Дипломы, курсовые, рефераты, контрольные...
Срочная помощь в учёбе

Создание новых хроматографических систем для выделения и очистки рекомбинантных белков с хитинсвязывающими доменами

Диссертация: Создание новых хроматографических систем для выделения и очистки рекомбинантных белков с хитинсвязывающими доменами
ДиссертацияПомощь в написанииУзнать стоимостьмоей работы

Целью настоящей работы является разработка новых аффинных сорбентов на основе хитина или хитозана для использовния их в сочетании с хитинсвязывающим аффинным лигандом для очистки рекомбинантных белковподбор и оптимизация хроматографических параметров метода для получения наиболее эффективных результатовисследование условий и механизмов сорбции модельных рекомбинантных белков на полученных… Читать ещё >

Содержание

  • Глава 1. Обзор литературы
    • 1. 1. Хитин, хитоз ан
    • 1. 2. Свойства хитина и хитозана
    • 1. 3. Деполимеризация хитина и хитозана
    • 1. 4. Хитинолитические ферменты
    • 1. 5. Аффинная очистка рекомбинантных белков

Создание новых хроматографических систем для выделения и очистки рекомбинантных белков с хитинсвязывающими доменами (реферат, курсовая, диплом, контрольная)

Рекомбинантные белки получают с использованием ДНК, в структуру которой введен ген другого организма, включая растения или животных, в том числе и человека. Важной особенностью получения рекомбинантных белков является высокая степень экспрессии целевого белка, иногда на несколько порядков превышающая уровень экспресии в клетках родного организама. Последние два десятилетия одновременно с I совершенствованием технологий получения рекомбинантных белков расширялись и области их пременения в медицине и биотехнологии. Рекомбинантные белки уже широко используются в фармацевтике и медицине для лечения заболеваний, получения антител, иммуноферментного анализа или диагностики. Для биотехнологии одной из важнейших стала проблема получения рекомбинантных белков в препаративных количествах и связанные с этим проблемы масштабирования процессов культивации клеточных культур и последующей очистки больших обьемов целевых белков. Увеличивается и спектр использования рекомбинантных белков для научных целей. В первую очередь это получение новых ферментов с еще не известной структурой и свойствами в удобной системе экспрессии и дальнейшая очистка для последующих кристаллографических и физико-химических исследований.

В связи с расширяющимся спектром практического применения возникают и новые требования к качеству, универсальности методов и объемам получения рекомбинантных белков. Для ряда терапевтических применений уже требуются большие количества белка, что ведет к стадии масштабирования. С каждым годом увеличивается и разнообразие получаемых рекомбинантных белков, требующий разработки универсальных систем экспресии и методов очистки. Использование таких универсальных систем позволит снизить стоимость получения и сделать более удобным сам процесс, являющийся зачастую лишь одной из стадий более масштабного исследования или производства. Кроме того в случае применения в медицине или для исследования пространственного строения новых ферментов возникают высокие требования к степени очистки получаемых рекомбинантных белков, требующие совершенствования уже существующих или разработки новых методов постэкспрессионной очистки целевых белков.

В настоящий момент наиболее эффективным и наиболее широко распространенным методом очистки рекомбинантных белков является метод аффинной хроматографии. Аффинная хроматография основывется на уникальном сродстве различных молекулярных единиц друг к другу, нарпимер, фермент — ингибитор, фермент — субстрат, фермент — кофактор. Однако главным недостатком до определенного времени была узкая специфичность таких систем аффинной очистки — каждая система могла использоваться только для очистки лишь одного уникального белка. Разработанный в конце двадцатого века метод использования аффинных меток для очистки позволил преодалеть этот недостаток аффинной хроматографии, сделав ее универсальной. Аффинные лиганды представляют собой полипептидные вставки, встраиваемые в структуру целевого рекомбинантного белка с Сили конца, и имеющие высокое сродство к аффинному сорбенту. Использование лигандов позволяет производить одностадийную высокоэффективную очистку различных целевых белков из сложной смеси, используя при этом одну и ту же систему аффинной хроматографии. Более того в некоторых случаях использование аффинного лигада может способствовать улучшению растворимости целевого белка. Появившаяся одной из первых и до сих пор широко используемая система, использующая гексогистидиновый лиганд в сочетании с металлохелат аффинной хроматографией хотя и оладает целым рядом преимуществ, но и не является универсальной. Данная метка за счет своего малого размера практически не влияет на экспрессию или фолдинг целевого белка, а сам метод очистки является экономичным и удобным в рутинном использовании. Однако и такой вариант имеет ряд своих недостатков, таких как очистка нативных металлзависимых или богатых гистидинами балластных белков клетки продуцента помимо целевого белка. Поэтому на сегодняшний день существует целый ряд коммерческих аффинных лигандов, использующих различные варианты хроматографии и различающихся по своему размеру, свойствам и условиям очистки. Уже разработаны и коммерчески доступны системы очистки, использующие субстратсвязывающие домены в качестве аффинных лигандов. Однако, например, в случае хитинсвязывающих доменов сществует лишь одна дорогостоющая и не являющаяся оптимальной система очистки. Таким образом на сегодняшний день не существует универсальной системы аффинной очистки рекомбинантных белков, исследования в этой области продолжаются.

Целью настоящей работы является разработка новых аффинных сорбентов на основе хитина или хитозана для использовния их в сочетании с хитинсвязывающим аффинным лигандом для очистки рекомбинантных белковподбор и оптимизация хроматографических параметров метода для получения наиболее эффективных результатовисследование условий и механизмов сорбции модельных рекомбинантных белков на полученных сорбентах.

Для достижения поставленной цели предстояло решить следующие задачи:

1. Синтезировать новые аффиные сорбенты на основе хитина или хитозана.

2. Изучить их хроматографические и физических свойства, определить оптимальные условия и материалы для получения сорбентов с требуемыми хроматографическими параметрами.

3. Провести хроматографическое испытание сорбентов, выбрать и оптимизировать хроматографических протоколов очистки рекомбинантных белков со встроенным хитинсвязывающим аффинным лигандом.

4. Ввести различные хитинсвязывающе домены в структуру модельного рекомбинантного белка для определения наиболее подходящего варианта использования в качестве аффинного лиганда.

5. Изучение возможности использования природных трехмерных хитиновых структур в качестве аффинных сорбентов.

6. Исследовать влияние химической структуры аффинного сорбента на сорбцию рекомбинантных белков со встроенным хитинсвязывающим аффинным лигандом.

Выводы.

1. В ходе работы была разработана система аффинной очистки рекомбинантных белков со встроенным хитинсвязывающим лигандом.

2. Разработан ряд оригинальных аффинных сорбентов на основе хитина и хитозана. Определена оптимальная степень сшивки эпихлоргидрином для увеличения механической прочности сорбента.

3. Оптимизированы условия хроматографического протокола очистки рекомбинантных белков.

4. Выделены и охарактеризованы трехмерные хитиновые матрицы из скелетов морских губок. Впервые показана принципиальная возможность использования таких матриц в качестве аффинных сорбентов.

Список работ по теме диссертации.

1.Курек Д. В., Лопатин С. А., Эльдаров М. А., Скрябин К. Г. Хроматографическая очистка рекомбинантных белков с использованием хитинсвязывающего домена как аффинной метки. // Девятая международная конференция «Современные перспективы исследования хитина и хитозана» Ставрополь -2008. -С. 68−70.

2. Курек Д. В., Лопатин С. А., Варламов В. П. Перспективы использования хитинсвязывающих доменов для выделения и очистки рекомбинантных белков методом аффинной хроматографии. // Прикладная Биохимия и Микробиология. -2009. -Т. 45. № 1. -С. 5−13.

3. Kurek D., Lopatin S., Tikhonov Y., Eldarov M., Varlamov V. New chitin based affinitysorbents for purification of recombinant proteins. // 9th International Conference of the European Chitin Society. Венеция -2009. -P. 33.

4. Курек Д. В., Варламов В. П., Эрлих Г. Трехмерные хитиновые матрицы из морских губок и их применение в биотехнологии. // Международная научная конференция по биоорганической химии, биотехнологии и бионанотехнологии, посвященная 75-летию со дня рождения академика Юрия Анатольевича Овчинникова. Москва -2009. -Т. 2. -Р. 124−125.

5. Курек Д. В., Лопатин С. А., Эльдаров М. А., Варламов В. П. Перспективы исследования и применения рекомбинантных белков со встроенным хитинсвязывающим доменом. // Всероссийская научная школа для молодежи «Горизонты нанобиотехнологии». Звенигород -2009. -С. 54−55.

6. Brunner, Е., Ehrlich, Н., Hedrich, R., Hunoldt, S., Kammer, M., Machill, S., Paasch, S., Ruhnow, M., Born, R., Bazhenov, V., Kurek, D., Arnold, Т., Brockmann, S. Chitin-based scaffolds are an integral part of the skeleton of the marine demosponge Ianthella basta. II Journal of Structural Biology, -2009. -V. 168.-P. 539−547.

7. Курек Д. В., Эрлих Г., Варламов В. П. Трехмерные хитиновые матрицы из морских губок — новый перспективный материал для использования в биотехнологии. // Десятая международная конференция «Современные перспективы исследования хитина и хитозана» Нижний Новгород -2010. -С. 35−37.

8. Kurek D.V., Lopatin S.A., Tikhonov V.E., Varlamov V.P., New affinity sorbents for purification of recombinant proteins with the use of chitin-binding domain as an affinity tag. // Progress on chemistry and application of chitin and its derivatives, by Polish Chitin Society, V. XV -2010. -P. 41 — 46.

9. Ehrlich, H., Simon, P., Carrillo-Cabrera, W., Bazhenov, V., Botting, J., lian, M., Ereskovsky, A., Muricy, G., Worch, H., Mensch, A., Born, R., Springer, A., Kummer, К., Vyalikh, D., Molodtsov, S., Kurek, D., Kammer, M., Paasch, S., Brunner, E. Insights into chemistry of biological materials: newly-discovered silica-aragonite-chitin biocomposites in demosponges. // Chemistry of materials -2010. -V. 22 (4). -P. 1462−1471.

10. Ehrlich H., Shiaparelli S., Ereskovsky A., Schupp P., Born R., Worch H., Bazhenov V.V., Kurek D., Varlamov V., Vyalikh D., Kummer К., Sivkov V.V., Molodtsov S.L., Meissner H., Richter G., Steele E., Richter W., Hunoldt S., Kammer M., Paasch S., Krasokhin V., Patzke G., Brunner E. Three dimensional chitin-based scaffolds from Verongida sponges (Demospongiae: Porifera). Part I. Isolation and Identification of Chitin. // International Journal of Biological Macromolecules -2010. -V. 47, p. 132−140.

11. Ehrlich H., Steck E., Han M., Maldonado M., Muricy G., Bavestrello G., Kljajic Z., Carballo J. L., Shiaparelli S., Ereskovsky A., Schupp P., Born R., Worch H., Bazhenov V.V., Kurek D, Varlamov V., Vyalikh D., Kummer К., Sivkov V.V., Molodtsov S.L., Meissner H., Richter G., Hunoldt S., Kammer M., Paasch S., Krasokhin V., Patzke G., Brunner E., Richter W. Three dimensional chitin-based scaffolds from Verongida sponges (Demospongiae: Porifera). Part II. Biomimetic Potential and Applications. // International Journal of Biological Macromolecules -2010. V. 47, p. 141−145.

Благодарности.

Автор благодарит за помощь в проведении исследований и ценные советы сотрудника института элементоорганических соединений имени А. Н. Несмеянова РАН к.х.н. Тихонова В. Е. и сотрудника Центра «Биоинженерия» РАН к.б.н. Эльдарова М.А.

Автор выражает искреннюю признательность за поддержку и внимание сотрудникам лаборатории инженерии ферметов Центра «Биоинженерия» РАН к.х.н. Ильиной A.B., к.х.н. Левову А. Н., к.т.н. Львовой A.A., Бакулину A.B., Зубаревой A.A.

Отдельную благодарность автор хотел бы выразить всем сотрудникам Института биоаналитической химии Технического университета Дрездена (Дрезден, Германия) и лично доктору Герману Эрлиху (Dr. Hermann Ehrlich) за прекрасную возможность учиться и работать с таким интереснейшим объектом, как морские губки.

Автор благодарит программу Erasmus Mundus cooperational programme between Russia and EU 2009 и лично фрау Крузе за организационную и финансовую поддержку во время пребывания и работы в Германии.

Показать весь текст

Список литературы

  1. Muzarelli R.A.A. Chitin. 1977. Oxford: Pergamon Press. P. 309.
  2. Pastor de Abram, A. Quitina у quitosano: obtencion, caracterization у aplicaciones. 2004. Peru: CYTED, P. 291.
  3. B.M., Немцев C.B. Сырьевые источники и способы получения хитина и хитозана. Приведено в «Хитин и хитозан. Получение, свойства и применение» / Под ред. К. Г. Скрябина, Г. А. Вихоревой, В. П. Варламова -М.: Наука, 2002. -С. 346−359.
  4. I. Aranaz, М. Mengibar, R. Harris, I. Panos, В. Miralles, N. Acosta, G. Galed, A. Heras, Functional Characterization of Chitin and Chitosan // Curr. Chem. Biol. -2009. -V. 3. -P. 203−230.
  5. R.G. Boot, G.H. Renkema, A. Strijland, A.J. van Zonneveld, J.M.F.G. Aerts, Purification and characterization of human chitotriosidase, a novel member of the chitinase family of proteins. // J. Biol. Chem. -1995. -Y. 270. -P. 2 625 226 256.
  6. Z. Zhu, T. Zheng, R.J. Homer, Y.K. Kim, N.Y. Chen, L. Cohn, Q. Hamid, J.A. Elias, Acidic mammalian chitinase in asthmatic Th2 inflammation and IL-13 pathway activation. // Science -2004. -V. 304. -P. 1678−1682.
  7. Chitosan per os: from dietary supplement to drug carrier. Eds: Muzzarelli, A.A.R. 2000. Italy: Atec Edizioni, P. 334.
  8. V.K. Mourya, N.N. Inamdar, Chitosan-modifications and applications: Opportunities galore. //React. Funct. Polym. -2008. -V. 68. -P. 1013−1051.
  9. K.V. Harish Prashanth, R.N. Tharanathan, Chitin/chitosan modifications and their unlimited applications potential an overview. // Trends Food Sci. Tech. -2007.-V. 18 -P. 117−131.
  10. T. Kean, M. Thanou, Biodegradation, biodistribution and toxicity of chitosan // Adv. Drug Deliv. Rev. -2010. -V. 62 -P. 3−11.
  11. C.H. Куликов, Ю. А. Тюрин, ДА. Долбин, Р. З. Хайруллин, Роль структуры в биологической активности хитозана. // Вестник Казанского технологического университета -2007. -Т. 6. -С. 10−15.
  12. R. Jayakumar, N. Nwe, S. Tokura, H. Tamura, Sulfated chitin and chitosan as novel biomaterials. // Int. J. Biol. Macromol. -2007. -V. 40 -P. 175−181.
  13. F. Shahidi, J. Kamil, V. Arachchi, Y.-J. Jeon, Food applications of chitin and chitosans. // Trends Food Sci. Tech. -1999. -V. 10. -P. 37−51.
  14. P.K. Dutta, S. Tripathi, G.K. Mehrotra, J. Dutta, Perspectives for chitosan based antimicrobial films in food applications // Food Chem. -2009. -V. 114. -P. 1173−1182.
  15. S.K. Chen, M.L. Tsai, J.R. Huang, R.H. Chen, In Vitro Antioxidant Activities of Low-Molecular-Weight Polysaccharides with Various Functional Groups. // J. Agric. Food Chem. 2009. — V.57. -P. 2699−2704.
  16. K.W. Kim, R.L. Thomas, Antioxidative activity of chitosans with varying molecular weights. // Food Chem. 2007. — V. 101. -P. 308−313.
  17. E. Guibal, Interactions of metal ions with chitosan-based sorbents: a review. // Sep. Purif. Techn.. 2004. — V. 38. -P. 43−74.
  18. A.H. Велешко, И. Е. Велешко, C.A. Кулюхин, JI.B. Мизина, А. Н. Левов,
  19. B.П. Варламов, Взаимодействие радионуклидов с некоторыми функциональными производными хитозана в растворах. // -2009. -Т.51.1. C. 428−433.
  20. К. Kurita, Chitin and Chitosan: Functional Biopolymers from Marine Crustaceans. // Mar. Biotechnol. 2006. — V. 8. -P. 203−226.
  21. N.M. Alves, J.F. Mano, Chitosan derivatives obtained by chemical modifications for biomedical and environmental applications. // Int. J. Biol. Macromol. 2008. — V. 43. -P. 401−414.
  22. C.H. Куликов, Ю. А. Тюрин, P.C. Фассахов, В. П. Варламов, Антибактериальная и антимикотическая активность хитозана: механизмы действия и роль структуры. //Журнал Микробиолог. Эпидемиол. Иммунол. -2009, -Т. 5. -С. 91−97.
  23. C.K.S. Pillai, W. Paul, С.Р. Sharnia, Chitin and chitosan polymers: Chemistry, solubility and fiber formation. // Progr. Polym. Sci. 2009. — V. 34. -P. 641 678.
  24. R.A.A. Muzzarelli, Chitins and chitosans for the repair of wounded skin, nerve, cartilage and bone // Carbohyd. Polym. 2009. — V. 76. -P. 167−182.
  25. Н.Г. Балабушевич, Н. И. Ларионова, Получение и характеристика полиэлектролитных частиц с белком. // Биохимия. 2004. — Т. 69. -С. 930−936.
  26. А.В. Ильина, В. П. Варламов, Ю. А. Ермаков, В. Н. Орлов, К. Г. Скрябин, Хитозан -природный полиме для формирования наночастиц. // Доклады Академии Наук-2008.-Т. 421.-С. 1−3.
  27. V. Dodane, V.D. Vilivalam, Pharmaceutical applications of chitosan. // Pharm. Sci. Technol. To. 1998. -V. 1. -P. 246−253.
  28. M. Amidi, W.E. Hennink, Chitosan-based formulations of drugs, imaging agents and biotherapeutics. // Adv. Drug Deliv. Rev. 2010. — V. 62. -P. 1−2.
  29. A. Mistry, S. Stolnik, L. Ilium, Nanoparticles for direct nose-to-brain delivery of drugs. // Int. J. Pharm. 2009. — V. 379. -P. 146−157.
  30. L.F. Boesel, R.L. Reis, J. San Roman, Innovative approach for producing injectable, biodegradable materials using chitooligosaccharides and green chemistry. // Biomacromol. 2009. — V. l 0. -P. 465−470.
  31. S.-B. Lin, Y.-C. Lin, H.-H. Chen, Low molecular weight chitosan prepared with the aid of cellulase, lysozyme and chitinase: Characterisation and antibacterial activity. // Food Chem. 2009. — V. 116. -P. 47−53.
  32. Y. Xie, J. Hu, Y. Wei X. Hong, Preparation of chitooligosaccharides by the enzymatic hydrolysis of chitosan. // Polym. Degr. Stab. 2009. — V. 10. -P. 1885−1899.
  33. C. Qin, W. Wang, H. Peng, R. Hu, W. Li, Preparation and properties of reduced chitooligomers. // Carbohyd. Polym. 2008. — V. 72. -P. 701−706.
  34. Sh.-B. Lin, Y.-C. Lin, H.-H. Chen, Low molecular weight chitosan prepared with the aid of cellulase, lysozyme and chitinase: Characterisation and antibacterial activity. // Food Chem. 2009. — V. 94. -P. 47−53.
  35. R.A. A. Muzzarelli, W. Xia, M. Tomasetti P. Ilari, Depolymerization of chitosan and substituted chitosans with the aid of a wheat germ lipase preparation. // Enz. Micr. Technol. 1995. — V. 17. -P. 541−545.
  36. A.B. Ильина, В. П. Варламов, Влияние степени деацетилирования на ферментативный гидролиз хитозана препаратом Целловиридин Г20х. // Прикл. Боихим. Микробиол. 2003. — Т. 39. -С. 273−277.
  37. W. Xia, P. Liu, J. Liu, Advance in chitosan hydrolysis by non-specific cellulases. // Bioresource Technol. 2008. — V. 99. -P. 6751−6762.
  38. R. Cohen-Kupiec, I. Chet, The molecular biology of chitin igestion. // Curr. Opin. Biotechnol. -1998. -V. 9. -P. 270−277.
  39. B. Henrissat, G. Davies, Structural and sequence-based classification of glycoside hydrolases. // Curr. Opin. Struct. Biol. 1997. -V. 7. -P. 637−644.
  40. A. Singh, S.I. Kirubakaran, N. Sakthivel, Heterologous expression of new antifungal chitinase from wheat. // Protein Expr. Purif. 2007. — V. 56. -P. 100−109.
  41. S.I. Kirubakaran, N. Sakthivel, Cloning and overexpression of antifungal barley chitinase gene in Escherichia coli. // Protein Expr. Purif. 2007. — V. 52.-P. 159−166.
  42. Y.Arakane, Q. Zhu, M. Matsumiya, S. Muthukrishnan, K.J. Kramer, Properties of catalytic, linker and chitin-binding domains of insect chitinase. // Insect Biochem. Molec. -2003. V. 33. -P. 631−648.
  43. V. Suarez, C. Staehelin, R. Arango, H. Holtorf, J. Hofsteengeand, F. Meins, Substrate specificity and antifungal activity of recombinant tobacco class I chitinases. // Plant Mol. Biol. 2001. — V. 45. -P. 609−618.
  44. V.G.H. Eijsink, G. Vaaje-Kolstad, K.M. Varum, S.J. Horn, Towards new enzymes for biofuels: lessons from chitinase research. // Trends Biotechnol. — 2008. -V. 26. -P. 228−235.
  45. C. Songsiriritthigul, S. Pantoom, A.H. Aguda, R.C. Robinson, W. Suginta, Crystal structures of Vibrio harveyi chitinase A complexed with chitooligosaccharides: Implications for the catalytic mechanism. // J. Struct. Biol. 2008. — V. 162. -P. 491−499.
  46. J.J. Beintema, Structural features of plant chitinases and chitin-binding proteins. // FEBS Lett. 1994. — V. 350. -P. 159−163.
  47. T. Ikegami, T. Okada, M. Hashimoto, S. Seino, T. Watanabe, M. Shirakawa, Solution Structure of the Chitin-binding Domain of Bacillus circulans WL-12 Chitinase Al. // J. Biol. Chem. 2000. — V. 275. -P. 13 654 -13 661.
  48. S. Luschnig, T. Batz, K. Armbruster, M.A. Krasnow, serpentine and vermiform Encode Matrix Proteins with Chitin Binding and Deacetylation Domains that Limit Tracheal Tube Length in Drosophila. // Curr. Biol. -2006. -V. 16. -P. 186−194.
  49. О. Shoseyov, Z. Shani, I. Levy, Carbohydrate binding modules: biochemical properties and novel applications. //Microbiol. Mol. Biol. R. -2006. -V. 70. -P. 283−295.
  50. T. Nakamura, S. Mine, Y. Hagihara, K. Ishikawa, T. Ikegami, K. Uegaki, Tertiary structure and carbohydrate recognition by the chitin-binding domain of a hyperthermophilic chitinase from Pyrococcus furiosus. II J. Mol. Biol. -2008.-V. 381.-P. 670−680.
  51. A.B. Boraston, D.N. Bolam, H.J. Gilbert, G.J. Davies, Carbohydrate-binding modules: fine-tuning polysaccharide recognition. // Biochem. J. -2004. -V. 382. -P. 769−781.
  52. N.V. Raikhel, H.-I. Lee, W.F. Broekaert, Structure and functions of chitin-binding proteins. // Annu. Rev. Plant Physiol. Plant Mol. Biol. -1993. -V. 44. -P. 591−615.
  53. Д.В. Курек, C.A. Лопатин, В. П. Варламов, Перспективы использования хитинсвязывающих доменов для выделения и очистки рекомбинантных белков методом аффинной хроматографии. // Прикл. Биохим. Микробиол. 2−009. -V. 45, -Р. 5−13.
  54. L. Chamoy, М. Nicolai, J. Ravaux, В. Quennedey, F. Gaill, J. Delachambre, Anovel chitin-binding protein form the vestimentiferan Riftia pachyptila interacts specifically with P-chitin. // J. Biol. Chem. -2001. -V. 276. -P. 80 518 058.
  55. T. Ikegami, T. Okada, M. Hashimoto, S. Seino, T. Watanabe, M. Shirakawa, Solution structure of chitin-binding domain of Bacillus circulans WL-12 Chitinase Al. //J. Biol. Chem. -2000. -V. 275. -P. 13 654−13 661.
  56. M. Alam, T. Mizutani, M. Isono, N. Nikaidou, T. Watanabe, Three Chitinase Genes (chiA, chic and chiD) Comprise the Chitinase System of Bacillus circulans WL-12. // J. Ferment. Bioeng. -1996. -V. 82. -P. 28−36.
  57. T. Toratani, Y. Kezuka, T. Nonaka, Y. Hiragi, T. Watanabe, Structure of full-length bacterial chitinase containing two fibronectin type III domains revealed by small angle X-ray scattering. // Biochem. Biophys. Res. Comm. -2006. -V. 348.-P. 814−818.
  58. S. Graslund, P. Nordlund, J. Weigelt, et al., Protein production and purification. // Nature Meth. -2008. -V. 5. -P. 135−145.
  59. C.-T. Lin, P. A. Moore, D. L. Auberry, E. V. Landorf, T. Peppier, K. D. Victrya, F. R. Collart, V. Kery, Automated purification of recombinant proteins: Combining high-throughput with high yield. // Protein Expr. Purif. -2006.-V. 47.-P. 16−24.
  60. F. Baneyx, Recombinant protein expression in Escherichia coli. II Curr. Op. Biotechnol. -1999. -V. 10. -P. 411−421.
  61. M. Vedadi, C. H. Arrowsmith, A. Allali-Hassani, G. Senisterra, G. A. Wasney, Biophysical characterization of recombinant proteins: A key to higherstructural genomics success. // J. Struct. Biol. -2010. doi:10.1016/j.jsb.2010.05.005.
  62. W. Tang, Z.Y. Sun, R. Pannell, V. Gurewich, J.N. Liu An efficient system for production of recombinant urokinase-type plasminogen activator // Protein Expr. Purif. -1997.-V. 11.-P. 279−283.
  63. S. Shi, J. Xue, K. Fan, G. Kou, H. Wang, Y. Guo, Preparation and characterization of recombinant protein ScFv (CD 11 c)-TRP2 for tumor therapy from inclusion bodies in Escherichia coli II Protein Expr. Purif. -2007. -V. 52. -P. 131−138.
  64. H. Chen, Z. Xu, N. Xu, P. Cen, Effcient production of a soluble fusion protein containing human beta-defensin-2 in E. coli cell-free system // J. Biotechnol. -2005.-V. 115.-P. 307−315.
  65. J. Arnau, C. Lauritzen, G. E. Petersen, J. Pedersen, Current strategies for the use of affnity tags and tag removal for the purification of recombinant proteins. // Protein Expr. Purif. -2006. -V. 48. -P. 1−13.
  66. K. Terpe, Overview of tag protein fusions: from molecular and biochemical fundamentals to commercial systems. // Appl. Microbiol. Biotechnol. -2003. -V. 60. -P. 523−33.
  67. A. Malhotra, Tagging for Protein Expression. // Methods Enzymol. -2009. -V. 463. -P. 239−258.
  68. J.J. Lichty, J.L. Malecki, H.D. Agnew, DJ. Michelson-Horowitz, S. Tan, Comparison of affinity tags for protein purification. // Protein Expr. Purif. -2005.-V.42.-P. 98−105.
  69. C.A. Лопатин, В. П. Варламов, Новые тенденции металлохелат аффинной хроматографии белков. // Прикл. Биохим. Микробиолог. -1995. -Т. 31. -С. 259−266.
  70. V.M. Bolanos-Garcia, O.R. Davies, Structural analysis and classification of native proteins from E. Coli, commonly co-purified by immobilized affinity chromatography. // Biochim. Biophys. Acta -2006. -V. 1760. -P. 1304−1313.
  71. И.Ю. Волков, H.A. Лунина, Г. А. Велиководская, Перспективы практического применения субстратсвязывающих модулей гликозилгидролаз. // Прикл. Биохим. Микробиол. -2004. -Т. 40. -С.499−504.
  72. М.Р. Bernard, D. Cao, R.V. Myers, W.R. Moyle, Tight attachement of chitin-binding-domain-tagged proteins to surfaces coated with acetylated chitosan. // Anal. Biochem. -2003. -V. 327. -P. 278−283.
  73. S.S. Sharma, S. Chong, S.W. Harcum, Intein-mediated protein purification of fusion proteins expressed under high-cell density conditions in E. coli. // J. Biotechnol. -2006. -V. 125. -P. 48−56.
  74. C.-J. Chiang, J.-Y. Wang, Р.-Т. Chen, Y.-P. Chao, Enhanced levan production using chitin-binding domain fused levansucrase immobilized on chitin beads. // Appl. Microbiol. Biotechnol. -2009. -V. 82 -P. 445−451.
  75. J.-T. Chern, Y.-P. Chao, Chitin-binding domain based immobilization of d-hydantoinase. //J. Biotechnol. -2005. -V. 117. -P. 267−275.
  76. P.-M. Kao, C.-I. Chen, S.-C. Huang, K.-M. Lin, Y.-C. Chang, Y.-Ch. Liu, Preparation of fermentation-processed chitin and its application in chitinase affinity adsorption. // Process Biochem. -2009. -V. 44 -P. 343−348.
  77. B. Krajewska, Application of chitin- and chitosan-based materials for enzyme immobilizations: a review. // Enzyme Microb. Technol. -2004. -V. 35. -P. 126−139.
  78. A.B. Деполимеризация высокомолекулярного хитозана ферментным препаратом Целловеридин Г20х/ А. В. Ильина, Ю. В. Ткачева, В. П. Варламов // Прикладная биохимия и микробиология. -2002. -Т. 38. -С.132−135
  79. И.И. Конформация макромолекул (вискозиметрический метод оценки). М. Химия. -1981. — 284с.
  80. М. Azarkan, J. Huet, D. Baeyens-Volant, Y. Looze, G. Vandenbussche, Affinity chromatography: A useful tool in proteomics studies. // J. Chromatogr. В -2007.-V. 849.-P. 81−90.
  81. R. Hahn, R. Schlegel, A. Jungbauer, Comparison of protein A affinity sorbents. // J. Chromatogr. В -2003. -V. 790. -P. 35−51.
  82. C. Madeira, M.E. Freitas, C. Vargas-Lopes, H. Wolosker, R. Panizzutti, Increased brain d-amino acid oxidase (DAAO) activity in schizophrenia. // Schizophr. Res. -2008. -V. 101. -P. 76−83.
  83. M. P. Boks, T. Rietkerk, M. H. van de Beek, I. E. Sommer, T.J. de Koning, R.S. Kahn, Reviewing the role of the genes G72 and DAAO in glutamate neurotransmission in schizophrenia. // Eur. Neuropsychopharmacol. -2007. -V. 17.-P. 567−572.
  84. M. S. Chiou, H. Y. Li, Adsorption behavior of reactive dye in aqueous solution on chemical cross-linked chitosan beads. // Chemosphere -2003. —V. 50, -P. 1095−1105.
  85. Q. Yang, F. Dou, B. Liang, Q. Shen, Studies of cross-linking reaction on chitosan fiber with glyoxal. // Carbohydr. Polym. -2005. -V. 59. -P. 205−210.
Заполнить форму текущей работой

Заказал и сдал!