Дипломы, курсовые, рефераты, контрольные...
Срочная помощь в учёбе

Биотехнологические аспекты разработки фагового препарата для индикации и идентификации бактерий рода Providencia

Диссертация: Биотехнологические аспекты разработки фагового препарата для индикации и идентификации бактерий рода Providencia
ДиссертацияПомощь в написанииУзнать стоимостьмоей работы

Апробация работы. Материалы диссертационной работы доложены и обсуждены на научно-практических конференциях: на Международной научно-практической конференции «Профилактика, диагностика и лечение инфекционных болезней, общих для людей и животных» (Ульяновск, 2006), П-ой открытой Всероссийской научно-практической конференции молодых ученых «Молодежь XXI века» (Ульяновск, 2007), Международной… Читать ещё >

Содержание

  • Список условных сокращений
  • 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
    • 1. 1. История открытия и токсономическая характеристика бактерий рода Providencia
    • 1. 2. Биологические свойства бактерий рода Providencia
      • 1. 2. 1. Морфология
      • 1. 2. 2. Культуральные свойства
      • 1. 2. 3. Биохимические свойства
      • 1. 2. 4. Антигенная структура и серологическая идентификация
      • 1. 2. 5. Патогенность
      • 1. 2. 6. Резервуар и распространение инфекционного агента
      • 1. 2. 7. Устойчивость к физико-химическим факторам
    • 1. 3. Лабораторная идентификация бактерий рода Providencia
    • 1. 4. Бактериофаги и их применение в лабораторной практике
      • 1. 4. 1. Взаимодействие бактериофагов с клеткой-хозяином
      • 1. 4. 2. Фагоидентификация бактерий и фаготипирование
      • 1. 4. 3. Реакция нарастания титра фага (РНФ)
  • 2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
    • 2. 1. Объект, материалы и методы
      • 2. 1. 1. Материалы
      • 2. 1. 1. Методы
    • 2. 2. Результаты собственных исследований
      • 2. 2. 1. Выделение бактерий рода Providencia из объектов ветеринарного надзора и патологического материала
      • 2. 2. 2. Выделение бактериофагов Providencia и селекция клонов фагов
      • 2. 2. 3. Характеристика фагов бактерий рода Providencia
        • 2. 2. 3. 1. Морфология негативных колоний
        • 2. 2. 3. 2. Литическая активность бактериофагов Providencia
        • 2. 2. 3. 3. Спектр литической активности бактериофагов Providencia
        • 2. 2. 3. 4. Специфичность действия бактериофагов рода Providencia
        • 2. 2. 3. 5. Температурная устойчивость бактериофагов рода Providencia
        • 2. 2. 3. 6. Устойчивость бактериофагов рода Providencia к воздействию хлороформа
    • 2. 3. Разработка технологических параметров изготовления и контроля индикаторных фагов Providencia
    • 2. 4. Разработка схемы ускоренной идентификации бактерий рода
  • Providencia
    • 2. 5. Разработка оптимальных условий постановки РНФ
      • 2. 5. 1. Определение количественного показателя РНФ, имеющего диагностическое значение
      • 2. 5. 2. Установление оптимального времени, обеспечивающее наиболее полноценное взаимодействие фага с бактериями
      • 2. 5. 3. Разработка схемы постановки РНФ для индикации бактерий рода Providencia в объектах ветеринарного надзора
        • 2. 5. 3. 1. Исследование водопроводной воды, контаминированной бактериями рода Providencia с помощью РНФ
        • 2. 5. 3. 2. Исследование комбикорма, контаминированного бактериями рода Providencia с помощью РНФ
        • 2. 5. 3. 3. Исследование фекалий, контаминированных бактериями рода Providencia с помощью РНФ
        • 2. 5. 3. 4. Исследование мяса, контаминированного бактериями рода Providencia с помощью РНФ
        • 2. 5. 3. 5. Исследование фекалий больных диареей телят на присутствие бактерий Providencia с использованием РНФ

Биотехнологические аспекты разработки фагового препарата для индикации и идентификации бактерий рода Providencia (реферат, курсовая, диплом, контрольная)

Известно, что заболеваемость острыми кишечными инфекциями в нашей стране в настоящее время остается довольно высокой, но лабораторное подтверждение кишечных заболеваний в среднем не превышает 50−60% и значителен удельный вес кишечных инфекций с невыясненной этиологией. В то же время данные литературы последних лет свидетельствуют, что этиологическим фактором при кишечных заболеваниях могут быть многие малоизученные родовые группы семейства кишечных бактерий, к которым относятся и бактерии рода Providencia. Интерес, проявляемый в последние годы к малоизученным группам семейства Enterobacteriaceae, в том числе и к бактериям рода Providencia вызван тем, что эти бактерии рассматриваются как возможный этиологический фактор в возникновении кишечных заболеваний {Львов, 1968; Sedlak и Rische, 1968; Авдеева и соавт., 1970; Золотухин, 2004, 2005 и др.). Представители рода Providencia широко распространены в природе, их выделяют из воды, почвы, фекалий и мочи животных и человека. Бактерии рода Providencia патогенны для разных видов лабораторных животных (белых мышей, морских свинок, кроликов, хомяков). Имеются литературные данные о заболеваниях людей: диареи, диспепсии, гастроэнтероколиты у детей, урологические заболевания, вспышки гастроэнтеритов и токсикоинфекций, внутрибольничные инфекции вызванные бактериями рода Providencia (Батуро 1988; Романенко, 1989; Venieri D., Vantarakis A., Komninou G., Papapetropoulou M., 2006). Бактерии рода Providencia способны также вызывать у животных и людей самостоятельные или в ассоциации с другими микроорганизмами заболевания. Известно о случаях обнаружения вида Providencia rettgeri в фекалиях больных диареей поросят-сосунов и новорожденных телят в период массовых желудочно-кишечных заболеваний молодняка {Кононенко, Бритова, Каврук, 1994; Золотухин с соавт., 1999, 2004, 2005).

Выделение и идентификация бактерий рода Providencia в основном проводится бактериологическим методом. Трудоемкость и длительность изучения биологических свойств бактерий не позволяет быстро идентифицировать бактерии рода Providencia. Существующие современные высокоспецифичные методы лабораторной диагностики (ИФА, РИА, ПЦР) из-за сложности методик, высокой стоимости оборудования и реактивов недоступны для большинства лабораторий. В связи с выше изложенным возникает необходимость изыскания эффективных и доступных для ветеринарных лабораторий методов индикации и идентификации бактерий рода Providencia.

Ряд исследователей (Голъдфарб, 1961; Ганюшкин, 1988; Габрилович, 1981; 1983; Русалеев, 1990; Колъпикова, Бакулов, Котляров, 1990; 1992; Натидзе с соавт., 2005; Золотухин, 2007) приводят убедительные данные о положительных результатах индикации и идентификации возбудителей некоторых заболеваний с помощью бактериофагов. Метод фагодиагностики является специфичным, не требующий больших затрат времени, материалов и доступен лабораториям всех уровней.

Выделением и изучением бактериофагов рода Providencia занимались {Габрилович с соавт., 1998). Однако в арсенале ветеринарных лабораторий отсутствуют бактериофаги рода Providencia. Поэтому получение специфических бактериофагов, активных в отношении бактерий рода Providencia, выделенных из объектов санитарного надзора, с целью индикации и идентификации этих микроорганизмов, является актуальным.

Целью исследований является выделение бактериофагов, активных в отношении штаммов бактерий рода Providencia и разработка на их основе диагностического биопрепарата для индикации и идентификации гомологичных энтеробактерий.

Для решения данной цели были поставлены следующие задачи:

1. Изучить ареал распространения бактерий рода Providencia.

2. Выделить и селекционировать из патологического материала и объектов ветеринарного надзора бактериофаги, активные в отношении штаммов бактерий рода Providencia.

3. Изучить основные биологические свойства (морфологию негативных колоний, литическую активность и ее спектр, специфичность, температурную устойчивость, устойчивость к хлороформу) выделенных бактериофагов.

4. Разработать технологические параметры изготовления фагового биопрепарата и сконструировать на основе выделенных штаммов новый биопрепарат — диагностикум.

5. Разработать схему идентификации бактерий рода Providencia с помощью бактериофагов.

6. Разработать схему ускоренной индикации бактерий рода Providencia в объектах ветеринарного надзора с помощью РНФ.

Научная новизна. Выделены новые штаммы бактериофагов, активные в отношении бактерий рода Providencia, изолированных из объектов ветеринарного надзора и патологического материала. Изучены основные биологические свойства выделенных бактериофагов.

Впервые разработаны биотехнологические параметры для фагоидентификации и фагоиндикации Providencia в объектах ветеринарного надзора и патологическом материале.

Практическая значимость работы. Селекционированы два изолята фагов бактерий рода Providencia F-67 УГСХА и F — 87 УГСХА, обладающие выраженными биологическими свойствами, соответствующие требованиям, предъявляемым к производственным штаммам фагов, которые можно использовать для изготовления диагностических фаговых препаратов.

По материалам диссертационных исследований разработаны «Методические рекомендации по выделению и идентификации бактерий рода Providencia из патологического материала, кормов, пищевых продуктов и объектов внешней среды с применением специфических бактериофагов F-67 УГСХА и F-87 УГСХА» (рассмотрены на заседании НТС ФГБОУ ВПО «Ульяновская ГСХА им. П. А. Столыпина и утверждены первым проректором-проректором по науке В. А. Исайчевым 29.11.2012 г.).

Методические рекомендации по ускоренной индикации методом реакции нарастания титра фага (РНФ) энтеробактерий рода Providencia в патологическом материале, кормах, пищевых продуктах и объектах внешней среды с применением специфических бактериофагов F-67 УГСХА и F-87 УГСХА" (рассмотрены на заседании НТС ФГБОУ ВПО «Ульяновская ГСХА им. П. А. Столыпина и утверждены первым проректором-проректором по науке В. А. Исайчевым 29.11.2012 г.).

Разработана «Временная инструкция по изготовлению и контролю лабораторной серии индикаторных фагов бактерий рода Providencia F-67 УГСХА и F — 87 УГСХА» (рассмотрены на заседании НТС ФГБОУ ВПО «Ульяновская ГСХА им. П. А. Столыпина и утверждены первым проректором-проректором по науке В. А. Исайчевым 29.11.2012 г.).

На базе ОГУ «Ульяновская областная ветеринарная лаборатория» проведены производственные испытания с положительным результатом по оценке эффективности реакции нарастания титра фага проб фекалий, полученных от поросят свинокомплекса «Поволжский» Чердаклинского района Ульяновской области на наличие бактерий вида Providencia с помощью специфических бактериофагов F — 67 и F — 87 серии УГСХА.

Исследования проводились с 18 ноября по 23 ноября 2012 года (акт производственных испытаний утвержден директором ОГУ «Ульяновская областная ветеринарная лаборатория» Р. М. Юсуповым 23.11.2012г).

Основные положения, выносимые на защиту:

1. В хозяйствах, неблагополучных по желудочно-кишечным заболеваниям молодняка сельскохозяйственных животных, бактерии рода Providencia распространены в 44% случаев.

2. Из общего количества исследуемых проб (120) патологического материала и объектов ветеринарного надзора выделены 14 изолятов бактериофагов бактерий рода Providencia, соответствующих требованиям для изготовления диагностического фагового биопрепарата.

3. Выделенные бактериофаги имеют литическую активность по Аппельману от 10″ 5 до Ю" 10, по Грациа — от 4,2×107± 0,1×107 до 8,3×109 ± 0,2×109- спектр литической активности варьирует от 14,3 до 85,7%- строго специфичны по отношению к Providencia rettgeriустойчивы к температуре до 67 °Собработка бактериофагов F-87 УГСХА, F-67 УГСХА хлороформом, выявила выраженную устойчивость к воздействию данного агента в течение 40 минут.

4. Разработанные технологические параметры изготовленного фагового биопрепарата позволяют получить специфический биопрепарат с высокой литической активностью.

5. Разработана схема фагоидентификации бактерий рода Providencia, которая позволяет выделить и идентифицировать эти микроорганизмы за 48 часов.

6. Разработанная схема ускоренной индикации бактерий рода Providencia в объектах ветеринарного надзора с помощью РНФ позволяет обнаружить бактерии рода Providencia в концентрации 103 м.к./мл (г) исследуемого субстрата за 18−22 часа.

Апробация работы. Материалы диссертационной работы доложены и обсуждены на научно-практических конференциях: на Международной научно-практической конференции «Профилактика, диагностика и лечение инфекционных болезней, общих для людей и животных» (Ульяновск, 2006), П-ой открытой Всероссийской научно-практической конференции молодых ученых «Молодежь XXI века» (Ульяновск, 2007), Международной научно-практической конференции «Актуальные вопросы аграрной науки и образования», посвященной 65-летию Ульяновской ГСХА (Ульяновск, 2008), Всероссийском совете молодых ученых аграрных образовательных и научных учреждений (Москва, 2008), Международной научно-практической конференции «Проблемы профилактики и борьбы с особо опасными, экзотическими и малоизученными инфекционными болезнями животных (Покров, 2008), Международной научно-практической конференции «Аграрная наука и образование на современном этапе развития: опыт, проблемы и пути их решения» (Ульяновск, 2009), Международной научно-практической конференции «Актуальные вопросы аграрной науки и образования (Ульяновск, 2009), III Международной научно-практической конференции «Молодежь и наука XXI века» (Ульяновск, 2010), Международной научно-практической конференции «Ветеринарная медицина XXI века: инновации, опыт, проблемы и пути их решения» (Ульяновск, 2011), IV Международной научно-практической конференции «Аграрная наука и образование на современном этапе развития: опыт, проблемы и пути их решения» (Ульяновск, 2012).

Работа выполнена на кафедре микробиологии, вирусологии, эпизоотологии и ветеринарно-санитарной экспертизы ФГБОУ ВПО «Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия».

Публикации. По теме диссертации опубликовано 12 работ из них 1 в журнале, рекомендованном ВАК РФ.

Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, двух глав: обзора литературы, собственных исследований, состоящих из объекта, материалов и методов, результатов исследования и их обсуждения, заключения, выводов, практических предложений, списка использованных литературных источников, приложений. Материалы диссертации изложены на 146 страницах (в том числе приложения на 7 страницах), включают 30 таблиц и 13 рисунков. Список использованных литературных источников включает 233 наименования, в том числе 97 зарубежных авторов.

Выводы.

1. В объектах ветеринарного надзора и патологическом материале Providencia обнаружены в 8 из 18 хозяйств, неблагополучных по желудочно-кишечным заболеваниям молодняка животных. Изолировано и идентифицировано 26 штаммов Providencia rettgeri.

2. Из 120 проб объектов внешней среды было выделено и селекционировано 14 бактериофагов, активных в отношении бактерий рода Providencia.

3. Выделенные фаги имеют литическую активность от 10″ 5 до 10″ 10 по Аппельману и от 4,2×107 ± 0,1×107 до 8,3×109 ± 0,2×109 фаговых корпускул в 1 мл по Грациа. Установлено, что два бактериофага отличались широким диапазоном литической активности: F-87 УГСХА лизировал 82,1% штаммов бактерий рода Providencia, F-67 УГСХА — 85,7%, а в сумме фаги лизировали 96,4% всех исследованных культур. Они обладали строгой специфичностью: не лизировали бактерии других родов и семейств.

4. Разработанные биотехнологические параметры изготовления и контроля бактериофагов Providencia позволяют получить специфический диагностический препарат штаммов F-87 УГСХА и F-67 УГСХА с высокой литической активностью. Разработанная схема с применением фагов F-87 УГСХА и F-67 УГСХА, позволяет выделить и идентифицировать бактерии рода Providencia за 48 часов.

5. Штаммы фагов F-87 УГСХА и F-67 УГСХА были устойчивы к воздействию высокой температуры. Нижний порог термоинактивации составляет 67 °C, верхний — 88° С. Фаги не меняют литической активности при воздействии хлороформа в течение 40 минут.

6. Разработанные технологические параметры ускоренной индикации бактерий рода Providencia в объектах ветеринарного надзора и в патологическом материале с помощью РНФ с использованием индикаторных бактериофагов (F-87 УГСХА и F-67 УГСХА), позволяют обнаружить бактерии рода Providencia в концентрации 103 м.к./мл (г) исследуемого субстрата за 18−22 часа.

Практические предложения.

1. Для изготовления диагностического фагового биопрепарата-диагностикума предлагаются в качестве производственных штаммы фагов F-67 УГСХА и F-87 УГСХА.

2. Изготовление и контроль диагностического набора бактериофагов рекомендуем проводить согласно «Временной инструкции по изготовлению и контролю индикаторных бактериофагов Providencia F-67 УГСХА и F-87 УГСХА.

3. Индикацию и идентификацию бактерий рода Providencia следует проводить с помощью набора диагностических фагов согласно «Методическим рекомендациям по ускоренной индикации и идентификации энтеробактерий рода Providencia в патологическом материале, кормах, пищевом сырье и объектах внешней среды с применением специфических бактериофагов F-67 УГСХА и F-87 УГСХА.

4. Материалы научных исследований по выделению и изучению биологических свойств бактериофагов рода Providencia рекомендованы для включения в список учебно-методической литературы для студентов и аспирантов по дисциплинам: биотехнология, микробиология, вирусология по биологическим, медицинским и ветеринарным специальностям и направлениям.

Заключение

.

В последние годы все большее значение в ветеринарной практике приобретают заболевания, вызванные бактериями рода Providencia. Известно, что Providencia rettgeri играет этиологическую роль при маститах, пневмониях, септицемиях коров, свиней, лошадей, обезьян, инфекционной диареи молодняка животных (Воронин с соавт., 1989; Каврук, 1994; Кукава с соавт., 1998; Шахов 2003; Золотухин с соавт., 2004; 2005).

Исследователи, занимающиеся лабораторной диагностикой, отмечают значительные трудности при обнаружении и идентификации провиденций бактериологическим методом. Идентификация бактерий рода Providencia бактериологическим методом, основана на изучении биохимических свойств данных микроорганизмов. Трудоемкость и длительность изучения ферментативных свойств не позволяет быстро и точно идентифицировать представителей рода Providencia.

Используя существующие схемы бактериологического выделения представителей рода Providencia, отмечали некоторые недостатки. Схема В. И. Покровского, О. К. Поздеева (1999) из-за трудоемкости и необходимости использования большого набора тестов, усложняла идентификацию. Недостаток использования методических рекомендаций по диагностике смешанной кишечной инфекции для выделения бактерий рода Providencia заключался в наборе тестов, который не позволяет дифференцировать выделенные культуры до вида, даже при большом сроке исследования (4 до 7 суток).

Для снижения трудоемкости бактериологического метода идентификацию бактерий проводили по следующим тестам: образование сероводорода (-), расщепление мочевины (+/-), определение подвижности (-), усвоение цитрата Симмонса (+), реакция с метиленовым красным (—/+), Фогеса-Проскауэра (+/-). Указанные тесты позволяли нам дифференцировать клебсиеллы от других родов семейства Enterobacteriaceae. При получении соответствующих результатов продолжали изучение ферментативных свойств на средах с углеводами: глюкозой (+), лактозой (+), мальтозой (-), малонатом (+/-), ставили тесты на образование индола (-/+), утилизации ацетата (+/-) и ферментации сорбита (+).

В лабораторной практике некоторых заболеваний метод фагодиагностики показал высокую эффективность при индикации и идентификации возбудителей (Голъдфарб, 1961; Ганюшкин, 1984; Русалеев, 1990; Кольпикова, Бакулов, Котляров, 1990, 1992; Натидзе с соавт., 2005, Золотухин с соавт., 2005).

Исходя из выше перечисленного, целью наших исследований была разработка технологических параметров по индикации и идентификации бактерий рода Providencia с помощью специфических бактериофагов.

Первоочередной задачей наших исследований стало выделение бактерий рода Providencia из объектов ветеринарного надзора и патологического материала. Провиденции были обнаружены в 8 из 18 хозяйств Ульяновской, Самарской областей и республики Татарстан, неблагополучных по желудочно-кишечным заболеваниям молодняка животных. В результате проведенных исследований из патологического материала и объектов ветеринарного надзора, нами изолированно и идентифицировано 26 штаммов Providencia rettgeri.

Для достижения поставленной цели из сточных вод свиноводческих и молочно-товарных ферм разных хозяйств Ульяновской области, сточных вод Ульяновского мясокомбината нами был выделен и селекционирован 14 штаммов бактериофагов Providencia. У выделенных фагов были изучены основные биологические свойства: 1) морфология негативных колоний- 2) литическая активность- 3) спектр литической активности- 4) специфичность действия- 5) температурная устойчивость- 6) чувствительность к хлороформу- 7) морфология фаговых корпускул.

Изученные фаги с разной морфологией негативных колоний были разделены на два типа. К первому типу относятся круглые, прозрачные в центре негативные колонии диаметром от 2 мм и более с зоной неполного лизиса 1−8 мм. Колонии второго типа круглые, прозрачные с ровными краями в диаметре до 2,5 мм с отсутствием зоны неполного лизиса.

Литическую активность бактериофагов оценивали по методу Аппельману — от 10″ 5 до Ю" 10 и от 4,2×107 ± 0,1×107 до 8,3×109 ± 0,2×109 фаговых корпускул в 1 мл по методу Грациа. В результате изучения спектра литической активности в отношении 28 (2 музейных и 26 выделенных нами) штаммов бактерий рода Providencia фаги характеризовались разным диапазоном литической активности.

Для дальнейшего изучения отобрали два бактериофага с наибольшим диапазоном по отношению к изучаемым культурам — фаг F-87 УГСХА, который лизировал 82,1% и фаг F-67 УГСХА — 85,7% штаммов бактерий рода Providencia, а в сумме фаги проявили литическое действие в отношении 96,4% всех исследованных культур. В исследованиях на специфичность фаги оказались неактивны по отношению к представителям бактерий других родов и семейств.

Селекционированные нами фаги F-87 УГСХА, F-67 УГСХА были термостабильны и не понижали свою физиологическую активность до 63 °C в течение 30 минут.

Обработка бактериофагов F-87 УГСХА, F-67 УГСХА хлороформом, выявила выраженную устойчивость к воздействию данного агента в течение 40 минут. Полученные результаты учитывались при освобождении фаголизата от жизнеспособных бактерий.

По литературным данным фаги, применяемые для индикации и идентификации должны соответствовать определенным биологическим свойствам, обладать широким диапазоном литического действия, высокой активностью и выраженной специфичностью, более высоким порогом термоинактивации, чем у бактерий (Тимаков, Голъдфарб, 1960; Ревенко, 1978). Результаты наших исследований соответствуют литературным данным. Бактериофаги F-87 УГСХА и F-67 УГСХА являются строго специфичными в отношении бактерий рода Providencia, с широким совместным диапазоном литического действия — 96,4%, с высокой литической активностью от 4,2×107 ± 0,1×107 до 8,3×109 ± 0,2×109 фаговых корпускул в 1 мл (по методу Грациа), термостабильны (до 63 °С) и устойчивы к воздействию хлороформа (до 40 мин.).

Полученные результаты изученных биологических свойств двух фагов F-87 УГСХА, F-67 УГСХА позволили нам использовать их для изготовления диагностических препаратов.

При разработке технологических параметров для получения индикаторных фагов Providencia с высокой литической активностью опытным путем установили множественность инфекции. Для штамма фага F-87 УГСХА оптимальное соотношение суспензий фага и бактериальной культуры составила 1:1, для фага F-67 УГСХА — 1:2. Оптимальная экспозиция пассажа при 37 °C составила 4 часа. Был осуществлен контроль бактериофагов: определение стерильности, литической активности, спектра лизиса, специфичностистепень нарастания титра фага.

Метод фагоидентификации успешно применяется в ветеринарной и медицинской практике. С помощью специфических бактериофагов, многие исследователи идентифицировали большой процент патогенных культур в течение 48 часов (Островская, Папкова, 1951; Аврех, 1954; Кузнецова, 1956; Попхадзе, 1968; Цветков, 1941; Лихачев, 1948; Ганюшкин, 1984; Николаенко, Тутов, 1970; Капырина, Бакулов, 1972; Ревенко, 1978).

Предложенная нами схема выделения и ускоренной идентификации бактерий рода Providencia с помощью специфических бактериофагов F-87 и F-67 серии УГСХА, позволяла сократить сроки исследования в два раза (48 часов). В то время как бактериологический метод исследования занимал 96 часов.

Следующей важной задачей, которая была нами решена, была фагоиндикация бактерий рода Providencia в объектах ветеринарного надзора и патологическом материале без выделения чистой культуры.

Решение поставленной задачи заключалось в разработки оптимальных условий постановки реакции нарастания титра фага с различными субстратами: определение количественного показателя РНФ, имеющего диагностическое значение. В наших исследованиях РНФ считали положительной, если увеличение титра фагов произошло в 5 и более раз. Данный критерий гарантировал достоверность результатов, поскольку он позволял исключить технические погрешности при титровании, при которых возможно выявление невысокой степени увеличения количества фага.

— установление оптимального времени, обеспечивающее наиболее полноценное взаимодействие фага с бактериями. Для решения поставленной задачи необходимо было провести эксперименты на тест-объекте по выявлению наиболее эффективного временного показателя взаимодействия фага и индикаторной культурой при сохранении остальных параметров (температурный режим, концентрация бактериальной культуры и фаговых корпускул в 1 мл) постановки РНФ. В качестве тест-объекта использовали МПБ, контаминированный бактериями рода Providencia, оптимальное время экспозиции выбирали из следующих параметров: предварительное подращивание исследуемого материала в течение 5, 16, 24 часов при температуре 37 °C, после добавления фагов смесь выдерживали в течение 5 часов при температуре 37 °Сувеличение времени контакта исследуемого материала с фагом до 6, 10, 16 и 24 часов при температуре 37 °C.

Установлено, что с помощью исследуемых бактериофагов в РНФ при подращивании материала в течение 5 часов можно обнаружить провиденции в концентрации 103 м.к./мл. С увеличение времени подращивания материала до 16 часов чувствительность реакции повышается и позволяет обнаружить.

— у бактерии в количестве 10 м.к./мл.

За 5 часов инкубации исследуемого материала с фагом F-87 УГСХА обнаруживались бактерии Providencia rettgeri Н 87 в концентрации 104 м.к./мл, при увеличении времени культивирования до 6 часов повышает чувствительность реакции с указанным фагом до 10 м.к./мл, а 10 часовая инкубация — до 10 м.к./мл. На основании полученных данных можно сделать вывод, что наиболее оптимальным является режим РНФ при 6 часовой экспозиции исследуемого материала с фагом, когда удается провести индикацию бактерий в количестве 103 микробных клеток в миллилитре исследуемого субстрата, на исследование которого затрачивается 18 часов. Одновременное исследование бактериологическим методом позволяло обнаружить бактерии рода Providencia в концентрации 104 м.к./мл, при этом на исследование затрачивалось 96 часов: выделение возбудителя (48 часов), изучение биохимических свойств (48 часов).

Полученные данные при исследовании воды, комбикорма и мяса подтверждают увеличение титра фагов более чем в 5 раз при минимальной концентрации бактерий рода Providencia 10 м.к./мл. При исследовании фекалий бактерии рода Providencia обнаруживались в концентрации 104 м.к./г, а с увеличением инкубации бактериофагов с материалом до 10 часов обнаруживали данные бактерии в концентрации 103 м.к./г за 22 часа.

В результате проведенных исследований по обнаружению бактерий рода Providencia в контаминированных указанными микроорганизмами объектах ветеринарного надзора и патологическом материале, можно утверждать об успешном применении метода фагоиндикации — РНФ, диагностическая чувствительность которого позволяет обнаруживать бактерии рода Providencia в минимальной концентрации 103−104м.к./мл за 18−22 часа.

Для оценки эффективности набора индикаторных бактериофагов F-87 УГСХА и F-67 УГСХА в условиях производства мы испытывали 13 проб фекалий больных телят, с помощью РНФ. Бактерии рода Providencia при этом были обнаружены в 38%, а при исследовании бактериологическим методом — в 15% случаях. Из этого следует, что РНФ является высокочувствительным методом, позволяющим обнаружить бактерии рода Providencia даже в случаях, когда выделение культуры в чистом виде практически невозможно из-за наличия большого количества посторонней микрофлоры.

В качестве усовершенствования предложенного метода нами изучалась возможность использования смеси из монофагов. Определив активность монофагов F-87 УГСХА и F-67 УГСХА, и активность смеси данных фагов на индикаторных штаммах культур Providencia rettgeri Н 87 и Providencia rettgeri Н 67 был получен аналогичный результат. Интерференция, то есть взаимное усиление или подавление при взаимодействии фагов отсутствовала.

На основании проведенных исследований, установлена возможность использования биопрепарата, состоящего из двух бактериофагов F-87 УГСХА и F-67 УГСХА. Следовательно, полученный биопрепарат, может использоваться для идентификации, а также в реакции нарастания титра фага для индикации бактерий рода Providencia в объектах ветеринарного надзора. Предложены оптимальные технологические параметры постановки РНФ, позволяющие повысить эффективность обнаружения бактерий рода Providencia.

Показать весь текст

Список литературы

  1. М.А. Сравнительное изучение реакции нарастания титра фага и бактериологического метода при диагностике брюшного тифа у больных и реконвалесцентов / М. А Абдусаматов // ЖМЭИ. 1960. — № 1. — С. 23−27.
  2. В.В. О применении бактериофагов в диагностике сальмонеллезов / В. В. Аврех // ЖЭМИ. 1954. — № 7. — С. 93−96.
  3. В.В. О понятии «Серологический тип бактериофагов» / В. В. Аврех // В кн.: XIII Всесоюзный съезд гигиенистов, эпидемиологов, микробиологов и инфекционистов. Ленинград, 1959. — Т.2. — С. 537−540.
  4. Л.И. Современное состояние проблемы теории бактериофага и его практическое применение / Л. И. Адельсон, В. Д Гуторова, Г. Г. Ключарева // Тезисы докладов юбилейной научной сессии Ленинградского сан.- гиг. мед. ун-та. Ленинград, 1958. — С.34.
  5. P.P. Изменение наследственности бактерий путем фаговой конверсии / P.P. Азизбекян // В кн. Микробиология. Генетика микроорганизмов. Итоги науки и техники ВИНИТИ АН СССР. М., 1974. -Т.З.-С. 191−233.
  6. А.Ф. Применение реакции нарастания титра фага в очагах брюшного тифа / А. Ф. Алымова, В. В. Гортинская, А. П. Кузнецова, Л. Л. Логинова, Е. А. Смирнова // Тр. Горьковского гос. мед. ин-та им. С. М. Кирова. 1964. — Т. 18. — С. 10 — 12.
  7. Анализ токсигенности штаммов энтеробактерий, изолированных в зверохозяйствах России / Козловский и др. // Доклады Российской академии с.-х. наук. 2002. — № 3 — С. 44 — 46
  8. В.Г. Применение реакции нарастания титра фага для диагностики хронической дизентерии / В. Г. Арский, 3.3. Ахметов, A.B. Ясенский // Здравоохранение Таджикистана. 1961. — № 2. — С. 5−11.
  9. И.И. Фаготипирование патогенных стафилококков, выделенных из молока коров / Б. А. Степанов, И.И.
  10. Архангельский // Ветеринария. 1966. — № 3. — С. 27.
  11. .И. Пути рационального использования синегнойных бактериофагов в лечебной и противоэпидемической практике / Б. И. Асланов, Р. Х. Яфаев, Л. П. Зуева // Микробиология. 2003. — № 5. — С. 72−76.
  12. В.В. Биологическая характеристика умеренных бактериофагов Е. coli 0124: В 17 / В. В. Бабков // Проблемы бактериофагии и биология кишечных бактерий: сб. кафедры микробиологии I Лен. мед. ин-та им. акад. И. П. Павлова Л., 1973. 53 с.
  13. В.А. Тесты патогенности и фаготипы стафилококков, выделенных при мастите коров / В. А. Байрак // Автореф. дис.. канд. биол. наук.-М., 1970, — 19 с.
  14. Бактериофаги малоизученных энтеробактерий и перспективы их применения в ветеринарии / С. Н. Золотухин и др. // Ветеринарная патология. 2006. — № 3. — С. 80 — 85.
  15. Г. А. Индикация дизентерийных бактерий на поверхности методом реакции нарастания титра фага / Г. А. Башмаков // Военно-медицинский журнал. 1961. — № 4. — С. 39 — 42.
  16. Биологические свойства патогенных энтеробактерий, выделенных из крови больных / H.A. Поликарпов и др. // Журн. микробиол.- 1985.-№ 10.-С. 15−19.
  17. В.М. Гемаглютинирующая и адгезивная способность штаммов клебсиелл и энтеробактер / В. М. Бондаренко, М. М. Баккус, В. И. Брилис // Журн. микробиол. 1987. — № 7. — С. 3 — 6.
  18. З.И. Некоторые свойства чумных фагов / З. И. Быкова // Тр. Армянской противочумной станции. М., 1964. — № 3. — С. 171−175.
  19. Д.А. Учебно-методическое пособие по методам общей бактериологии / Д. А. Васильев, С. Н. Золотухин, Н. М. Никишина -Ульяновск, 1998.- 151 с.
  20. Викторов Д. А Усовершенствование методов выделения, идентификации и индикации бактерий Pseudomonas putida II Автореф. дис.. канд. биол. наук. 2011. — 22 с.
  21. Д.А. Выделение и изучение биологических свойств бактериофагов Pseudomonas fluorescens / Д. А. Викторов, A.M. Артамонов, Д. А. Васильев // Ветеринария и кормление. Москва: «ВЕТКОРМ», 2012. -№ 5. — С. 8−9.
  22. Т.С. О диагностическом значении реакции нарастания титра фага при дизентерии / Т. С. Вилькомирская // ЖМЭИ. -1971.-№ 1.-С. 136- 138.
  23. Р. Генетика бактериофага / Р. Висконти // В кн.: Онтогенез вирусов. М., 1956. — 141 с.
  24. A.A. Применение метода реакции нарастания титра фага при эпидемиологическом и санитарном обследовании / A.A. Воронцова
  25. Кишечные инфекции: Тез.докл. на межинстит.конф. М., 1961. — С. 127 128.
  26. Выделение и общая характеристика группы умеренных фагов Pseudomonas aeruginosa / А. С. Яненко и др. // Микробиология. 1979. -Т.48, № 1.-С.109−113.
  27. Выделение и селекция клонов бактериофагов патогенных энтеробактерий / Золотухин С. Н. и др. // Профилактика, диагностика и лечение инфекционных болезней, общих для людей и животных: матер, междунар. научн. конф. Ульяновск, 2006. — С. 227 — 231.
  28. И.М. Общая характеристика бактериофагов / И. М. Габрилович // Основы бактериофагии. Минск. — 1973. — С. 5−24.
  29. В.Я. Реакция нарастания титра фага при диагностике паратифа поросят / В. Я. Ганюшкин // Ветеринария. 1967. — № 3. — С. 69 -71.
  30. В.Я. Бактериофаги Salmonella choleraesuis, сравнительная характеристика и практическое применение / В. Я. Ганюшкин // Автореф. дис.. докт. вет. наук. Ульяновск, 1984. — 84 с.
  31. В.Я. Бактериофаги сальмонелл и их применение в ветеринарии / В. Я. Ганюшкин // Ульяновск. 1988. — С.45.
  32. В.Я. Обследование свиней на носительство сальмонелл и фагопрофилактика / В. Я. Ганюшкин // Вопросы ветеринарной микробиологии, эпизоотологии и ветеринарно-санитарной экспертизы. -Ульяновск, 1990. — С. 20 — 28.
  33. Д.М. Бактериофагия / Д. М. Гольдфарб // М.: Медгиз. -1961.-225 с.
  34. Д.M. Опыт применения реакции нарастания титра фага для диагностики дизентерии / Д. М. Гольдфарб, В. Н. Кузнецова // ЖМЭИ. 1957. — № 8. — С. 90−94.
  35. Д.М. Индикация брюшнотифозной палочки в воде с помощью реакции нарастания титра фага / Д. М. Гольдфарб, З. С. Островская //ЖМЭИ. 1957.-№ 5.-С. 17.
  36. Р.В. Фаготипирование паратифозных В бактерий и действие на них бактериофагов / Р. В. Гордина // Автореф. дис.. докт. вет. наук. -М., 1954.-С. 24−27.
  37. Л.Д. Фаготипирование бреславской палочки / Л. Д. Гуторова // ЖМЭИ. 1958. — № 12. — С. 53 — 55.
  38. Т.А. Фаготипирование S.typhimurium, выделенных в Киеве в 1966—1970 / Т. А. Давиденко, A.M. Зарицкий // В кн.: Кишечные инфекции. Киев. — 1972. — С. 41.
  39. И.В. Методика быстрого обнаружения чумного микроба при помощи бактериофага / И. В. Домарадский, О. Н. Мосолова, JI.K. Денисенко // Иркутск. 1957. — С. 44−51.
  40. Ф.И. Индикация дизентерийных бактерий с помощью РНФ / Ф. И. Ершов // В кн.: Изменчивость микроорганизмов и иммунитет. -М.- 1959.-С. 188.
  41. С.Н. Новые фармакологические средства в ветеринарии / С. Н. Золотухин // Матер. 7 межгосуд. конф. С.-Пб., 1995. — С. 78 — 79.
  42. С.Н. Возбудители пищевых отравлений / С. Н. Золотухин, Д. А. Васильев // Курс лекций по санитарной микробиологии.
  43. Учеб. пособ. 2002 — С. 151.
  44. С.Н. Малоизученные энтеробактерии и их роль в патологии животных / С. Н. Золотухин // Ульяновск. 2004. — С. 64 — 75.
  45. С.Н. Смешанная кишечная инфекция телят и поросят, вызываемая патогенными энтеробактериями / С. Н. Золотухин, JI.C. Каврук, Д. А. Васильев // Ульяновск ГСХА. 2005. — С. 43 — 48.
  46. С.Н. Создание и разработка схем применения диагностических биопрепаратов на основе выделенных и изученных бактериофагов энтеробактерий / С. Н. Золотухин // Автореф. дис.. д-ра биол. наук. Ульяновск, 2007. — 39 с.
  47. Изучение основных биологических свойств бактериофагов Bordetella bronchiseptica, выделенных методом индукции / Д. А. Васильев и др. // Вестник Ульяновской государственной сельскохозяйственной академии. 2011. — № 1(13). — С. 59−62.
  48. П.И. Клиническая оценка РНФ как метода лабораторной диагностики острой дизентерии / П. И. Камбаратов // ЖМЭИ. -1963.-№ 4. -С. 29.
  49. H.A. Идентификация возбудителя листериоза с помощью бактериофага / И. А. Бакулов, H.A. Капырина // Симпозиум «Профилактика и меры борьбы с лептоспирозом и листериозом с/х животных». Новочеркасск. — 1972. — С. 76−78.
  50. , Н.П. Разработка оптимальных технологических параметров постановки РНФ с биопрепаратом YP 09 УГСХА / Н. П. Катмакова, С. Н. Золотухин, Д. А. Васильев // Естественные и техническиенауки. Москва, 2009. — № 6. — С. 202 — 204.
  51. , Н.П. Поиск и селекция псевдотуберкулезных фагов / Н. П. Катмакова, С. Н. Золотухин, Д. А. Васильев. // Ветеринарная медицина. -Москва, 2009. № 4. — С. 19 — 20.
  52. Н.П. Разработка и применение диагностического биопрепарата «YP 09 УГСХА» на основе бактериофагов Yersinia pseudotuberculosis / Н. П. Катмакова // Автореф. дис.. канд. биол. наук. -Ульяновск, 2010 — 24 с.
  53. Кац-Чернохвостова Л. Я. Проблема фаготипирования брюшнотифозных и паратифозных микробов и ее эпидемиологическое значение / Л.Я. Кац-Чернохвостова // ЖМЭИ. 1947. — № 8. — С. 312 — 315.
  54. В. А. Идентификация сальмонеллёзных культур с помощью О-бактериофага / В. А. Килессо // Тез. докл. конф. Таллин, научн.-иссл. ин-та эпидемиол., микробиол. и гигиены. Таллин. — 1960. — С. 5.
  55. Е.Н. Создание биопрепарата на основе выделенных и изученных бактериофагов Enteroccocus faecalis II Автореф. дис.. канд. биол. наук. 2009. — 20 с.
  56. О.А. Применение метода РНФ для контроля качества дезинфекции в очагах кишечных инфекций / О. А. Козелько // ЖМЭИ. 1961. — № 2. — С. 36−40.
  57. Т.И. Фаготипирование листерий / Т. И. Кольпикова // Ветеринария. 1990. — № 6. — С. 31−32.
  58. .М. Выделение и изучение основных биологических свойств бактериофагов Yersinia enterocolitica и их применение в диагностике // Автореф. дис.. канд. биол. наук. Саратов, 2005. — 20 с.
  59. Г. В. РНФ при индикации дизентерийных бактерий вводе в сопоставлении с бактериологическим методом / Г. В. Корнилова // Материалы 16 межоб-ластн. научно-практ. конф. лабор. работников Зап. Сибири. Томск. — 1960. — С. 20 — 21.
  60. H.A. Определитель бактерий и актиномицетов / H.A. Красильников М.: Л.: Изд-во АН СССР, 1949. — 830 с.
  61. H.A. Жизнь растений. Том 1. Введение Бактерии и актиномицеты / Под ред. члена-корреспондента АН СССР, профессора H.A. Красильников, профессора A.A. Уранов М.: Просвещение, 1974. — С. 209 218.
  62. А.П. Микробиологический словарь справочник / А. П. Красильников, Т. Р. Романовская // Минск: Асар. — 1999. — 310 с.
  63. Г. А. Применение реакции нарастания титра фага для исследования объектов внешней среды / Г. А. Кременчук, М. А. Гицевич, К. П. Бояршинова // ЖМЭИ. 1961. — № 7. — С. 124.
  64. М.Д. Применение бактериофагов для типирования бактерий / М. Д. Крылова // В кн.: Бактериофагия. М.: Медгиз, 1961. — С. 220−257.
  65. М.Д. Фаготипы бактерий / М. Д. Крылова // М. — 1963. -97 с.
  66. М.Д. Схема фаготипирования нетоксигенных дифтерийных бактерий типа gravis / М. Д. Крылова // ЖМЭИ. 1970. — № 12. -С. 16−22.
  67. М.Д. Перспективы и возможности метода фаготипирования бактерий / М. Д. Крылова // Материалы юбилейного симпозиума, посвящен. 50-летию Тбилисского НИИВС. Тбилиси. — 1974. -С. 276−280.
  68. В.Н. Применение реакции нарастания титра фага для индикации дизентерийных бактерий в условиях внешней среды / В. Н. Кузнецова, М. И. Хазанов, Т. Н. Ремова // ЖМЭИ. 1960. — № 6. — С. 59.
  69. В.И. Опыт применения РНФ в эпидемиологическойпрактике / В. И. Лебедев // ЖМЭИ. 1963. — № 12. — С. 29.
  70. В.И. РНФ как ранний метод индикации дизентерии в детских учреждениях / В. И. Лебедев // Тр. науч. конф. аспирантов и ординаторов. М. — 1964. — С. 105 — 107.
  71. C.B. Бактериофаги для лечения и специфической профилактики сальмонеллеза птиц /C.B. Ленев, H.A. Дрогалина, С. А. Бугаев // Матер. Междунар. научн. конф. Ульяновск. — 2006. — С. 417 — 420.
  72. C.B. Способ выделения и свойства бактериофагов / C.B. Ленев // Сб. науч. трудов Всеросс. науч. ин-та вет. препаратов. М. — 1991. -С. 24.
  73. Н.Л. О диапазоне и специфичности действия чумных фагов 1701, 1710 и их мутантов / Н. Л. Лешкович, В. П. Ермилова // В кн.: Проблемы особо опасных инфекций. М. — 1974. — С. 38−41.
  74. Н.В. Метод диагностики паратифа свиней при помощи бактериофага / Н. В. Лихачев // Ветеринария. 1948. — № 7. — С. 32.
  75. С. Общая вирусология / С. Лурия, Д. Дарнелл М.: Мир, 1970.-397 с.
  76. Н.Д. РНФ при диагностике дизентерии / Н. Д. Мазурин, Ц.С. Розина-Япкина// ЖМЭИ, 1963.- № 1. — С. 113 — 115.
  77. С.М. РНФ в диагностике брюшного тифа / С. М. Матвеева // Кишечные инфекции: тез. докл. межинстит. конф. М. — 1961. -С. 146- 147.
  78. Мац Л. И. Вопросы санитарной бактериологии и вирусологии / Л. И. Мац М.: Медицина. — 1965. — С. 44−59.
  79. Микробиологическая диагностика бактериальных болезней животных / Д. И. Скородумов и др. М.: ИзографЪ, 2005. — 656 с.
  80. E.H. Определение зараженности предметов бытовой обстановки дизентерийными микробами с помощью реакции нарастания титра бактериофага / E.H. Миляева // ЖМЭИ. 1958. — № 12.-34 с.
  81. Н.И. Выделение и изучение основных биологическихсвойств бактериофагов Escherichia coli 0157 и их применение в диагностике / Н. И. Молофеева // Автореф. дис.. канд. биол. наук. Саратов, 2004. — 20 с.
  82. Н.М. Фаготипирование Styphimurium, выделенных на различных территориях СССР / Н. М. Никитюк // ЖМЭИ. 1970. — № 1. — С. 53.
  83. Ю.Б. Разработка методов индикации и идентификации Bordetella bronchiseptica, выделенных у домашних животных / Ю.Б. икульшина, Д. Г. Сверкалова, Е. Н. Никулина // Ветеринарная патология. 2007. — № 2. — С. 156−159.
  84. С.Н. Фаготипирование стафилококков, выделенных от больных гнойными инфекциями / С. Н. Нурызгалиев // Материалы 10 науч. сем. Алма-Атин. гос. мед. ин-та. Алма-Ата. — 1978. — С. 55 — 57.
  85. Н.Н. Ускоренный метод диагностики брюшного тифа Vi-фага / Н. Н. Островская, Б. Н. Папкова // ЖМЭИ. 1951. — № 2. — С. 37−40.
  86. Н.Н. К использованию метода нарастания титра фага для выявления бруцелл во внешней среде / Н. Н. Островская, Д. М. Гольдфарб //ЖМЭИ, 1961,-№ 5.-С. 145.
  87. И.П. Изучение морфологии и биологических свойств фагов Bacillus anthracis и Bacillus cereus / И. П. Павлова // ЖМЭИ. 1971. — № 7.-С. 147.
  88. В.Г. Факторы патогенности энтеробактерий и ихгенетический контроль / В. Г. Петровская // Актуальные вопросы гигиены и краевой инфекционной патологии. Душанбе. — 1981. — С. 194 — 200.
  89. Л.И. Фаготипирование стафилококков, выделенных от больных маститом коров / Л. И. Петрушина // ЖМЭИ. 1967. — № 5. — С. 128.
  90. Ф.Н. Изучение специфичности и чувствительности РНТФ при индикации дизентерийных бактерий в воде / Ф. Н. Поддубный // ЖМЭИ, 1962. № 1.-С. 29−31.
  91. В.И. Энтеробактерии. / В. И. Покровский М.: Медицина, 1985. — С. 171 7 192.
  92. В.И. Медицинская микробиология. / В. И. Покровский, O.K. Поздеев М.: Медицина. — 1999. — С. 389 — 393.
  93. В.И. Современные принципы и методы диагностики инфекционных болезней / В. И. Покровский, O.A. Дунаевский // Эпидемиология и инфекционные болезни. 2001. — № 4. — С. 5 — 7.
  94. .Я. Изучение реакции нарастания титра фага в условиях практической лаборатории / Б. Я. Понявин // ЖМЭИ. 1960. — № 6. -С. 135.
  95. М.З. Использование бруцеллезного фага для диагностики бруцелл / М. З. Попхадзе // ЖМЭИ. 1968. — № 2. — С. 119 — 124.
  96. Применение РНФ для индикации дизентерийных бактерий флекснера в организме зараженных кроликов / А. Ю. Иллютович и др. // Бюлл. эксп. биол. и мед. 1958. — № 6. — С. 78.
  97. Л.П. Выделение и изучение основных биологических свойств бактериофагов Citrobacter и их применение в диагностике / Л. П. Пульчеровская // Автореф. дис.. канд. биол. наук. Саратов, 2004. -21с.
  98. И.П. К диагностике рожи свиней / И. П. Ревенко // Ветеринария. 1970. — № 6. — С. 13.
  99. И.П. Бактериофаги и их использование в ветеринарной практике. Киев: Урожай. — 1978. — С. 41−88.
  100. .К. Применение метода нарастания титра фага для исследования объектов внешней среды / Б. К. Рубашкина, С. Ф. Казакова // ЖМЭИ. 1959. — № 6. — С. 110−112.
  101. B.C. Фагочувствительность аэробных спорообразующих бактерий / B.C. Русалеев // Ветеринария. 1990. — № 8. — С. 29.
  102. В.И. Современное состояние изученности фагов фитопатогенных бактерий / В. И. Самойленко // Бактериальные болезни растений. М.: Колос, 1981. — С. 27−42.
  103. E.H. Выделение и изучение биологических свойств бактериофагов Bordetella bronchiseptica и разработка на их основебиопрепарата для индикации и идентификации // Автореф. дис.. канд. биол. наук. -2012.-21 с.
  104. Ф.Е. Новый метод бактерюлопчно1 д1агностики за допомогою бактерюфага / Ф. Е. Сергиенко // Мшробюл. журнал А.Н. УССР. -1936.-№ 1.-С. 85−112.
  105. М.А. Определитель зоопатогенных микроорганизмов. Справочник. / М. А. Сидоров, Д. И. Скородумов, В. Б. Федотов. М.: Колос -1995.-320.
  106. Г. Молекулярная биология вирусов бактерий / Г. Стент -М.: Мир, 1965.-452 с.
  107. Н.В. Сравнительное изучение РНФ для выявления носительства дизентерийных бактерий: Автореф. дис.. канд. мед. наук. -Симферополь. 1964. — С. 6−20.
  108. В.Д. Экспериментальное обоснование нового принципа обнаружения дизентерийных и брюшнотифозных бактерий с помощью фага / В. Д. Тимаков, Д. М. Гольдфарб // ЖМЭИ. 1956. — № 10. — С. 3−7.
  109. В.Д. Об условиях взаимодействия фага и бактериальнойклетки / В. Д. Тимаков, Д. М. Гольдфарб // Вестник АМН СССР. 1958. — № 2. -С. 37.
  110. В.Д. Реакция нарастания титра фага (РНФ) / В. Д. Тимаков, Д. М. Гольдфарб М., 1962. — С. 65−71.
  111. А.С. Ультраструктура вирусов бактерий / А. С. Тихоненко М.: Наука, 1968. — С. 89−168.
  112. Факторы патогенности некоторых условно-патогенных энтеробактерий / О. С. Якушенко и др. // Диагност лечение, профилактика инваз. и инфекц. заболев, с.-х. животных. Ставроп. с.-х. ин-т. — Ставрополь, 1991.-С. 55 -59.
  113. Н.А. Выделение и изучение основных биологических свойств бактериофагов Proteus, конструирование на их основе биопрепарата и разработка параметров практического применения // Автореф. дис.. канд. биол. наук. Саратов. — 2006. — 22 с.
  114. Характеристика биологических свойств бактериофагов вида Bacillus subtilis / А. Х. Мустафин и др. // Вестник Ульяновской государственной сельскохозяйственной академии. 2011. № 1 (13). С. 79.
  115. У. Генетика бактерий и бактериофагов / У. Хейс М.: «Мир», 1965.-С. 288−294.
  116. Н.А. Изучение ацетатной среды как теста для дифференциации энтеробактерий / Н. А. Хоменко, Б. С. Киселева // Жур. микробиол. 1973. — № 12. — С. 101 — 105.
  117. К.И. Применение специфического фактериофага для диагностики паратифозного аборта кобыл / К. И. Цветков // Ветеринария. -1941.-№ 6.-С. 4−6.
  118. JI.Г. Типирование S. typhimurium при помощи селекционированных фагов / Л. Г. Чиракадзе, Т. Г. Чинашвили // ЖМЭИ. -1974.-№ 3,-С. 72−78.
  119. И.В. Изучение РНФ как метода индикации бактерий дизентерии во внешней среде / И. В. Шантаренко // Тез. докл. и выступл. на 5 Всес. научн. конф. по санитарн. микробиол. М. — 1962. — С. 89−93.
  120. А.Г. Усовершенствование методов выделения, идентификации и индикации бактерий Pseudomonas aeruginosa / А. Г. Шестаков // Автореф. дис.. канд. биол. наук. Саратов, 2010 — 22 с.
  121. М.К. Некоторые свойства листериозного бактериофага / М. К. Щеглова // ЖМЭИ. 1962. — № 1. — С. 99−102.
  122. A prospective microbiologic study of bacteriuria in patients with indwelling urethral catheters / J.W. Warren et al. // J. Infect. Dis. 1982. — Vol. 146.-P. 719−723.
  123. Ackermann H.W. Taxonomic changes in tailed of enterobacteria / H.W. Ackermann, M.S. DuBow, M. Gershman // Archies of virology. 1997. — № 142.-P. 1381 — 1390.
  124. Activation of the 2'-N-Acetyltransferase Gene aac (2')-Ia. in Providencia stuartii by an Interaction of AarP with the Promoter Region / P.M. Hawkey [et al.] // J. Antimicrob. Chemother. 1984. — Vol. 13. — P. 209−226.
  125. Activities of oral antibiotics on Providencia strains isolated from institutionalized elderly patients with urinary tract infections / G. Cornaglia et al. // Antimicrob. Agents Chemother. 1995. — Vol. 39. — P. 2819−2821.
  126. Adams M. H. Bacteriophages / M.H. Adams Interscience Publishers, Inc., New York, 1959. — 473 p.
  127. Albert M.J. Association of Providencia alcalifaciens with Diarrhea in Children / M.J. Albert, A.S. Farnque, D. Mahalanabis // J. Clin. Microbiol. 1998. -Vol. 36.-P. 1433−1435.
  128. An outbreak of nosocomial Proteus rettgeri urinary tract infection / J.O. Lindsey et al. // Am. J. Epidemiol. 1976. — Vol. 103. — P. 261−269.
  129. Bacteremia in a long-term-care facility: a five-year prospective study of 163 consecutive episodes. / R.B. Muder et al. // Clin. Infect. Dis. 1992. -Vol. 14.-P. 647−654.
  130. Bacteriemia por Providencia rettgeri / H.E. Villar et al. // Enferm. Infecc. Microbiol. Clin. 1998. — Vol. 16. — P. 261−264.
  131. Bergey’s manual of determinative bacteriology / D. Bergey et al. -Baltimore: Williams and Wilkins Co., 1923. 442 p.
  132. Boyd J. S. K. Bacteriophage and heredity / J. S. K. Boyd // Nature. -1954.-V.173.-P. 50−51.
  133. Bradley D.E. The fine structure of bacteriophages / D.E. Bradley, D. Kay // J. Gen. Microbiol. 1960. — V.23. — P. 553−563.
  134. Breed K. Bergey’s manual of determinative bacteriology / K. Breed, E. Murray, N. Smith Baltimore, 1957. — 1094 p.
  135. Brooke M.S. Biochemical investigations on certain urinary strains of Enterobacteriaceae: (1) B. cloacae, (2) «Providence.» /M.S. Brooke // Acta Pathol Microbiol. Scand. — 1951 -N29. — P. 1−8.
  136. Burnet F.M. Induced lysogenicity and mutation of bacteriophage within lysogenic bacteria / F.M. Burnet, D. Lush. // Australian J. Exptl. Biol. Med. Sci.- 1936.-V.14.-P. 27−38.
  137. Ceftazidime and Aztreonam Resistance in Providencia stuartii: Characterization of a Natural TEM-Derived ExtendedSpectrum (3-Lactamase,
  138. TEM-60 / N. Franeesehini et al. // Antimicrob. Agents Chemother. 1998. — Vol. 42.-P. 1459−1462.
  139. Characteristics of invasion of H Ep-2 cells by Providencia alcalifa ciens I M.J. Albert et al. // J. Med. Microbiol. 1995. — Vol. 42. — P. 186−190.
  140. Characterization of an Unusual Strain of Proteus rettgeri Associated with an Outbreak of Nosocomial Urinary-Tract Infection / W.H. Traub et al. // Appl. Microbiol. 1971. — Vol. 22. — P. 278−283.
  141. Cope E.J. Study of Atypical Enteric Organisms of the Schigella Group Am. / E.J. Cope, K. Kilander // J. Public Health. 1942. — Vol. 32. — P. 352−354.
  142. Davison P.F. The physical properties of T7 bacteriophage / P.F. Davison, D. Freifelder // J. Mol. Biol. 1962. — P. 635−642.
  143. Deoxyribonucleic acid relatedness of Proteus and Providencia species / D.J. Brenner et al. // Int. J. Syst. Bacteriol. 1978. — Vol. 28. — P.269−282.
  144. Duguid J.P. Adhesive properties of Enterobacteriaceae / J.P. Duguid, D.C. Old // Bacterial Adherence ed. E.H. Beachey. London. — Chapman and Hall. — 1980.-P. 187−215.
  145. Edwards P.R. Identification of Enterobacteriaceae / P.R. Edwards, W.N. Ewing // Burgess publ. Co. Minneeaprolis. — 1972.
  146. Enteropathogenicity of Providencia alcalifaciens, a newly recognized pathogen causing food-poisoning / T. Honda et al. // Nippon Rinsho. 2002. -Vol. 60.-P. 1228−1232.
  147. Ewing W.H. The Providencia group: an intermediate group of enteric bacteria / W.H. Ewing, K.E. Tanner, D.A. Dennard //J. infect. Dis. 1954. — Vol. 94.-P. 134−140.
  148. Ewing W.H. The nomenclature and taxonomy of the Proteus and Providence groups / W.H. Ewing // Int. Bull. Bacteriol. Nomencl. Taxon. 1958. -Vol. 8.-P. 17−22.
  149. Ewing W.H. Biochemical characterization of Providencia / W.H. Ewing, B.R. Davis, J. V. Sikes // Public Health Lab. 1972. — Vol. 30. — P. 25−38.
  150. Ewing W.H. Ewings Identification of Enterobacteriaceae / W.H. Ewing, P.R. Edwards 4 th ed. — New York. — Amsterdam, Oxford, Elsevier. -1986.-V. 536.
  151. Extended-Spectrum p-Lactamases in Enterobacteriaceae in Buenos Aires, Argentina, / M. Quinteros et al. // Public Hospitals Antimicrob. Agents Chemother. — 2003. — Vol. 47. — P. 2864−2867.
  152. Filipkowska Z. Persistence of Category A Select Agents in the Environment / Z. Filipkowska // Acta Microbiol Pol. 2003. — Vol. 52. — P. 57−66.
  153. Franklin K. Overexpression and Characterization of the Chromosomal Aminoglycoside 2 -N -Acetyltransferase of Providencia stuartii. / K. Franklin, A.J. Clarke // Antimicrob. Agents Chtmother. 2001. — Vol. 45 — P. 2238−2244.
  154. Freeman V.J. Studies on the virulence of bacteriophage infected strains of Corynebacterium diphtheriae / V.J. Freeman // J. Bacteriol. 1951. -V.61.-P. 675−688.
  155. Graigie J. Typing of typhoid bacilli with Vi bacteriophage, suggestions for its standardization / J. Graigie, A. Felix // Lancet. 1947. — N14. -P. 823.
  156. Gomes L. de S. Classification, identification, and Clinical Significance of Proteus, Providencia, and Morganella / L. de S. Gomes // Rev. Inst. Lutz. 1944. — Vol. 4. — P. 183−195.
  157. Hawkey P.M. The Genera Proteus, Providencia, and Morganella / P.M. Hawkey, M.R. Potten, M. Stephens // J. Hosp. Infect. 1982. — Vol. 3. — P. 369−374.
  158. Hawkey P.M. Selective and differential medium for the primary isolation of members of the Proteeae / P.M. Hawkey, A.M. Cormick, R.A. Simpson // J. Clin. Microbiol. 1986. — Vol. 23. — P. 600−603.
  159. Haynes J. Providencia alcalifaciens and travellers' diarrhoea. J. Haynes, P.M. Hawkey // Br. Med. I. 1989. — Vol. 299. — P. 94−95.
  160. Isolation of insect pathogenic bacteria, Providencia rettgeri, from Heterorhabditis spp. / T.J. Jackson et al. // J. Appl. Bacteriol. 1995. — Vol. 78. -P. 237−244.
  161. Isolation of Providencia heimbachae from human feces / C.M. O’Hara et al. //J. Clin. Microbiol. 1999. — Vol. 37. — P. 3048−3050.
  162. Kahlich R. Nalez enterobakterove toxikose v Ramcidiagnostiky strevnich epidemii / R. Kahlich, A. Palecek, B. Korych // Voj. Zdrav. Listy. -1982.-V. 51.-P. 260−263.
  163. Katznelson H. Rapid phage plague count method for the detection of bacteria as applied to the demonstration of intern along borne bacterial infection of seed / H. Katznelson, M. Sutton // J. Bact. 1951. — V. 61. — N1. — P. 689.
  164. Kauffmann F. Enterobacteriaceae / F. Kauffmann Capenhagen: Einar Munksgaard. -1951.
  165. Kauffmann F. Classification and nomenclature of Enterobacteriaceae / F. Kauffmann, P.R. Edwards // Int. Bull. Bacterial. Namencl. Taxon. 1952. -Vol. 2. — P. 2−8.
  166. Kauffmann F. On the Classification and nomenclature of Enterobacteriaceae. / F. Kauffmann // Riv. 1st. Sieroter. Ital. 1953. — Vol. 28. -P. 485−491.
  167. Kauffmann F. Enterobacteriaceae. 2nd ed. / F. Kauffmann -Copenhagen, Denmark. Einar Munksgaard. — 1954.
  168. Kauffmann F. On the classificacion and nomenclature of family Enterobacteriaceae / F. Kauffmann // Intern. Bull. bact. Nomencl. a. Tacsonom., 1963.-V. 13.-P. 187- 193.
  169. Ladds P.W. Providencia rettgeri meningitis in hatchling Saltwater crocodiles / P.W. Ladds, J. Bradley, R.G. Hirst // Aust. Vet. J. 1996. — Vol. 74. -P. 397−398.
  170. Lambert T. Characterization of transposon Tnl528, which confers amikacin resistance by synthesis of aminoglycoside 3'-0-phosphotransferase type
  171. VI. / T. Lambert, G. Gerbaud, P. Courvalin // Antimicrob. Agents Chemother. -1994. Vol. 38. — P. 702−706.
  172. Les proprietes biochimiques characteristiques du gence Proteus. Inclusion souhaitable des Providencia dans celui-cei / R. Buttiaux et al. Ann. Inst. Pasteur. — Paris. — 1954. — Vol. 87. — P. 375−386.
  173. Levintal C. Structural developmet of a bacteriae virus / C. Levintal, A. Fisher // Biochim. Biophys. Acta. 1952. — V. 9. — N4. — P. 419.
  174. Lindberg R.B. Phage tuping of Ps. aeruginosa chinical and epidemiologi considerations / R.B. Lindberg, R.L. Latta // J. Infect. Diseases. -1974. V. 130. — N5. — P. 32 — 34.
  175. Martin W.J. Enterobacteriaceae / W.J. Martin, J.A. Washington // Manual of clinical microbiology. 3rg ed. Eds. E.H. Lennette et al. — Washington D.S.: ASM, 1980. — P. 195 — 209.
  176. Mathan M.M. A Large Outbreak of Foodborne Infection Attributed to Providencia alcalifaciens / M.M. Mathan, V.l. Mathan, M.J. Albert // J. Pathol. -1993.-Vol. 171.-P. 67−71.
  177. Mchale P.J. Antibiotic resistance in Providencia stuartii isolated in hospitals. / P.J. Mchale, C.T. Keane, G. Dougan // J. Clin. Microbiol. 1981. -Vol. 13.-P. 1099−1104.
  178. Mekell J. Numerical Taxonomic stdy of Proteus, Providencia baceria. / J. Mekell, D. Jones //J. Appl. Microbiol. 1976. — Vol. 41. — P. 143−161.
  179. Molecular analysis of type 3 fimbrial genes from Eschirichia coli, Klebsiella and Citrobacter species / P.D. Martino et al. II Can. J. Microbiol. -2003. Vol. 49. — P. 443−449.
  180. Molecular epidemiology of catheter-associated bacteriuria in nursing home patients / G. Rahav et al. // J. Clin. Microbiol. 1994. — Vol. 32. — P. 10 311 034.
  181. MR/K Hemagglutination of Providencia stuartii Correlates with Adherence to Catheters and with Persistence in Catheter-Associated Bacteriuria / H.L.T. Mobley et al. // J. Inf. Dis. -1988. Vol. 157. — P. 264−271.
  182. Muller H E. Providencia friedericiana, a new species isolated from penguins. / Muller H E. // Int J. Syst Bacteriol. 1983. — V. 33. — P. 709−715.
  183. New Members of the Family Enterobacteriaceae / C.A. Stuart et al. //J. Bacterial. 1943.-Vol. 45.-P. 101−119.
  184. New TEM Variant (TEM-92) Produced by Proteus mirabilis and Providencia stuartii Isolates / C. De Champs et al. // Antimicrob. Agents Chemother.-2001.-Vol. 45.-P. 1278−1280.
  185. Old D.C. Hemagglutinins and Fimbriae of Providencia spp. / D.C. Old, S.S. Scott//J. Bacteriol. 1981.-Vol. 146.-P. 404−408.
  186. Ornstein M. Classification identification and clinical significance of Proteus, Providencia, and Morganella / Ornstein M. // Z. Hyg. 1920. — Vol. 91. -P. 152−178.
  187. Outbreak of a nosocomial infection with a strain of Proteus rettgeri resistant to many antimicrobials. / L.D. Edwards et al. // Am. J. Clin. Pathol. 1974. — Vol. 61. — P. 41 -46.
  188. Owen R.J. Guanine-plus-cytosine contents of type strains of the genus Providencia / R.J. Owen, A.U. Ahmed, C.A. Dawson // Int. J. Syst. Bacteriol. -1987.-V.37.-P. 449−450.
  189. Pathogenesis of Providencia alcalifaciens-induced diarrhea / M.J. Albert et al. // Infect Immun. 1992. — N60. — P. 5017−5024.
  190. Penner J.L. The Prokaryotes: a handbook on habitats, isolation: and identification of bacteria / J.L. Penner // ed. by A. Balows et al. 2nd ed. -Berlin.: Springer-Verlag. — 1991. — P. 2849−2862.
  191. Pickett M.J. Manual of Clinical Microbiology / M.J. Pickett, D.G. Hollis, E. Bottone // 5th ed., ed. in chief A.Ballows. Washington: Am Soc Mirobiol. 1991. — P. 410−28.
  192. Prentice B. A review of Providencia bacteremia in a general hospital, with a comment on patterns of antimicrobial sensitivity and use / B. Prentice, B.L. Robinson // Can. Med. Assoc. J. 1979. — Vol. 121. — P. 745−749.
  193. Prevalence of invasive ability and other virulence associated characteristics in Providencia alcalifaciens strains isolated in S5o Paulo, Brazil / J.M.Janda et al. // Curr. Microbiol. — 1998. — Vol. 37. — P. 159−165.
  194. Proom H. Amine production and nutrition in the Providence group / H. Proom//J. Gen. Microbiol.- 1955.-Vol. 13.-P. 170−175.
  195. Providencia alcalifaciens strains translocate from the gastrointestinal tract and are resistant to lytic activity of serum complement / M.J. Albert et al. // Infect. Immun. 1992. — Vol. 60. -P. 5017 -5024.
  196. Providencia heimbachae, a new species of Enterobacteriaceae isolated from animals / H.E. Muller et al. // Int. J. Syst. Bacteriol. 1986. — Vol. 36. — P. 252−256.
  197. Providencia rustigianii: a new species in the family Enterobacteriaceae formerly known as Providencia alcalifaciens biogroup 3. / F.W. Hickman-Brenner etal.//J. Clin. Microbiol.- 1983.-Vol. 17.-P. 1057−1060.
  198. Providencia stuartis as an Etiologia Agents in Neonatal Diarrea in Calves / D.G. Wardhalm et al. // Amer. J. veter. Res. 1969. — Vol. 30. — N9. -P. 1573- 1575.
  199. Providencia vernicola sp. Nov., isolated from infective yuveniles of the entomopathogenic nematode steinernema thermophilum / V.S. Somvanshi et al. // Int. J. Syst. Evol. Microbiol. 2006. — Vol. 56. — Pt. 3. — P. 629−633.
  200. Rustigian R. The Genera Proteus, Providencia, and Morganella / R. Rustigian, C.A. Stuart // Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 1941. — Vol. 47. — P. 108−112.
  201. Senior B.W. Modified MacConkey medium which allows simple and reliable identification of Providencia stuartii / B.W. Senior // J. Clin. Microbiol. -1997.-Vol. 46.-P. 524−527.
  202. Senior B.W. Proteus, Morganella and Providencia / B.W. Senior. In: Collier L, editor. Topley & Wilson’s microbiology and microbial infections. -London, United Kingdom.: Arnold. — 1998. — P. 1035−1050.
  203. Shaw C. Biochemical classification of Proteus and Providence cultures / C. Shaw, P.H. Clarke // J. Gen. Microbiol. 1955. — V. 13. — P. 155−161.
  204. Singer J. Biochemical investigation of Providence strains and their relationship to the Proteus group / J. Singer, J. Bar-Chay // J, Hyg. 1954. — V.52. -P. 1−8.
  205. Spach D.H. Clinical infectious disease: a practical approach / D.H. Spach, W.C. Liles. ed. by R.K. Root. — New York.: Oxford University Press, 1999.-P. 337−348.
  206. Stiekler D.J. Automatic implantable cardioverter defibrillator pocket infection due to Providencia rettgeri: a case report / D.J. Stiekler, C. Fawsett, C. Clawla // J. Hosp. Infect. 1985. — Vol. 6. — P. 221−223.
  207. Stock I. Naturaiantibiotic susceptibility of Providencia stuartii, P. rettgeri, P. alcalifaciens and P. rustigianii strains / I. Stock, B. Wiedemann // J. Med. Microbiol. 1998. — Vol. 47. — P. 629−642.
  208. TEM-24 Produced by Four Different Species of Enterobacteriaceae, Including Providencia rettgeri, in a Single Patient / H. Marchandin et al. // Antimicrob. Agents Chemother. 1999. — Vol. 43. — P. 2069−2073.
  209. The Genera Proteus, Providencia, and Morganella / D. Stiekler et al. // Eur. J. Clin. Microbiol. Infect. Dis. 1998. — Vol. 17. — P. 649−652.
  210. Uetake H. Conversion of somatic antigens in Salmonella by phage infection leading to lysis or lysogeny / H. Uetake // Virology. 1958. — V.5. — P. 68−91.
  211. Unusual Enterobacteriaceae: «Proteus rettgeri» that «change» into Providencia stuartii I J.J. Farmer et al. // J. Clin. Microbiol. 1977. — Vol. 6. -P. 373−378.
  212. Usefulness of trehalose fermentation and L-glutamic acid decarboxylation for identification of biochemically aberrant Providencia stuartii strains / R. Fischer et al. // J Clin Microbiol. 1989. — N27. — P. 1969−1972.
  213. Wardhalm D.G. Providencia stuartis as an Etiologia Agents in Neonatal Diarrea in calves / D.G. Wardhalm, W.A. Meinershagen, F.W. Frank // Am. J. Vet. Res. 1969. — Vol. 30. — P. 1573−1575.
  214. Warren J.W. Providencia stuartii: a common cause of antibiotic-resistant bacteriuria in patients with long-term indwelling catheters / J.W. Warren // Rev. Infect. Dis. 1986. — Vol. 8. — P. 61−67.
  215. Woods T.D. Complete Genome Sequence of Providencia stuartii Clinical Isolate MRSN 2154 / T.D. Woods, C. Watanakunakom // South. Med. J. -1996.-Vol. 89.-P. 221−224.
Заполнить форму текущей работой

Заказал и сдал!