Дипломы, курсовые, рефераты, контрольные...
Срочная помощь в учёбе

Импорт тРНК в митохондрии дрожжей: роль предшественника митохондриальной лизил-тРНК-синтетазы и функция импортируемой тРНК в митохондриальном матриксе

Диссертация: Импорт тРНК в митохондрии дрожжей: роль предшественника митохондриальной лизил-тРНК-синтетазы и функция импортируемой тРНК в митохондриальном матриксе
ДиссертацияПомощь в написанииУзнать стоимостьмоей работы

Автор считает своим долгом выразить глубочайшую признательность и огромную благодарность своим научным руководителям, Игорю Александровичу Крашенинникову и Ивану Тарасову. Они всемерно помогали мне при постановке экспериментов, интерпретации результатов и написании статей и диссертации. Более того, по прошествии семи лет совместной работы я смело могу назвать их своими друзьями, с которыми мне… Читать ещё >

Содержание

  • Список используемых сокращений
  • 1. Введение
  • 2. Обзор литературы. Импорт макромолекул в митохондрии
    • 2. 1. Импорт белков в митохондрии
      • 2. 1. 1. Сигнальные последовательности импортируемых белков
      • 2. 1. 2. Претранслокационное разворачивание предшественников митохондриаль-ных белков и их транспорт к митохондриалыюй поверхности
      • 2. 1. 3. Транслокационный комплекс внешней митохондриалыюй мембраны (ТОМ)
      • 2. 1. 4. Встраивание белков во внешнюю мембрану митохондрий при помощи БАМ-комплекса
      • 2. 1. 5. Импорт белков в межмембранное пространство митохондрий
      • 2. 1. 6. Транслокационный комплекс внутренней митохондриалыюй мембраны Т1М23 и мотор транслокации
      • 2. 1. 7. Транслокационный комплекс внутренней митохондриалыюй мембраны Т1М22 и малые Тт-белки межмембранного пространства
      • 2. 1. 8. Экспорт белков из митохондриального матрикса
    • 2. 2. Импорт РНК в митохондрии
      • 2. 2. 1. Импорт тРНК в митохондрии простейших
      • 2. 2. 2. Импорт тРНК в митохондрии растений
      • 2. 2. 3. Импорт тРНК в митохондрии дрожжей
      • 2. 2. 4. Импорт РНК в митохондрии млекопитающих
    • 2. 3. Импорт ДНК в митохондрии
  • 3. Материалы и методы исследования
    • 3. 1. Материалы
      • 3. 1. 1. Реактивы
      • 3. 1. 2. Коммерческие наборы
      • 3. 1. 3. Антитела
      • 3. 1. 4. Приборы и оборудование
      • 3. 1. 5. Штаммы микроорганизмов
      • 3. 1. 6. Питательные среды
      • 3. 1. 7. Генно-инженерные конструкции
      • 3. 1. 8. Олигонуклеотиды
    • 3. 2. Методы
      • 3. 2. 1. Полимеразная цепная реакция (ПЦР)
      • 3. 2. 2. Расщепление ДНК эндонуклеазами рестрикции и дефосфо-рилирование
      • 3. 2. 3. Лигирование
      • 3. 2. 4. Определение нуклеотидной последовательности ДНК методом Сэнгера
      • 3. 2. 5. Трансформация клеток E. col
      • 3. 2. 6. Трансформация клеток Saccharomyces cerevisiae
      • 3. 2. 7. Определение фенотипов штаммов дрожжей S. cerevisiae
      • 3. 2. 8. Измерение поглощения кислорода клетками
      • 3. 2. 9. Исключение плазмиды, содержащей маркер URA3, из дрожжевых клеток
      • 3. 2. 10. Выделение ДНК из клеток дрожжей
      • 3. 2. 11. Выделение митохондрий из клеток дрожжей
      • 3. 2. 12. Выделение дрожжевых митохондриальных РНК
      • 3. 2. 13. Выделение суммарных дрожжевых тРНК в аминоацилированном состоянии
      • 3. 2. 14. Нозерн-блот гибридизация
      • 3. 2. 15. In vitro Т7-транскрипция
      • 3. 2. 16. Радиоактивное мечение тРНК
      • 3. 2. 17. Экспрессия рекомбинантных белков в клетках E. col
      • 3. 2. 18. Очистка рекомбинантных белков методом аффинной хроматографии на колонках с никель-агарозой
      • 3. 2. 19. Вестерн-блот гибридизация
      • 3. 2. 20. Выделение белкового препарата, способного направлять импорт тРНК в изолированные митохондрии дрожжей
      • 3. 2. 21. Транспорт радиоактивно меченных тРНК в изолированные митохондрии дрожжей
      • 3. 2. 22. Митохондриальная трансляция in vivo
      • 3. 2. 23. Метод задержки в геле
      • 3. 2. 24. Футпринтинг
  • 4. Результаты и обсуждение
    • 4. 1. Образование РНК-белкового комплекса, приводящего к импорту тРНК в митохондрии дрожжей
    • 4. 2. Изучение структуры РНК-белкового комплекса, приводящего к импорту тРНК в митохондрии, методом футпринтинга
    • 4. 3. Поиск участков ргеМзк1р, необходимых для направления импорта тРНК в митохондрии
    • 4. 4. Создание штамма дрожжей, в котором тРЛ1 не импортировалась бы в митохондрии, и изучение фенотипического эффекта такого дефекта
  • Выводы
  • Благодарности

Импорт тРНК в митохондрии дрожжей: роль предшественника митохондриальной лизил-тРНК-синтетазы и функция импортируемой тРНК в митохондриальном матриксе (реферат, курсовая, диплом, контрольная)

Митохондрии — это многофункциональные органеллы эукариотических клеток, обеспечивающие клетки энергией за счет окислительного фосфорилирования, участвующие в образовании железосерных кластеров, окислении жирных кислот, образовании некоторых аминокислот, а также играющие важную роль в апоптозе. Для митохондрий характерно наличие собственной ДНК и системы биосинтеза белка, однако большое число макромолекул импортируется в органеллы из цитоплазмы. Было показано, что в ряде случаев в митохондрии транспортируются не только белки, но также и тРНК. К настоящему времени импорт тРНК в митохондрии был обнаружен у простейших, ряда растений, сумчатых млекопитающих, а также у почкующихся дрожжей Saccharomyces cerevisiae. Механизм переноса тРНК в митохондрии и его специфичность значительно отличается от вида к виду.

В случае дрожжей было показано, что из цитоплазмы в митохондрии импортируется два вида тРНК — тРНКЛизСии (Martin et al. 1979) и тРНКГлн (Rinehart et al. 2005). Детальные механизмы импорта тРНК, а также функции импортируемой тРНК в митохондриалыюм матриксе, остаются неясными. Импорт тРНК является высокоспецифичным процессом, так как одна из двух изоакцепторных лизиновых тРНК (тРНКЛизсии, далее тРЛ1) направляется в митохондрии дрожжей, в то время как вторая (тРНКЛизиии> тРЛ2) присутствует только в цитоплазме. Такое различие в локализации довольно близких тРНК может быть объяснено отличиями в структуре этих тРНК (Entelis et al. 1998). Помимо этого, в нашей лаборатории было показано участие трех растворимых цитоплазматических белков в импорте тРЛ1 в митохондрии. Прежде всего, тРЛ1 должна быть аминоацилирована с помощью цитоплазматической лизил-тРНК-синтетазы, затем необходимо ее взаимодействие с предшественником митохондриалыюй лизил-тРНК-синтетазы (preMsklp) (Tarassov et al. 1995b). Предполагается, что тРЛ1 импортируется в митохондрии, будучи связанной с этим белком. Однако присутствия аминоацилированной тРЛ1 и preMsklp не достаточно для импорта тРЛ1 в митохондрии, что говорит о необходимости дополнительных белковых факторов, направляющих ее импорт, так называемых факторов импорта. Один из таких факторов был недавно охарактеризован как гликолитический фермент енолаза (Entelis et al. 2006). Роль этого белка в процессе импорта тРНК в митохондрии остается неясной.

Вопрос о функции tPJII в митохондриальном матриксе к настоящему моменту остается открытым. Существует предположение, что тРЛ1 принимает участие в митохоидриальной трансляции. Однако, эта гипотеза подтверждена только косвенными экспериментами (Kolesnikova et al. 2000). Более того, митохондриальная лизиновая тРНК дрожжей (с антикодоном cmnmsUUU, далее тРЛЗ) способна узнавать оба лизиновых кодона (AAA и AAG) в процессе митохондриалыюй трансляции.

Целью данной работы являлось изучение формирования комплекса между тРЛ1 и preMsklp, и с использованием полученных данных, создание штамма дрожжей, в котором тРЛ1 присутствовала бы исключительно в цитоплазме, и изучение фенотипического эффекта отсутствия тРЛ1 в митохондриях.

Для достижения поставленных целей были сформулированы следующие экспериментальные задачи:

— оценить константу диссоциации комплекса тРЛ1-preMsklp в отсутствии и присутствии енолазы 2;

— определить, какие нуклеотиды тРЛ1 становятся защищенными от действия нуклеаз в результате взаимодействия с preMsklp;

— оцепить эффективность импорта тРЛ1, направляемого различными мутантными версиями preMsklp in vitro и in vivo;

— в случае невозможности направления импорта тРЛ1 той или иной мутантной версией preMsklp, оценить эффективность митохондриального дыхания и митохондриалыюй трансляции в клетках штамма дрожжей с соответствующей мутантной версией preMsklp;

— оценить эффективность митохондриального дыхания и митохондриалыюй трансляции в клетках штамма дрожжей, в которых геи preMsklp заменен на ортологичный ген грибов Ashbya gossypii.

5. ВЫВОДЫ.

1. Только те тРНК, которые способны образовывать стабильный комплекс с предшественником митохондриалыюй лизил-тРНК-синтетазы (preMsklp), импортируются в изолированные митохондрии дрожжей. Константа диссоциации таких комплексов составляет 180−250 нМ. Присутствие енолазы снижает константу диссоциации до 40 нМ.

2. Комплекс импортируемой лизиновой тРНК (тРЛ1) с цитоплазматической лизил-тРНК-синтетазой организован как типичный комплекс аминоацил-тРНК-синтетазы класса НЬ с соответствующей тРНК, образование которого ведет к аминоацилированию. Комплекс тРЛ1 с preMsklp организован совершенно иначе: в этом комплексе подавляющее большинство нуклеотидов тРНК экранированы белком.

3. N-концевой домен preMsklp специфически направляет импорт тРНК в митохондрии дрожжей in vitro и in vivo и взаимодействует с тРЛ1 таким же образом, что и полноразмерный белок.

Участок preMsklp, определяющий специфический импорт тРНК в митохондрии, ограничен a-спиралями Н5 и Н6. Участки preMsklp, ограниченные a-спиралями Н5 и Н6 и a-спиралями HI и НЗ, необходимы для аминоацилирования зрелым белком митохондриальной лизиновой тРНК.

4. тРЛ1 участвует в митохондриальной трансляции. При 30 °C митохондриальная лизиповая тРНК (с антикодоном UUU) полностью заменяет в этом процессе тРЛ1 (с антикодоном CUU), тогда как при 37 °C митохондриальная лизиновая тРНК гипомодифицирована по U34 и неэффективно считывает кодоны AAG. Поэтому при данной температуре тРЛ1 необходима для нормального функционирования митохондрий.

БЛАГОДАРНОСТИ.

Автор считает своим долгом выразить глубочайшую признательность и огромную благодарность своим научным руководителям, Игорю Александровичу Крашенинникову и Ивану Тарасову. Они всемерно помогали мне при постановке экспериментов, интерпретации результатов и написании статей и диссертации. Более того, по прошествии семи лет совместной работы я смело могу назвать их своими друзьями, с которыми мне всегда очень интересно проводить время и которые не раз приходили мне на помощь в трудную минуту. Эти же слова я хотел бы адресовать своим коллегам, Нине Энтелис, Робэру Мартэну и Ольге Колесниковой, без помощи и поддержки которых эта работа никогда не была бы сделана. Я очень признателен Ирине Брандиной, Ольге Каричевой и Александру Смирнову, которые, в числе прочих, создали в нашей лаборатории идеальный климат для приятной и эффективной работы. Я благодарю также студентов, делавших курсовые и дипломные работы (или их французские аналоги) в нашей лаборатории — Алину Корбут, Эстель Пфистер, Сэми Догана и Ванессу Жубено. Часть этой работы была сделана при их непосредственном участии. Я также хотел бы поблагодарить ученых, которые любезно делились со мной генно-инженерными конструкциями, антителами и методиками: Сильви Фриан, Убера Беккера, Александера Цаголофф, Хайке Ланг и Роланда Лилля. Я очень признателен коллективу кафедры молекулярной биологии за полученное мной великолепное образование. Также хотелось бы поблагодарить коллектив лаборатории молекулярной генетики, геномики и микробиологии Университета Луи Пастера, Страсбург, Франция, и в особенности — Анн-Мари Экель и Кати Рейбель, за помощь в работе и доброжелательное отношение. И в заключение я благодарю своих родителей и свою жену за все то, что они для меня сделали и продолжают делать.

Показать весь текст

Список литературы

  1. Abe, Y., Shodai, T., Muto, T., Mihara, K., Torii, H., Nishikawa, S., Endo, T., and Kohda, D. 2000. Structural basis of presequence recognition by the mitochondrial protein import receptor Tom20. Cell 100(5): 551−560.
  2. Adam, A., Endres, M., Sirrenberg, C., Lottspeich, F., Neupert, W., and Brunner, M. 1999. Tim9, a new component of the TIM22.54 translocase in mitochondria. Embo J 18(2): 313−319.
  3. Ades, I.Z. and Butow, R.A. 1980. The products of mitochondria-bound cytoplasmic polysomes in yeast. J Biol Chem 255(20): 9918−9924.
  4. Ahmed, A.U., Beech, P.L., Lay, S.T., Gilson, P.R., and Fisher, P.R. 2006. Import-Associated Translational Inhibition: Novel In Vivo Evidence for Cotranslational Protein Import into Dictyostelium discoideum Mitochondria. Eukaryot Cell 5(8): 1314−1327.
  5. Akashi, K., Hirayama, J., Takenaka, M., Yamaoka, S., Suyama, Y., Fukuzawa, H., and Ohyama, K. 1997, Accumulation of nuclear-encoded tRNA (Thr) (AGU) in mitochondria of the liverwort Marchantia polymorpha. Biochim Biophys Acta 1350(3): 262−266.
  6. Barrientos, A., Korr, D., and Tzagoloff, A. 2002. Shylp is necessary for full expression of mitochondrial COX1 in the yeast model of Leigh’s syndrome. Embo J 21(1−2): 43−52.
  7. Beddoe, T. and Lithgow, T. 2002. Delivery of nascent polypeptides to the mitochondrial surface. Biochim Biophys Acta 1592(1): 35−39.
  8. Bhattacharyya, S.N. and Adhya, S. 2004. tRNA-triggered ATP hydrolysis and generation of membrane potential by the leishmania mitochondrial tRNA import complex. J Biol Chem 279(12): 11 259−11 263.
  9. Bhattacharyya, S.N., Chatteijee, S., and Adhya, S. 2002. Mitochondrial RNA import in Leishmania tropica: aptamers homologous to multiple tRNA domains that interact cooperatively or antagonistically at the inner membrane. Mol Cell Biol 22(12): 43 724 382.
  10. Bonnefoy, N., Chalvet, F., Hamel, P., Slonimski, P.P., and Dujardin, G. 1994. OXA1, a Saccharomyces cerevisiae nuclear gene whose sequence is conserved from prokaryotes to eukaryotes controls cytochrome oxidase biogenesis. J Mol Biol 239(2): 201−212.
  11. Broadley, S.A., Demlow, C.M., and Fox, T.D. 2001. Peripheral mitochondrial inner membrane protein, Mss2p, required for export of the mitochondrially coded Cox2p C tail in Saccharomyces cerevisiae. Mol Cell Biol 21(22): 7663−7672.
  12. Brunei, C. and Romby, P. 2000. Probing RNA structure and RNA-ligand complexes with chemical probes In Process Citation. Methods Enzymol 318: 3−21.
  13. Cavarelli, J., Rees, B., Ruff, M., Thierry, J.C., and Moras, D. 1993. Yeast tRNA (Asp) recognition by its cognate class II aminoacyl-tRNA synthetase. Nature 362(6416): 181−184.
  14. Chang, D.D. and Clayton, D.A. 1987. A novel endoribonuclease cleaves at a priming site of mouse mitochondrial DNA replication. Embo J 6(2): 409−417.
  15. Chatterjee, S., Home, P., Mukherjee, S., Mahata, B., Goswami, S., Dhar, G., and Adhya, S. 2006. An RNA-binding respiratory component mediates import of type II tRNAs into Leishmania mitochondria. J Biol Chem 281(35): 25 270−25 277.
  16. Chen, D.H., Shi, X., and Suyama, Y. 1994. In vivo expression and mitochondrial import of normal and mutated tRNA (thr) in Leishmania. Mol Biochem Parasitol 64(1): 121−133.
  17. Crausaz Esseiva, A., Marechal-Drouard, L., Cosset, A., and Schneider, A. 2004. The T-stem determines the cytosolic or mitochondrial localization of trypanosomal tRNAsMet. Mol Biol Cell 15(6): 2750−2757.
  18. Curran, S.P., Leuenberger, D., Oppliger, W., and Koehler, C.M. 2002. The Tim9p-TimlOp complex binds to the transmembrane domains of the ADP/ATP carrier. EmboJ21(5): 942−953.
  19. D’Silva, P.D., Schilke, B., Walter, W., Andrew, A., and Craig, E.A. 2003. J protein cochaperone of the mitochondrial inner membrane required for protein import into the mitochondrial matrix. P roc Natl Acad Sci USA 100(24): 13 839−13 844.
  20. Davis, A.J., Alder, N.N., Jensen, R.E., and Johnson, A.E. 2006. The Tim9p/10p and Tim8p/13p Complexes Bind to Specific Sites on Tim23p during Mitochondrial Protein Import. Mol Biol Cell.
  21. Davis, A.J., Sepuri, N.B., Holder, J., Johnson, A.E., and Jensen, R.E. 2000. Two intermembrane space TIM complexes interact with different domains of Tim23p during its import into mitochondria. J Cell Biol 150(6): 1271−1282.
  22. Dekker, P.J., Ryan, M.T., Brix, J., Muller, H., Honlinger, A., and Pfanner, N. 1998. Preprotein translocase of the outer mitochondrial membrane: molecular dissection and assembly of the general import pore complex. Mol Cell Biol 18(11): 6515−6524,
  23. Delage, L., Duchene, A.M., Zaepfel, M., and Marechal-Drouard, L. 2003a. The anticodon and the D-domain sequences are essential determinants for plant cytosolic tRNAVal import into mitochondria. Plant ./34(5): 623−633.
  24. Delage, L., Dietrich, A., Cosset, A., and Marechal-Drouard, L. 2003b. In vitro import of a nuclearly encoded tRNA into mitochondria of Solanum tuberosum. Mol Cell Biol 23(11): 4000−4012.
  25. Dietmeier, K., Honlinger, A., Bomer, U., Dekker, P.J., Eckerskorn, C., Lottspeich, F., Kubrich, M., and Pfanner, N. 1997. Tom5 functionally links mitochondrial preprotein receptors to the general import pore. Nature 388(6638): 195−200.
  26. Dietrich, A., Marechal-Drouard, L., Carneiro, V., Cosset, A., and Small, I. 1996. A single base change prevents import of cytosolic tRNA (Ala) into mitochondria in transgenic plants. Plant ^ 10(5): 913−918.
  27. Dietrich, A., Small, I., Cosset, A., Weil, J.H., and Marechal-Drouard, L. 1996. Editing and import: strategies for providing plant mitochondria with a complete set of functional transfer RNAs. Biochimie 78(6): 518−529.
  28. Dietrich, A, Weil, J.H., and Marechal-Drouard, L. 1992. Nuclear-encoded transfer RNAs in plant mitochondria. Annu Rev Cell Biol 8: 115−131.
  29. Doersen, C.J., Guerrier-Takada, C., Altman, S., and Attardi, G. 1985. Characterization of an RNase P activity from HeLa cell mitochondria. Comparison with the cytosol RNase P activity. J Biol Chem 260(10): 5942−5949.
  30. Donzeau, M., Kaldi, K., Adam, A., Paschen, S., Wanner, G., Guiard, B., Bauer, M.F., Neupert, W., and Brunner, M. 2000. Tim23 links the inner and outer mitochondrial membranes. Cell 101(4): 401−412.
  31. Dorner, M., Altmann, M., Paabo, S., and Mori, M. 2001. Evidence for Import of a Lysyl-tRNA into Marsupial Mitochondria. Mol Biol Cell 12(9): 2688−2698.
  32. Eilers, M., Hwang, S., and Schatz, G. 1988. Unfolding and refolding of a purified precursor protein during import into isolated mitochondria. Embo J 7(4): 1139−1145.
  33. Entelis, N., Brandina, I., Kamenski, P., Krasheninnikov, I.A., Martin, R.P., and Tarassov, I. 2006. A glycolytic enzyme, enolase, is recruited as a cofactor of tRNA targeting toward mitochondria in Saccharomyces cerevisiae. Genes Dcv 20: 16 091 620.
  34. Entelis, N.S., Kieffer, S., Kolesnikova, O.A., Martin, R.P., and Tarassov, I.A. 1998. Structural requirements of tRNALys for its import into yeast mitochondria. Proc Natl Acad Sci USA 95(6): 2838−2843.
  35. Entelis, N.S., Kolesnikova, O.A., Dogan, S., Martin, R.P., and Tarassov, I.A. 2001. 5 S rRNA and tRNA Import into Human Mitochondria. Comparison of in vitro requirements. J Biol Chem 276(49): 45 642−45 653.
  36. Entelis, N.S., Krasheninnikov, I.A., Martin, R.P., and Tarassov, I.A. 1996. Mitochondrial import of a yeast cytoplasmic tRNA (Lys): possible roles of aminoacylation and modified nucleosides in subcellular partitioning. FEBS Lett 384(1): 38−42.
  37. Esseiva, A.C., Naguleswaran, A., Hemphill, A., and Schneider, A. 2004. Mitochondrial tRNA import in Toxoplasma gondii. J Biol Chem 279(41): 4 236 342 368.
  38. Fan, A.C., Bhangoo, M.K., and Young, J.C. 2006. Hsp90 functions in the targeting and outer membrane translocation steps of Tom70-mediated mitochondrial import. J Biol Chem 281(44): 33 313−33 324.
  39. Foury, F., Roganti, T., Lecrenier, N., and Purnelle, B. 1998. The complete sequence of the mitochondrial genome of Saccharomyces cerevisiae. FEBS Lett 440(3): 325 331.
  40. Francin, M., Kaminska, M., Kerjan, P., and Mirande, M. 2002. The N-terminal domain of mammalian Lysyl-tRNA synthetase is a functional tRNA-binding domain. J Biol Chem 277(3): 1762−1769.
  41. Fujiki, M. and Verner, K. 1993. Coupling of cytosolic protein synthesis and mitochondrial protein import in yeast. Evidence for cotranslational import in vivo. J Biol Chem 268(3): 1914−1920.
  42. Funfschilling, U. and Rospert, S. 1999. Nascent polypeptide-associated complex stimulates protein import into yeast mitochondria. Mol Biol Cell 10(10): 3289−3299.
  43. Gabriel, K., Milenkovic, D., Chacinska, A., Muller, J., Guiard, B., Pfanner, N., and Meisinger, C. 2007. Novel Mitochondrial Intermembrane Space Proteins as Substrates of the MIA Import Pathway. J Mol Biol 365(3): 612−620.
  44. Gakh, O., Cavadini, P., and Isaya, G. 2002. Mitochondrial processing peptidases. Biochim Biophys Acta 1592(1): 63−77.
  45. Garcia, M., Darzacq, X., Delaveau, T., Jourdren, L., Singer, R.H., and Jacq, C. 2007. Mitochondria-associated Yeast mRNAs and the Biogenesis of Molecular Complexes. Mol Biol Cell 18(2): 362−368.
  46. Gatti, D.L. and Tzagoloff, A. 1991. Structure and evolution of a group of related aminoacyl-tRNA synthetases. J Mol Biol 218(3): 557−568.
  47. Gavel, Y. and von Heijne, G. 1990. Cleavage-site motifs in mitochondrial targeting peptides. Protein EngA{) 33−37.
  48. Gentle, I., Gabriel, K., Beech, P., Waller, R., and Lithgow, T. 2004. The Omp85 family of proteins is essential for outer membrane biogenesis in mitochondria and bacteria. J Cell Biol 164(1): 19−24.
  49. Gietz, R.D. and Woods, R.A. 2006. Yeast transformation by the LiAc/SS Carrier DNA/PEG method. Methods Mol Biol 313: 107−120.
  50. Goswami, S., Dhar, G., Mukherjee, S., Mahata, B., Chatterjee, S., Home, P., and Adhya, S. 2006. A bifunctional tRNA import receptor from Leishmania mitochondria. Proc Natl Acad Sei USA 103(22): 8354−8359.
  51. Habib, S.J., Waizenegger, T., Niewienda, A., Paschen, S.A., Neupert, W., and Rapaport, D. 2007. The N-terminal domain of Tob55 has a receptor-like function in the biogenesis of mitochondrial {beta}-barrel proteins. J Cell Biol 176(1): 77−88.
  52. Hell, K., Herrmann, J.M., Pratje, E., Neupert, W., and Stuart, R.A. 1998. Oxalp, an essential component of the N-tail protein export machinery in mitochondria. Proc Natl Acad Sei USA 95(5): 2250−2255.
  53. Hell, K., Herrmann, J., Pratje, E., Neupert, W., and Stuart, R.A. 1997. Oxalp mediates the export of the N- and C-termini of pCoxII from the mitochondrial matrix to the intermembrane space. FEBS Lett 418(3): 367−370.
  54. Helm, M., Brule, H., Degoul, F., Cepanec, C., Leroux, J.P., Giege, R., and Florentz, C. 1998. The presence of modified nucleotides is required for cloverleaf folding of a human mitochondrial tRNA. Nucleic Acids Res 26(7): 1636−1643.
  55. Herrmann, J.M. and Neupert, W. 2003. Protein insertion into the inner membrane of mitochondria. IUBMB Life 55(4−5): 219−225.
  56. Hill, K., Model, K., Ryan, M.T., Dietmeier, K., Martin, F., Wagner, R., and Pfanner, N. 1998. Tom40 forms the hydrophilic channel of the mitochondrial import pore for preproteins see comment. Nature 395(6701): 516−521.
  57. Huang, S., Ratliff, K.S., and Matouschek, A. 2002. Protein unfolding by the mitochondrial membrane potential. Nat Struct Biol 9(4): 301−307.
  58. Isaya, G., Kalousek, F., Fenton, W.A., and Rosenberg, L.E. 1991. Cleavage of precursors by the mitochondrial processing peptidase requires a compatible mature protein or an intermediate octapeptide. J Cell Biol 113(1): 65−76.
  59. James, A.M., Wei, Y.H., Pang, C.Y., and Murphy, M.P. 1996. Altered mitochondrial function in fibroblasts containing MELAS or MERRF mitochondrial DNA mutations. BiochemJ 318 (Pt 2): 401−407.
  60. Karniely, S., Regev-Rudzki, N., and Pines, O. 2006. The presequence of fumarase is exposed to the cytosol during import into mitochondria. J Mol Biol 358(2): 396−405.
  61. Kerscher, O., Sepuri, N.B., and Jensen, R.E. 2000. Timl8p is a new component of the Tim54p-Tim22p translocon in the mitochondrial inner membrane. Mol Biol Cell 11(1): 103−116.
  62. Kerscher, O., Holder, J., Srinivasan, M., Leung, R.S., and Jensen, R.E. 1997. The Tim54p-Tim22p complex mediates insertion of proteins into the mitochondrial inner membrane. J Cell Biol 139(7): 1663−1675.
  63. Kirino, Y., Goto, Y., Campos, Y., Arenas, J., and Suzuki, T. 2005. Specific correlation between the wobble modification deficiency in mutant tRNAs and the clinical features of a human mitochondrial disease. Proc Natl Acad Sei USA 102(20): 7127−7132.
  64. Knox, C., Sass, E., Neupert, W., and Pines, O. 1998. Import into mitochondria, folding and retrograde movement of fumarase in yeast. J Biol Chem 273(40): 2 558 725 593.
  65. , C.M. 2004. New developments in mitochondrial assembly. Annu Rev Cell Dev Biol 20:309−335.
  66. Koehler, C.M., Leuenberger, D., Merchant, S., Renold, A., Junne, T., and Schatz, G. 1999. Human deafness dystonia syndrome is a mitochondrial disease. Proc Natl Acad Sei USA 96(5): 2141−2146.
  67. Koehler, C.M., Merchant, S., Oppliger, W., Schmid, K., Jarosch, E., Dolfini, L., Junne, T., Schatz, G., and Tokatlidis, K. 1998. Tim9p, an essential partner subunit of TimlOp for the import of mitochondrial carrier proteins. Embo J 17(22): 6477−6486.
  68. Kolesnikova, O., Entelis, N., Kazakova, H., Brandina, I., Martin, R.P., and Tarassov, I. 2002. Targeting of tRNA into yeast and human mitochondria: the role of anticodon nucleotides. Mitochondrion 2(1−2): 95−107.
  69. Kolesnikova, O.A., Entelis, N.S., Mireau, H., Fox, T.D., Martin, R.P., and Tarassov, I.A. 2000. Suppression of mutations in mitochondrial DNA by tRNAs imported from the cytoplasm. Science 289(5486): 1931−1933.
  70. Komiya, T., Sakaguchi, M., and Mihara, K. 1996. Cytoplasmic chaperones determine the targeting pathway of precursor proteins to mitochondria. Embo J 15(2): 399−407.
  71. Koulintchenko, M., Temperley, R.J., Mason, P.A., Dietrich, A., and Lightowlers, R.N. 2006. Natural competence of mammalian mitochondria allows the molecular investigation of mitochondrial gene expression. Hum Mol Genet 15(1): 143−154.
  72. Koulintchenko, M., Konstantinov, Y., and Dietrich, A. 2003. Plant mitochondria actively import DNA via the permeability transition pore complex. Embo J 22(6): 1245−1254.
  73. Krayl, M., Lim, J.H., Martin, F., Guiard, B., and Voos, W. 2007. A cooperative action of the ATP-dependent import motor complex and the inner membrane potential drives mitochondrial preprotein import. Mol Cell Biol 27(2): 411−425.
  74. , U.K. 1970. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4. Nature 227(5259): 680−685.
  75. Laforest, M.J., Delage, L., and Marechal-Drouard, L. 2005. The T-domain of cytosolic tRNAVal, an essential determinant for mitochondrial import. FEBS Lett 579(5): 1072−1078.
  76. Lee, C.M., Sedman, J., Neupert, W., and Stuart, R.A. 1999. The DNA helicase, Hmilp, is transported into mitochondria by a C-terminal cleavable targeting signal. J Biol Chem 274(30): 20 937−20 942.
  77. Li, K., Smagula, C.S., Parsons, W.J., Richardson, J.A., Gonzalez, M., Hagler, H.K., and Williams, R.S. 1994. Subcellular partitioning of MRP RNA assessed by ultrastructural and biochemical analysis .J Cell Biol 124(6): 871−882.
  78. Liu, Q., D’Silva, P., Walter, W., Marszalek, J., and Craig, E.A. 2003. Regulated cycling of mitochondrial Hsp70 at the protein import channel. Science 300(5616): 139−141.
  79. Ludewig, G. and Staben, C. 1994. Characterization of the PNT1 pentamidine resistance gene of Saccharomyces cerevisiae. Antimicrob Agents Chemother 38(12): 2850−2856.
  80. Mahapatra, S., Ghosh, S., Bera, S.K., Ghosh, T., Das, A., and Adhya, S. 1998. The D arm of tRNATyr is necessary and sufficient for import into Leishmania mitochondria in vitro. Nucleic Acids Res 26(9): 2037−2041.
  81. Mahata, B., Mukherjee, S., Mishra, S., Bandyopadhyay, A., and Adhya, S. 2006. Functional delivery of a cytosolic tRNA into mutant mitochondria of human cells. Science 314(5798): 471−474.
  82. Mahata, B., Bhattacharyya, S.N., Mukherjee, S., and Adhya, S. 2005. Correction of translational defects in patient-derived mutant mitochondria by complex-mediated import of a cytoplasmic tRNA. J Biol Chem 280(7): 5141−5144.
  83. Martin, R., Schneller, J.M., Stahl, A., and Dirheimer, G. 1979. Import of nuclear deoxyribonucleic acid coded lysine-accepting transfer ribonucleic acid (anticodon C-U-U) into yeast mitochondria. Biochemistry 18: 4600−4605.
  84. Martinez-Caballero, S., Grigoriev, S.M., Herrmann, J.M., Campo, M.L., and Kinnally, K.W. 2007. Timl7p Regulates the Twin Pore Structure and Voltage Gating of the Mitochondrial Protein Import Complex TIM23. J Biol Chem 282(6): 3584−3593.
  85. Meier, S., Neupert, W., and Herrmann, J.M. 2005. Conserved N-terminal negative charges in the Tim 17 subunit of the TIM23 translocase play a critical role in the import of preproteins into mitochondria. J Biol Chem 280(9): 7777−7785.
  86. Mesecke, N., Terziyska, N., Kozany, C., Baumann, F., Neupert, W., Hell, K., and Herrmann, J.M. 2005. A disulfide relay system in the intermembrane space of mitochondria that mediates protein import. Cell 121(7): 1059−1069.
  87. Mihara, K. and Omura, T. 1996. Cytosolic factors in mitochondrial protein import. Experientia 52(12): 1063−1068.
  88. Moczko, M., Gartner, F., and Pfanner, N. 1993. The protein import receptor MOM 19 of yeast mitochondria. FEBSLett 326(1−3): 251−254.
  89. Moczko, M., Dietmeier, K., Sollner, T., Segui, B., Steger, H.F., Neupert, W., and Pfanner, N. 1992. Identification of the mitochondrial receptor complex in Saccharomyces cerevisiae. FEBSLett 310(3): 265−268.
  90. Mokranjac, D. and Neupert, W. 2005. Protein import into mitochondria. Biochem Soc Trans 33(Pt 5): 1019−1023.
  91. Mokranjac, D., Popov-Celeketic, D., Hell, K" and Neupert, W. 2005. Role of Tim21 in mitochondrial translocation contact sites. J Biol Chem 280(25): 2 343 723 440.
  92. Mokranjac, D., Paschen, S.A., Kozany, C., Prokisch, H., Hoppins, S.C., Nargang, F.E., Neupert, W., and Hell, K. 2003. Tim50, a novel component of the TIM23 preprotein translocase of mitochondria. EmboJ 22(4): 816−825.
  93. Mokranjac, D., Sichting, M., Neupert, W., and Hell, K. 2003. Timl4, a novel key component of the import motor of the TIM23 protein translocase of mitochondria. Embo J 22(19): 4945−4956.
  94. Mukherjee, S., Bhattacharyya, S.N., and Adhya, S. 1999. Stepwise transfer of tRNA through the double membrane of Leishmania mitochondria. J Biol Chem 274(44): 31 249−31 255.
  95. Neupert, W. and Brunner, M. 2002. The protein import motor of mitochondria. Nat Rev Mol Cell Biol 3(8): 555−565.
  96. , W. 1997. Protein import into mitochondria. Annu Rev Biochem 66: 863−917.
  97. Nunnari, J., Fox, T.D., and Walter, P. 1993. A mitochondrial protease with two catalytic subunits of nonoverlapping specificities. Science 262(5142): 19 972 004.
  98. Onesti, S., Miller, A.D., and Brick, P. 1995. The crystal structure of the lysyl-tRNA synthetase (LysU) from Escherichia coli. Structure 3(2): 163−176.
  99. Paschen, S.A., Waizenegger, T., Stan, T., Preuss, M., Cyrklaff, M., Hell, K., Rapaport, D., and Neupert, W. 2003. Evolutionary conservation of biogenesis of beta-barrel membrane proteins. Nature 426(6968): 862−866.
  100. Pfanner, N. and Geissler, A. 2001. Versatility of the mitochondrial protein import machinery. Nat Rev Mol Cell Biol 2(5): 339−349.
  101. Pfanner, N., Craig, E.A., and Honlinger, A. 1997. Mitochondrial preprotein translocase. Annu Rev Cell Dev Biol 13: 25−51.
  102. , D. 2003. Finding the right organelle. Targeting signals in mitochondrial outer-membrane proteins. EMBO Rep 4(10): 948−952.
  103. Rapaport, D., Neupert, W., and Lill, R. 1997. Mitochondrial protein import. Tom40 plays a major role in targeting and translocation of preproteins by forming a specific binding site for the presequence. J Biol Chem 272(30): 18 725−18 731.
  104. Rehling, P., Brandner, K., and Pfanner, N. 2004. Mitochondrial import and the twin-pore translocase. Nat Rev Mol Cell Biol 5(7): 519−530.
  105. Rep, M. and Grivell, L.A. 1996. MBA1 encodes a mitochondrial membrane-associated protein required for biogenesis of the respiratory chain. FEBS Lett 388(2−3): 185−188.
  106. Rinehart, J., Krett, B., Rubio, M.A., Alfonzo, J.D., and Soll, D. 2005. Saccharomyces cerevisiae imports the cytosolic pathway for Gln-tRNA synthesis into the mitochondrion. Genes Dev 19(5): 583−592.
  107. , D. 1997. Recognition and binding of mitochondrial presequences during the import of proteins into mitochondria. J Bioenerg Biomembr 29(1): 19−27.
  108. Rose, M.D., Winston, F., Hieter, P. 1990. Methods in yeast genetics. A laboratory course manual. Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY.
  109. Rudinger, J., Puglisi, J.D., Putz, J., Schatz, D., Eckstein, F., Florentz, C., and Giege, R. 1992. Determinant nucleotides of yeast tRNA (Asp) interact directly with aspartyl-tRNA synthetase. Proc Natl Acad Sei USA 89(13): 5882−5886.
  110. Ryan, M.T., Muller, H., and Pfanner, N. 1999. Functional staging of ADP/ATP carrier translocation across the outer mitochondrial membrane. J Biol Chem 274(29): 20 619−20 627.
  111. Saint-Georges, Y., Hamel, P., Lemaire, C., and Dujardin, G. 2001. Role of positively charged transmembrane segments in the insertion and assembly ofmitochondrial inner-membrane proteins. Proc Natl Acad Sei USA 98(24): 1 381 413 819.
  112. Salinas, T., Duchene, A.M., Delage, L., Nilsson, S., Glaser, E., Zaepfel, M., and Marechal-Drouard, L. 2006. The voltage-dependent anion channel, a major component of the tRNA import machinery in plant mitochondria. Proc Natl Acad Sei USA.
  113. Salinas, T., Schaeffer, C., Marechal-Drouard, L., and Duchene, A.M. 2005. Sequence dependence of tRNA (Gly) import into tobacco mitochondria. Biochimie 87(9−10): 863−872.
  114. Saracco, S.A. and Fox, T.D. 2002. Coxl8p is required for export of the mitochondrially encoded Saccharomyces cerevisiae Cox2p C-tail and interacts with Pntlp and Mss2p in the inner membrane. Mol Biol Cell 13(4): 1122−1131.
  115. Schneider, A. and Marechal-Drouard, L. 2000. Mitochondrial tRNA import: are there distinct mechanisms? Trends Cell Biol 10(12): 509−513.
  116. , A. 1996. Cytosolic yeast tRNA (His) is covalently modified when imported into mitochondria of Trypanosoma brucei. Nucleic Acids Res 24(7): 12 251 228.
  117. Schneider, A., Martin, J., and Agabian, N. 1994a. A nuclear encoded tRNA of Trypanosoma brucei is imported into mitochondria. Mol Cell Biol 14(4): 23 172 322.
  118. Schneider, A., McNally, K.P., and Agabian, N. 1994b. Nuclear-encoded mitochondrial tRNAs of Trypanosoma brucei have a modified cytidine in the anticodon loop. Nucleic Acids Res 22(18): 3699−3705.
  119. Schneider, A., Oppliger, W., and Jeno, P. 1994. Purified inner membrane protease I of yeast mitochondria is a heterodimer. J Biol Chem 269(12): 8635−8638.
  120. Schneider, H.C., Berthold, J., Bauer, M.F., Dietmeier, K., Guiard, B., Brunner, M., and Neupert, W. 1994. Mitochondrial Hsp70/MIM44 complex facilitates protein import. Nature 371(6500): 768−774.
  121. Schwartz, M.P. and Matouschek, A. 1999. The dimensions of the protein import channels in the outer and inner mitochondrial membranes. Proc Natl Acad Sei USA 96(23): 13 086−13 090.
  122. Sherman, E.L., Go, N.E., and Nargang, F.E. 2005. Functions of the small proteins in the TOM complex of Neurospora crasssa. Mol Biol Cell 16(9): 41 724 182.
  123. Shi, X., Chen, D.H., and Suyama, Y. 1994. A nuclear tRNA gene cluster in the protozoan Leishmania tarentolae and differential distribution of nuclear-encoded tRNAs between the cytosol and mitochondria. Mol Biochem Parasitol 65(1): 23−37.
  124. Sirrenberg, C., Endres, M., Folsch, H., Stuart, R.A., Neupert, W., and Brunner, M. 1998. Carrier protein import into mitochondria mediated by the intermembrane proteins TimlO/Mrsl 1 and Timl2/Mrs5. Nature 391(6670): 912−915.
  125. Sirrenberg, C., Bauer, M.F., Guiard, B., Neupert, W., and Brunner, M. 1996. Import of carrier proteins into the mitochondrial inner membrane mediated by Tim22. Nature 384(6609): 582−585.
  126. Souza, R.L., Green-Willms, N.S., Fox, T.D., Tzagoloff, A., and Nobrega, F.G. 2000. Cloning and characterization of COX 18, a Saccharomyces cerevisiae PET gene required for the assembly of cytochrome oxidase. J Biol Chem 275(20): 14 898−14 902.
  127. Strub, A., Rottgers, K., and Voos, W. 2002. The Hsp70 peptide-binding domain determines the interaction of the ATPase domain with Tim44 in mitochondria. EmboJ21(11): 2626−2635.
  128. Sylvestre, J., Margeot, A., Jacq, C., Dujardin, G., and Corral-Debrinski, M. 2003. The role of the 3' untranslated region in mRNA sorting to the vicinity of mitochondria is conserved from yeast to human cells. Mol Biol Cell 14(9): 38 483 856.
  129. Tan, T.H., Bochud-Allemann, N., Horn, E.K., and Schneider, A. 2002a. Eukaryotic-type elongator tRNAMet of Trypanosoma brucei becomes formylated after import into mitochondria. Proc Natl Acad Sei USA 99(3): 1152−1157.
  130. Tan, T.H., Pach, R., Crausaz, A., Ivens, A., and Schneider, A. 2002b. tRNAs in Trypanosoma brucei: genomic organization, expression, and mitochondrial import. Mol Cell Biol 22(11): 3707−3717.
  131. Tarassov, I. and Entelis, N. 1992. Mitochondrially-imported cytoplasmic tRNALys (CUU) of Saccharomyces cerevisiae: in vivo and in vitro targetting systems. Nucleic Acids Res 20: 1277−1281.
  132. Waizenegger, T., Schmitt, S., Zivkovic, J" Neupert, W., and Rapaport, D. 2005. Miml, a protein required for the assembly of the TOM complex of mitochondria. EMBO Rep 6(1): 57−62.
  133. Waizenegger, Т., Habib, S.J., Lech, M., Mokranjac, D., Paschen, S.A., Hell, K., Neupert, W., and Rapaport, D. 2004. Tob38, a novel essential component in the biogenesis of beta-barrel proteins of mitochondria. EMBO Rep 5(7): 704−709.
  134. Wiedemann, N., Kozjak, V., Chacinska, A., Schonfisch, В., Rospert, S., Ryan, M.T., Pfanner, N., and Meisinger, С. 2003. Machinery for protein sorting and assembly in the mitochondrial outer membrane. Nature 424(6948): 565−571.
  135. Wiedemann, N., Pfanner, N., and Ryan, M.T. 2001. The three modules of ADP/ATP carrier cooperate in receptor recruitment and translocation into mitochondria. Embo J 20(5): 951−960.
  136. Yamamoto, H., Esaki, M., Kanamori, Т., Tamura, Y., Nishikawa, S., and Endo, Т. 2002. Tim50 is a subunit of the TIM23 complex that links protein translocation across the outer and inner mitochondrial membranes. Cell 111(4): 519 528.
  137. Yasukawa, Т., Suzuki, Т., Ishii, N. Ohta, S., and Watanabe, K. 2001. Wobble modification defect in tRNA disturbs codon-anticodon interaction in a mitochondrial disease. Embo J 20(17): 4794−4802.
  138. Yermovsky-Kammerer, A.E. and Hajduk, S.L. 1999. In vitro import of a nuclearly encoded tRNA into the mitochondrion of Trypanosoma brucei. Mol Cell Biol 19(9): 6253−6259.
Заполнить форму текущей работой

Заказал и сдал!