Изыскание средств лечения животных при Т-2-и афлатоксикозе

Актуальность темы

Важное значение в решении проблем животноводства придают созданию качественной кормовой базы. Однако решение этой задачи осложняется тем, что корма часто бывают небезопасными, так как могут загрязняться различными экотоксикантами как техногенного, так и природного происхождения. Среди последних все большее внимание привлекают микотоксины.

Микотоксины — вторичные, структурно различные метаболиты грибов, которые растут на разнообразных продуктах питания и корма, потребляемых ^ животными и человеком. Заболевания, возникающие в результате потребления последними контаминированных микотоксинами продуктов и кормов, классифицируются как микотоксикозы. Первые сообщения об алиментарных токсикозах, обусловленных микроскопическими грибами и продуцируемыми ими микотоксинами, появились более 100 лет назад (Воронин Н.С., 1890).

Сейчас количество микотоксинов по разным данным составляет от 200 до 400 видов, и оно, вероятно, будет возрастать за счет установления этиологии новых микотоксикозов.

Учитывая, что микотоксины, помимо общетоксического действия, обладают мутагенными, тератогенными и канцерогенными свойствами, а также существенно влияют на иммунный статус млекопитающих и птиц, их следует рассматривать как одну из важнейших ветеринарных и медицинских проблем (Тутельян В.А., Кравченко Л. В., 1985; Хмелевский Б. А. и соавт., 1985; Котик А. Н., 1999; Кузнецов А. Ф., 2001; Petska J. et al., 1990; Fernandes A. et al., 1990; Oswald I. et al., 1998).

Степень распространения микотоксинов очень высокая. География их охватывает страны всех континентов. Контаминации микотоксинами Ъ подвержены все основные продукты питания, корма, продовольственное сырье, а усиление торговых связей между различными странами в значительной степени способствует распространению микотоксинов и, как следствие, микотоксикозов, и есть все основания полагать, что эта проблема является глобальной.

На современном этапе, учитывая многолетние данные по микотоксикозам, наиболее значимы заболевания, вызываемые афла-, фузарио-, охратоксинами (Тремасов М.Я., 2002; Жуленко В. Н. и соавт., 2002; Pitt J., 2000). Они наиболее широко распространены в объектах ветнадзора и обладают сильнейшим негативным действием на организм животных.

Важной проблемой для ветеринарной микотоксикологии является терапия микотоксикозов животных. Это, прежде всего, связано, с одной стороны, с отсутствием эффективных специфических средств профилактики и лечения отравлений животных ядами микроскопических грибов, с другой стороны — со сложностью разработки антидотов, которые в настоящее время не существуют.

У исследователей при лечении микотоксикозов интерес вызывают фармакологические препараты и биологически активные вещества, способствующие быстрому выведению из организма токсинов, повышающие устойчивость организма, а также средства симптоматической терапии.

Учитывая вышеизложенное, поиск эффективных, технологичных препаратов и методов, обладающих способностью защитить организм животных от воздействия микотоксинов, сохранить качество продуктов питания животного происхождения, является актуальной проблемой.

Работа является частью комплексных заданий НИР по теме «Разработка мероприятий по ликвидации в очагах поражения последствий воздействия экотоксикантами» (№ гос. регистрации 1 200 202 603).

Основной целью наших исследований явился отбор средств — потенциальных антидотов микотоксиновоценка их эффективности при.

раздельном и сочетанном воздействии Т-2 токсина и афлатоксина Вь разработка и апробация схемы лечения животных при микотоксикозах.

На решение были поставлены следующие задачи:

1. Провести отбор средств — потенциальных антидотов микотоксинов из веществ различных химических групп.

2. Оценить сорбционные свойства сорбентов различных групп в отношении Т-2 токсина и афлатоксина Bj.

3. Изучить эффективность применения аминазина и зоокарба при раздельном и совместном воздействии Т-2 — токсина и афлатоксина Вь учитывая изменения клинических, некоторых гематологических и биохимических показателей, перекисного окисления липидов, симпато-адреналовой и сердечно-сосудистой систем.

4. Разработать схему лечения животных при микотоксикозах и провести ее апробацию.

Научная новизна.

Впервые проведен скрининг потенциальных антидотов микотоксинов. Отобраны средства, оказывающие определенный защитный эффект при микотоксикозах животных. С использованием данных гематологических и электрокардиографических показателей, состояния симпато-адреналовой системы, перекисного окисления липидов показана эффективность применения углеродного энтеросорбента зоокарба и нейролептика аминазина при раздельном и сочетанном Т-2-, афлатоксикозах. С учетом результатов проведенных исследований разработана схема лечения животных при микотоксикозах, успешно апробированная в лабораторных и производственных условиях.

Практическая ценность работы. Выявленные изменения клинических, гематологических и электрокардиографических показателей, данных липидного обмена, состояния симпато-адреналовой системы при '4 микотоксикозах на фоне применения аминазина и зоокарба позволяют использовать последние для лечения животных при отравлении к микотоксинами.

Разработана схема лечения животных при отравлении микотоксинами. Результаты исследований использованы при составлении нормативно-технических документов, утвержденных директором ФГНУ ВНИВИ -«Методические указания по санитарно-микологической оценке и улучшению качества кормов» (19.11.2003), начальником ГУВ КМ РТ — «Методические рекомендации по борьбе с микотоксикозами животных в Республике Татарстан» (18.11.2002), руководителем управления реализации целевых программ в животноводстве МСХ и продовольствия Самарской областир «Методические рекомендации по борьбе с микотоксикозами животных в Самарской области» (1.03.2004).

Апробация работы. Основные материалы диссертационной работы доложены и одобрены на научных сессиях ФГНУ ВНИВИ (г.Казань) по итогам НИР за 2001;2003 гг, ежегодных республиканских, межрегиональных, международных научно-практических конференциях по актуальным проблемам ветеринарии и зоотехнии (Троицк, 2002; Воронеж, 2002; Ульяновск, 2003; Владимир, 2003; Казань, 2003, 2004; Чебоксары, 2004; Москва, 2004).

Публикации. По результатам исследований опубликовано 12 работ.

На защиту выносятся:

— результаты скрининга средств — потенциальных антидотов микотоксинов животных;

— сорбционные свойства бентонита, цеолита и зоокарба in vitro;

— эффективность лечения животных при остром и подостром раздельном и совместном воздействии Т-2- и афлатоксина Вь.

— схема лечения животных при микотоксикозах.

Объем и структура диссертации. Материалы диссертации изложены Л1 на 191 странице, компьютерного текста и включают введение, обзор литературы, материалы и методику исследований, результаты собственных исследований, обсуждение результатов исследований, выводы, практические предложения, список использованной литературы, приложения. Работа иллюстрирована 46 таблицами, 8 рисунками. Список использованной литературы содержит 243 источника, в том числе 119 иностранных.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 1.1. Т-2 токсикоз.

В настоящее время известно около 250 токсигенных грибов, которые образуют огромное количество разнообразных микотоксинов, наносящих серьезный экономический ущерб в результате снижения продуктивности и падежа сельскохозяйственных животных, потребляющих загрязненные корма. В Российской Федерации этот ущерб составляет в среднем 400 миллионов рублей, а в годы с благоприятными условиями для развития токсигенных грибов может увеличиться до 1,0−1,2 миллиардов рублей (Монастырский О.А., Коган Ю. Д., 2001).

В ряде монографических работ (Билай В.И., Пидопличко Н. М., 1970; Микотоксины, 1982 (Женева) — Mycotoxins, 1984 (Амстердам)) обобщены многочисленные оригинальные публикации, посвященные главным образом изучению распространения токсинообразующих грибов и их токсигенного потенциала, химической природы микотоксинов, методов их определения и биологических свойств. В последнее десятилетие значительно увеличилось число сообщений, затрагивающих проблему профилактики микотоксикозов, и в меньшей степени их лечение.

В естественных условиях наиболее многочисленны случаи афлатоксикозов, трихотеценовых токсикозов, охратоксикозов животных (Петрович С.В., 1991; Жуленко В. Н. и соавт., 2002; Тремасов М. Я., 2002; Fernandes A. et al., 1990; Pitt J., 2000), в меньшей степени распространены заболевания, вызываемые другими микотоксинами.

Среди трихотеценовых микотоксинов наибольшая степень контаминирования отмечена дезоксиниваленолом и Т-2 токсином (Smith Т., et al., 2001). Следует выделить, что Т-2 токсин вызывает больший интерес ввиду своей чрезвычайно высокой патогенной активности.

Т-2 токсин — один из представителей многочисленной группы трихотеценовых микотоксинов, обладающий сильнейшим токсическим действием (Тутельян В.А., Кравченко Л. В., 1985; Хмелевский Б. А. и соавт., 1985; Pestka J., Bondy G., 1990; Oswald I., Comera C., 1998; Котик A.H., 1999; Кузнецов А. Ф., 2001; Тремасов М. Я., 2002). Широко распространен в природе, особенно в средней полосе Российской Федерации, где наиболее благоприятные климато-географические условия для развития основного гриба-продуцента Т-2 токсина — Fusarium sporotrichiella. Наиболее важным условием синтеза токсина является влажность и химический состав среды. Меньшее значение отводится температурному фактору, так как интенсивный токсикогенез отмечается и при низких (4−6 °С), и при высоких (26−28 °С) температурах, как в естественных, так и искусственно созданных условиях (Тремасов М.Я. и соавт., 2000а).

С момента первых сообщений об алиментарных токсикозах, обусловленных поражением пищевых продуктов и кормов микроскопическими грибами, продуцирующими трихотеценовые микотоксины, изучение биологического действия последних значительно углубилось.

Характерной картиной отравления Т-2 токсином является клиника АТА — алиментарной токсической алейкии, заболевания, отмечавшегося в СССР в середине XX века, вызываемое потреблением пищи, загрязненной грибом F. sporotrichiella. Это типичный микотоксикоз, характеризующийся очаговостью, сезонностью, связью с потреблением корма, загрязненного микроскопическими грибами (Саркисов А.Х., 1954). Заболевание характеризуется явлениями общего токсикоза (слабость, недомогание), рвотой, диареей, прогрессивной лейкопенией, гранулоцитопенией и умеренным лимфоцитозом. Нарушения крови, характерные для 1-й и 2-й стадий, усугубляются в 3-ей. Смертность при АТА достигает 60% (Билай В.И., Пидопличко Н. М., 1970).

При рассмотрении клинической картины трихотеценовых микотоксикозов выделяют следующие наиболее часто встречающиеся симптомы: отсутствие аппетита, отказ от корма, рвотаразвитие геморрагического синдроманарушение функций желудочно-кищечного трактадерматотоксический эффект (воспалительные изменения, некрозы, отеки) — лейкопения, тромбоцитопения, анемия, в частности при подостром и хроническом течении токсикозавыраженные деструктивные изменения кроветворных и иммунокомпетентных органов (Тутельян В.А., Кравченко Л. В., 1985).

В опытах на кошках (внутривенно Т-2 токсин в дозе 2 мг/кг) отмечено достоверно значимое снижение артериального давления и пульсового давления, частота сердечных сокращений значимых изменений не претерпевала. Острочить развитие микотоксинового шока позволила трансфузия плазмы или цельной крови. Наблюдаемая при микотоксиновом шоке гиповолемия и полицитемия является результатом плазмореи и внутривенных кровотечений (Borison Н. et al., 1991).

В той или иной степени у большинства животных отмечаются признаки поражения центральной нервной системы. Так, у лабораторных животных, телят наблюдаются нарушения координации движений, парезы задних конечностейу овец — тремор, ослабление тактильной и болевой чуствительности, атаксия и частичная потеря зренияу кур — опущенность крыльев, вытягивание головы, малоподвижность, принятие неестественных поз (Рухляда В.В., 1982; Рухляда В. В., 1983; Уразаев А. Н., Сметов П. К., 1996; Ображей А. Ф., 1997).

Характерные признаки поражения центральной нервной системы, вероятно, связаны с избытком в мозге серотонина, синтезируемого из триптофана. Сергейчевым А. И. (1998) при интоксикации овец Т-2 токсином в дозе ЛД50 отмечено увеличение количества серотонина в тканях среднего мозга, коре мозга и сердце, при одновременном снижении его содержания в легких. Максимальное увеличение, по сравнению с фоновым, в течение 12 часов интоксикации выявлено в коре мозга — в 47,3 раза. Т-2 токсин может ингибировать синтез протеинов печени (Melone J., Smith Т., 1995; Смит Т., 2002), что приводит к гипераминоацидемии — избытку свободных аминокислот, увеличению концентрации в мозге триптофана, и в конечном итоге серотонина (McDonald Е. et al., 1988).

Постоянным симптомом фузариотоксикозов сельскохозяйственных животных является рвота. Предполагают, что Т-2 токсин стимулирует триггерные зоны продолговатого мозга, тем самым, вызывая рвоту (Тутельян В.А., Кравченко Л. В., 1985).

Наряду со рвотой у крыс, мышей, кошек, кроликов, цыплят, овец и крупного рогатого скота постоянно встречается диарея (Рухляда В.В., 1985; Ueno Y., 1985; SchieferH., 1986).

Для Т-2 токсина характерны дерматотоксические свойства. Например, при остром и подостром Т-2 токсикозе у свиней и овец наблюдаются эрозии и некрозы кожи губ и слизистых оболочек ротовой полости и глотки, у курнекротические поражения слизистой ротовой полости, у крыс и мышей — эксудативные дерматиты и гиперкератоз кожи вокруг рта, некрозы слизистой оболочки ротовой полости (Рухляда В.В., 1983; Yarom R. et al., 1987; Ображей А. Ф., 1997).

При гистологическом исследовании органов кроликов после субхронической интоксикации Т-2 токсином найдены дегенеративные изменения в печени и фиброз, геморрагии в сердце, а также нефроз (Azyz Nady Н. et al., 1995).

В молекулярном воздействии микотоксинов выделяют три важнейших механизма: 1) ингибирование синтеза протеина, ДНК и РНК и образование аддуктов ДНК- 2) нарушение структуры мембран и инициирование липидного переокисления- 3) запуск запрограммированной клеточной гибели (апоптоза) — непосредственно воздействуя на специфические ферменты, либо через изменение баланса антиоксидант/прооксиданты в клетке, в частности, путем снижения содержания глютатиона (Сурай П., 2002).

Многие исследователи считают, что в основе биохимического механизма действия трихотеценовых микотоксинов лежит их ингибирующее действие на биосинтех белка (Ueno Y., 1980; Oldham J. et al., 1980; Тутельян B.A., Кравченко JI.B., 1981; Rosenstein Y., Lafarge-Frayssient C., 1983).

Т-2 токсин относится к трихотеценовым микотоксинам, подавляющим инициацию трансляции (Ueno Y. et al., 1983).

Имеются данные о действии трихотеценовых микотоксинов на белковый обмен как на модельных системах, так и у различных видов животных.

В частности, инкубация культуры фибробластов человека в течение 1 часа с Т-2 токсином в концентрации от 0,006 до 2070 мкг/мл приводила к подавлению синтеза ДНК (Agrelo С., Schoental R., 1980). Почти полностью подавлялся синтез ДНК и белка при инкубировании в течение 4 часов фибробластов человека и Т-2 токсина в дозе ЛД5о (Oldham J. et al., 1980). Еще более значимые повреждения ДНК наблюдаются в лимфоидных клетках (Lafarge-Frayssient С. et al., 1980).

Т-2 токсин вызывает неспецифическое ингибирование синтеза всех белков митохондрий на 50% (Расе J. et al., 1988). По сообщению Munsch N. и Muller Werner Е. (1980) Т-2 токсин ингибирует активность а-ДНК-полимераз и дезоксинуклеотидилтрансфераз.

При введении Т-2 токсина у крыс в печени развивались постепенно нарастающие повреждения белоксинтезирующего аппарата гепатоцитов — деструкция мембран шероховатого эндоплазматического ретикулума и уменьшение числа рибосом, сопровождающиеся прогрессивным падением активности большинства ферментов (Agrelo С. et al., 1980).

При введении крысам в течение 4 дней указанного трихотецена в дозе 1,5 мг/кг происходило снижение прироста массы тела на 50% и увеличение массы печени. Содержание в последней ДНК и белка снижалось, в то время как содержание РЖ достоверно не изменялось (Suneja S. et al., 1983).

У телят при поступлении Т-2 токсина в дозе 0,5 мг/кг в течение 28 дней уменьшалось содержание общего протеина, альбумина, а-, Pi-, и Рг-глобулинов, концентрация у-глобулинов не изменялась (Mann D. et al., 1983).

При острой интоксикации овец отмечалось снижение содержания общего белка, р-глобулина, возрастание уровня а-глобулина, уровень у— глобулина вначале увеличивался, а затем снижался (Рухляда В.В., 1983).

Снижение общего белка сыворотки крови наблюдали при остром Т-2 токсикозе у свиней (Рухляда В.В., 1985). Одновременно увеличивалось содержание а-, Рглобулинов, уменьшалось количество альбумина.

Наряду с подавлением белкового синтеза в экспериментах наблюдали и угнетение синтеза ДНК. Это действие Т-2 токсина усиливалось в смеси с другими трихотеценовыми микотоксинами (Tajima О. et al., 1998).

Все возрастающее внимание в механизме действия Т-2 токсина уделяют апоптотическим повреждениям клеток, вызываемым этим микотоксином при введении в основном в сублетальных дозах. Апоптоз отличается от некроза и характеризуется конденсацией цитоплазмы, утратой микроворсинок мембран и фрагментацией хроматина ДНК. Происходит нарушение трансмембранного потенциала митохондрий. Это явление имеет место в течение 30 минут, иногда длится в течение одного часа, оно сопровождается конденсацией митохондрий. Это явление характерно как для апоптоза, так и для состояния некроза, однако морфологически эти изменения различны. При апоптозе происходит ультраструктурное изменение митохондрий (Okumura Н. et al., 1998). В исследованиях Shinozuka J. et al. (1997) ранние ультраструктурные изменения в лимфоцитах характеризовались сокращением клеточных телец и конденсацией хроматина ядра уже через 3 часа после введения микотоксина 10 мг/кт per os. Фрагментация ДНК наблюдалась через 9 часов. В селезенке эти изменения наблюдались несколько позднее. В печени индукция апоптотических клеточных повреждений наблюдалась через 2 часа после введения Т-2 токсина в дозе 2,5 мг/кг (Ihara Т. et al., 1997). Но за счет фагоцитирования апоптотических тел купферовскими клетками такие повреждения здесь не обнаруживались уже через 12 часов. Ими же изучен апоптоз, вызываемый Т-2 токсином, в кроветворных органах и криптах кишечных эпителиоцитов у мышей (Li G. et al., 1997; Shinozuka J. et al., 1998). В первом случае в костном мозге и красной пульпе обнаружили значительную бедность тканей клетками, что доказывает и многие другие исследования, например Aziz Nady Н. et al. (1995). В костном мозге число миелоцитов значительно уменьшено из-за потери незрелых гранулоцитов, эритробластов и лимфоцитов. Токсичность Т-2 токсина для предшественников клеток крови также показана и в других исследованиях (Rio В. et al., 1997). В сохранившихся в костном мозге и красной пульпе клетках обнаружился пикноз и кариорексис. В криптах кишечного эпителия обнаруженные электронной микроскопией мертвые клетки характеризовались сокращением тела клетки и конденсацией ядерного хроматина, часто вдоль ядерной мембраны.

Действие Т-2 токсина, как и некоторых других микотоксинов, в живом организме вызывает серьезные деструктивные изменения в кроветворных и иммунокомпетентных органах. Многочисленными исследованиями показано, что органами-мишенями Т-2 токсина являются костный мозг, селезенка, вилочковая железа, лимфоидная ткань, а у птиц еще и фабрициева сумка (Котик А.Н., Труфанова В. И., 1977; Кравченко JI.B. и соавт., 1983; Красников Г. А. и соавт., 1992; Oswald I., Comera С., 1998; Дерягина В. П., Кравченко Л. В, 2001).

Изучения действия трихотеценов показывают уменьшение хемотаксиса и фагоцитоза различных нейтрофилов и макрофагов (Buening G. et al., 1982; Gerberic G., Sorenson W., 1984; Yarom R., et al., 1984; Niyo K. et al., 1988). Было продемонстрированно, что несмотря на ингибирующий эффект трихотеценов на синтез белка, происходит увеличение in vitro экспрессии IL.

2, IL-1 в лимфоцитах и макрофагах, соответственно (Shoental R. et al., 1979; Holt P. et al., 1988).

При Т-2 микотоксикозе многие авторы отмечают изменение активности ферментов в сыворотке крови и микросомах печени. Так при острой интоксикации Т-2 токсином крыс (1/3 ЛД50) отмечено снижение активности аспартатаминотрансферазы, аланинаминотрансферазы и щелочной фосфатазы в микросомах печени на 66, 71 и 60% соответственно и одновременно повышение их активности в сыворотке крови (Jovanovic D. et al., 1992). Уменьшение активности щелочной фосфатазы, а также большинства лизосомных ферментов при введении внутрь Т-2 токсина в различных концентрациях обнаружили также Авреньева Л. И. и соавт. (1983), Кравченко Л. В., Котик А. Н. (1984), Кравченко Л. В. и соавт. (1983), Aziz Nady Н. et al. (1995). Вероятно падение активности щелочной фосфатазы в сыворотке крови является результатом повреждения Т-2 токсином эпителиальных клеток тонкой кишки — одного из основных источников фермента в сыворотке крови (Тутельян В.А., Кравченко Л. В., 1985).

Существенное воздействие Т-2 токсин оказывает на гемопоэз и гемостаз. В обзоре Parent-Massin D. и Parchment R. (1998) Т-2 токсин и другие трихотецены отнесены к категории микотоксинов, для которых гематотоксическое действие, вероятно, является основным. Афлатоксин Bi и охратоксин, А классифицируются как микотоксины, оказывающие патогенное действие на систему крови, но основная токсическая реакция в патологии все же не гематологическая.

Характерным симптомом Т-2 токсикоза являются гематологические изменения, проявляющиеся, главным образом, как тромбоцитопения и лейкопения. У больных возникает быстроразвивающиеся нарушения свертываемости крови. DeLoach J. et al. (1989) на основании изучения гемолитического эффекта Т-2 токсина утверждают, что эритроциты различных видов животных (свиней, гвинейских свиней, кроликов, крыс, мышей, лошадей, собак и человека) поражаются различными концентрациями Т-2 токсина. Напротив, некоторые виды устойчивы к гемолитическому действию токсина, включая овец, коз, коров, оленей и буйволов. Данные подтверждают гипотезу, что важный признак этих жвачных то, что оболочка эритроцитов содержит очень мало или не содержит фосфатидилхолина.

Т-2 вызывает гемолитическое действие на эритроциты крыс в концентрациях равных 200 и 250 мкг/мл (Rizzo A. et al. 1992). В дозе 130 мг/мл лизиса не имелось. Добавление ингибиторов перекисного окисления липидов в среду инкубации уменьшило степень гемолиза. Rizzo A. et al. (1992) предложили 3 возможных механизма для объяснения результатов гемолиза. Первая, проникновение токсина в жировую оболочку, вторая, взаимодействие токсина с мишенью в клеточной мембране, и третья, перекисное окисление липидов освобожденными свободными радикалами. Schoental R., Gibbard S. (1979) обнаружили повышенное выделение порфирина у крыс после введения Т-2 токсина в дозе ЛД5о. Они предположили, что это является результатом подавления синтеза гемоглобина. Т-2 токсин вызывал уменьшение уровня гемоглобина и гематокрита у мышей после воздействия в дозе 10 мкг/кг массы тела (Velazco V. et al., 1996). Включение 59Fe в циркулирующие эритроциты мышей значительно ингибировалось присутствием Т-2 токсина даже в низких дозах (1/10 ЛД5о). По сообщениям Faiter G., Godoy Н. (1991), напротив, не обнаружено каких-либо изменений в уровне 59Fe в крови. Работы Rio В. et al. (1997) по эритропоэзу человека показали, что трихотецены не воздействуют на синтез отдельных порфиринов, гемоглобина, или синтез белка в эритробластах.

Лейкопения встречалась после воздействия Т-2 токсина у кошек (Sato N. et al., 1975; Bergers W. et al., 1987), мышей (Sato N. et al., 1978), крыс (Yarom R. et al., 1984aBergers W. et al., 1987), кроликов (Niyo K. et al., 1988) и свиней (Rotter В. et al., 1994). Yarom R. et al. (19 846) инкубировали лейкоциты человека в присутствии различных концентраций Т-2 токсина. В присутствии 10 нг токсина на 106 клеток (10 мг/106) примерно 50% лейкоцитов было разрушено.

Гематологический анализ у крыс, мышей и кошек после воздействия одиночной дозой Т-2 показал быстрое увеличение уровня циркулирующих белых клеток крови. Напротив, повторное введение трихотеценов несколько уменьшало число циркулирующих белых клеток крови (Ueno Y., 1983). Эти работы показали, что Т-2 токсин первично воздействует на гематологические параметры и параметры коагуляции. Для домашней птицы, лабораторных животных, собак и кошек, главным в гематологической реакции на воздействие токсина, является то, что она включает в себя не только уменьшение числа эритроцитов и тромбоцитов, но также еще более заметное уменьшение белых клеток крови (Gentry Р., 1989). У мышей как одиночное, так и повторное введение Т-2 токсина вызывали лейкоцитоз и последующую лейкопению (Sato N. et al., 1978). Интоксикация птицы скармливанием кормов, загрязненных Т-2 токсином, характеризовалась коагулопатией, что обуславливалось дефицитом активности фактора VII и протромбин-зависимой активности фибриногена (Doerr J. et al., 1981). Считают, что в основе гемморагического синдрома лежит вызванное Т-2 токсином снижение свертываемости крови.

Yarom R. et al. (1984а) считают, что одной из возможных причин гемморагического синдрома является нарушение проницаемости мембран тромбоцитов и подавление реакции их агрегации.

Sato et al. (1975, 1978) сообщили, что Т-2 токсин вызывал повреждения в костном мозгу кошек и гипоплазию у мышей.

Т-2 токсин блокировал эритропоэз у мышей, и эту токсичность наблюдали после прибавления к кормам токсина в концентрации в пределах 10 ррш. После 2 недель, число красных клеток крови уменьшилось на 36%, и после 6 недель на 45%. Напротив, тканевой эритропоэз, показал признаки 4 регенерации к 6−8 неделе. Ингибиторный эффект Т-2 токсина на эритропоэз у мышей обратимый и зависит от состава рациона (Hayes М., Schiefer PL, 1990). Воздействие на мышей Т-2 токсином в дозе 0,3 мг/кг вызывало уменьшение в количестве предшественников моноцитов спустя 24−72 ч (Faifer G. et al., 1992). Авторы отмечают, что это уменьшение заменялось увеличенной кроветворной реакцией у мышей через 96 ч после одиночного введения.

Smith R. (1991) изучил состояние клеток костного мозга в дозе Т-2 токсина равной 1,75 мг/кг, которая явилась миелотоксичной. Velazco V. et al. (1996) изучили действие 2 мг/кг Т-2 токсина на мозговой и селезеночный эритропоэз у мышей и определили включение 59Fe. Результаты показали, что Т-2 токсин вызывал обратимые повреждения в селезенке, где эритропоэз встречался у взрослых мышей, и был причиной необратимых повреждений в костном мозге мышей, кроме мышей с удаленной селезенкой.

Di Ninno V. et al. (1985) оценили in vitro действие 400 нг Т-2 токсина на лимфоидные клетки мышей. Они наблюдали, что клетки костного мозга были более устойчивы к токсину, чем клетки тимуса, селезенки и перитонеальные клетки. После 6 часов инкубации они обнаружили, что 50% клеток костного мозга выживали. Dugala R. et al. (1994) изучили действие Т-2 токсина на гематопоэтические предшественники мышей, используя 2 подхода. В первом случае, мыши были подвергнуты воздействию Т-2 токсина, и затем полученные кроветворные предшественники были культивированы после соответствующей обработки. При другом подходе, кроветворные предшественники были культивированы из мышей, in vivo не подверженных воздействию Т-2 токсина. Они наблюдали значительную миелотоксичность Т-2 токсина in vitro, которая была равнозначна при обоих способах получения и дальнейшего культивирования кроветворных предшественников.

Широкое иммунодепрессивное действие микотоксинов на клеточные и гуморальные иммунные реакции проявляется уменьшением устойчивости организма к инфекционным болезням. Например, неоднократные воздействия трихотеценового Т-2 токсина увеличивают чувствительность мышей к Mycobacterium bovis, Salmonella typhimurium, Listeria monocytogenes, Staphylococcus aureus и герпесвирусной инфекции типа 1 (Tai J., Petska J., 1990; Vidal D.R., 1990). Подобно, Т-2 токсин уменьшает устойчивость кроликов к болезни, вызываемой Aspergillus fumigatus, также как цыплят к инфекциям, вызываемым Cryptosporidium baileyi (Bekesi L. et al., 1997) и видами Salmonella (Boonchuvit B. et al., 1975). Другие изучения показали, что Т-2 токсин в дополнении к уменьшению ответной реакции организма на инфекционные болезни, может подавлять опухолево-защитные механизмы и ухудшать контроль организмом роста опухолевых клеток (Schoental. R. et al., 1979; Corrier D., 1991).

Сообщалось, что модулирующее действие Т-2 токсина на устойчивость организма к листериозу непосредственно зависит от времени воздействия токсина. Действительно, обработка мышей Т-2 токсином после контрольного заражения Listeria подавляла устойчивость к листериозу, тогда как обработка токсином предшествующая заражению повышала устойчивость к листериозу (Corrier D., 1991). Повышенная устойчивость была связана с увеличением не специфической иммунной реакции, в частности с повышенной миграцией макрофагов, усиленной фагоцитарной активностью и увеличеннием уровня сывороточного амилоидного Р-компонента (SAP) (Ziprin R. et al., 1987). Carray R. и Jonsson P. (1990) также замечали повышенную устойчивость к мастит-вызывающим патогенным организмам, когда мышам вводился Т-2 токсин. В этом случае, устойчивость была связана с увеличенным респераторным взрывом активности макрофагов, еще одного параметра неспецифической защиты.

При оценке потенциальной опасности микотоксинов в целом и Т-2 токсина в частности следует учитывать, что они могут нарушать обмен кальция и его регуляцию, а также вызывают снижение концентрации витаминов А, Е и С (Сергеев И.Н. и соавт., 1990; Красников Г. А. и соавт., 1992).

У Т-2 токсина обнаружены также тератогенные свойства. Так введение его в эмбрион цыплят на 3 день инкубации влияло преимущественно на развитие конечностей и, в меньшей степени, на сердечно-сосудистую систему. При этом, чем больше была воздействующая доза токсина или кратность его введения, тем возникал более широкий и серьезный спектр аномалий. Эмбриотоксическое действие токсина Т-2 у эмбриона цыпленка начиналось с доз мг на эмбрион (Novotna В. et al., 1994).

Важным в изучении токсического действия Т-2 токсина остаются вопросы его метаболизма, распространения и выведения из организма животных. Это связано в том числе и с возможностью использования продуктов вынужденного убоя для пищевых целей.

Основными путями детоксикации Т-2 токсина в организме является его диацетилирование микросомальной карбоксилэстеразой в положении С-4, С-8 и С-5 с образованием более полярных НТ-2 токсина, неосоланиола и/или 4-ацетилнеосоланиола, Т-2 триола и Т-2 тетраола (1 фаза) и их конъюгация с глюкуроновой кислотой осуществляемая микросомальными UDP-глюкоронозилтрансферазами (2 фаза), и дальнейшее выведение с желчью (Garies М. et al., 1986; Тутельян В. А. и соавт., 1994). Сходные пути детоксикации у другого трихотеценового микотоксина — ДОН: восстановление эпоксида с образованием деэпоксипроизводного ДОМ-1 и глюкуронидов ДОН и ДОМ-1 (Кравченко JT.B. и соавт., 1995).

Как уже отмечалось выше выделение Т-2 токсина из организма через свои метаболиты осуществляется и с молоком. В эксперименте, где микотоксин вводился в желудок лактирующим крысам на 3−9 день лактации в дозе 0,5 мг/кг, установлено, что токсический эффект был более выражен у крысят. Проявлялся он лейкоцитозом, лимфопенией, атрофией тимуса, структурными изменениями в селезенке и печени, угнетением пролиферацией тимоцитов (Tiefenbach В. et al., 1993).

После скармливания супоросным свиноматкам (24 мг/сут) на протяжении последней четверти супоросности у новорожденных поросят через 48−72 часа после рождения отмечали появление признаков отравления — слабость, диарею, понижение уровня сахара в крови, коллапс, гибель. При морфологическом исследовании отмечали острый энтерит, дистрофию печени и почек, отек брыжейки, переполнение желудка сгустками молока, жировую инфильтрацию клеток печени, снижение числа лимфоцитов в лимфоидных фолликулах слизистой кишечника, атрофию коры тимуса, а также гиперфункцию надпочечников и щитовидной железы (Vanyi A. et al., 1991).

ВЫВОДЫ.

1. В результате целенаправленного скрининга потенциальных антидотов микотоксина Т-2 отобраны сорбенты зоокарб, цеолит, бентонит, нейролептик аминазин и сочетание антигистаминного препарата димедрол с кортизон ацетатом, которые обеспечили 60−100% сохранность животных, уменьшили признаки интоксикации при использовании их через 1−3 ч после экспериментальной затравки.

2. Экспериментально in vitro и in vivo обосновано использование сорбентов при микотоксикозах. Установлено, что в условиях кислой и нейтральной рН и температуры близкой к температуре желудочно-кишечного тракта углеродный энтеросорбент зоокарб обладает выраженными сорбционными свойствами в отношении Т-2 токсина и афлатоксина Bj.

3. Раздельное и совместное однократное и многократное воздействия Т-2 токсина и афлатоксина Bj сопровождаются изменениями клинических, гематологических и некоторых биохимических показателей крови и деятельности сердечной мышцы. Наиболее выраженно при острой совместной интоксикации у овец возрастает уровень глюкозы и альбуминов в крови — на 24,7 и 24,1% (Р<0,01) соответственно, меньше — количество эритроцитов и лейкоцитов — на 15,0 и 16,4% (Р<0,05). Многократное поступление микотоксинов в дозе 1/5 ЛД50 у животных характеризуется лейкопенией, на ЭКГ — уменьшением вольтажа зубцов на 20,7−25% (Р<0,05-Р<0,01), изменениями формы зубцов и сегментов.

4. Экспериментально доказана эффективность применения энтеросорбента углеродного зоокарба и нейролептика аминазина при раздельном и совместном воздействии Т-2 токсина и афлатоксина Bj в остром и подостром эксперименте на лабораторных (белые крысы) и сельскохозяйственных (овцы) животных. Положительные тенденции при использовании аминазина (5 мг/кг, в/м) и зоокарба (1−2 г/кг, перорально) выявлены в динамике изменений показателей морфологического состава крови, состояния симпато-адреналовой системы, процесса перекисного окисления липидов и электрокардиографических показателей.

5. Разработана схема лечения животных при микотоксикозах, включающая использование мероприятий и средств, направленных на ускорение деградации, выведение токсинов, на поддержание жизнедеятельности организма, усиление и активацию его защитных сил, обеспечивающая сохранность большинства животных. Выбор конкретных элементов схемы зависит от характера и тяжести отравления, вида животных.

6. Использование аминазина и зоокарба при комбинированном поражении лабораторных животных (белые мыши и белые крысы) ионизирующим излучением и Т-2 токсином способствует повышению их выживаемости (на 50−67%), увеличению продолжительности жизни павших животных (на 1,5−2,5 сут) и уменьшению тяжести клинических признаков у пораженных животных.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ.

1. Сочетание нейролептика аминазина и углеродного энтеросорбента зоокарб может быть использовано для лечения животных как при раздельном, так и при совместном поступлении в организм Т-2 токсина и афлатоксина Bi.

2. Мероприятия, составляющие схему лечения животных при микотоксикозах, рекомендуется применять с учетом этиологии заболевания, клинических признаков, сроков и степени тяжести отравления.

3. Результаты исследований использованы при составлении нормативно-технических документов, утвержденных директором ФГНУ ВНИВИ — «Методические указания по санитарно-микологической оценке и улучшению качества кормов» (19.11.2003), начальником ГУВ КМ РТ -«Методические рекомендации по борьбе с микотоксикозами животных в Республике Татарстан» (18.11.2002), руководителем управления реализации целевых программ в животноводстве МСХ и продовольствия Самарской области — «Методические рекомендации по борьбе с микотоксикозами животных в Самарской области» (1.03.2004).