Функциональная и метаболическая активность лейкоцитов у больных дерматофитиями

Актуальность проблемы. Болезни, вызываемые микроскопическими грибами, по-прежнему остаются актуальной проблемой современной дерматологии. По данным ВОЗ, грибковыми заболеваниями кожи — микозами страдает каждый пятый житель планеты. По другим данным этими инфекциями поражено от 10 до 40% населения земного шара. Несмотря на усилия медиков, заболеваемость остается очень высокой, что дает основания говорить о массовом распространении грибковых заболеваний среди населения, в том числе и в нашей стране. Прогрессирующее увеличение числа больных микозами представляет серьезную медико-социальную проблему (А.А. Ку-банова, Н. С. Потекаев, Н. Н. Потекаев, 2001; Ю. К. Скрипкин, 1996).

Дерматофитии — группа инфекций, вызываемых грибами-дермато-фитами из родов Trichophyton, Microsporum и Epidermophyton. При этом поражаются почти исключительно кожа и ее придатки — волосы и ногти. Микроспория и трихофития — распространенные высококонтагиозные грибковые заболевания. В нашей стране заболеваемость этими микозами составляет в среднем 44,0 на 100 000 населения. Микроспория волосистой части головы (ВЧГ) отмечается почти исключительно у детей в возрасте от 1 года до 14 лет, взрослые болеют редко (Корсунская И.М., 2001; Родионов А. Н., 1998). Из 40 с лишним известных видов дерматофитов в Российской федерации наиболее часто встречаются три: Trichophyton rubrum, Trichophyton mentagrophytes var. interdigitale и Microsporum canis. Последним возбудителем обусловлены почти ' 95% поражений волосистой части головы (С.Т.Павлов, В. И. Самцов, 1985; Ю.Т.ДьяковЮ.В. Сергеев, 2003; А. Ю. Сергеев, В. Ю. Сергеев, 2004).

Известно, что у большинства больных микозами значительно ослаблены неспецифические факторы естественной защиты: барьерная функция эпителия, выработка медиаторов воспаления — цитокинов, функциональная активность клеток крови, системы комплемента, лизоцима, пропердина, ин-терферонообразования и др. Наряду с дефицитом факторов естественной защиты отмечается также выраженная недостаточность клеточных и гуморальных факторов иммунитета, особенно при глубоких, дессеминированных формах микоза. Дерматофиты продуктами своей жизнедеятельности, в частности, антигенами, довольно быстро вызывают перестройку реактивности организма, сенсибилизируют его, а в отдельных случаях способствуют формированию вторичного иммунодефицита (А.Ю.Сергеев, Ю. В. Сергеев, 2004).

Между тем, остается множество нерешенных вопросов, касающихся значения факторов неспецифической резистентности организма при грибковых заболеваниях. В этой связи комплексное изучение интралейкоцитарных биологически активных компонентов в динамике у больных дерматофития-ми представляется актуальным и интересным невозможно, прольет свет на некоторые механизмы иммуногенеза и патогенеза трихофитии и микроспории. Неоднозначность и ограниченность сведений о состоянии внутриклеточной микробицидной системы лейкоцитов при микозах указывает на ма-лоизученность проблемы и создает предпосылки для более детальных иссле-. дований в данной области.

Цитохимическое изучение активности и количества интралейкоцитарных биологически активных компонентов является воспроизводимым, апробированным и информативным методом оценки эффекторных факторов иммунитета. Микробицидная функция полиморфноядерных гранулоцитов обеспечивается наличием и активностью в их цитоплазме лизосомальных биологически активных веществ (лизоцим, пероксидаза, катионные белки, фосфатазы, гликоген, липиды и т. д.). Лейкоциты являются первым клеточным звеном, ответственным за нейтрализацию чужеродных антигенов (бактерий, вирусов, грибов). Поэтому, весьма актуальным представляется изучение состояния микробицидной системы нейтрофилов при грибковых поражениях кожи как весомого звена неспецифической резистентности организма. (В.Е.Пигаревский, 1978; Ю. К. Скрипкин, И. В. Петрова, 1982; Б. С. Нагоев, 1986; В. И. Покровский с соавт. 1987; А. Н. Маянский, 1989; Klebanoff, Clark, 1978; Babior, 1984; Houde, Gray, 1986; Alam, 1987; Pires с соавт., 1993).

Цель работы. Провести клинико-цитохимическую оценку состояния неспецифической резистентности и эффекторных факторов иммунитета у больных различными формами трихофитии и микроспории путем изучения состояния основных компонентов микробицидной системы и функционального метаболизма лейкоцитов в зависимости от клинической формы, характера поражения, остроты и длительности инфекционного процесса, наличия сопутствующей патологии.

Задачи исследования.

1. Изучить у больных дерматофитиями цитохимическими методами активность интралейкоцитарных ферментов: миелопероксидазы, кислой и щелочной фосфатаз в лейкоцитах периферической крови с целью выяснения их значения в патогенетических механизмах.

2. Исследовать содержание микробицидных компонентов лейкоцитов периферической крови (катионного белка, гликогена и липидов) в динамике для определения их роли в осуществлении фагоцитарной функции.

3. Оценить метаболизм и фагоцитарные функции гранулоцитов периферической крови в динамике у больных дерматофитиями путем проведения НСТ-теста.

4. Исследовать функциональное состояние лейкоцитов в кожных очагах при инфильтративно-нагноительной трихофитии.

5. Установить пределы физиологических колебаний основных биологически активных интралейкоцитарных компонентов путем обследования группы здоровых лиц с применением цитохимических методик.

6. Показать возможную клинико-диагностическую информативность и практическую значимость определения важнейших компонентов микроби-цидной системы лейкоцитов и НСТ-теста при трихофитии и микроспории. .

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Комплексное изучение содержания основных компонентов микро-бицидной системы и НСТ-теста цитохимическими методами у больных дерматофитиями является эффективным и доступным способом оценки неспецифических факторов эффекторных механизмов иммунитета.

2. Изменения функционально-метаболической активности нейтро-фильных гранулоцитов у больных дерматофитиями сопровождаются угнетением активности миелопероксидазы, снижением содержания катионного белка, липидов, повышением концентрации гликогена, активности кислой и щелочной фосфатаз, нарастанием тетразолиевой активности.

3. Закономерности, установленные в ходе изучения внутриклеточных компонентов нейтрофилов и их функционального состояния, позволяют использовать их в качестве дополнительных критериев для оценки выраженности воспалительных явлений, наличия сопутствующей хронической патологии и полноты выздоровления у больных дерматофитиями.

Работа проводилась в соответствии с комплексным планом НИР Кабардино-Балкарского государственного госуниверситета Минобразования и науки РФ по программе «Университеты России», раздел II «Медицина». Тема «Состояние функционально-метаболической активности лейкоцитов и среднемолекулярных пептидов сыворотки крови в норме и при инфекционных заболеваниях различной этиологии» (зарегистрирована в ВНТИ-центре, государственная регистрация за № 01.990.4 250).

Научная новизна. Впервые проведено комплексное, динамическое изучение важнейших компонентов микробицидной системы нейтрофилов и их функционально-метаболической активности у больных трихофитией' и микроспорией. Проведенные исследования позволили выявить разнонаправленные сдвиги в содержании интралейкоцитарных компонентов. Это проявлялось подавлением ферментативной активности миелопероксидазы, снижением концентрации неферментных катионных белков и липидов. Между тем, наблюдалось нарастание активности кислой и щелочной фосфатаз, уровня гликогена, усиление тетразолиевой активности лейкоцитов. Выявлена зависимость между стадией кожного процесса, клинической формой, наличием сопутствующей патологии и изменением внутриклеточных компонентов, обозначенных выше.

Практическая ценность работы. У больных дерматофитиями установлено закономерное снижение активности миелопероксидазы, содержания ка-тионного белка и липидов при повышенных значениях кислой и щелочной фосфатаз, гликогена и показателей НСТ-теста, которые являются дополнительными критериями для оценки состояния эффекторных механизмов иммунитета. Кроме того, они могут служить дополнением к общепринятым критериям излеченности, поскольку при неэффективности терапии и хрони-зации процесса возвращение цитохимических показателей к исходной норме задерживается или не происходит. Наиболее быстрое восстановление цитохимических показателей выявлено при успешном лечении поверхностных форм трихофитии и микроспории. При инфильтративно-нагноительной трихофитии, а также при наличии сопутствующей хронической патологии, нормализация внутриклеточного метаболизма лейкоцитов происходила весьма медленно.

Внедрение в практику,. Результаты диссертационной работы доложены на многих научно-практических конференциях, представлены в печати. Данные клинико-цитохимических сопоставлений внедрены в практику работы ГУЗ Кожно-венерологический диспансер МЗ КБР и используются в учебном процессе на кафедрах и курсах дерматовенерологии, инфекционных болезней, микробиологии и иммунологии Кабардино-Балкарского госуниверситета при изучении тем «Грибковые заболевания кожи», «Инфекция, инфекционный процесс», «Неспецифическая реактивность и иммунитет».

Публикации. По материалам диссертационной работы опубликовано 10 научных работ. , — ¦

Апробация диссертационного материала. Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на ежегодных итоговых конференциях сотрудников медицинского факультета КБГУ (2001;2005), на заседаниях Кабардино-Балкарского Республиканского филиала Всероссийского научно-медицинского общества дерматовенерологов (2002;2005), на всероссийской конференции «Клинические перспективы в инфектологии» (Санкт-Петербург, 2001), на региональной научной конференции молодых ученых, аспирантов «Перспектива — 2001» (Нальчик, 2001), на научной конференции «Достижения медицинской науки — практическому здравоохранению», посвященной 70-летию КБГУ (Нальчик, 2002), на международной конференции «Фундаментальные и прикладные исследования в медицине» (Греция, 2003), на региональной конференции «Молодые ученые — медицине» (Владикавказ, 2003), на всероссийской научной конференции молодых ученых, аспирантов «Перспектива — 2003» (Нальчик, 2003), на Российской научно-практической конференции «Узловые вопросы борьбы с инфекциями» (Санкт-Петербург, 2004), на Всероссийской конференции дерматовенерологов «Современные направления развития диагностики, лечения и профилактики ИППП и дерматозов» (Н.Новгород, 2004), на Всероссийской конференции «Хронические дерматозы: новые аспекты патогенеза и терапии. Инфекции, передаваемые половым путем», посвященной памяти проф. М. М. Желтакова (Москва, 2004).

Диссертационная работа апробирована на совместной научной конференции сотрудников кафедры инфекционных болезней с курсом дерматовенерологии, кафедры микробиологии и ГУЗ Кожно-венерологический диспансер МЗ КБР (июнь, 2006 -г.).

Структура и объем диссертации

Диссертационный материал изложен на 130 страницах машинописного текста, содержит введение, 6 глав, заключение, выводы и указатель литературы, включающий 224 отечественных и 143 зарубежных авторов. Диссертационная работа иллюстрирована 36 таблицами, 33 рисунками и 4 клиническими наблюдениями.

Выводы.

1. У больных трихофитией и микроспорией наблюдаются закономерные, разнонаправленные сдвиги в содержании и активности интралейкоцитар-ных микробицидных факторов, носящие неспецифический характер. Так, на фоне угнетения содержания катионного белка, липидов и активности миелопероксидазы выявлено повышенное содержание гликогена, активности кислой, щелочной фосфатаз и показателей спонтанного НСТ-теста.

2. У больных дерматофитиями закономерные, разнонаправленные сдвиги цитохимических показателей связаны с клинической формой заболевания и выраженностью воспалительных явлений в коже.

3. Степень отклонений в содержании внутриклеточных компонентов и активности спонтанного НСТ-теста зависят от наличия сопутствующих хронических заболеваний.

4. При изучении фагоцитарной и метаболической активности нейтрофилов с использованием метода спонтанного НСТ-теста выявлены высокие показатели НСТ-теста у больных дерматофитиямии, максимально выраженные в стадии островоспалительных явлений у больных инфильтративно-нагноительной трихофитией.

5. У больных инфильтративно-нагноительной трихофитией в гнойно-воспалительных очагах имеется максимальная активация метаболических процессов в лейкоцитах, что прояваляется массивным усилением активности миелопероксидазы, кислой и щелочной фосфатаз, нарастанием уровня катионных белков, липидов и гликогена. Уровень микробицид-нывх факторов в лейкоцитах из кожных очагов значительно превышает таковой в лейкоцитах периферической крови как здоровых лиц, так и больных дерматофитиями.

6. Выявлено отсутствие сопряженности между цитохимическими показателями лейкоцитов (миелопероксидазы, катионного белка, кислой и щелочной фосфатаз, липидов, гликогена и НСТ-теста) с данными гемограммы (лейкоцитозом, палочкоядерным сдвигом, увеличением СОЭ).

Следовательно, исследования функционально-метаболической активности лейкоцитов дают дополнительную информацию о развитии патологического кожного процесса у больных микозами. Практические рекомендации.

1. Цитохимические исследования внутриклеточных компонентов лейкоцитов (катионного белка, гликогена, липидов, миелопероксидазы, щелочной и кислой фосфатаз) у больных дерматофитиями могут быть использованы для оценки состояния эффекторного звена иммунитета в комплексе с традиционными общеклиническими исследованиями.

2. Длительные нарушения состояния внутриклеточных компонентов лейкоцитов и активности НСТ-теста у больных трихофитией и микроспорией могут свидетельствовать о возможности развития рецидива.

3. Установленные при исследовании здоровых людей пределы физиологических колебаний содержания катионного белка, гликогена, липидов, миелопероксидазы, щелочной, кислой фосфатаз и уровня спонтанного НСТ-теста могут быть использованы в качестве исходных критериев при оценке результатов цитохимических и цитоиммунологических исследований в клинической практике.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

.

Дерматофитии, по данным ряда авторов, являются сегодня весьма актуальной проблемой, так как в последнее десятилетие наблюдается неуклонный рост числа больных грибковыми инфекциями. (Ю.К.Скрипкин, 1996; А. А. Кубанова с соавт., 2001). Эти и другие данные свидетельствуют, что грибковые поражения кожи, волос и ногтей являются весьма актуальной проблемой и требуют внимания специалистов различного профиля.

Представляет определенныей интерес разработка вопросов, связанных с патогенетическими механизмами развития микоза, особенностями клинического течения, расширением возможностей лабораторной оценки состояния больного, апробацией и внедрением современных методов лечения и контроля излеченности.

Многими авторами изучались отдельные стороны патогенеза и иммунитета при микозах. Между тем, комплексному изучению интралейкоцитарных микробицидных факторов, непосредственно участвующих в нейтрализации патогенных микроорганизмов, не уделялось должного внимания. Мало также литературных данных относительно показателей НСТ-теста у больных микозами. В нашей работе функциональная и метаболическая активность нейтрофильных гранулоцитов изучена в неразрывной связи с характером клинических проявлений, наличием сопутствующих заболеваний, влияющих на состояние эффекторных механизмов иммунитета.

Для решения поставленных задач применены цитохимические, цито-энзимологические и цитоиммунологические методы исследования нейтрофилов. Следует отметить, что эти методы доступны, воспроизводимы, информативны, апробированы и общепризнаны. Ценность использованных цитохимических методик состоит в том, что они позволяют изучить химическую организацию клеток при максимальном сохранении их прижизненной морфологии. Цитохимические методы в большинстве своем являются специфичными для отдельных групп веществ (углеводы, белки) или определенных химических соединений (катионные белки, гликоген, фосфатазы, мие-лопероксидаза). Методы цитохимического выявления биологически активных веществ в лейкоцитах специфичны и чувствительны к их минимальным количествам. (М.Н.Шубич, Б. С. Нагоев, 1980; В. Е. Пигаревский, 1978; А. Н. Маянский, Д. Н. Маянский, 1983, 1989; Б. С. Нагоев, 1986, 1996; М. О. Гулиев, 2000; Е. Б. Губжокова, 2004 и др.).

С помощью цитохимических исследований раскрываются тонкие механизмы изменений, свидетельствующие об участии клеток в развитии некоторых реактивных и патологических состояний организма. Удается проследить этапы формирования изменений, развивающихся в лейкоцитах под воздействием патологических агентов, сдвиги в направленности метаболизма, ферментном спектре, координации обменных процессов в клетках с формированием характерных морфологических изменений. Проведение подобных исследований способствует пониманию механизмов адаптации и компенсации, возникающих в системе крови в ответ на воздействие вирусов, бактерий и грибов, а также продуктов их метаболизма. Это создает предпосылки для диагностики и дифференциальной диагностики воспалительных заболеваний различной этиологии.

Цитохимические методы могут значительно быстрее, чем цитологические уловить в лейкоцитах функциональные изменения, что очень важно для объективной интерпретации тяжести патологического процесса. Вместе с тем, необходимо иметь в виду, что обмен веществ на клеточном и субклеточном уровнях трудно поддается изучению, так как многие методы пока недостаточно совершенны и с их помощью не всегда удается дать достоверную клиническую оценку исследуемым явлениям.

Для решения поставленных задач применены цитохимические, цито-энзимологические и цитоиммунологические методы исследований нейтрофилов. Изучались важнейшие внутриклеточные компоненты лейкоцитов, обеспечивающие функциональную полноценность клетки в ее борьбе с патогенными факторами. Так, миелопероксидаза и неферментные катионные белки взаимодействуют с патогенными микроорганизмами непосредственнокислая и щелочная фосфатазы способствуют ферментативному гидролизу фагоцитированных частиц, являясь лизосомальными энзимами. Энергетический потенциал гранулоцитов обеспечивают внутриклеточный гликоген и липиды. Последние, кроме того, являются пластическим материалом для синтеза мембран клеток и фагосом. Цитоиммунологическое изучение НСТ-теста позволяет выявить готовность лейкоцитов к фагоцитозу, т. е., применимо для диагностики дефектов фагоцитоза.

Комплекс цитохимических реакций, примененный нами, несомненно выгодно отличается от' громоздких биохимических, электронно-микроскопических и бактериологических методов своей технической простотой, чувствительностью и воспроизводимостью.

При изучении ферментативной активности щелочной, кислой фосфатаз и миелопероксидазы, концентрации гликогена, липидов, а также НСТ-теста у здоровых лиц установлены пределы физиологических колебаний, которые использованы как исходные данные для дальнейших исследований и согласуются с результатами других авторов (Б.С.Нагоев, 1986; Г. И. Козинец с соавт., 1984; А. Б. Иванов с соавт., 1994; Н. Г. Оразаев, 1999; М. О. Гулиев, 2000; Е. Б. Бубжокова, 2004; М. Х. Нагоева, 2005).

В результате проведенных исследований у больных трихофитией и микроспорией обнаружены важные закономерности. Обнаружено достоверное угнетение активности миелопероксидазы, уровня катионных белков и внутриклеточных липидов. В то же время констатирована высокая фосфа-тазная активность нейтрофилов, высокие цифры нейтралейкоцитарного гликогена.

На фоне разрешения высыпаний в процессе системной и местной терапии происходило постепенное, ступенеобразное восстановление нормальной активности внутриклеточных ферментов, повышение уровня катионных белков, липидов, снижение концентрации гликогена. У большинства больных поверхностными формами микроспории и трихофитии нормализация показателей микробицидных компонентов произошла в среднем к периоду выписки из стационара, т. е. через месяц от начала противогрибковой терапии. Между тем, у больных инфильтративно-нагноительной трихофитией наблюдались значительно более выраженные, стойкие сдвиги, а возвращение цитохимических показателей к нормальным величинам происходило довольно медленно. У этой категории больных имелись стабильно низкие показатели катионных белков, активности миелопероксидазы, существенное возрастание уровня гликогена, ферментативной активности кислой и щелочной фосфатаз. При этом концентрация внутриклеточных липидов имела статистически достоверные отклонения лишь при первичном обследовании, т. е. до начала лечения.

Наличие у больных дерматофитиями хронических заболеваний и интоксикаций также оказало свое влияние на состояние функционально-метаболической активности нейтрофилов. В большинстве случаев изменения микробицидных компонентов, связанные с, соматической патологией были выражены не столь значительно, но статистически достоверными. Цитохимические коэффициенты катионного белка, липидов и миелопероксидазы оказались более низкими, чем у больных без сопутствующих заболеваний. В то же время ферментативная активность щелочной, кислой фосфатаз и уровень гликогена оказались монотонно повышенными в динамике. При этом нормализация происходила весьма медленно, даже после полноценной санации. У некоторой части больных даже через месяц после выписки из стационара, цитохимические показатели достоверно отличались от нормы.

Снижение ферментативной активности миелопероксидазы у больных дерматофитиями, вероятно, можно объяснить расходованием ее для реализации микробицидного действия. В пользу этого свидетельствует обнаружение значительного количества миелопероксидазоположительных клеток в кожных очагах инфильтративно-нагноительной трихофитии.

Механизмы бактерицидного действия миелопероксидазной системы весьма сложны. Практически все клеточные компоненты — белки, липиды, нуклеиновые кислоты — повреждаются при взаимодействии с этой системой (Н.Ю.Говорова с соавт., 1989; Klebanoff, 1985, 1992; Salmeron с соавт. 1984). Поэтому идентифицировать субклеточные и надмолекулярные структуры, повреждения которых наиболее губительны к действию миелопероксидазы, не просто. Полагают, что наиболее чувствительны к действию миелопероксидазы компоненты клеточной мембраны: белки дыхательной цепи, белки мембранного транспорта (Albrich, Hurst, 1982; Klebanoff, 1985; Н. Ю. Говорова с соавт. 1989). В системе миелопероксидаза — перекись водорода — галло-ид ионы галлодиов при уничтожении микроорганизмов действуют синергично и взаимозаменяют друг друга. При ферментном катализе бактерицидный эффект миелопероксидазы обусловлен денатурацией галлоидированных белков микробов, находящихся в фаголизосоме, что, в конечном итоге, приводит к их гибели (М.Г.Шафран, 1981; Sepe, Clark, 1985). В интактной клетке имеются все условия для активного ферментативного действия миелопероксидазы. Необходимое условие для проявления антибиотического действия миелопероксидазы — это адсорбция данного фермента на поверохности чужеродной клетки (М.Г.Шафран, 1981). Феномен выброса миелопероксидазы наблюдается довольно рано: не позднее 9−15 минут после контакта лейкоцита с чужеродным агентом (Yong с соавт. 1986).

Неферментные катионные белки нейтрофильных гранулоцитов обладают целым рядом микробицидных свойств: могут выступать как фактор проницаемости, медиаторы воспаления, стимуляторов метаболических процессов и т. д. (В.Н.Кокряков, 1990; Б. А. Мазинг, 1990). Катионные белки способны адсорбироваться на отрицательно заряженных частицах за счет электростатических сил. Прикрепление этих протеинов к бактериальной клетке создает необходимые условия для успешного фагофитирования микроорганизма (В.Н.Кокряков, 1990; Ginzburg с соавт. 1982; Tedesco с соавт. 1986). .

Установлено, что процесс фагоцитоза сопровождается интенсивным расходованием компонентов микробицидной системы лейкоцитов (миелопероксидазы, катионных белков, кислой и щелочной фосфатаз). В экспериментальных и клинических условиях доказано, что поглощение чужеродных агентов (бактерий, грибов) приводит к уменьшению содержания катионного белка и миелопероксидазы в лейкоцитах (Б.С.Нагоев, 1986; В. И. Покровский с соавт. 1987). Внутриклеточное разрушение и лизис поглощенных микробных клеток происходит в фагоцитарных вакуолях, с которыми последовательно сливаются сначала специфические гранулы, затем — азурофильные. В результате в фаголизосомах содержатся катионные белки, миелопероксида-за, кислая фосфатаза и др. микробицидные факторы, которые в результате микробицидного действия нарушают жизнеспособность микроорганизма.

При воздействии на микробные клетки неферментных катионных белков наблюдается дезорганизация структуры мембраны микробной клетки, нарушение ее проницаемости, подавляются процессы дыхания, окислитель* ного фосфорилирования, биосинтеза ДНК, РНК и белков (В.Н.Кокряков, 1990). Кроме того, дестабилизирующее клеточную структуру действие катионных белков облегчает в дальнейшем воздействие на чужеродную клетку литических факторов — лизоцима, эластазы, многочисленных кислых гидра-лаз лизосомального аппарата нейтрофильных лейкоцитов.

Имеются указания, что миелопероксидаза, как и катионные белки, может оказать антимикробное действие и подавлять рост микроорганизмов не-ферментативно (Klebanoff, 1978; Seger, 1984). Это, видимо, связано со способностью катионных полиэлектролитов связываться с отрицательно заряженными компонентами мембраны микроорганизма, в связи с чем по вышеописанному механизму нарушается струкатура клеточной мембраны.

Уровень внутриклеточных липидов у больных трихофитией и микроспорией был достоверно снижен главным образом до начала антимикотиче-ской терапии. При этом не выявлено достоверной зависимости величины цитохимического коэффициента от клинической стадии поверхностной трихофитии и микроспории. Однако, при наличии островоспалительных явлений, обусловленных антропозоонозным трихофитоном, обнаружено существенное снижение концентрации интралейкоцитарных липидов. Вероятно, это можно связать с расходованием их в качестве энергетического и пластического материала для обеспечения фагоцитарных функций в гнойно-воспалительных очагах (Dimova, Nedialkov, 1981; Pruzansky с соавт., 1982, 1984; Mosser, Edelson, 1984).

Существенное возрастание концентрации внутриклеточного полисахарида — гликогена у больных дерматофитиями, возможно, обусловлено разба-лансированностью анаболических и катаболических процессов в клетке на фоне постоянной стимуляции грибковыми антигенами. Увеличение числа ШИК-положительных клеток может быть также связано с активацией мембран гранулярных структур нейтрофилов в процессе фагоцитоза, в результате чего гликолипиды, содержащиеся в этих гранулах, становятся более доступными для вступления в реакцию с шифф-йодной кислотой (В.Е.Венглинская, М. Г. Шубич, 1974). В наших исследованиях наиболее высокие значения интралейкоцитарного гликогена обнаружены у больных трихофитией до начала лечения, при первичном обследовании. Учитывая, что повышение уровня гликогена — это показатель активации фагоцитарных мел ханизмов, можно предположить, что в начальных стадиях кожного процесса важным звеном во взаимодействии макроорганизма с патогенными грибами является фагоцитоз.

Полученные в наших исследованиях данные о повышении уровня гликогена у больных дерматофитиями с постепенным снижением на фоне лечения, по-видимому, можно объяснить его расходованием в процессе фагоцитоза, а также с активацией мембран нейтрофилов под действием антигенного раздражения. В результате этого гликолипид, содержащийся в гранулах, нейтрофилов, становится более доступным для связывания с ШИК-реактивом. Интересно отметить, что накопление гликогена поисходит параллельно активации воспалительного процесса в организме. При этом наибольшее количество гликогена сосредоточено в лейкоцитах, скопившихся в очагах воспаления, нежели в периферической крови.

Лизосомальные ферменты лейкоцитов способны разрушать только те микроорганизмы, которые были умерщвлены миелопероксидазной системой и неферментными катионными белками до их фагоцитоза. Так, фосфатазы подвергают гидролизу бактериальные, грибковые клетки и вирусы, но вступают во взаимодействие только после воздействия на антиген катионного белка и миелопероксидазы.' Этим, возможно, объясняется отмеченное нами возрастание фосфатазной активности у больных дерматофитиями. (М.Г.Шубич, Б. С. Нагоев, 1980; Baggiolini, Dewald, 1984).

Кислая фосфатаза, являясь цитохимическим маркером лизосом, участвует в нейтрализации чужеродных агентов, токсических продуктов, образующихся в результате расщепления клеток, т. е. она является показателем катаболических процессов в организме (М.Г.Шубич, Б. С. Нагоев, 1980). О большом значении кислой и щелочной фосфатаз в осуществлении фазы переваривания в реакции фагоцитоза свидетельствуют данные о высокой корреляции между активностью фермента и завершенностью фагоцитоза (Б.С.Нагоев, 1986; Ч. Д. Асадов, Л. С. Нумерова, 1990 и др.). Полученные нами данные о повышении фосфатазной активности в динамике заболевания дерматофитиями согласуются с данными других авторов, обнаруживших усиление фосфатазной активности при различных дерматозах. Так, высокие уровни фосфатазной активности отмечены при псориазе (А.У.Джангуразова, 2002), экземе (М.Т.Нальчикова, 2002), гнойничковых инфекциях кожи (М.М.Тхазаплижева, 2005). '.

Комплексное исследование микробицидной системы лейкоцитов у больных дерматофитиями выявило неспецифический характер изменений их цитохимического статуса. Во всех группах обследованных выявлено значительное угнетение активности миелопероксидазы, снижение содержания неферментных катионных белков и липидов. Между тем, активность щелочной и кислой фосфатаз, а также уровень гликогена были существенно повышены. Наиболее выраженные отклонения в цитохимическом статусе лейкоцио-тов отмечены при обследовании больных до лечения, при поступлении в стационар, т. е. при наличий клинических проявлений микоза. Параллельно разрешению кожной симптоматики у большинства больных констатировано постепенное возвращение изучаемых показателей к уровню физиологической нормы, за исключением случаев, когда имелись сопутствующие заболевания и были зарегистрированы клинические и микробиологические рецидивы инфекции.

Функциональный метаболизм суправитальных лейкоцитов, изученный при помощи теста восстановления нитросинего тетразолия in vitro, показал значительную активацию внутренней метаболической системы гранулоцитов на фоне дерматофитий. 'Интересно отметить, что у части больных показатели НСТ-теста оставались повышенными, без тенденции к нормализации в процессе стационарного лечения. У этой группы (8 чел.) при контроольном культуральном иссследовании через месяц после выписки констатирован рецидив, подтвержденный культуральным выделением возбудителя. В связи с этим, НСТ-тест в процессе лечения и после его окончания может иметь дифференциально-диагностическое и прогностическое значение как дополнительный метод для оценки состояния эффекторных механизмов иммунитета.

На фоне хронической соматической патологии также найдено более выраженное усиление активности НСТ-теста в сравнении с основной группой больных. Однако, далее после полноценного лечения показатели тетра-золиевого теста длительно оставались выше нормальных величин. Этот факт, вероятно, обусловлен различными эндогенными факторами и патогенетическими механизмами, связанными с хроническими воспалительными заболеваниями внутренних органов.

Таким образом, представленный материал позволяет пролить свет на некоторые механизмы функционального метаболизма нейтрофильных гра-нулоцитов, дает новую информацию и углубляет представление о развитии патологического процесса при грибковых инфекциях. Достоверные, разнонаправленные сдвиги, выявленные в лейкоцитах цитохимическими методами у больных трихофитией и микроспорией, свидетельствуют о напряженности эффекторных механизмов иммунитета. Это проявлялось изменениями активности лизосомальных ферментов (миелопероксидазы, щелочной и кислой фосфатаз), патологическими изменениями со стороны энергозависимых процессов (угнетение уровня липидов, нарастание концентрации гликогена), снижением количества важнейших микробицидных веществ — неферментных катионных белков.

Учитывая информативность, доступность, воспроизводимость и апро-бированность, цитохимические, цитоэнзимологические и цитоиммунологи-чесие методы можно рекомендовать к широкому применению в практическом здравоохранении для определения состояния неспецифической резистентности организма у больных микозами наряду с общепринятыми клини-ко-лабораторными методами.