Дипломы, курсовые, рефераты, контрольные...
Срочная помощь в учёбе

Создание векторов для тканеспецифической экспрессии генов эритропоэтина и гранулоцит колониестимулирующего фактора человека в молочной железе животных

Диссертация: Создание векторов для тканеспецифической экспрессии генов эритропоэтина и гранулоцит колониестимулирующего фактора человека в молочной железе животных
ДиссертацияПомощь в написанииУзнать стоимостьмоей работы

Научная новизна работы. Впервые созданы отечественные векторные конструкции, содержащие кодирующие последовательности генов человека: эритропоэтина и гранулоцит колониестиму-лирующего фактора, тканеспецифическая экспрессия которых обусловлена наличием в рекомбинантных плазмидах регуляторных элементов гена asi-казеина быка. Определены оптимальные условия проведения анализа интеграции трансгена… Читать ещё >

Содержание

  • 1. Обзор литературы
    • 1. 1. Продукция рекомбинантных белков в составе молока трансгенных животных
    • 1. 2. Гены казеинов молока
    • 1. 3. Получение и использование рекомбинантных белков эритропоэтина и гранулоцит колониестимулирующего фактора человека
  • 2. Материалы и методы исследований
    • 2. 1. Используемые материалы и объекты исследований
    • 2. 2. Выделение ДНК
    • 2. 3. Расщепление плазмидной ДНК рестриктазами
    • 2. 4. Электрофоретическое разделение фрагментов ДНК
    • 2. 5. Элюция фрагментов ДНК из геля и их очистка
    • 2. 6. Лигирование
    • 2. 7. Трансформация плазмидной ДНК
    • 2. 8. Детекция трансгена методом ПЦР-амплификации ДНК
    • 2. 9. Определение нуклеотидной последовательности ДНК
  • 3. Результаты исследований и их обсуждение
    • 3. 1. Создание вектора, содержащего структурный ген эритропоэтина человека и регуляторные районы гена asi- казеина быка
    • 3. 2. Выделение, молекулярное клонирование структурной части гена гранулоцит колониестимулирующего фактора человека
    • 3. 3. Некоторые аспекты подготовки раствора ДНК для микроинъекций
    • 3. 4. Идентификация трансгена с использованием полиме-разно-цепной реакции
    • 3. 5. Использование полученных генных конструкций при создании ретровирусных векторов
  • Выводы 84 Практические предложения
  • Список используемой литературы

Создание векторов для тканеспецифической экспрессии генов эритропоэтина и гранулоцит колониестимулирующего фактора человека в молочной железе животных (реферат, курсовая, диплом, контрольная)

Актуальность исследований. В последние годы быстрыми темпами развиваются биотехнологические программы по получению трансгенных животных с измененным генотипом. Одним из перспективных направлений в этой области является создание и использование сельскохозяйственных животных, синтезирующих ре-комбинантные белки человека.

Развитие этого направления связано с возможностью создания генных конструкций, которые при интеграции способны обеспечивать экспрессию данного гена в определенное время и в определенных органах или тканях.

Во всем мире существует огромный коммерческий интерес к производству целого ряда белков, необходимых для проведения диагностических, терапевтических и профилактических мероприятий в медицине и ветеринарии. Преимущества использования сельскохозяйственных животных в качестве биореакторов очевидны. Молочная железа сельскохозяйственных животных обладает огромным потенциалом синтеза белков и является идеальным источником производства рекомбинантных белков.

Необходимым условием для направленной экспрессии рекомбинантных белков в молочной железе трансгенных животных является использование в генных конструкциях регуляторных элементов генов белков молока. Анализ литературных данных (Clark R.A. et al. 1994; Korhonen V.P.et al., 1997; Volf E. et al., 1997; и др.) позволяет сделать вывод, что регуляторные последовательности гена as 1-казеина быка (Bos taurus) могут успешно использоваться для тканеспецифической экспрессии экзогенных белков в молочной железе сельскохозяйственных животных.

В рамках данной проблемы интересными представляются эксперименты с генами, кодирующими белки, минимальные количества которых способны оказывать существенное влияние на физиологические процессы организма. В частности, к ним относятся белки, стимулирующие рост и дифференцировку клеток крови: эритропоэтин (ЭПО) и гранулоцит колониестимулирующий фактор (Г-КСФ) человека.

Цель и задачи исследования

Исходя из вышеизложенного, целью настоящей работы являлось создание векторов, содержащих гены, кодирующие эритропоэтин и гранулоцит колониестимулирующий фактор человека, для тканеспецифической экспрессии в молочной железе животных при проведении биотехнологических исследований по трансгенозу. В связи с этим решались следующие задачи:

1. создать рекомбинантную плазмиду, содержащую структурный ген эритропоэтина человека под контролем регулятор-ных элементов гена asi-казеина быка;

2. выделить нуклеотидную последовательность гена гранулоцит колониестимулирующего фактора человека и клонировать в вектор, включающий регуляторные районы гена asi-казеина быка;

3. разработать способ обработки эмбрионов на ранней стадии их развития с целью достоверного анализа интеграции трансгена.

Научная новизна работы. Впервые созданы отечественные векторные конструкции, содержащие кодирующие последовательности генов человека: эритропоэтина и гранулоцит колониестиму-лирующего фактора, тканеспецифическая экспрессия которых обусловлена наличием в рекомбинантных плазмидах регуляторных элементов гена asi-казеина быка. Определены оптимальные условия проведения анализа интеграции трансгена у эмбрионов млекопитающих ранних стадий развития.

Практическая значимость. Созданные рекомбинантные плазмиды могут быть использованы в разработке технологий по получению трансгенных сельскохозяйственных животных, продуцирующих рекомбинантные эритропоэтин и гранулоцит колоние-стимулирующий фактор человека в составе молока.

На основе этих генных конструкций были созданы ретрови-русные векторы для получения соматических трансгенных животных, продуцирующих клетками молочной железы белки, имеющие фармакологическое значение.

Рекомбинантные плазмиды могут найти применение не только при проведении исследований в области трансгеноза, но и в дальнейших молекулярно-генетических работах по клонированию с целью создания новых векторов.

Метод определения интеграции трансгена на стадии эмбриона пригоден для практического использования при проведении анализа генома зародышей млекопитающих. Этот метод также можно применять при взятии биопсии у бластоцист с целью детекции трансгена и дальнейшей трансплантации только трансгенных эмбрионов.

Положения, выносимые на защиту:

• Тканеспецифическую экспрессию эритропоэтина и грану-лоцит колониестимулирующего фактора человека в молочной железе трансгенных животных обеспечивают ре-гуляторные элементы гена asi-казеина быка (Bos taurus).

• Нуклеотидная последовательность ОС1/ОС2-фрагмента созданной рекомбинантной плазмиды pGCm идентична опубликованной первичной структуре гена гранулоцит колониестимулирующего фактора человека.

• Предварительная обработка эмбрионов рестриктазой Dpnl и протеиназой К перед проведением ПЦР-анализа позволяет более достоверно определить интеграцию трансгена у бластоцист млекопитающих.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

Одним из основных факторов, необходимых для производства высококачественных продуктов животноводства, наряду с улучшением кормовой базы, является повышение генетического потенциала сельскохозяйственных животных, призванного обеспечить более эффективное использование кормов и значительное повышение продуктивности. Однако для существенного повышения генетического потенциала методами классической селекции требуется не одно десятилетие. В связи с этим возникает необходимость в разработке технологий, позволяющих более быстрыми темпами создавать новые генотипы животных с желаемыми признаками, и, таким образом, резко ускорить селекционный процесс.

Исследования, проведенные в последние годы в области эм-бриоинженерии, молекулярной биологии и генной инженерии свидетельствуют о принципиальной возможности применения биоинженерных технологий для получения и ускоренного размножения высокоценных племенных животных. Разработка эффективных технологий получения трансгенных и клонированных животных в принципе позволяет за одно поколение достигать большего генетического прогресса, чем методами классической селекции за десятилетия.

Биоинженерные технологии, основанные на прямом переносе дополнительных генов в геном животных, с целью генетического совершенствования животных, дают возможность:

1) получать селекционный эффект по отдельным признакам в несколько раз быстрее, чем при обычной селекции;

2) внедрять в популяцию определенный ген, не комбинируя, как при естественном скрещивании, множеством неизвестных, и часто нежелательных генов, а вводя в геном животного отдельный ген или группу генов, определяющих конкретный признак.

3) достигать изменения признаков, которые до последнего времени не поддавались селекции (устойчивость к вирусным инфекциям);

4) создавать генетические варианты, которые никогда не существовали у животных данного вида (например, продукция лекарственных веществ с молоком);

Все эти преимущества биоинженерных технологий послужат основой для резкого ускорения селекционного процесса, что позволит существенно повысить продуктивность сельскохозяйственных животных и качество полученной продукции и, возможно, изменят наши представления о коммерческой значимости сельскохозяйственных животных.

ВЫВОДЫ.

1. Выделены и клонированы регуляторные последовательности гена asi-казеина быка. Амплифицированные 5'- и 3'- фрагменты ДНК включают функциональные элементы (промоторную область, ТАТА-бокс, сигналы сплайсинга и полиаденилирования) гена asi-казеина быка, обеспечивающие тканеспецифическую экспрессию генов в молочной железе животных.

2. Создана рекомбинантная плазмида paslEpo, содержащая ген эритропоэтина человека. Сконструированный вектор обладает необходимыми компонентами для тканеспецифической экспрессии гена эритропоэтина человека в клетках молочной железы животных.

3. Выделен и клонирован фрагмент ДНК, содержащий ген гранулоцит колониестимулирующего фактора человека, рестрикт-ный анализ которого соответствует опубликованной рестриктной карте, а нуклеотидная последовательность фрагмента идентична последовательности нуклеотидов гена гранулоцит колониестимулирующего фактора человека, за исключением позиции 548 во втором интроне, в которой выявлена замена С на Т.

4. Получена рекомбинантная плазмида pGCm, включающая структурный ген гранулоцит колониестимулирующего фактора человека и регуляторные элементы гена asi-казеина быка, наличие которых позволяет обеспечивать специфическую экспрессию гена в тканях молочной железы трансгенных животных.

5. Предложенный способ предварительной обработки эмбрионов с использованием рестриктазы Dpnl и протеиназы К позволяет исключить ложноположительные ответы при проведении детекции трансгена у эмбрионов ранних стадий развития.

6.Созданная генная конструкция, содержащая ген эритропо-этина человека под контролем промотора гена asi-казеина быка, при ее использовании в составе ретровирусного вектора проявляет тканеспецифическую экспрессию в эпителиальных клетках молочной железы сельскохозяйственных животных.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ.

1. При анализе интеграции трансгена на стадии эмбриона рекомендуется использовать предложенный способ предамплифи-кационной обработки образцов ферментами Брп1 и протеиназой К для снижения ложноположительных ответов и более точной идентификации трансгена.

2. Созданные генные конструкции, содержащие гены эри-тропоэтина и гранулоцит колониестимулирующего фактора человека, могут быть использованы и используются в разработке технологии трансгенеза.

Показать весь текст

Список литературы

  1. А.Р. Совершенствование некоторых этапов технологии получения трансгенных сельскохозяйственных животных / автореф. дисс. на соиск. уч. ст., 1997
  2. Брэм Г., X. Кройслих, Г. Штранцингер. Экспериментальная генетика в животноводстве. Основы методов в биотехнологии. 1995.-М. — С. 183
  3. В.И. Физиология сельскохозяйственных животных, М.: Агропромиздат. — 1990. — 511С.
  4. Д. Клонирование ДНК. Методы. М.: Мир. — 1988. -С. 538
  5. И.Л., Захарова Е. С., Якубовская Р.И.и др. Лакто-феррин: свойства и перспективы биотехнологического производства // Биотехнология. 1998. — N 4. — С. 3−16
  6. ДыбанАЛ. Трансгенные млекопитающие в биологии развития // Онтогенез. 1989. — Т. 6. — С. 577−589
  7. H.A., Эрнст Л. К., Брем Г. / Трансгенные животные и возможности их использования. ВИЖ. — 2000. — С. 37−39
  8. М.М., Народицкий Б. С. Перспективы использования современных методов введения генетического материала вэмбрионы млекопитающих // Сельскохозяйственная биология. 2000.-N 2.
  9. Ю.Кетлинский С. А., Симбирцев A.C., Воробьев A.A./ Эндогенные иммуномодуляторы 1992. — С.-Пб. — Гиппократ.- 256 С.
  10. J1 урияС., Дарнслл Дж., Балтимор Д. и др. Общая вирусология. М. — 1981
  11. Т., Фрич Э., Сэмбрук Дж. Молекулярное клонирование. М.: Мир. — 1984. — С. 479
  12. JI.C., Коробко И. В., Андреева JT.E. и др., О функциональной значимости 5'-области гена k-казеиа быка // Доклады Академии наук.- 1995.-Т. 340.-N 1.-С. 111−113
  13. Е.А. Эмбриоинженерные аспекты повышения эффективности получения трансгенных животных / автореф. дисс. на соиск. уч. ст., 2000.
  14. П.Свердлов Е. В. Очерки современной молекулярной генетики. // Мол. генетика, микробиология и вирусология. 1996. — N 4
  15. В.Н. Исследования геномов к концу 1999 года // Со-росовский образовательный журнал 2000. — Т. 6.-N 1.-С. 24
  16. В.А. Молекулярно-генетические аспекты использования ретровирусных векторов для трансгенеза в животноводстве / автореф. дисс. на соиск. уч. ст., 2001
  17. Транскрипция и трансляция. Методы, под ред. Б. Хеймса, С.Хиггинса. М. — Мир. — 1987. — С.69
  18. America society of Clinical Oncology. Recommendation for the us hemapoetic colony-stimulating factorts: evidence-based, clinical practice guidelines // Jour, of Clinical Oncology. 1994. — N 12.-P. 2471−2508
  19. Alexander L.J., SteWart A.F., Mackinlay A.G. et al. // Eur. J. Biochem. 1988. — Y. 178. — P. 395−401
  20. Archibald A.L., McClenaghan M., Hornsey V. et al. High-level expression of biologically active human pi-antitrypsin in the milk of transgenic mice // Proc. Natl. Acad. Sci U.S.A. 1990. — V. 87. -P. 5178−5182
  21. Bayna E.M., Rosen J.M. Tissue-specific, high-level expression of the rat whey acidic protein gene in transgenic mice // Nucl. Acids Res.-1990. -V. 18. -N 10. P. 2977−2985
  22. Birnboim N.C., Doly J. A rapid alcaline extraction procedure for serening recombinant plasmid DNA // Nucl. Aids Res.- 1979. -V.7.-P. 1513−1523
  23. Bischff R., Degryse E., Perraud F. et al. A 17.6 kbp region lo-calisated upstream of the rabbit WAP gene directs high level expression of a functional human protein variant in transgenic mouse milk // FEBS Lett. 1992. — V. 305. — P. 265−268.
  24. Blin N., Stefford D.W. A general method for isolation of high molecular weight DNA from eucaryotes // Nucl. Asids Res. -1976. -V.3.- P. 2303−2308
  25. Bonsing J., Ring J.M., Stewart A.F. et al. // Aust.J.Biol. 1988. -V. 41.-P. 527−537
  26. Bowen R.A., Reed M., Schnieke A. et al. Production of transgenic cattle from PCR-screened embryos // Thereogenology.1993.-V. 39.-P. 194
  27. Brem G., Harti P., Besenfelder U. et al. Expression of synthetic cDNA sequences encoding hums insulin-like growth factor-1 (IGF-1) in to mammary gland of transgenic rabbits // Gene.1994.-V. 149.-P. 351−355
  28. Brem G., Harti P. High-level expression of pro- chymosin in the of transgenic rabbits // Frontiers of Biotechnology in Agriculture. 1991. — Sea of Galilee. Israel. — V. 22. — Abstr.
  29. Brinster R. L., Chen H. Y., Traumbauer M. E. et al. Factors affecting the efficiency of introducting foreing DNA into mice by microinjection eggs // Proc. Natl. Acad. Sei USA. 1985. — V. 82.. p. 4438−4442
  30. BuhlerTh.A., Bruyere Th., Went D.R. et al. Rabbit B-casein promoter directs secretion of human interleukin-2 in the milk of transgenic rabbits // Bio/Technology. 1990. — V. 8. — P. 140−143
  31. Burdon T.G. and Wall R.J. Fate of microinjected genes in preim-plantation mouse embryos // Mol. Rep. Dev. 1992. — N 33. — P. 436−442
  32. Butler S.P., van Cott K., Subrumanian A. et al. Current progress in the production of recombinant human fibrinogen in the milk of transgenic animals // Thromb Haemost. 1997. — V. 78. — P. 537 542
  33. Chada K., Magran J., Raphael K. et al // Nature. 1985. — V. 314. -P. 377
  34. Clark A.J., Bessos H., Bishop J.O. et al. Expression of human antihemophilic Factor IX in the milk of transgenic sheep // Bio/Technology. 1989. — V. 7. — P. 487−492
  35. C h a n A.W., H o m a n E.J., B a 1 1 o u L.U. Transgenic cattle produced by re verse transcribed gene transfer in oocytes // Proc. Natl. Acad. Sci. 1998. — V. 95. — N 24. — P. 14 028−14 033
  36. Cousens C., Carver A.S., Wilmut I. et al. Use of PCR-based methods for selection of integrated tragenes in preimplantation embryos // Mol. Rep. Dev. 1994. — V. 39. — P. 384−391
  37. Denivoy E., Thepot D., Stinnakre M.-G. // Transgene Res. 1994. -V. 3.-P. 79−89
  38. Denman J., Hayes M., O’Day C. et al. Transgenic expression of a variant of human tissue-type plasminogen activator in goat milk: Purification and characterization of the recombinant enzyme // Bio/Technol. 1991. — V. 9. — P. 839−843
  39. Di Fruscio M., WeiherH., Vanderhyden B.C. et al. Proviral inac-tivation ol the Npat ysrve of Mpy 20 mice results in early embi-yonic arrest // Mol. Cell. Biol. 1997. — V. 17. — N 7. — P. 40 804 086
  40. Doppler W., Groner B., Ball R.K. Prolactin and glucocorticoid hormones synnergistically induce expression of transfected rat a-casein gene promoter constructs in a mammary epithelial cell line // PNAS. 1989. — V. 86. — P. 104−108
  41. Drohan W.N., Young J.M., Lubon H. et al. Expression of human protein C in the milk c transgenic mice and pigs // Thromb. Haemostasis. 1991. — V. 65. — P. 465
  42. Ebert K.M., Schlndler J.E.S. Transgenic farm animals: progress report // Theriogenology. 1993. — V. 39. — P. 121−135
  43. Ebert K.M., Selgrath J.P., DiTullio P. et al. Transgenic production of a variant of human tissue-type plasminigen activator in goat milk: generation of transgenic goats and analysis of expression // Bio/Technol. 1991. -V. 9. — P. 835−838
  44. C., Leont P., Scaramella V., // Nucleic Acids Res. -1990.-V. 18.-P. 6829−6833
  45. J.C., Weisbart R.H., Kaufman S.E. // Science. 1984. — V. 226.-P. 1339−1342
  46. Gordon K., Lee E., Vitale J.A., Smith A. I., Westphal H. et al., Production human tissue plasminogen activator in transgenic mouse milk // Bio/Thechnology. 1987. — V. 5. — P. 1183−1187
  47. Green E.D. and Olson M.V. Systematic screening of yeast artificial- chromosome libraries by use of the polymerase chain reaction // Proc. Natl. Acad. Sci., 1990, 87:1213−1217.
  48. Greenberg N.M., Anderson J.W., Hsueh A.J.W. et al. Expression of biologically active heterodimeric bovine follicle-stimulating hormone in milk of transgenic mice // Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 1991. -V. 88. — P. 8327−8331
  49. Groenem M.A.M., Dijkhof R.J.M., Verstege A.G.M. // Gene. -1993.-V. 123.-P. 187−193
  50. Grosclande F., Mahe M.F., Brignon G., Di Statio L., Jennet R. // Genetic Sil. Evol. 1987. — V. 19. — P. 199−412
  51. Gunzburg W.H., Salmons B., Zimmermann B. et al. A mammary-specific promoter directs expression of growth hormone not only to the mammary gland, but also to Bergman glia cells intransgenic mice // Molec. Endoorinol. 1991. — V. 5. — P. 123 133
  52. H a s k e 1 1 R.E., B o w e n R.A. Efficient production of transgenic cattle by retroviral infection of early embryos // Mol. Re-prod. Dev. 1995. — V. 40. — P. 386−390
  53. Hall L., Emery D.C., Davles M.S. et al. Organization and sequence of the human a-lactalbumin gene // Biochem. J. 1987. -V. 242.-P. 735−742
  54. Henninghausen L. The mammary gland as a bioreactor: Production of foreign protein in milk // Protein expression and purification. 1990. — V. l.-P. 3−8
  55. Hill K.L., Curry J., DeMayo F.J. et al. Production of transgenic cattle by pronuclear injection // Theriogenology. 1992. — V. 37. -P. 222
  56. Horvat S., Medrano J.F., Behboodi E. et al. Sextingand detection gene construct in microinjected bovine blastocysts using the PCR // Transgene Res. 1993. — V. 2. — P. 134−140
  57. Jaenisch R., Dausman J., Cox V. et al. Infection of developing mouse embryos with murine leukemia virus: tissue specificity and genetic transmission of the virus // Hamatol. Bluttransros. 1976. -V. 19.-P. 341−356
  58. Jaenish R. Transgenic animals // Science. 1988. — V. 240. — P. 1468−1474
  59. Jang Ho Ko, Chul-Sand Lee, Kui Huin Kim et al. Production of biologically active human granulocyte colony stimulating factor in the milk of transgenic goat // Transgenic Research. 2000. — V. 9. -P. 215−222
  60. Janne J., Hyttinen J.-M., Peura T. et al. Transgenic animals as bioproducers of therapeutic proteins // Ann.Med. 1992. — V. 24. -P. 273−280
  61. Kay M.A., Liu D., Hoogerbrugge P.M. Gene therapy // Proc. Nat. Acad. Sei. USA. 1997. — V. 94. — P. 12 744−12 746
  62. Korhonen V.P., Tolvanen M., Hyttinen J.M. et al. Expression of bovine beta-lactoglobulin/human erythropoetin fusion protein in the milk of transgenic mice and rabbits // Eur J Biochem. 1997. -V. 245.-P. 482−489
  63. Kozan D., Hobon G., Seifert H.M. Genomic organization of the bovine a -SI-casein gene // Nucleic Asids Res. 1991. — P. 5591−5596
  64. Krimpenfort P., Rademakers A., Eyestone W. et al. Generation of transgenic dairy cattle using «in vitro» embryo production // Bio/Technology. -1991. -V. 9. P. 844−847
  65. Krisher R. L., Gibbons J. R., Canseco R. S. et al. Influence of time of gene microinjection on development and DNA detection frequency in bovine embryos // Transgenic Res. 1994. — V. 3. — N 4. — P. 226−231
  66. Kushner S.R. An improved method for transformation of E. coli with ColEl-derived plasmids // Genetic engeneering.- Amsterdam ets: Elsier. 1978. — P. 17−23.
  67. Li Q., Zhou B., Powers P. et al. Primary structure of the goat ?-globin locus control region // Genomics. 1991. — 9. — P. 488−499
  68. G.J., Cebon J., Morstyn G. 11 Blood. 1989. — V. 74. — P. 2634- 2643
  69. Lu Y.F., Tian C., Deng J.X. et al. Cloning of human G-CSF genomic gene and its expression transgenic mice mammary gland // ChuanNsuehPao. 1999. -V. 26. -N4. — P. 281−287
  70. J., Chada K., Constantini F. // Nature. V. 315. — P. 388
  71. Marcowitz D., Goff S., Bank A. Construction and use of a safe and efficient amphotrofic packaging cell line // Virology. 1988. -V. 167.-P. 400−406
  72. Massoud M., Attal J., Thepot D. et al. The deleterious effectc of human erythropoietin gene driven by the rabbit wtey acidic protein gene promoter in transgenic rabbits // Reprod. Nutr. Dev.-1996. V. 36. — N 5. — P. 555−563
  73. McFadden T.B., Akers R.M., Karmer G.W. a-lactalbumin in bovine serum: relationship with udder development and function // J. Dairy Sci. 1987. — V. 70. — P. 259−264
  74. Mead H., Gates L., Lacy E., Lonberg N. Bovine alpha asl- casein gene sequences direct high level expression of active human urokinase in mouse milk // Bio/Technol. 1990. — V. 8. — P. 443 446
  75. Miller D.A., Rosman G.J. Impruved retroviral vectors for gene transfer and expression // BioTechniques. 1989. — V. 7. — N 9. -P. 980−990
  76. Nagato S., Tsuchiya M., Asano S., Yamamoto O., Hirata Y., Ki-bota N., Oheda M., Nomura H. and Yamazaki T. The chromosomal gene structure and two mRNAs for human granulocyte colony-stimulating factor // EMBO. 1986. — V. 5. — N 3. — P. 575 581
  77. D.W., Womack J.K. // Nucleic Acids Res.- 1990. V. 18.- P. 6935−6942
  78. N.A., Begley C.G., Metcalf D. // Nature. 1985. — V. 321.- P. 625−628
  79. Nimoniya T., Hoshi M., Mizuno et al. Selection of mouse preim-plantation embryos earring DNA by polymerase chain reaction // Mol. Reprod. Develop. 1989. — V.l. — P. 242−248
  80. T., Hirabayashi M., Sagara J., Yuki A. // Mol. Reprod. Dev. 1994. -V. 37. -P. 273−2830
  81. Page R.L. Caneso R.S., Russell C.G. et al. Transgene detection during early murine embryonic development after pronuclear microinjection// Transgenic Res. 1995. — V.4. — P. 12−17
  82. Palmiter R.D. and Brinster R.L. Germ-line transformation of mice // Ann.Rev.Genet. 1986. — V. 20. — P. 465−499
  83. Peura T., Hyttinen J.-M., Turunen M. et al. Birth of calves developed from embryos of predetermined sex // Acta vet. scand. -1991.-V. 32.-P. 283−286
  84. Pittius C.W., Henninghausen L., Lee E. et al. A milk protein gene promoter directs the expression of human tissue plasminogen activator cDNA to the mammary gland in transgenic mice // Proc.Natl.Acad.Sci. U.S.A. 1988. — V. 85. — P. 5874−5878
  85. Reddy V.B., Vitale J.A., Wei C. et al. Expression of human growth hormone in the milk of transgenio mice // Anim. Bitech-nol. 1991. — V.2.-P. 15−29
  86. Rlego E., Limonta J., Auguilar A. et al. Production of transgenic mice and rabbits that carry and express human tissue plasminogen activator cDNA under the control of a bovine al-pha-sl- casein promoter // Theriogenology. 1993. — V. 39. — P. 1173−1185.
  87. Robinson G. W, McKnight R. A, Smith G.H. et al. Mammary epithelial cells undergo transient differentiation in cycling virgins but require pregnancy for the establishment of terminal differentiation // Development. 1995. -V. 121. — P. 2079−2083
  88. Sambrook J, Fritsch E. F, Maniatis T. Molecular cloning. A laboratory manual / Cold Spring Harbor Laboratory Press. -1989
  89. Seo B. B, Kim C. H, Yamanouchi K. et al, Co-injection of restriction enzime with foreing DNA into the pronucleus for elevating prodaction efficiencies of transgenic animals // Anim. Reprod. Sci. 2000. — V. 63.-N 1−2.-P. 113−122
  90. Serizawa I, Amano K, Ishii H. et al. Long-term overexpression of human granulocyte colony-stimulating factor in transgenic mice: neutrophilia with no increased mortality for more than one year // Cytokine. 2000. — V. 12. — N 6. — P. 630−635
  91. Shu-Hua Y, Deen K. C, Lee E. et al. Functional human CD4 protein produced In milk of transgenic mice // Mol. Biol. Med. -1988.-V. 6.-P. 255−261
  92. Siemieniak D. R, Sieu L.C. Slightom J.L. Strategy and methods for directly sequencing cosmid clones // Analytical Biochemistry. -1991.-V. 192.-P. 441−448.
  93. Steward C, Harbers K, Jahner D. et al. X-chromosome-linkedtransmission and expression of retroviral genomes microinjected into mouse zygotes // Science. 1983. — V. 221. — P. 760−762
  94. Stinnacre M.S., Vilotte J. L, Soulier 3, et al. The bovine R-lact-albumin promoter directs expression of ovine trophoblast interferon in the mammary gland of transgenic mice // Fed. Eur. Bio-chem. Soc. 1991. — V. 284. — P. 19−22
  95. S t u h I m a n n H, Jaenisch R, Mulligan R.C. Transfer of a mutant dihydrofo-late reductase gene into pre- and postimplantationmouse embryos by a replication-competeni retrovirus vector 11 J. Virol. 1989. — V. 63(11). — P. 4857−4865
  96. D.W., Womack J. E. // Nucleic Asids Res. 1990. -V. 23.-P. 6935−6942
  97. Tomasetto C., Wolf C., Rio M.-C. et al. Breast cancer protein PS2 synthesis in mammary gland of transgenic mice and secretion into milk // Molec. Endocrinol. 1989. — V. 3. — P. 15 791 584
  98. Townes T.M., Lingrel J.B., Chen H. J et al. // EMBO J. -1985. -V. 4.-P. 1715
  99. Uusi-Oukari M., Hyttinen J.M., Korhonen V.P. et al. Bovine alpha sl-caseine gene stimulating factor in the milk of transgenic mice // Transgenic Res. 1997. — V. 6. — N 1. — P. 75−84
  100. Van Cott K.E., Williams B., Velander W.H. et al. Affinity purification of biologically active and inactive forms of recombinant human protein C produced in porcin mammary gland // J. Mol. Recognit. 1996. — V. 9. — P. 407−414
  101. Van den Ouweland Ans M.W., Kioschis P., Verdijk M. et al. Identification and characterization of a new gene in the human Xq28 region // Human Mol. Genet. 1992. — V. 1. — N 4. — P. 269−273
  102. Van der Putten H., Botteri P.M., Miller A.D. Efficient insertion of genes into the mouse germ line via retroviral vectors // Proc. Natl. Acad. Sei. 1985. -V. 82. — P. 148−152
  103. Van der Putten H., Botteri P.M., Miller A.D. Efficient insertion of genes into the mouse germ line via retroviral vectors // Proc. Natl. Acad. Sei. 1985. — V. 82. — P. 148−152
  104. Velander W.H., Johnson J.L., Page R.L. et al. High-level expression of a heterologous protein in the milk of transgenicswine using the DNA encoding human protein C // Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 1992. — V. 89. — P. — 12 003−12 007
  105. Wall R.J. Biotechnology for the production of modified and innovative animal products: transgenic livestock bioreactors // Transgenic Res.- 1998. -P. 364−378
  106. Wall R.J., Rexroad C.E., Powell A. et al. Synthesis and secretion of the mouse whey acidic protein in transgenic sheep // Transgenic Res. 1996. — 5. — P. 67−72
  107. Wilmut I., Archibald A.L., Harris S. et al. Modification of milk composition // J. Reprod. Fert. 1990. — V. 41(Suppl). — P. 135 146
  108. Wright G., Carver A., Cottom D. et al. High level expression of active human alpha-1-antitrypsin in the milk of transgenic sheep // Bio/Technol. 1991. -V. 9. — P. 830−834
  109. Yamada T., Kaneko H., Iizuka K. et al. Elevation of lymphocyte and hematopoetic stem cell numbers mice transgenic for human granulocyte CSF // Lab. Invest. 1996. — V. 74. -N 2. -P. 384−394
  110. Yom H.C., Bremel R.D. Genetic enginiring of milk composition: modification of milk components in lactating transgenic mice // Am. J. Clin. Nutz. 1993. — V. 58. — P. 2995−3065
Заполнить форму текущей работой

Заказал и сдал!