01−5.26 (м, 1 Н, NH), 5.26−5.34 (м, 1 Н, Н (6)), 7.50−7.59 (м, 1 Н), 7.59−7.70 (м, 2 Н) и 7.87−8.00 (м, 1 Н, С6Н4). Спектр ЯМР 13С: 11.94, 18.80, 19.39, 21.11, 22.03, 22.64, 22.89, 23.90, 24.36, 25.61, 25.79, 27.87, 28.07, 28.29, 28.53, 31.94, 31.98, 34.00, 35.86, 36.26, 36.68, 37.07, 37.67, 38.22, 39.60, 39.82, 42.40, 43.94, 44.54, 45.19, 46.77, 47.07, 50.12, 56.23, 56.78, 74.02, 79.58, 122.73, 124.24, 130.80, 131.73, 133.50, 133.58 139.71, 148.13, 155.50, 156.10, 172.51.
Л/9,Л/14,Л/17-Три-(шреш-бутоксикарбонил)-Л/5-(2-нитрофенилсульфонил)-Л/1-(холест-5-ен-Зр-илоксикарбонил)-1,17-диамино-5,9,14-триазагептадекан (24Ь): Получали как соединение 24а исходя из соединения 5а (0.098 г, 0.142 ммоль), Cs2C03 (0.046 г, 0.142 ммоль) и бромида 17а (0.096 г, 0.170 ммоль). Получили соединение 24Ь в виде кристаллизующегося масла (0.157 г, 94%). /?f 0.4 (В). Масс-спектр, m/z (/отн (%)): 1193.762 [М + Na]+ (100). Вычислено для.
CeaHioeNeOiaS: 1170.759 [M]+. Спектр ЯМР 1Н: 0.61 (с, 3 Н, С (13)Ме), 0.79 (д, 3 Н, J = 6.5, С (25)Ме), 0.80 (д, 3 Н, J = 6.5, С (25)Ме), 0.84 (д, 3 Н, J = 6.5, С (20)Ме), 0.94 (с, ЗН, С (Ю)Ме), 0.90−2.00 (м, 38 Н, протоны Chol, 2 СН2(СН2)2СН2, 2 NCH2CH2CH2N), 1.36 (уш. с, 18 Н) и 1.39 (уш. с, 9 Н, 3 С (СН3)з), 2.11−2.33 (м, 2 Н, Н2С (4)), 2.91−3.12 (м, 10 Н, CHzNH, 4 NCH2), 3.12−3.30 (м, 6 Н, СЩМН, 2 NCH2), 4.32−4.47 (м, 1 Н, Н (3)), 4.55−4.96 (м, 1 Н, NH), 4.96−5.25 (м, 1 Н, NH), 5.25−5.33 (м, 1 Н, Н (6)), 7.50−7.59 (м, 1 Н), 7.59−7.70 (м, 2 Н) и 7.87−8.00 (м, 1 Н, С6Н4). Спектр ЯМР 13С: 11.97, 18.84, 19.44, 21.17, 22.67, 22.92, 23.95, 24.40, 25.61, 26.01, 27.20, 27.57, 28.11, 28.30, 28.58, 32.01, 35.90, 36.31, 36.54, 36.69, 37.13, 37.80, 38.70, 39.63, 39.87, 40.36, 42.44, 44.16, 44.70, 45.57, 46.70, 50.15, 56.27, 56.82, 74.36, 79.66, 122.56, 124.27, 130.83, 131.77, 133.48, 133.61, 139.98, 148.18, 155.56, 156.16, 156.35.
Л/11,Л/16,Л/19-Три-(трет-бутоксикарбонил)-Л/7-(2-нитрофенилсульфонил)-Л/1-(холест-5-ен-Зр-илоксикарбонил)-1,1 Э-диамино-7,11,16-триазанонадекан (24с): Получали как соединение 24а исходя из соединения 5а (0.203 г, 0.302 ммоль), Cs2C03 (0.098 г, 0.302 ммоль) и бромида 17Ь (0.215 г, 0.362 ммоль). Получили соединение 24с в виде кристаллизующегося масла (0.382 г, 88%). Rf 0.45 (В). Масс-спектр, m/z (/0TH (%)): 1221.424 [М + Na]+(100). Вычислено для C65HiioN6012S: 1198.790 [М]+. Спектр ЯМР 1Н: 0.61 (с, 3 Н, С (13)Ме), 0.79 (д, 3 Н, J = 6.5, С (25)Ме), 0.80 (д, 3 Н, J = 6.5, С (25)Ме), 0.84 (д, 3 Н, J =6.5, С (20)Ме), 0.94 (с, ЗН, С (Ю)Ме), 0.90−2.00 (м, 42 Н, протоны Chol, NHCH^ChbbC^N, 2 NCHzChbC^N, СН2(СН2)4СН2), 1.37 (уш. с, 18 Н) и 1.39 (уш. с, 9 Н, 3 С (СН3)з), 2.11−2.35 (м, 2 Н, Н2С (4)), 2.92−3.13 (м, ЮН, ChhNH, 4 NCH2), 3.13−3.33 (м, 6 Н, ChbNH, 2 NCH2), 4.33−4.47 (м, 1 Н, Н (3)), 4.50−4.85 (м, 1 Н, NH), 4.96−5.25 (м, 1 Н, NH), 5.26−5.35 (м, 1 Н, Н (6)), 7.51−7.59 (м, 1 Н), 7.59−7.70 (м, 2 Н) и 7.87−8.00 (м, 1 Н, С6Н4). Спектр ЯМР 13С: 12.00, 18.87, 19.48, 21.20, 22.70, 23.00, 23.98, 24.43, 25.91, 26.31, 26.37, 27.60, 28.09, 28.14, 28.36, 28.60, 30.30, 32.05, 35.93, 36.34, 36.72, 37.16, 37.81, 38.74, 39.66, 39.90, 40.88, 42.47, 44.13, 44.67, 45.28, 46.82, 47.48, 50.19, 56.30, 56.85, 74.36, 79.65, 122.57, 124.29, 130.87, 131.73, 133.57, 133.68, 140.03, 148.20, 155.59, 156.18, 156.33. a, Nu, Nn-Tpw-(mpem-6yTOKCWKap6oHMn)^-{xonecT-5-eH-3?-илоксикарбонил)-17-амино-5,9,14-триазагептадекан (25а): К раствору соединения 24а (0.150 г, 0.130 ммоль) в ДМФА (3 мл) при перемешивании добавили К2С03 (0.072 г, 0.520 ммоль), а затем PhSH (0.13 мл, 1.310 ммоль).
Через 1 ч реакционную массу фильтровали через Celite® 545, промывали осадок МеОН, растворитель упаривали в вакууме. После хроматографии на силикагеле CHCI3-MeOH-25% водн. NH3, (25:1:0.1) получили соединение 25а в виде желтоватого кристаллизующегося масла (0.079 г, 83%). Rf 0.33 (Е). Масс-спектр, m/z (/0Тн (%)): 971.7 [М + Н]+ (100). Вычислено для СбгНюг^Ов: 970.7 [М]+. Спектр ЯМР 1Н: 0.61 (с, 3 Н, С (13)Ме), 0.79 (д, 3 Н, J = 6.5, С (25)Ме), 0.80 (д, 3 Н, J = 6.5, С (25)Ме), 0.84 (д, 3 Н, J = 6.5, С (20)Ме), 0.94 (с, 3 Н, С (Ю)Ме), 0.90−2.00 (м, 38 Н, протоны Chol, 2 СН2(СН2)2СН2, 2 NCH2CH2CH2N), 1.36 (уш. с, 18 Н) и 1.39 (уш. с, 9 Н, 3 С (СН3)3), 2.15−2.33 (м, 4 Н, 0С (0)СН2, Н2С (4)), 2.60−2.87 (м, 4 Н, CthNHChh). 2.96−3.35 (м, ЮН, СНгЫН, 4 NCH2), 4.44−4.59 (м, 1 Н, Н (3)), 5.01−5.26 (м, 1 Н, NHBoc), 5.26−5.33 (м, 1 Н, Н (6)). Спектр ЯМР 13С: 11.94, 18.81, 19.40, 21.12, 22.29, 22.66, 22.91, 23.91, 24.37, 25.82, 27.88, 28.09, 28.31, 28.54, 31.94, 31.99, 34.02,.
35.87, 36.27, 36.68, 37.07, 37.53, 38.22, 39.60, 39.82, 42.39, 43.42, 43.99, 44.35, 45.45, 46.88, 47.25, 50.12, 56.22, 56.78, 74.12, 79.70, 122.74, 139.71, 156.14, 172.53.
Л/9,Л/14,Л/17-Три-(трет-бутоксикарбонил)-Л/1-(холест-5-ен-Зр-илоксикарбонил)-1,17-диамино-5,9,14-триазагептадекан (25Ь): Получали как соединение 25а исходя из 24Ь (0.130 г, 0.110 ммоль), К2С03 (0.050 г, 0.360 ммоль) и PhSH (0.1мл, 1.10 ммоль). Получили соединение 25Ь в виде желтоватого аморфного вещества (0.107 г, 99%). Rf 0.35 (Е). Масс-спектр, m/z (/отн (%)): 986.796 [М + Н]+ (100). Вычислено для C57Hio3N508: 985.781 [М]+. Спектр ЯМР 1Н: 0.61 (с, 3 Н, С (13)Ме), 0.79 (д, 3 Н, J = 6.5, С (25)Ме), 0.80 (д, 3 Н, J = 6.5, С (25)Ме), 0.84 (д, ЗН, J = 6.5, С (20)Ме), 0.94 (с, 3 Н, С (Ю)Ме), 0.90−2.00 (м, 38 Н, протоны Chol, 2 СН2(СНг)2СН2, 2 МСН2СНгСН2Ы), 1.36 (уш. с, 18 Н, 2 С (СН3)3), 1.39 (уш. с, 9 Н, С (СН3)3), 2.11−2.33 (м, 2 Н, Н2С (4)), 2.53−2.82 (м, 4 Н, CHaNHChb), 2.95−3.33 (м, 12 Н, 2 CUNH, 4 NCH2), 4.32−4.47 (м, 1 Н, Н (3)), 4.55−4.96 (м, 1 Н, NH), 4.96−5.25 (м, 1 Н, NH), 5.25−5.33 (м, 1 Н, Н (6)). Спектр ЯМР 13С: 11.92, 18.77, 19.40, 21.10, 22.62,.
22.88, 23.88, 24.34, 26.01, 27.40, 28.05, 28.25, 28.28, 28.51, 31.93, 35.84, 36.23, 36.61, 37.06, 37.58, 38.66, 39.57, 39.79, 40.29, 42.36, 43.73, 44.21, 46.56, 46.84, 50.07, 56.19, 56.75, 74.21, 79.67, 122.46, 139.94, 156.15, 156.41.
Л/11,Л/16,Л/19-Три-(трет-бутоксикарбонил)-Л/1-(холест-5-ен-Зр-илоксикарбонил)-1,19-диамино-7,11,16-триазанонадекан (25с): Получали как соединение 25а исходя из 24с (0.106 г, 0.088 ммоль), К2С03 (0.053 г, 0.380 ммоль) и PhSH (0.1мл, 1.10 ммоль). Получили соединение 25с в виде желтоватого аморфного вещества (0.079 г, 89%). f? f 0.37 (Е). Масс-спектр, m/z (/отн (%)): 1014.7.
M + Hf (100). Вычислено для C59Hi07N5O8: 1013.8 [Mf. Спектр ЯМР 1Н: 0 61 (с, 3 Н, С (13)Ме), 0.79 (д, 3 Н, J = 6.5, С (25)Ме), 0.80 (д, 3 Н, J = 6.5, С (25)Ме), 0.84 (д, ЗН, J =6.5, С (20)Ме), 0.94 (с, 3 Н, С (Ю)Ме), 0.90−2.00 (м, 42 Н, протоны Chol, NHCH2(ch2)2ch2N, 2 NCH2CH2CH2N, СН2(СН2)4сн2), 1.37 (уш. с, 18 Н) и 1.39 (уш. с, 9 Н, 3 С (СНз)з), 2.11−2.35 (м, 2 Н, Н2С (4)), 2.47−2.76 (м, 4 Н, CU-NHChb), 2.933.30 (м, 12 Н, 2 СНгЫН, 4 NCH2), 4.32−4.52 (м, 1 Н, Н (3″, 4.50−4.85 (м, 1 Н, NH), 4.96−5.25 (м, 1 Н, NH), 5.26−5.35 (м, 1 Н, Н (6)). Спектр ЯМР 13С: 11.95, 18.81, 19.43, 21.13, 22.66, 22.92, 23.92, 24.38, 25.59, 25.96, 26.31, 26.37, 27.60, 28.09, 28.29, 28.32, 28.54, 29.93, 31.97, 35.89, 36.27, 36.65, 37.10, 37.55, 38.69, 39.60, 39.83, 40.79, 42.40, 43.73, 44.20, 44.30, 45.83, 45.90, 46.47, 46.60, 46.84, 47.08, 50.10, 56.22, 56.78, 74.22, 79.56, 122.50, 139.97, 156.13, 156.18, 156.33.
17-Амино-1-(холест-5-ен-Зр-илоксикарбонил)-5,9,14-триазагептадекан, тетрагидрохлорид (26а): К раствору соединения 25а (0.164 г, 0.169 ммоль) в 4 мл CH2CI2 добавили 4н HCl в диоксане (4 мл) и перемешивали 2 ч при 24 °C. Растворители удаляли в вакууме, остаток перекристаллизовывали из смеси CHCI3-EtOH (1: 1). Получили соединение 26а в виде аморфных бежевых кристаллов (0.136 г, 99%). Rf 0.35 (Ж). Масс-спектр, m/z (/отн (%)): 671.5 [М-4HCI + Н]+ (100). Вычислено для C42H82Cl4N402: 670.61 [М -4HCI]+. Спектр ЯМР 1Н (D20): 0.61 (с, ЗН, С (13)Ме), 0.77 (д, 3 Н, J = 6.5, С (25)Ме), 0.79 (д, 3 Н, J = 6.5, С (25)Ме), 0.84 (д, 3 Н, J = 6.5, С (20)Ме), 0.94 (с, 3 Н, С (Ю)Ме), 0.90−2.00 (м, 38 Н, протоны Chol, NHCH2(ch2)2CH2N, 2 NCH2CH2CH2N, СН2(сн2)2СН2), 2.11−2.32 (м, 2 Н, Н2С (4)), 2.90−3.15 (м, 16 Н, 0С (0)СН2, 7 CH2N), 4.20−4.40 (м, 1 Н, Н (3)), 5.205.35 (м, 1 Н, Н (6)).
1,17-Диамино-М1-(холест-5-ен-Зр-илоксикарбонил)-5,9,14-триазагептадекан тетрагидрохлорид (26Ь): Получали как соединение 26а исходя из 25Ь (0.120 г, 0.122 ммоль). Получили соединение 26Ь в виде аморфных бежевых кристаллов (0.098 г, 97%). Rf0.38(>K). Масс-спектр, m/z (/отн (%)): 686.6 [М — 4HCI + Н]+ (100). Вычислено для C42H83Cl4N502: 685.63 [M-4HCI]+. Спектр ЯМР 1Н (D20): 0.60 (с, 3 Н, С (13)Ме), 0.76 (д, 3 Н, .7 = 6.5, С (25)Ме), 0.79 (д, 3 Н, J = 6.5, С (25)Ме), 0.85 (д, 3 Н, J = 6.5, С (20)Ме), 0.95 (с, 3 Н, С (Ю)Ме), 0.90−2.00 (м, 38 Н, протоны Chol, NHCH2(CH2)2CH2N, 2 NCH2CH2CH2N, СН^СНг^СНг), 2.10−2.33 (м, 2 Н, Н2С (4)), 2.91−3.15 (м, 16 Н, 8 CH2N), 4.13−4.39 (м, 1 Н, Н (3)), 5.17−5.38 (м, 1 Н, Н (6)).
1,19-Диамино-Л/1″ (холест-5-ен-Зр-илоксикарбонил)-7,11,16-триазанонадекан, тетрагидрохлорид (26с): Получали как соединение 26а исходя из 25с (0.144 г, 0.142 ммоль). Получили соединение 26с в виде аморфных бежевых кристаллов (0.116 г, 95%). /?f0.40(>K). Масс-спектр, m/z (/0™(%)): 714.6 [М — 4HCI + Н]+(100). Вычислено для C44H87CI4N5O2: 713.65 [М — 4HCI]+. Спектр ЯМР 1Н (D20): 0.61 (с, 3 Н, С (13)Ме), 0.77 (д, 3 Н, J = 6.5, С (25)Ме), 0.79 (д, 3 Н, J = 6.5, С (25)Ме), 0.85 (д, 3 Н, J = 6.5, С (20)Ме), 0.94 (с, 3 Н, С (Ю)Ме), 0.91−2.05 (м, 42 Н, протоны Chol, NHCH2(ch2)2ch2N, 2 NCHhChbChbN, СЬЫСН^СНг), 2.12−2.35 (м, 2 Н, Н2С (4)), 2.91−3.14 (м, 16 Н, 8 CH2N), 4.13−4.40 (м, 1 Н, Н (3)), 5.17−5.38 (м, 1 Н, Н (6)).
Л/9,Л/14-Ди-(тре/п-бутоксикарбонил)-Л/5,Л/18-бис (2-нитрофенилсульфонил)-1,22-бис (холест-5-ен-Зр-илоксикарбонил)-5,9,14,18-тетраазадокозан (27а): К раствору соединения 12 (0.200 г, 0.259 ммоль) в безводном ДМФА (7 мл) последовательно добавили CS2CO3 (0.084 г, 0.259 ммоль) и бромид 14 (0.300 г, 0.546 ммоль). Реакционную смесь перемешивали 1 ч при 60 °C. Осадок отфильтровывали через Celite® 545, промывали CH2CI2. После удаления растворителей в вакууме, остаток хроматографировали на колонке с силикагелем, элюируя смесью СНС1з-МеОН-25% водный NH3 (60: 2: 0.1 с увеличением полярности до 60:4:0.1). Получили соединение 27а в виде кристаллизующегося светло-желтого масла (0.307 г, 78%). Rf 0.38 (В). Спектр ЯМР 1Н: 0.61 (с, 6Н, 2 С (13)Ме), 0.79 (д, 6 Н, J = 6.5, 2 С (25)Ме), 0.80 (д, 6 Н, J = 6.5, 2 С (25)Ме), 0.83 (д, 6 Н, J = 6.5, 2 С (20)Ме), 0.94 (с, 6 Н, 2 С (Ю)Ме), 0.90−2.07 (м, 68 Н, протоны Chol, 3 СН2(СН2)2СН2, 2 NCH2ch2ch2N), 1.36 (уш. с, 18 Н, 2 С (СНз)з), 2.20−2.38 (м, 8 Н, 2 Н2С (4), 2 0С (0)СН2), 3.00−3.17 (м, 8 Н, 4 NCH2), 3.17−3.31 (м, 8 Н, 4 NCH2), 4.33−4.49 (м, 2 Н, 2 Н (3)), 5.25−5.34 (м, 2 Н, 2 Н (6)), 7.497.60 (м, 2 Н), 7.58−7.69 (м, 4 Н) и 7.88−7.98 (м, 2 Н, 2 С6Н4). Спектр ЯМР 13С: 11.95, 18.64, 19.21, 20.96, 21.88, 22.46, 22.69, 23.75, 24.19, 25.58, 25.74, 27.30, 27.46, 27.72, 27.89, 28.11, 28.37, 31.81, 31.82, 33.84, 35.68, 36.12, 36.52, 36.93, 38.07, 39.44, 39.68, 42.25, 44.48, 45.07, 46.99, 47.02, 50.01, 56.12, 56.64, 73.85, 79.37, 122.2, 124.06, 130.60, 131.54, 133.38, 139.58, 147.00, 155.32, 172.30.
Л/9,Л/14-Ди-(трет-бутоксикарбонил)-Л/5,Л/18-бис (2-нитрофенилсульфонил)-1,22-бис (холест-5-ен-Зр-илоксикарбониламино)-5,9,14,18-тетраазадокозан (27Ь): Получали как соединение 27а исходя из соединения 12 (0.200 г, 0.259 ммоль), Cs2C03 (0.127 г, 0.389 ммоль) и соединения.
17а (0.300 г, 0.531 ммоль). Остаток элюировали системой CHCI3-MeOH (100: 0.5 с увеличением полярности до 100:1). Получили соединение 27Ь в виде кристаллизующегося светло-желтого масла (0.276 г, 57%). Rf 0.38 (В). Спектр ЯМР 1Н: 0.61 (с, 6 Н, 2 С (13)Ме), 0.79 (д, 6 Н, J = 6.5, 2 С (25)Ме), 0.80 (д, 6 Н, J = 6.5, 2 С (25)Ме), 0.83 (д, 6 Н, J = 6.5, 2 С (20)Ме), 0.94 (с, 6 Н, 2 С (Ю)Ме), 0.90−2.00 (м, 68 Н, протоны Chol, 3 СН2(СН2)2СН2, 2 NCH2CH2CH2N), 1.36 (уш. с, 18 Н, 2 С (СНз)з), 2.11−2.38 (м, 4 Н, 2 Н2С (4)), 2.96−3.14 (м, 12 Н, 2 ChbNH, 4 NCH2), 3.143.29 (м, 8 Н, 4 NCH2), 4.33−4.49 (м, 2 Н, 2 Н (3)), 4.58−4.75 (м, 2 Н, 2 NH), 5.26−5.33 (м, 2 Н, 2 Н (6)), 7.51−7.58 (м, 2 Н), 7.58−7.69 (м, 4 Н) и 7.88−7.98 (м, 2 Н, 2 С6Н4). Спектр ЯМР 13С: 11.95, 18.81, 19.43, 21.13, 22.66, 22.92, 23.92, 24.37, 25.52, 26.02, 27.13, 27.54, 28.09, 28.27, 28.32, 28.56, 31.96, 31.98, 35.88, 36.27, 36.64, 37.08, 38.68, 39.60, 39.81, 40.30, 42.39, 44.71, 45.20, 45.67, 47.28, 47.64, 50.09, 56.22, 56.77, 74.27, 79.62, 122.53, 124.25, 130.72, 131.81, 133.36, 133.65, 139.93, 148.11, 155.53, 156.33.
Л/1М16-Ди-(трет-бутоксикарбонил)ЛУ7,Л/?°-бис (2-нитрофенилсульфонил)-1,26-бис (холест-5-ен-Зр-илоксикарбониламино)-7,11,16,20-тетраазагексакозан (27с): Получали как соединение 27а исходя из соединения 12 (0.200 г, 0.259 ммоль), CS2CO3 (0.084 г, 0.259 ммоль) и соединения 17Ь (0.338 г, 0.569 ммоль). Вещество элюировали системой CHCI3-MeOH (100: 0.5 с увеличением полярности до 100: 1). Получили соединение 27с в виде кристаллизующегося светло-желтого масла (0.262 г, 56%). Rf 0.40 (В). Спектр ЯМР 1Н: 0.61 (с, 6 Н, 2 С (13)Ме), 0.79 (д, 6 Н, J = 6.5, 2 С (25)Ме), 0.80 (д, 6 Н, J = 6.5, 2 С (25)Ме), 0.83 (д, 6 Н, J = 6.5, 2 С (20)Ме), 0.94 (с, 6 Н, 2 С (Ю)Ме), 0.90−2.00 (м, 76 Н, протоны Chol, NCH2(CH2)2CH2N, 2 NCbhChhCHhN, 2 СНг^Нг^СНг), 1.37 (уш. с, 18 Н, 2 С (СНз)з), 2.11−2.37 (м, 4 Н, 2 Н2С (4)), 2.96−3.14 (м, 12 Н, 2 CHzNH, 4 NCH2), 3.14−3.30 (м, 8 Н, 4 NCH2), 4.33−4.50 (м, 2 Н, 2 Н (3)), 4.55−4.78 (м, 2 Н, 2 NH), 5.26−5.32 (м, 2 Н, 2 Н (6)), 7.51−7.58 (м, 2 Н), 7.59−7.68 (м, 4 Н) и 7.88−7.97 (м, 2 Н, 2 С6Н4). Спектр ЯМР 13С: 11.97, 18.83, 19.45, 21.14, 22.68, 22.94, 23.93, 24.40, 25.68, 26.25, 26.38, 27.50, 28.03, 28.11, 28.30, 28.34, 28.57, 29.97, 31.97, 35.90, 36.28, 36.66, 37.10, 38.70, 39.61, 39.83, 40.79, 42.41, 44.65, 45.14, 47.20, 50.10, 56.22, 56.78, 74.25, 79.61, 122.53, 124.26, 130.77, 131.78, 133.54, 133.62, 139.98, 148.11, 155.54, 156.29.
Л/^А/^-Ди^тре/п-бутоксикарбонилН, 22-бис (холест-5-ен-Зр-илоксикарбонил)-5,9,14,18-тетраазадокозан (28а): К раствору соединения 27а.
0.215 г, 0.126 ммоль) в ДМФА (2 мл) при перемешивании добавили К2С03 (0.035 г, 0.252 ммоль), а затем PhSH (0.13 мл, 1.13 ммоль). Через 1 ч реакционную массу фильтровали через Celite® 545, промывали осадок МеОН, растворитель упаривали в вакууме. Остаток хроматографировали на колонке с силикагелем, элюируя смесью CHCI3-MeOH-25% водный NH3 (100:10:1). Получили соединение 28а в виде желтоватого кристаллизующегося масла (0.100 г, 60%). Rf 0.32 (Е). Масс-спектр, m/z (/отн (%)): 1339.642 [М]+ (100). Вычислено для C84H146N408: 1339.114 [М]+. Спектр ЯМР 1Н: 0.61 (с, 6 Н, 2С (13)Ме), 0.79 (д, 6 Н, J = 6.5, 2 С (25)Ме), 0.80 (д, 6 Н, J = 6.5, 2 С (25)Ме), 0.83 (д, 6 Н, J = 6.5, 2 С (20)Ме), 0.94 (с, 6Н, 2 С (Ю)Ме), 0.90−2.03 (м, 68 Н, протоны Chol, 3 СН2(СН2)2СН2, 2 nch2cm2ch2n), 1.37 (уш. с, 18 Н, 2С (СН3)3), 2.30−2.35 (м, 8 Н, 2 Н2С (4), 2 0С (0)СН2), 2.50−2.70 (м, 8 Н, 2 СЩЧНСНг), 3.00−3.30 (м, 8 Н, 4 NCH2), 4.40−4.50 (м, 2 Н, 2 Н (3)), 5.25−5.33 (м, 2 Н, 2 Н (6)). Спектр ЯМР 13С: 12.03, 18.91, 19.47, 21.24, 22.71, 22.94, 24.03, 24.46, 26.07, 28.03, 28.16, 28.38, 28.66, 29.20, 32.10, 34.60, 35.95, 36.40, 36.80, 37.21, 38.37, 39.72, 39.97, 42.54, 45.03, 47.03, 49.55, 50.30, 56.41, 56.93, 74.04, 79.59, 122.76, 139.90, 155.97, 172.99.
Л/9,Л/14-Ди-(трет-бутоксикарбонил)-1,22-бис (холест-5-ен-Зр-илоксикарбониламино)-5,9,14,18-тетраазадокозан (28Ь): Получали как соединение 28а исходя из соединения 27Ь (0.200 г, 0.115 ммоль), К2С03 (0.048 г, 0.345 ммоль) и PhSH (0.14 мл, 1.15 ммоль). Остаток элюировали системой CHCI3-МеОН-25% NH3 водн. (120:7.6:1). Получили соединение 28Ь в виде светло-желтого кристаллизующегося масла (0.121 г, 77%). Rf0.30(E). Масс-спектр, m/z (/отн (%)): 1370.339 [М + Н]+ (100). Вычислено для C84H148N608: 1369.136 [М]+. Спектр ЯМР 1Н: 0.61 (с, 6 Н, 2 С (13)Ме), 0.79 (д, 6 Н, J = 6.5, 2 С (25)Ме), 0.80 (д, 6 Н, J = 6.5, 2 С (25)Ме), 0.83 (д, 6 Н, J = 6.5, 2 С (20)Ме), 0.94 (с, 6 Н, 2 С (Ю)Ме), 0.90−2.00 (м, 68 Н, протоны Chol, 3 СНг^ЬЬЬСНг, 2 МСН2СНгСН2М), 1.37 (уш. с, 18 Н, 2 С (СН3)3), 2.10−2.35 (м, 4 Н, 2 Н2С (4)), 2.47−2.62 (м, 8 Н, 2 CHzNHChb). 2−98 3.28 (м, 12 Н, 2 СЩМН, 4 NCH2), 4.34−4.49 (м, 2 Н, 2 Н (3)), 4.58−4.70 (м, 2 Н, 2 NH), 4.92−5.11 (м, 2 Н, 2 NH), 5.25−5.33 (м, 2 Н, 2 Н (6)). Спектр ЯМР 13С: 12.00, 18.86, 19.49, 21.19, 22.70, 22.96, 23.97, 24.43, 25.86, 26.14, 27.13, 27.97, 28.15, 28.37, 28.62, 32.02, 35.94, 36.33, 36.70, 37.15, 38.76, 39.66, 39.88, 40.86, 42.45, 44.45, 45.17, 46.81, 47.41, 50.15, 56.28, 56.83, 74.25, 79.54, 122.55, 140.02, 155.53, 156.38.
Л/11,Л/16-Ди-(трет-бутоксикарбонил)-1,26-бис-(холест-5-ен-Зр-илоксикарбониламино)-7,11,16,20-тетраазагексакозан (28с): Получали как 28а исходя из соединения 27с (0.330 г, 0.184 ммоль), К2С03 (0.076 г, 0.552 ммоль) и PhSH (0.19 мл, 1.83 ммоль). Получили соединение 28с в виде светло-желтого кристаллизующегося масла (0.185 г, 71%). f? f 0.33(E). Масс-спектр, m/z (/0Тн (%)): 1426.339 [М + Н]+ (100). Вычислено для C88Hi56N608: 1425.198 [М]+. Спектр ЯМР 1Н: 0.61 (с, 6 Н, 2 С (13)Ме), 0.79 (д, 6 H, J = 6.5, 2 С (25)Ме), 0.80 (д, 6 H, J = 6.5, 2 С (25)Ме), 0.83 (д, 6 H, J = 6.5, 2 С (20)Ме), 0.94 (с, 6 Н, 2 С (Ю)Ме), 0.90−2.00 (м, 76 Н, протоны Chol, NCH2(CH2)2CH2N, 2 NCHaCHbCh^N, 2 СН^СН^СНг), 1.37 (уш. с, 18 Н, 2 С (СНз)з), 2.12−2.35 (м, 4 Н, 2 Н2С (4)), 2.47−2.61 (м, 8 Н, 2 CH2NHCH2), 2.99−3.27 (м, 12 Н, 2 ChbNH, 4 NCH2), 4.34−4.49 (м, 2 H, 2 Н (3)), 4.57−4.70 (м- 2 Н, 2 NH), 5.26−5.33 (м, 2 Н, 2 Н (6)). Спектр ЯМР 13С: 11.97, 18.83, 19.45, 21.14, 22.68, 22.94, 23.93, 24.40, 25.68, 26.25, 26.38, 27.50, 28.03, 28.11, 28.30, 28.34, 28.57, 29.97, 31.97, 35.90, 36.28, 36.66, 37.10, 38.70, 39.61, 39.83, 40.79, 42.41, 44.65, 45.14, 47.20, 50.10, 56.22, 56.78, 74.25, 79.61, 122.53, 139.98, 155.54, 156.29.
1,22-Бис (холест-5-ен-Зр-илоксикарбонил)-5,914, 18-тетраазакозан тетрагидрохлорид. (29а): К раствору, соединения 28а, (0.100 г, 0.075 ммоль) в CH2CI2 (3 мл) добавили.4н раствор HCl в диоксане (4 мл) и перемешивали 2 ч при 24 °C. Растворитель удаляли в вакууме, осадок промывали СН3ОН (5 мл). Получили соединение 29а в виде бежевых кристаллов (79 мг, 82%). Rf 0.40 (Ж). Масс-спектр, m/z (/0Тн (%)): 1139.784 [M-4HCI]+ (100). Вычислено для C74H134Cl4N404: 1139.009 [M — 4 HCI]+. Спектр ЯМР 1Н (flMCO-d6 — CDCI3, 1: 3): 0.61 (с, 6 Н, 2 С (13)Ме), 0.77 (д, 6 H, J = 6.5, 2 С (25)Ме), 0.79 (д, 6 H, J = 6.5, 2 С (25)Ме), 0.84 (д, 6 H, J = 6.5, 2 С (20)Ме), 0.94 (с, 6 Н, 2С (10)Ме), 0.90−2.03 (м, 68 Н, протоны Choi, NHCH2(CH2)2CH2N, 2 NCH2CH2CH2N, 2 СН2(СН2)2СН2), 2.15−2.25 (м, 8 H, 2 Н2С (4), 2 0С (0)СН2), 2.90−3.15 (м, 16 Н, 8 CHbN), 4.20−4.40 (м, 2 Н, 2 Н (3)), 5.20−5.35 (м, 2 Н, 2 Н (6)).
1,22-Бис (холест-5-ен-Зр-илоксикарбониламино)-5,9,14,18-тетраазадокозан тетрагидрохлорид (29Ь): Получали как соединение 29а исходя из соединения 28Ь (0.086 г, 0.063 ммоль). Получили соединение 29Ь в виде бежевых кристаллов (82 мг, 99%). /^0.40(Ж). Масс-спектр, m/z (1от (%)): 1170.1 [М — 4 HCl + Н]+ (100). Вычислено для C74Hi36Cl4N604: 1169.13 [M — 4 HCIf. Спектр ЯМР 1Н (CD3OD — CDCI3, 1:4): 0.61 (с, 6 Н, 2С (13)Ме), 0.77 (д, 6 H, J = 6.5, 2 С (25)Ме), 0.79 (д, 6 H, J = 6.5, 2 С (25)Ме), 0.83 (д, 6 H, J = 6.5, 2 С (20)Ме), 0.94 (с, 6Н, 2 С (Ю)Ме), 0.90−2.04 (м, 68 Н, протоны Chol, NHCH2(CH2)2CH2NH, 2 NCHsCHzCHzN, 2 СН2(СН2)4СН2), 2.11−2.34 (м, 4 H, 2 Н2С (4)), 2.41−2.60 (м, 8 Н,.
2 CH2NHCH2), 3.00−3.28 (м, 12 Н, 2 CU-NH, 4 NCH2), 4.33−4.49 (м, 2 Н, 2 Н (3)), 5.265.33 (м, 2 Н, 2 Н (6)).
1,26-Бис (холест-5-ен-Зр-илоксикарбониламино)-7,11,16,20-тетраазагексакозан тетрагидрохлорид (29с): Получали как соединение 29а соединения 28с (0.160 г, 0.112 ммоль). Получили соединение 29с в виде бежевых кристаллов (146 мг, 95%). Rf0.45(>K). Масс-спектр, m/z (/отн (%)): 1226.3 [М-4 HCl + Н]+ (100). Вычислено для C78H144CI4N6O4: 1225.13 [М — 4 HCI]+. Спектр ЯМР 1Н (ДМСО-ds — CDCI3, 1:3): 0.61 (с, 6 Н, 2С (13)Ме), 0.79 (д, 6 Н, J = 6.5, 2 С (25)Ме), 0.80 (д, 6 Н, J = 6.5, 2 С (25)Ме), 0.83 (д, 6 Н, J = 6.5, 2 С (20)Ме), 0.94 (с, 6 Н, 2 С (Ю)Ме), 0.91−2.04 (м, 76 Н, протоны Chol, NHCH2(CH2)2CH2NH, 2 NCH2CH2CH2N, 2 СН2(СН2)4СН2), 2.12−2.35 (м, 4 H, 2 Н2С (4)), 2.40−2.61 (м, 8 Н, 2 CH2NHCH2), 2.99−3.27 (м, 12 Н, 2 CUNH, 4 NCH2), 4.34−4.49 (м, 2 Н, 2 Н (3)), 4.574.70 (м, 2 Н, 2 NH), 5.26−5.33 (м, 2 Н, 2 Н (6)).
Л/7,Л/12,Л/15-Три-бензилоксикарбонил-Л/3-(2-нитрофенилсульфонил)-1-(холест-5-ен-Зр-илоксиметокси)-15-амино-3,7,12-триазапентадекан (30а): К раствору соединения 5Ь (0.156 г, 0.20 ммоль) в безводном ДМФА (Змл) последовательно добавили Сэ2СОз (0.035 г, 0.11 ммоль) и соединение 20а (0.114 г, 0.22 ммоль). Реакционную смесь перемешивали 2 ч при 60 °C, приливали 15 мл СНСЬ, промывали 20% водным раствором NaCI (2×15 мл), сушили над Na2S04, упаривали. Остаток хроматографировали на колонке с силикагелем, элюируя смесью CHCI3-MeOH (200:1 с увеличением полярности до 50:1). Получили соединение 30а в виде кристаллизующегося масла (0.228 г, 94%). Rf 0.40 (Б). Спектр ЯМР 1Н: 0.64 (с, 3 Н, С (13)Ме), 0.83 (д, 3 Н, J =6.5, С (25)Ме), 0.84 (д, 3 Н, J = 6.5, С (25)Ме), 0.89 (д, 3 Н, J = 6.5, С (20)Ме), 0.95 (с, 3 Н, С (Ю)Ме), 0.93−2.05 (м, 33 Н, протоны Chol, NCH2(CH2)2CH2N, 2 ГМСНгСНгСНгЫ), 2.08−2.35 (м, 2 Н, Н2С (4)), 2.95−3.45 (м, 15 Н, Н (3), 7 NCH2), 3.45−3.55 (м, 2 Н, ЫСНгСНгО), 4.404.65 (м, 2 Н, 0СН20), 4.95−5.18 (м, 6 Н, 3 CUPh), 5.23−5.38 (м, 1 Н, Н (6)), 7.15−7.40 (м, 15 Н, 3 Ph) 7.50−7.80 (м, 3 Н) и 7.88−8.03 (м, 1 Н, С6Н4). Спектр ЯМР 13С: 11.85, 18.71, 19.33, 21.02, 22.57, 22.83, 23.78, 24.26, 25.17, 25.74, 26.90, 27.98, 28.20, 28.79, 31.82, 31.90, 35.75, 36.14, 36.44, 36.67, 37.12, 37.56, 38.13, 39.38, 39.48, 39.70, 42.27, 44.01, 46.38, 46.95, 50.10, 56.08, 56.69, 65.59, 66.36, 67.09, 76.93, 93.29, 121.86, 124.05, 127.86, 128.02, 128.44, 128.50, 130.86, 133.41, 136.64, 140.48, 147.99, 155.95, 156.50.
Л^.^^Л/^-Три-бензилоксикарбонил-Л^^г-нитрофенилсульфонил)-!-(холест-5-ен-Зр-илоксиметокси)-17-амино-5,9,14-триазагептадекан (ЗОЬ): К раствору соединения 5Ь (0.377 г, 0.48 ммоль) в безводном ДМФА (9 мл) последовательно добавили CS2CO3 (0.156 г, 0.48 ммоль), соединение 20Ь (0.266 г, 0.53 ммоль) и Bu4NI (0.088 г, 0.24 ммоль). Реакционную смесь перемешивали 20 ч при 85 °C, приливали 15 мл CHCI3, промывали 20% водным раствором NaCI (4×25 мл), сушили над Na2S04, упаривали. Остаток хроматографировали на колонке с силикагелем, элюируя смесью CHCI3-MeOH (100: 1 с увеличением полярности до 50:1). Получили соединение ЗОЬ в виде кристаллизующегося масла (0.299 г, 50%). R, 0.42 (Б). Спектр ЯМР 1Н: 0.68 (с, 3 Н, С (13)Ме), 0.86 (д, 3 Н, J = 6.5, С (25)Ме), 0.87 (д, 3 Н, J = 6.5, С (25)Ме), 0.91 (д, 3 Н, J = 6.5, С (20)Ме), 1.00 (с, ЗН, С (Ю)Ме), 0.93−2.10 (м, 37 Н, протоны Chol, 2 СН2(СН2)2СН2, 2 NCH2CH2CH2N), 2.13−2.41 (м, 2 Н, Н2С (4)), 2.90−3.54 (м, 17 Н, Н (3), 7 NCH2> СН2СНгО), 4.67 (с, 2 Н, 0СН20), 5.00−5.15 (м, 6 Н, 3 Cj^Ph), 5.31−5.38 (м, 1 Н, Н (6)), 7.21−7.42 (м, 15 Н, 3 Ph) 7.50−7.72 (м, 3 Н) и 7.86−8.07 (м, 1 Н, С6Н4). Спектр ЯМР 13С: 11.84, 18.71, 19.33, 21.05, 22.53, 22.77, 23.81, 24.27, 24.95, 25.24, 25.60, 26.69, 27.08, 27.34, 27.99, 28.19, 28.90, 31.89, 31.92, 35.75, 35.87, 36.18, 36.74, 37.22, 39.50, 39.55, 39.78, 42.32, 43.71, 44.09, 45.04, 46.58, 46.92, 50.19, 56.18, 56.76, 66.95, 67.09, 67.51, 76.96, 93.41, 121.73, 124.09, 127.85, 127.99, 128.20, 128.55, 130.68, 131.52, 133.39, 136.66, 140.71, 148.05, 156.00, 156.97, 157.46.
Л/11,Л/16,Л/19-Три-бензилоксикарбонил-Л/7-(2-нитрофенилсульфонил)-1-(холест-5-ен-Зр-илоксиметокси)-19-амино-7,11,16-триазадодекан (30с):
Получали как соединение ЗОЬ исходя из соединения 5Ь (0.313 г, 0.40 ммоль), Cs2C03 (0.129 г, 0.40 ммоль), соединения 20с (0.255 г, 0.48 ммоль) и Bu4NI (0.074 г, 0.20 ммоль). Получили соединение 30с в виде масла (0.278 г, 54%). R 0.43 (Б). Спектр ЯМР 1Н: 0.68 (с, 3 Н, С (13)Ме), 0.86 (д, 3 Н, J = 6.5, С (25)Ме), 0.87 (д, 3 Н, J = 6.5, С (25)Ме), 0.91 (д, 3 Н, J = 6.5, С (20)Ме), 1.00 (с, 3 Н, С (Ю)Ме), 0.95−2.05 (м, 41 Н, протоны Chol, NCH2(CH2)2CH2N, OCH2(CH2)4CH2N, 2 NCH2CuCH2N), 2.20−2.41 (м, 2 H, Н2С (4)), 3.00−3.35 (м, 14 Н, 7 NCH2), 3.35−3.45 (м, 1 Н, Н (3)), 3.50 (т, 2 Н, J = 6.5, СНгСНгО), 4.71 (с, 2 Н, 0СН20), 5.00−5.20 (м, 6 Н, 3 CHzPh), 5.32−5.39 (м, 1 Н, Н (6)), 7.21−7.42 (м, 15 Н, 3 Ph) 7.52−7.73 (м, 3 Н) и 7.90−8.00 (м, 1 Н, С6Н4). Спектр ЯМР 13С: 11.99, 18.84, 19.51, 21.17, 22.71, 22.97, 23.95, 24.42, 25.37, 25.70, 25.95, 26.53, 27.25, 28.15, 28.37, 29.02, 29.69, 31.99, 32.06, 35.92, 36.30, 36.87, 37.35, 37.61, 38.24, 39.64, 39.67, 39.88, 42.43, 44.09, 44.48, 44.78, 46.89, 47.07, 50.25, 56.25, 56.86, 66.59, 67.29, 67.70, 76.97,93.56,.
121.88, 124.25, 128.04, 128.20, 128.61, 128.65, 130.91, 131.70, 133.56, 136.78, 140.88, 148.11, 156.11, 156.65, 156.88.
Л/7,Л/12,Л/15-Три-бензилоксикарбонил-1-(холест-5-ен-Зр-илоксиметокси)-15-амино-3,7,12-триазапентадекан (31а): К раствору соединения 30а (0.200 г, 0.16ммоль) в ДМФА (5 мл) при перемешивании добавили К2СОэ (0.074 г, 0.54 ммоль), а затем PhSH (0.167 мл, 1.62ммоль). Через 15 мин к реакционной массе добавляли CHCI3 (10 мл), промывали 20% раствором NaCI (3×15 мл), сушили над Na2S04, упаривали. Остаток хроматографировали на колонке с силикагелем, элюируя смесью CHCI3-MeOH-25% водный NH3 (100:5:0.1). Получили соединение 31а в виде желтоватого масла (0.165 г, 97%). f? f0.58 (Н). Масс-спектр, m/z (1от{%)) 1047.767 [М+Н]+ (100). Вычислено для C64H94N408: 1046.707 [М]+. Спектр ЯМР 1Н: 0.68(с, 3 Н, С (13)Ме), 0.86 (д, 3 Н, J = 6.5, С (25)Ме), 0.87 (д, 3 Н, J = 6.5, С (25)Ме), 0.92 (д, 3 Н, J = 6.5, С (20)Ме), 1.00 (с, 3 Н, С (Ю)Ме), 0.93−2.1 (м, 33 Н, протоны Chol, NCH2(CH2)2CH2N, 2 NCH2CH2CH2N), 2.20−2.40 (м,.
2 Н, Н2С (4)), 2.50−3.00 (м, 4 Н, СШМНСНг), 3.00−3.30 (м, ЮН, 5 NCH2), 3.30−3.50 (м, 1 Н, Н (3)), 3.50−3.80 (м, 2 Н, МСН2СНгО), 4.73 (с, 2 Н, 0СН20), 5.00−5.15 (м, 6 Н,.
3 ChbPh), 5.25−5.40 (м, 1 Н, Н (6)), 7.20−7.40 (м, 15 Н,' 3 Ph). Спектр ЯМР 13С: 11.97, 18.85, 19.45, 21.19, 22.66, 22.90, 23.96, 24.40, 25.44, 25.86, 27.27, 28.11, 28.32, 29.03, 32.03, 35.88, 36.33, 36.87, 37.35, 37.90, 39.65, 39.92, 42.46, 44.29, 44.29, 44.87, 46.67, 46.90, 50.33, 56.33, 56.90, 65.72, 66.63, 67.29, 77.26, 93.75, 121.92, 127.99, 128.15, 128.57, 128.61, 136.87, 140.78,156.58.
Л/^Л/^М^-Три-бензилоксикарбонил-! -(холест-5-ен-Зр-илоксиметокси)-17-амино-5,9,14-триазагептадекан (31Ь): Получали как соединение 31а исходя из ЗОЬ (0.220 г, 0.17 ммоль), К2СОэ (0.080 г, 0.58 ммоль), PhSH (0.179 мл, 1.75 ммоль). Получили соединение 31 b в виде желтоватого масла (0.139 г, 74%). Яг 0.60 (Н). Масс-спектр, m/z (/отн (%)): 1075.760 [М+Н]+ (100). Вычислено для C66H98N408: 1074.738 [М] Спектр ЯМР 1Н: 0.68 (с, 3 Н, С (13)Ме), 0.86 (д, 3 Н, J = 6.5, С (25)Ме), 0.87 (д, 3 Н, J =6.5, С (25)Ме), 0.91 (д, 3 Н, J =6.5, С (20)Ме), 1.00 (с, ЗН, С (Ю)Ме), 0.95−2.08 (м, 37 Н, протоны Chol, 2 СН2(СН2)2СН2, 2 NCH2ch2ch2N), 2.15−2.40 (м, 2 Н, Н2С (4)), 2.45−2.65 (м, 4 Н, ch2nhch2), 3.033.35 (м, 10 Н, 5 NCH2), 3.35−3.50 (м, 1 Н, Н (3)), 3.53 (т, 2 Н, J = 6.2, СНгСНаО), 4.72 (с, 2 Н, 0СН20), 5.03−5.17 (м, 6 Н, 3 Ch^Ph), 5.31−5.38 (м, 1 Н, Н (6)), 7.20−7.42 (м, 15 Н, 3 Ph). Спектр ЯМР 13С: 11.96, 18.83, 19.45, 21.17, 22.65, 22.90, 23.94, 24.39, 25.34, 25.82, 26.25, 27.27, 28.10, 28.32, 29.03, 29.78, 32.02, 32.04, 35.88, 36.31,.
36.86, 37.38, 37.79, 39.62, 39.68, 39.91, 43.44, 44.21, 45.03, 46.66, 47.19, 50.30, 56.30, 56.88, 67.15, 67.26, 67.86, 76.95, 93.56, 121.762, 127.91, 128.08, 128.14, 128.55, 128.57, 128.63, 136.95, 140.92, 156.50, 156.56.
М11,Л/16,Л/1э-Три-бензилоксикарбонил-1-(холест-5-ен-Зр-илоксиметокси)-19-амино-7,11,16-триазадодекан (31с): Получали как соединение 31а исходя из 30с (0.210 г, 0.17 ммоль), К2СОэ (0.074 г, 0.54 ммоль), PhSH (0.167 мл, 1.63 ммоль). Получили соединение 31с в виде желтоватого масла (0.150 г, 83%). Rf0.61(H). Масс-спектр, m/z (/0™(%))' 1103.6 [M+Hf (100). Вычислено для C68H102N4O8: 1102.770 [М]+. Спектр ЯМР 1Н: 0.67 (с, 3 Н, С (13)Ме), 0.85 (д, 3 Н, J = 6.6, С (25)Ме), 0.86 (д, 3 Н, J =6.6, С (25)Ме), 0.91 (д, 3 Н, J = 6.5, С (20)Ме), 1.00 (с, ЗН, С (Ю)Ме), 0.96−2.07 (м, 41 Н, протоны Chol, NCh^CuhCHhN, OCH2(ch2)4ch2N, 2 NCH2CH2CH2N), 2.15−2.40 (м, 2 H, Н2С (4)), 2.45−2.70 (м, 4 Н, CUNHChb). 3.02−3.35 (м, 10 Н, 5 NCH2), 3.35−3.45 (м, 1 Н, Н (3)), 3.53 (т, 2 Н, J = 6.0, СН2СНгО), 4.71 (с, 2 Н, 0СН20), 5.00−5.15 (м, 6 Н, 3 CJiPh), 5.32−5.37 (м, 1 Н, Н (6)), 7.21−7.40 (м, 15 Н, 3 Ph). Спектр ЯМР 13С: 11.95, 18.82, 19.44, 21.15, 22.64, 22.89, 23.92, 24.38, 25.37, 25.84, 26.33, 26.76, 27.55, 28.08, 28.31, 29.01, 32.00, 32.03, 35.86, 36.29, 36.84, 37.35, 37.81, 38.30, 39.61, 39.66, 39.89, 42.42, 44.21, 44.98, 46.60, 47.08, 49.64, 50 28, 56.28, 56.86, 67.16, 67.24, 67.63, 76.96, 93.53, 121.79, 127.91, 128.07, 128.12, 128.53, 128.57, 128.62, 136.92, 140.86, 156.29, 156.53, 156.71.
15-Амино-1-(холест-5-ен-Зр-илоксиметокси)-3,7,12-триазапентадекан, тетрагидрохлорид (32а): К раствору соединения 31а (131 мг, 0.13 ммоль) в THF (10 мл) добавили 5% Pd/C (524 мг) и продували Н2 в течении 8 ч. Реакционную массу фильтровали, упаривали, сухой остаток промывали диэтиловым эфиром (5×10 мл). Получили соединение 32а в виде белых кристаллов (51 мг, 62%). Масс-спектр, m/z (/0™(%)): 645.581 [М+Н]+ (100). Вычислено для C4oH76N402: 644.597 [М]+. Спектр ЯМР 1Н: 0.58 (с, 3 Н, С (13)Ме), 0.75 (д, 3 Н, J = 6.5, С (25)Ме), 0.76 (д, 3 Н, J = 6.5, С (25)Ме), 0.81 (д, 3 Н, J = 6.5, С (20)Ме), 0.90 (с, 3 Н, С (Ю)Ме), 0.90−2.00 (м, 33 Н, протоны Chol, NHCH2(CH2)2CH2N, 2 NHCH2CH2CH2NH), 2.102.29 (м, 2 Н, Н2С (4)), 2.65−3.00 (м, 8 Н, 4 CH2N), 3.20−3.50 (м, 9 Н, Н (3), NCHzCHzO, 3 NCH2), 4.64 (с, 2 Н, 0СН20), 5.15−5.30 (м, 1 Н, Н (6)).
17-Амино-1-(холест-5-ен-ЗР-илоксиметокси)-5,9,14-триазагептадекан, тетрагидрохлорид (32Ь): Получали как соединение 32а исходя из 31 b (0.059 г, 0.06 ммоль), 5% Pd/C (177 мг). Получили соединение 32Ь в виде белых кристаллов (20 мг, 55%). Масс-спектр, m/z (1тн (%)) 673.736 [М+Н]+ (100). Вычислено для C42H8oN402: 672.628 [М]+. Спектр ЯМР 1Н: 0.59 (с, 3 Н, С (13)Ме), 0.74 (д, 3 Н, J = 6.5, С (25)Ме), 0.75 (д, 3 Н, J = 6.5, С (25)Ме), 0.80 (д, 3 Н, J = 6.5, С (20)Ме), 0.90 (с, 3 Н, С (Ю)Ме), 0.91−2.03 (м, 37 Н, протоны Chol, NHCH2(CH2)2CH2N, 2 NHCH2CH2CH2NH, СН2(СН2)2СН2), 2.10−2.30 (м, 2 Н, Н2С (4)),.
2.69−3.05 (м, 14 Н, 3 CH2NCH2, NCH2), 3.21−3.51 (м, 1 Н, Н (3)), 3.55 (т, 2 Н, J = 6.2, СН2СН2О), 4.72 (с, 2 Н, 0СН20), 5.14−5.19 (м, 1 Н, Н (6)).
19-Амино-1 -(холест-5-ен-Зр-илоксиметокси)-7,11,16-триазадодекан, тетрагидрохлорид (32с): Получали как соединение 32а исходя из 31с (0.058 г, 0.05 ммоль), 5% Pd/C (177 мг). Получили соединение 32с в виде белых кристаллов (23 мг, 60%). Масс-спектр, m/z (/отн (%)): 701. 834 [М+Н]+ (100). Вычислено для C44H84N402: 700.659 [М]+. Спектр ЯМР 1Н: 0.60 (с, 3 Н, С (13)Ме), 0.74 (д, 3 Н, J = 6.5, С (25)Ме), 0.75 (д, 3 Н, J = 6.5, С (25)Ме), 0.79 (д, 3 Н, J = 6.5, С (20)Ме), 0.91 (с, 3 Н, С (Ю)Ме), 0.91−2.03 (м, 41 Н, протоны Chol, NHCH2(CH2)2CH2N, 2 NHCH2CH2CH2NH, СН2(СШ)4СН2), 2.11−2.30 (м, 2 Н, Н2С (4)),.
2.70−3.07 (м, 14 Н, 3 CH2NCH2, NCH2), 3.22−3.51 (м, 1 Н, Н (3)), 3.54 (т, 2 Н, J = 6.2, СН2СНгО), 4.71 (с, 2 Н, 0СН20), 5.15−5.20 (м, 1 Н, Н (6)).
Холест-5-ен-Зр-ил)-Л/11,Л/16,Л/19-три-(/прет-бутилоксикарбонил)-19-амино-6-оксо-3,4-дитиа-7,11,16-триазадодеканоат (33а). К раствору соединения 4а (99 мг, 0.198 ммоль) в ДМФА (2.5 мл) последовательно добавили соединение 22а (0,131 г, 0.238 ммоль), TBTU (0.076 мг, 0.238 ммоль) и Et3N (0.033 мл, 0.238 ммоль). Через 1 ч упариваем, остаток хроматографировали на колонке с силикагелем, элюируя смесью СНС1з-МеОН (100: 1). Получили соединение 33а в виде кристаллизующегося бесцветного масла (0.122 г, 60%). f? f0.35(B). Спектр ЯМР 1Н: 0.68 (с, 3 Н, С (13)Ме), 0.85 (д, 3 Н, J = 6.5, С (25)Ме), 0.86 (д, 3 Н, J = 6.5, С (25)Ме), 0.91 (д, 3 Н, J =6.5, С (20)Ме), 1.02 (с, 3 Н, С (Ю)Ме), 0.90−2.10 (м, 34 Н, протоны Chol, 2 NCH2CH2CH2N, NCH2(CH2)2CH2N), 1.43 (с, 9 Н), 1.45 (с, 9 Н) и 1.50 (с, 9 Н, 3 С (СНз)з), 2.29−2.40 (м, 2 Н, Н2С (4)), 3.02−3.35 (м, 12 Н, 6 CJiN), 3.47 (с, 2 Н, SChbCOOChol), 3.54 (с, 2 Н, SCUCONH), 4.35−4.75 (м, 1 Н, Н (3)), 5.27−5.40 (м, 1 Н, Н (6)). Спектр ЯМР 13С: 11.85, 18.72, 19.27, 21.05, 22.53, 22.77, 23.83, 24.27, 25.91, 27.70, 27.99, 28.19, 28.44, 28.47, 29.67, 31.88, 31.91, 33.94, 35.77, 36.20, 36.60, 36.95, 37.68, 38.00, 39.52, 39.75, 41.04, 41.71, 42.67, 44.11, 46.85, 49.14, 50.08, 56.20, 56.72, 75.76, 79.64, 122.99, 139.31, 156.01, 167.95, 169.08.
Холест-б-ен-ЗР-ил^Л/^М^ЛР^ри^трет-бутилоксикарбонил)^!-амино-8-оксо-4,5-дитиа-9,13,18-триазагенэйкозаноат (33b): Получали как соединение 33а исходя из соединения 4а (0.158 г, 0.314 ммоль), соединения 22Ь (0.218 г, 0.377 ммоль), TBTU (0.121 г, 0.377 ммоль) и Et3N (0.053 мл, 0.377 ммоль). Получили соединение ЗЗЬ в виде кристаллизующегося бесцветного масла (0.178 г, 82%). Rf 0.4 (Б). Спектр ЯМР 1Н: 0.68 (с, 3 Н, С (13)Ме), 0.85 (д, 3 Н, J = 6.5, С (25)Ме), 0.86 (д, 3 Н, J = 6.5, С (25)Ме), 0.91 (д, 3 Н, J = 6.5, С (20)Ме), 1.02 (с, 3 Н, С (Ю)Ме), 0.91−2.05 (м, 34 Н, протоны Chol, 2 nch2ch2ch2n, NCH^ChhhCHzN), 1.46 (уш. с, 27 Н, СМе3), 2.27−2.37 (м, 2 Н, Н2С (4)), 2.58 (т, 2 Н, J =7.1, SCHzChbCOOChol), 2.70 (т, 2 Н, J =7.1, SCH2CH2CONH), 2.87−3.00 (м, 4 Н,.
2 SCH2), 3.07−3.40 (м, 12 Н, 6 CH^N), 4.55−4.72 (м, 1 Н, Н (3)), 5.33−5.40 (м, 1 Н, Н (6)). Спектр ЯМР 13С: 11.82, 18.67, 19.28, 20.98, 22.54, 22.80, 23.78, 24.24, 25.94, 27.17, 27.64, 27.72, 27.98, 28.19, 28.33, 28.41, 31.79, 31.86, 33.11, 33.82, 34.40, 35.75, 35.97, 36.13, 36.54, 36.91, 38.05, 39.47, 39.66, 42.94, 43.31, 46.66, 46.81, 49.95, 56.06, 56.63, 74.46, 79.92, 80.33, 122.74, 139.46, 157.02, 157.51, 170.66, 171.13.
Холест-5-ен-Зр-ил)-19-амино-6-оксо-3,4-дитиа-7−11,16-триазадодеканоат тригидрохлорид (34а): К раствору соединения 33а (0.055 г, 0.053 ммоль) в 3 мл CH2CI2 добавили 4н. HCl в диоксане (1 мл) и перемешивали.
1 ч при 24 °C. Растворители удаляли в вакууме, остаток промывали chci3. Получили соединение 29а в виде аморфных бежевых кристаллов (0.030 г, 67%). Rf 0.85 (Ж). Масс-спектр, m/z (/0™(%)): 735.623 [М — 3HCI + Н]+ (100). Вычислено для C4iH77Cl3N403S2: 734.520 [М — 3HCI]+. Спектр ЯМР 1Н (CDCI3- CD3OD, 1: 5): 0.67 (с,.
3 Н, С (13)Ме), 0.85 (д, 3 Н, J = 6.5, С (25)Ме), 0.86 (д, 3 Н, J = 6.5, С (25)Ме), 0.92 (д, ЗН, J =6.5, С (20)Ме), 1.03 (с, 3 Н, С (Ю)Ме), 0.91−2.05 (м, 34 Н, протоны Chol,.
2 NCH2ChUCH2N, NCH2(ch2)2CH2N), 2.30−2.41 (м, 2 Н, Н2С (4)), 2.91−3.21 (м, 12 Н, 6 ch2n), 3.46 (с, 2 Н, SChbCOOChol), 3.55 (с, 2 Н, sch2conh), 4.36−4.76 (м, 1 Н, Н (3)), 5.28−5.41 (м, 1 Н, Н (6)).
Холест-5-ен-Зр-ил)-21-амино-8-оксо-4,5-дитиа-9,13,18-триазагенэйкозаноат тригидрохлорид (34Ь): Получали как соединение 34а исходя из ЗЗЬ-(0.05 г, 0.073 ммоль). Получили соединение 34Ь в виде аморфных белых кристаллов (0.048 г, 76%). Rf 0.86 (Ж). Масс-спектр, m/z (/от&bdquo-(%)): 763.725 [М — 3HCI + Н]+ (100). Вычислено для C43H8iCI3N403S2: 762.552 [М — 3HCI]+. Спектр ЯМР 1Н (CDCI3- cd3od, 1: 5): 0.68 (с, 3 Н, С (13)Ме), 0.84 (д, 3 Н, J = 6.5, С (25)Ме),.
0.85 (д, 3 H, J = 6.5, C (25)Me), 0.90 (д, 3 H, J = 6.5, C (20)Me), 1.01 (с, 3 H, С (Ю)Ме), 0.90−2.06 (м, 34 H, протоны Chol, 2 nch2ch2ch2n, NCH2(ch2)2CH2N), 2.27−2.37 (м, 2 H, H2C (4)), 2.59 (т, 2 H, J =7.1, SCHzChbCOOChol), 2.71 (т, 2 H, J =7.1, SCH2ch2conh), 2.88−3.21 (m, 16 H, 2 SCH2, 6 ch2n), 4.55−4.72 (m, 1 H, H (3)), 5.335.40 (m, 1 H, H (6)).
Л/14,М19,Л/22-Три-(шрет-бутилоксикарбонил)-Л/1-(холест-5-ен-Зр-илоксикарбонил)-1,22-диамино-8-оксо-3,4-дитиа-7,10,14,19-тетраазадокозан (35): К охлажденному до 0 °C раствору соединения 8а (100 мг, 0.167 ммоль) в ДМФА (5 мл) последовательно добавили TBTU (0.134 мг, 419 ммоль), раствор соединения 23 (0.302 мг, 0.502 ммоль), DIEA (0.146 мл, 0.837 ммоль) в ДМФА (2.5 мл). Через 2 ч к реакционной массе добавляли 20 мл CH2CI2, промывали 3% водным раствором HCl (2×15 мл), сушили над Na2S04, упаривали. После хроматографии на силикагеле CHCI3-MeOH, (80:1) получили соединение 35 в виде кристаллизующегося масла (0.176 г, 92%). Rf0.57©. Масс-спектр, m/z (/отн (%)): 1107.867 [M — Cl]+ (100). Вычислено для C59H107CIN6O9S2: 1107.754 [M-Cl]+. Спектр ЯМР 1Н: 0.64 (с, 3 Н, С (13)Ме), 0.83 (д, 3 H, J = 6.6, С (25)Ме), 0.84 (д, 3 H, J = 6.6, С (25)Ме), 0.88 (д, 3 H, J = 6.5, С (20)Ме), 0.97 (с, 3 Н, С (Ю)Ме), 0.85−1.70 (м, 36 Н, протоны Chol, NCH2(ch2)2ch2N, nch2ch2ch2nh2ch2co), 1.40 (с, 9 H), 1.41 (с, 9 H) и 1.42 (с, 9 Н, ЗС (СНз)з), 1.70−2.07 (м, 7 Н, протоны Chol, b0cnhch2ch2ch2n), 2.20−2.39 (м, 2 Н, Н2С (4)), 2.55 (т, 2 H, J =6.5, ch2nh2ch2co), 2.76−2.84 (м, 4 Н, 2 ch2s), 3.01−3.32 (м, ЮН, 2 CH2N (Boc)CH2, NH (Boc)CU). 3.21 (с, 2 H, ch2nh2ch2co), 3.44 (квартет, J = 6.2, 2 H, ChbNHCOOChol), 3.57 (квартет, J = 6.3, 2 H, ch2oconhch2), 4.30−4.58 (м, 1 H, H (3)), 5.25−5.50 (m, 1 H, H (6)). Спектр ЯМР 13C: 11.93, 18.80, 19.40, 21.12, 22.63, 22.88, 23.91, 24.36, 25.98, 28.06, 28.25, 28.29, 28.52, 28.54, 28.56, 31.97, 31.98, 35.85, 36.27, 36.64, 37.08, 37.82, 37.94, 38.51, 38.64, 39.59, 39.83, 44.11, 46.73, 47.07, 50.12, 56.24, 56.78, 74.57, 79.07, 79.53, 79.64, 122.56, 139.87, 156.17, 156.18, 156.19.
1,22-Диамино-Л/1-(холест-5-ен-Зр-илоксикарбонил)-8-оксо-3,4-дитиа-7,10,14,19-тетраазадокозан (36): К раствору соединения 35 (0.200 г, 0.146 ммоль) в 4 мл THF добавили 4 н HCl в диоксане (3 мл) и перемешивали 3 ч при 24 °C. Растворители удаляли в вакууме, остаток промывали МеОН. Получили соединение 36 в виде белых кристаллов (0.155 г, 81%). Rf 0.35 (Ж). Масс-спектр, m/z (/0Тн (%)): 807.654 [M — 4HCI + Н]+ (100). Вычислено для C44H86CI4N603S2: 806.589.
М — 4НС1]+. Спектр ЯМР 1Н (D20): 0.65 (с, 3 Н, С (13)Ме), 0.84 (д, 3 Н, J =6.6, С (25)Ме), 0.85 (д, 3 Н, J = 6.6, С (25)Ме), 0.87 (д, 3 Н, J = 6.5, С (20)Ме), 0.96 (с, 3 Н, С (Ю)Ме), 0.85−1.70 (м, 38 Н, протоны Chol, NCH2(ch2)2CH2N, NCH2ch2ch2NH2CH2CO), 1.70−2.07 (м, 5 Н, протоны Chol), 2.21−2.40 (м, 2 Н, Н2С (4)), 2.54 (т, 2 Н, J = 6.5, CH2NH2CH2CO), 2.77−2.84 (м, 4 Н, 2 CH2S), 2.94−3.25 (м, 14 Н, 7ch2n), 3.45 (квартет, J = 6.2, 2 Н, CHzNHCOOChol), 3.56 (квартет, J = 6.3, 2 Н, СН2ОСОЫНСШ. 4.31−4.59 (м, 1 Н, Н (3)), 5.24−5.49 (м, 1 Н, Н (6)).
Получение композиции катионный амфифил-DOPE.
Раствор поликатионного амфифила (26а-с, 29а-с, 34а, Ь, 36) и нейтрального фосфолипида DOPE в 50% мольном соотношении в подходящем органическом растворителе упаривали в вакууме до образования липидной пленки. Полученную липидную пленку гидратировали в необходимом количестве (с = 1мМ) автоклавированной деионизированной воды в течение 3−6 часов, а затем озвучивали на ультразвуковой бане до получения однородной смеси.
Доставка в клетки FITC-меченного олигонуклеотида с использованием композиции катионный амфифил-DOPE.
Исследование проникновения FITC-меченного олигонуклеотида в клетки НЕК 293 проводили с помощью проточной цитофлоуметрии. Эффективность доставки оценивали по количеству трансфицированных клеток от общего количества клеток в образце. Клетки высаживали в 24-луночные планшеты (2×105 клеток на лунку) и культивировали в течение суток при 37 °C в атмосфере, содержащей 5% С02. Перед проведением трансфекции для экспериментов в присутствии или в отсутствие сыворотки среду в лунках заменяли на 200 мкл среды DMEM, содержащей 10% FBS, или DMEM, не содержащей сыворотку, соответственно. Одну из композиций (26a-c-DOPE, 29a-c-DOPE, 34a, b-DOPE, 36-DOPE) в среде OptiMEM смешивали с раствором FITC-меченного олигонуклеотида (конечная концентрация олигонуклеотида в лунке 1 мкМ) в этой же среде в соответствии с выбранным соотношением P/N (отношение количество отрицательных зарядов фосфатных групп к количеству положительных зарядов атомов азота) и инкубировали 20 минут при комнатной температуре. Затем образовавшиеся комплексы добавляли к клеткам и инкубировали в течение 4 ч. По окончании инкубации клетки промывали PBS (300 мкл), добавляли 40 мкл раствора трипсина и инкубировали 1−2 мин. (37°С, 5%С02). По окончании инкубации в лунки добавляли 200 мкл DMEM с 10% сыворотки, клетки суспендировали и переносили.
91 в пробирки. Полученную клеточную суспензию центрифугировали при 1000−1200 об./мин., 4 °C, отбирали среду и клетки промывали 0.5 мл PBS. Затем клетки фиксировали путем суспендирования в 600 мкл 2% раствора формальдегида в PBS. Анализ уровня трансфекции клеток проводили на флуоцитометре FC500 (Beckman-Coulter), определяя число FITC-положительных клеток в популяции и-средний уровень флуоресценции клеток, определяемый при длине волны возбуждения 488 нм. В качестве агентов сравнения использовали коммерческую композицию Lipofectamine®2000.
Трансфекция клеток НЕК 293 плазмидной ДНК с использованием композиции катионный амфифил-DOPE.
Исследование доставки плазмидной ДНК в клетки НЕК 293 проводили с помощью проточной цитофлоуметрии. Эффективность трансфекции оценивали по количеству клеток, в которых происходит экспрессия зеленого флуоресцентного белка (EGFP) от общего количества клеток в популяции. Клетки высаживали в 24-луночные планшеты (1.2×105 клеток на лунку для клеток НЕК 293) и культивировали в течение суток при 37 °C в атмосфере, содержащей 5% СОг. Перед проведением трансфекции-для экспериментов в присутствии или в отсутствие сыворотки среду в лунках заменяли на 200 мкл среды DMEM, содержащей 10% FBS, или DMEM, не содержащей сыворотку, соответственно. Одну из композиций (26a-c-DOPE, 29a-c-DOPE, 34a, b-DOPE, 36-DOPE) в среде OptiMEM смешивали с раствором ДНК плазмиды pEGFP-C2 (0.5 мкг в лунке) в этой же среде в определенном соотношении P/N, полученную смесь добавляли к клеткам и инкубировали в течение 24 ч. Через 4 часа среду в лунках со средой без сыворотки заменяли среду на DMEM' с 10% сывороткой. По окончании инкубации клетки обрабатывали и анализировали, как описано в доставки в клетки FITC-меченного олигонуклеотида с использованием композиции катионный амфифил-DOPE.
Список литературы
- Mintzer М.А. and Simanek Е.Е. / Nonviral Vectors for Gene Delivery // Chem. Rev., 2009, 109 (2), P. 259−302
- Templeton N. S. / Gene and cell therapy: therapeutic mechanisms and strategies. 3rd ed. / CRC, 2008
- Vonarbourg A, Passirani C, Saulnier P, Benoit J.P. / Parameters influencing the stealthiness of colloidal drug delivery systems // Biomaterials, 2006, 27(24), P. 435 673.
- Rejman J., Bragonzi A., Conese M. Role of clathrin- and caveolae-mediated endocytosis in gene transfer mediated by lipo- and. polyplexes // Mol Ther, 2005, V. 12(3), P. 468−74.
- Mellman I. / Endocytosis and moleculansorting // Annu Rev Cell Dev Biol- 1996, V. 12, P. 575−625.
- Francis C.L., Ryan.T.A., Jones, B.D., Smith. S.J., Falkow S. / Ruffles induced by Salmonella and other stimuli direct macropinocytosis of bacteria.// Nature, 1993, V. 364(6438), P: 639−642.
- Harbottle R.P., Cooper R.G., Hart S.L., Ladhoff A., McKay Т., Knight A.M. et al. / An RGD-oligolysine peptide: a prototype construct for integrin-mediated gene delivery // Hum Gene Ther, 1998, V. 9(7), P. 10377.
- Wiethoff С, M., Middaugh С R. / Barriers to Nonviral Gene Delivery1 // J. Pharmaceut. Sci. 2003, V.92, 2, P. 203−217
- Remy J.S., Abdallah В., Zanta M. A., Boussif O., Behr. J.P. / Demeneix B. Gene transfer with lipospermines and polyethylenimines // Adv. Drug Del. Rev. 1998- V. 30, P. 85−95
- Luo D., Saltzman Wi M. / Synthetic DNA delivery systems // Nat. Biotechnol. 2000, V. 18, P. 33−37.
- Feigner P. L, Gadek T.R., Holm.M., Roman R., Chan H.W., Wenz M., Northrop J.P., Ringold G.M., Danielsen M: / Lipofection: A highly efficient, lipid-mediated'DNA-transfection procedure// Proc. Natl.-Acad. Sci., 1987, V. 84, P. 7413−7417
- Akinc A., Zumbuehl A., Goldberg M., LeshchinerE.S., Busini V., Zimmermann T.S. et al. / A combinatorial library of lipid-like materials for delivery of RNAi therapeutics // NATURE BIOTECHNOLOGY, 2008, V. 26 (5), P. 561−569.
- Zimmermann T.S. et al: / RNAi-mediated gene silencing in non-human primates // Nature, 2006, V. 441, P. 111−114.
- Bloomfield, V.A. I DNA condensation II Curr. Opin. Struct. Biol., 1996, V. 6, P. 334−341.
- Allison S.A., Herr J.C. and Schurr J.M. / Structure of viral cp 29 DNA condensed by simple triamines: a light-scattering and electronmicroscopy study // Biopolymers, 1981, V. 20, P. 469−488
- Stewart K.D. and Gray T.A. / Survey of the DNA Binding Properties of Natural and Synthetic Polyamino Compounds // J. Phys. Org. Chem., 1992, V. 5, P. 461−466
- Geall A.J., Taylor R.J., Earll M.E., Eaton M.A.W. and Blagbrough I.S. / Synthesis of cholesterol-polyamine carbamates: pKa studies and condensation of calf thymus DNA// Chem. Commun., 1998, P. 1403−1404
- Wilson R.W. and Bloomfield V.A. / Counterion-induced condensation of deoxyribonucleic acid: a light-scattering study // Biochemistry, 1979, V. 18, P. 21 922 196.
- Zana R. / Alkanediyl-alpha, omega-bis(dimethylalkylammonium bromide) surfactants: II. Krafft temperature and melting temperature // J. Colloid Interface Sci., 2002, V. 252 (1), P. 259−61
- Kim T.S., Kida T., Nakatsuji Y., Ikeda I. / Preparation and Properties of Multiple Ammonium Salts Quaternized by Epichlorohydrin // Langmuir, 1996, V. 12 (26), P. 6304−6308.
- In M., Bee V., Aguerre-Chariol O., Zana R. / Quaternary Ammonium Bromide Surfactant Oligomers in Aqueous Solution: Self-Association and Microstructure // Langmuir, 2000, V. 16 (1), P. 141−148.
- Zana R.- Talmon Y. / Dependence of aggregate morphology on structure of dimeric surfactants// Nature, 1993, V. 362, P. 228−230.
- Moss R.A.- Li J.-M. / Bilayer-bridging bolaamphiphilic lipids // J. Am. Chem. Soc., 1992, V. 114 (23), P. 9227−9229.
- McGregor C., Perrin C., Monck M., Camilleri P., Kirby A.J. / Rational Approaches to the Design of Cationic Gemini Surfactants for Gene Delivery // J. Am. Chem. Soc., 2001, V. 123 (26), P. 6215−6220.
- Gerweck L.E., Seetharaman K. / Cellular pH gradient in tumor versus normal tissue: potential exploitation for the treatment of cancer // Cancer Res. 1996, V. 56 (6), P. 1194−1198.
- Hunt C.A., MacGregor R.D., Siegal R.A. / Engineering targeted In vivo drug delivery I. The physiological & physicochemical principles governing opportunities & limitations // Pharm.Res. 1986, V. 3, P. 333−344.
- Torchillin V.P. / Recent advances with liposomes as pharmaceutical carriers // Nat.Rev., Drug. Discov., 2005, V. 4, P. 145−160.
- Shim W.S., Kim J.H., Kim K" Kim Y.S., Park R.W., Kim I.S., Kwon I.C., Lee D.S. / pH-and temperature-sensitive, injectable, biodegradable block copolymer hydrogels as carriers for paclitaxel // Int.J.Pharm., 2007, V. 331 (1), P. 11−18.
- Kim Y.H., Bae Y.H., Kim S.W. / pH/temperature-sensitive polymers for macromolecular drug loading and release // J.Control.Release, 1994, V. 28 (1−3), P. 143−152.
- Benns J.M., Choi J.S., Mahato R.I., Park J.S., Kim S.W. / pH-sensitive cationic polymer gene delivery vehicle: N-Ac-poly (L-histidine)-graft-poly (L-lysine) comb shaped polymer// Bioconjug.Chem., 2000, V. 11 (5), P. 637−645.
- Dufresne M.H., Garrec D.L., Sant V., Leroux J.C., Ranger M. / Preparation and characterization of water-soluble pH-sensitive nanocarriers for drug delivery // Int.J.Pharm., 2004, V. 277 (1−2), P. 81−90.
- Liua S.Q., Wiradharma N., Gao S.J., Tong Y.W., Yang Y.Y. / Biofunctional micelles self-assembled from a folate-conjugated block copolymer for targeted intracellular delivery of anticancer drugs // Biomaterials, 2007, V. 28, P. 1423−1433.
- Lee E.S., Na K., Bae Y.H. / Polymeric micelle for tumor pH and folate-mediated targeting // J.Control.Release, 2003, V. 91 (1−2), P. 103−113.
- Fattal E., Couvreur P., Dubernet C. / «Smart» delivery of antisense oligonucleotides by anionic pH-sensitive liposomes // Adv.DrugDeliv.Rev., 2004, V. 56 (7), P. 931−946.
- Boomer J.A., Thompson D.H., Sullivan S.M. / Formation of plasmid-based transfection complexes with an acid-labile cationic lipid: characterization of in vitro and in vivo // Gene Transfer. Pharm Res, 2002, V. 19 (9), P. 1292−1301
- Zhu M.Z., Wu Q.H., Zhang G" Ran T., Liu D., Guo Q.X. / Synthesis and evaluation of cationic lipids bearing cholesteryl groups for gene delivery in vitro // Bull.Chem.Soc.Jpn, 2002, V. 75 (10), P. 2207−2213.
- Zhu J., Munn R.J., Nantz M.H. / Self-cleaving ortho ester lipids: a new class of pH-vulnerable amphiphiles//J.Am.Chem.Soc, 2000, V. 122 (11), P. 2645−2646.
- Guo X., MacKay J.A., Szoka F.C. / Mechanism of pH-triggered collapse of phosphatidylethanolamine liposomes stabilized by an orthoester polyethyleneglycol lipid // Biophys. J., 2003, 84 (3), P. 1784- 1795.
- Li S., Dory Y.L., Deslongchamps P. / Hydrolysis of cyclic orthoesters: experimental observations and theoretical rationalization // Tetrahedron, 1996, V. 52 (47), P. 14 841−14 854.
- Masson C., Garinot M., Mignet N., Wetzer B., Mailhe P., Scherman D" Bessodes M. / pH-sensitive PEG lipids containing orthoester linkers: new potential tools for nonviral gene delivery II Journal of Controlled Release, 2004, V. 99, P. 423−434
- Choi J.S., MacKay J.A., Szoka FC.Jr. / Low-pH-sensitive PEG-stabilized plasmid-lipid nanoparticles: preparation and characterization // Bioconjug Chem., 2003, V. 14 (2), P. 420−429.
- Wheeler O. H., Rosado-Lojo O. / Kinetics of formation and hydrolysis of steroid Girard-T hydrazones // Tetrahedron, 1962, V. 18, P. 477−482.
- Simoes S., Moreira- J.N., Fonseca C., Duzgunes N., Lima M.C. / On the formulation of pH-sensitive liposomes with long circulation times // Adv. Drug Deliv.Rev., 2004, V. 56, P. 947−965.
- Sergeeva A., Kolonin M.G., Molldrem J.J., Pasqualini R., Arap W. / Display technologies: application for the discovery of drug and gene delivery agents // Adv. Drug Deliv.Rev., 2006, V. 58 (15), P. 1622−1654.
- Couffin-Hoarau A.C., Leroux J.C. / Report on the use of poly (organophosphazenes) for the design of stimuli-responsive vesicles // Biomacromolecules, 2004, V. 5, P. 2082−2087.
- De Wolf H.K., Luten J., Snel C.J., Oussoren C., Hennink W.E., Storm G. / In vivo tumor transfection mediated by polyplexes based on biodegradable poly (DMAEA)-phosphazene//Journal of controlled release, 2005, V. 109 (1−3), P. 275−287
- Papanicolaou I., Briggs S., Alpar H.O. / Increased resistance of DNA lipoplexes to protein binding in vitro by surface-modification with a multivalent hydrophilic polymer //J.Drug Target, 2004, V. 12 (8), P. 541−547.
- Roux E., Passirani C., Scheffold S., Benoit J.P., Leroux J.C. / Serum-stable and long-circulating, PEGylated, pH-sensitive liposomes // J.Control.Release, 2004, V. 94, P. 447—451.
- Shen H., Eisenberg A. / Control of architecture in block-copolymer vesicles II Angew. Chem., 2000, V. 39 (18), P. 3310−3312.
- Liu S., Armes S.P. / Synthesis and aqueous solution behavior of a pH-responsive schizophrenic diblock copolymer// Langmuir, 2003, V. 19, P. 4432—4438.
- Taillefer J., Jones M.C., Brasseur N., vanLier J.E., Leroux J.C. / Preparation and characterization of pH-responsive polymeric micelles for the delivery of photosensitizing anticancer drugs // J.Pharm.Sci., 2000, V. 89 (1), P. 52−62.
- LeGarrec D., Taillefer J., VanLier J.E., Lenaerts V., Leroux J.C. / Optimizing pH-responsive polymeric micelles for drug delivery in a cancer photodynamic therapy model // J.DrugTarget., 2002, V. 10 (5), P. 429−437.
- Shima M.S., Kwon Y.J., Controlled cytoplasmic and nuclear localization of plasmid DNA and siRNA by differentially tailored polyethylenimine, Journal of Controlled Release, 133 (3), (2009), 206−213.
- Shima M.S., Kwon Y.J. / Acid-transforming polypeptide micelles for targeted nonviral gene delivery // Biomaterials, 2010, V. 31 (12), P. 3404−3413.
- Ko I.K., Ziady A., Lu S., Kwon Y.J. / Acid-degradable cationic methacrylamide polymerized in the presence of plasmid DNA as tunable non-viral gene carrier // Biomaterials, 2008, V. 29, P. 3872−3881.
- Townsend D.M., Tew K.D., Tapiero H. / The importance of glutathione in human disease // Biomed Pharmacother, 2003, V. 57(3−4), P. 145−55.
- Go Y-M., Jones D.P. / Redox compartmentalization in eukaryotic cells. // Biochim. Biophys Acta, 2008, V. 1780 (11), P. 1273−1290.
- Wu G., Fang Y-Z., Yang S., Lupton J.R., Turner N.D. / Glutathione metabolism and its implications for health // J. Nutr., 2004, V. 134(3), P. 489−92.
- Hassan S.M., Rechnitz G.A. / Determination of glutathione and glutathione reductase with a silver sulfide membrane electrode // Anal.Chem., 1982, V. 54, P. 1972−1976.
- Saito G, Swanson J.A., Lee K.D. / Drug delivery strategy utilizing conjugation via reversible disulfide linkages: role and site of cellular reducing activities // Adv. Drug. Deliv. Rev., 2003 V. 55(2), P. 199−215.
- Kuppusamy P, Afeworki M., Shankar R.A., Coffin D., Krishna M.C., Hahn S.M., et al. / In vivo electron paramagnetic resonance imaging of tumor heterogeneity and oxygenation in a murine model // Cancer Res., 1998, V. 58(7), P. 1562−1568.
- Kuppusamy P., Li H., Ilangovan G., Cardounel A.J., Zweier J.L., Yamada K., et al. / Noninvasive imaging of tumor redox status and its modification by tissue glutathione levels. II Cancer Res., 2002, V. 62(1), P. 307−312.
- Gosselin M.A., Guo W.J., Lee R.J. / Efficient gene transfer using reversibly cross-linked low molecular weight polyethylenimine II Bioconjugate Chem., 2001, V. 12(6), P. 989−994.
- Wang Y., Chen P., Shen J. / The development and characterization of a glutathione-sensitive cross-linked polyethylenimine gene vector// Biomaterials, 2006, V. 27(30), P. 5292−5298.
- Peng Q., Zhong Z.L., Zhuo R.X. / Disulfide cross-linked polyethylenimines (PEI) prepared via thiolation of low molecular weight PEI as highly efficient gene vectors // Bioconjugate Chem., 2008, V. 19(2), P. 499−506.
- Sun Y-X., Zeng X., Meng Q-F., Zhang X-Z., Cheng S-X., Zhuo R-X. / The influence of RGD addition on the gene transfer characteristics of disulfidecontaining polyethyleneimine/DNA complexes // Biomaterials, 2008, V. 29(32), P. 4356−4365.
- Choi S., Lee K-D. / Enhanced gene delivery using disulfide-crosslinked low molecular weight polyethylenimine with listeriolysin o-polyethylenimine disulfide conjugate II J. Control Release, 2008, V. 131(1), P. 70−76.
- Neu M., Germershaus O., Behe M., Kissel T. / Bioreversibly crosslinked polyplexes of PEI and high molecular weight PEG show extended circulation times in vivo // J. Control Release, 2007, V. 124 (1−2), P. 69−80.
- Anderson D.G., Lynn D.M., Langer R. / Semi-automated synthesis and screening of a large library of degradable cationic polymers for gene delivery // Angew. Chem., 2003, V. 42 (27), P. 3153−3158.
- Christensen L.V., Chang C.W., Yockman J.W., Conners R., Jackson H., Zhong Z.Y., et al. / Reducible poly (amido ethylenediamine) for hypoxia-inducible VEGF delivery // J. Control Release, 2007, V. 118 (2), P. 254−261.
- Jeong J.H., Christensen L.V., Yockman J.W., Zhong Z.Y., Engbersen J.F.J., Kim W.J., et al. / Reducible poly (amido ethylenimine) directed to enhance RNA interference II Biomaterials, 2007, V. 28 (10), P. 1912−1917.
- Wang X-L., Nguyen T., Gillespie D., Jensen R., Lu Z-R. / A multifunctional and reversibly polymerizable carrier for efficient siRNA delivery // Biomaterials, 2008, V. 29 (1), P. 15−22.
- McKenzie D.L., Smiley E., Kwok K.Y., Rice K.G. / Low molecular weight disulfide cross-linking peptides as nonviral gene delivery carriers // Bioconjugate Chem., 2000, V. 11 (6), P. 901−909.
- Wong S.Y., Pelet J.M., Putnam D. / Polymer systems for gene delivery-past, present, and future // Prog. Polym. Sci., 2007, V. 32 (8−9), P. 799−837.
- Manickam D.S., Hirata A., Putt D.A., Lash L.H., Hirata F., Oupick D. / Overexpression of Bcl-2 as a proxy redox stimulus to enhance activity of non-viral redox-responsive delivery vectors // Biomaterials, 2008, V. 29 (17), P. 2680−2688.
- Stevenson M., Ramos-Perez V., Singh S., Soliman M., Preece J.A., Briggs S.S. et al. / Delivery of siRNA mediated by histidine-containing reducible polycations // J. Control Release, 2008, V. 130 (1), P. 46−56.
- Mok H.J., Park T.G. / Self-crosslinked and reducible fusogenic peptides for intracellular delivery of siRNA // Biopolymers, 2008, V. 89 (10), P. 881−888.
- Lo S.L., Wang S. / An endosomolytic Tat peptide produced by incorporation of histidine and cysteine residues as a nonviral vector for DNA transfection // Biomaterials, 2008, V. 29 (15), P. 2408−2414.
- Manickam D.S., Oupicky D. / Multiblock reducible copolypeptides containing histidine-rich and nuclear localization sequences for gene delivery // Bioconjugate Chem., 2006, V. 17 (6), P. 1395−1403.
- Oishi M., Hayama T., Akiyama Y., Takae S., Harada A., Yarnasaki Y., et al. / Supramolecular assemblies for the cytoplasmic delivery of antisense oligodeoxynucleotide: polyion complex (PIC) micelles based on poly (ethylene glycol)
- SS-oligodeoxynucleotide conjugate // Biomacromolecules, 2005, V. 6 (5), P. 24 492 454.
- Takae S., Miyata K" Oba M., Ishii T., Nishiyama N., Itaka K" et al. / PEG-detachable polyplex micelles based on disulfide-linked block catiomers as bioresponsive nonviral gene vectors // J.Am. Chem. Soc., 2008, V. 130 (18), P. 60 016 009.
- Ghosh Y.K., Visweswariah S.S., Bhattacharya S. / Nature of linkage between the cationic headgroup and cholesteryl skelton controls gene transfection efficiency // FEBS Lett., 2000, V. 473, P. 341−344.
- Ghosh Y.K., Visweswariah S.S., Bhattacharya S. / Advantage of the ether linkage between the positive charge and the cholesteryl skeleton in cholesterol-based amphiphiles as vectors for gene delivery // Bioconjugate Chem., 2002, V. 13, P. 378 384.
- Wether B., Byk G., Frederic M., Airiau M., Blanche F., Piterd B. et al. / Reductible cationic lipids for gene transfer// Biochem J., 2001, V. 356 (3), P. 747−756.
- Zuber G., Zammut-ltaliano L., Dauty E., Behr J-P. / Targeted gene delivery to cancer cells: directed assembly of nanometric DNA particles coated with folic acid // Agnew. Chem., 2003, V. 42,(23), P. 2666−2669.
- Balakirev M., Schoehn G., Chroboczek J. / Lipoic acid-derived amphiphiles for redox-controlled DNA delivery// Chem. Biol., 2000, V. 7(10), P. 813−819.
- Chittimalla C., Zammut-ltaliano L., Zuber G., Behr J.P. / Monomolecular DNA nanoparticles for intravenous delivery of genes // J. Am. Chem. Soc., 2005, V. 127 (32), P. 11 436−11 441.
- Maeda Т., Fujimoto K. / A reduction-triggered delivery by a liposomal carrier possessing membrane-permeable ligands and a detachable coating // Colloids Surfaces B: Biointerfaces, 2006, V. 49 (1), P. 15−21.
- Patil S.D., Rhodes D.G. and Burgess D.J. I DNA-based Therapeutics and DNA Delivery Systems: A Comprehensive Review // AAPS J., 2005, V. 7 (1), P. 61−77.
- Huang L, Hung M.-C., Wagner E. / Non-viral Vectors for Gene Therapy. Part 1 II Elsevier, Amsterdam, 2005.
- Martin B., Sainlos M., Aissaoui A., Oudrhiri N., Hauchecorne M., Vigneron J.-P., Lehn J.-M., and Lehn P. / The design of cationic lipids for gene delivery // Curr. Pharm. Design, 2005, V. 11 (3), P. 375−394.
- Kostarelos K. and Miller A.D. / Synthetic, self-assembly ABCD nanoparticies- a structural paradigm for viable synthetic non-viral vectors // Chem. Soc. Rev., 2005, V. 34, P. 970.
- Ghosh Y.K., Visweswariah S.S. and Bhattacharya S. / Advantage of the Ether Linkage between the Positive Charge and the Cholesteryl Skeleton in Cholesterol-Based Amphiphiles as Vectors for Gene Delivery // Bioconjugate Chem. 2002, V. 13, P. 378−384.
- Hasegawa- S., Hirashima N. and Nakanishi Ml I Comparative Study of Transfection Efficiency of Cationic Cholesterols Mediated by Liposomes-Based Gene Delivery // Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters, 2002, V. 12, P. 1299−1302
- Маслов M.A., Сычева1 E.B., Морозова Н. Г., Серебренникова Г. А. / Катионныеамфифилы липидной и нелипидной природы в генной терапии // Изв. АН, Сер. хим., 2000, № 3, С. 385−400 Russ. Chem. Bull., 2000, V. 49, P. 385 (Engl.1. Transl.).
- Miller A.D. I Cationic Liposomes for Gene Therapy // Angew. Chem., Int. Ed., 1998, V. 37, P. 1768−1785.
- S.J. Ryhanen, M.J. Saily, T. Paukku, S. Borocci, G. Mancini, J.M. Holopainen and P.K.J. Kinnunen / Surface Charge Density Determines the Efficiency of Cationic Gemini Surfactant Based Lipofection // Biophysical Journal, 2003, V. 84, P. 578−587
- Sternberg B., Sorgi F.L. and Huang L. / New structures in complex formation between DNA and cationic liposomes visualized by freeze-fracture electron microscopy // FEBS Lett., 1994, V. 356 (2−3), P. 361−366
- Kawaura C., Nogucki A., Furuno T. and Nakonishi M. / Atomic force microscopy for studying gene transfection mediated by cationic liposomes with a cationic cholesterol derivative // FEBS Lett., 1998, V. 421 (1), P. 69.
- U’Ren L., Kedl R., Dow S. / Vaccination with liposome-DNA complexes elicits enhanced antitumor immunity // Cancer Gene Ther., 2006, V. 13, P. 1033−1044.
- Gregoriadis G., Bacon A., Caparros-Wanderley W., McCormack B. / Plasmid DNA Vaccines: Entrapment into Liposomes by Dehydration-Rehydration // Methods in Enzymology, 2003, V. 367, P. 70−80.
- Tabor C.W. and Tabor H. / Polyamines // Annu. Rev: Biochem., 1984, V. 53, P. 749−790.
- Ouameur A.A. and Tajmir-Riahi H.-A. / Structural Analysis of DNA Interactions with Biogenic Polyamines and Cobalt (lll)hexamine Studied by Fourier Transform Infrared and Capillary Electrophoresis // J. Biol. Chem., 2004, V. 279, P. 42 041−42 054.
- Eds J.-Y. Wang and R. A. Casero Jr! / Polyamine Cell Signaling: Physiology, Pharmacology and Cancer Research /, Humana Press Inc., 2006, P.91.
- Geall A.J., Taylor R.J., Earll M.E., Eaton M.A.W. and Blagbrough I.S. / Synthesis of cholesteryl polyamine carbamates: pK (a) studies and condensation of calf thymus DNA // Bioconjugate Chem., 2000, V. 11 (3), P. 314−326.
- Cooper R.G., Etheridge C.J., Stewart L., Marshall J., Rudginsky S., Cheng S.H. and Miller A.D., Chem. Eur. J., 1998, V. 4, P. 137.
- Lv H., Zhang S., Wang B., Cui S. and Yan J. / Toxicity of cationic lipids and cationic polymers in gene delivery//J. Control. Release, 2006, V. 114 (1), P. 100−109.
- Guo X., Szoka F.C. / Chemical’approaches to triggerable lipid, vesicles for drug and gene delivery II Acc. Chem. Res., 2003- V. 36 (5), P. 335−341.
- Asokan A., Cho M.J. / Cytosolic delivery of macromolecules. 3. Synthesis and characterization of acid-sensitive bis-detergents // Bioconjugate Chem., 2004, V. 15 (6), P. 1166−1173.
- Hellberg P.-E., Bergstrom K., Juberg M. / Nonionic cleavable ortho ester surfactants // J. Surfact. Deterg., 2000, V. 3, P. 369−379.
- Huang Z., Guo X., Li W., MacKay J.A., Szoka F.C. / Acid-triggered transformation of diortho ester phosphocholine liposome // J. Am. Chem. Soc., 2006, V. 128 (1), P. 60−61.
- Ronsin G., Perrin C., Guedat P., Kremer A., Camilleri P. and Kirby A.J. / Novelspermine-based cationic gemini surfactants for gene delivery // Chem. Commun., 2001, P. 2234.
- Miller K.A., Kumar E.V., Wood S.J., Cromer J.R., Datta A. and David S.A. / Lipopolysaccharide Sequestrants: Structural Correlates of Activity and Toxicity in Novel Acylhomospermines // J. Med. Chem., 2005, V. 48 (7), P. 2589−2599.
- Geall A.J. and Blagbrough I.S. / Homologation of Polyamines in the Rapid Synthesis of Lipospermine Conjugates and Related Lipoplexes // Tetrahedron, 2000, V. 56 (16), P. 2449−2460.
- Fukuyama Т., Jow C.-K., and Cheung M. / 2- and 4-Nitrobenzenesulfonamides: Exceptionally versatile means for preparation of secondary amines and protection of amines // Tetrahedron Lett., 1995, V. 36 (36), P. 6373−6374.
- Fukuyama Т., Cheung M., Jow C.-K., Hidai Y., and Kan T. / 2,4-Dinitrobenzenesulfonamides: A simple and practical method for the preparation of a variety of secondary amines and diamines // Tetrahedron Lett., 1997, V. 38 (33), P. 5831−5834.
- Maslov M.A., Morozova N.G., Serebrennikova G.A. / A Convenient Method for Synthesis of Cationic Glycerolipids via Methylthiomethyl Ethers // Mendeleev Commun. 2000. V. 10. P. 65−66
- Маслов M.A., Морозова Н. Г., Серебренникова Г. А. / Удобный метод получения катионных глицеролипидов с потенциальной биологической активностью II Изв. АН, Сер. хим., 2002, № 3, С. 1778−1783 Russ. Chem. Bull., 2002, V. 51, P. 1931−11 936 (Engl. Transl.).
- Sokolik V.N., Sokolova T.V., Maslov M.A., Morozova N.G., Serebrennikova G.A. / Synthesis of cationic cholesterol-containing amphiphiles with an acid-labile linker // Mendeleev Commun., 2007, V. 17, P. 281−283.
- Маслов M.A., Морозова Н. Г., Сенан И. М., Серебренникова Г. А. / Синтез катионных липидных агентов трансфекции с О, О- или N.O-ацетальными связями / Биоорган, химия, 2009, Т. 35, № 5, С. 696−700
- Fuxing Tang and Jeffrey A. Hughes / Use of Dithiodiglycolic Acid as a Tether for Cationic Lipids Decreases the Cytotoxicity and Increases Transgene Expression of
- Plasmid DNA in Vitro // Bioconjugate Chem., 1999, V. 10, P. 791−796
- Greene T.W., Wuts P.G.M. / Protective Groups in Organic Synthesis // Wiley-Interscience, 4 edition, 2006
- Донсон P., Эллиот Д., Эллиот У., Джонс К. /Справочник биохимика // Мир, Москва, 1991 Dowson R.M.C., Elliot D.C., Elliot W.H. and Jones K.H. / Date for Biochemical Research // Clarendon Press, Oxford, 1986.
- Kritchevsky D., Kirk M.R. / Radioactive eggs. III. Degradation of yolk glycerol // Arch. Biochem. Biophys. 1952, V. 39 (2), P. 305−309.