Жидкостная хроматография высокого давления

Многие органические соединения с большой молекулярной массой, особенно биополимеры, перевести в газовую фазу затруднительно или вообще невозможно. Удовлетворительного разделения смесей таких соединений с помощью обычной, жидкостной распределительной хроматографии получить не удается из-за неоднородности неподвижной фазы и неламинарного характера движения подвижной фазы, связанных с большим диаметром колонок. Для разделения таких соединений применяется жидкостная хроматография высокого давления (молекулярная жидкостная хроматография). Она представляет собой дальнейшее развитие колоночной распределительной хроматографии и в отличие от последней позволяет проводить разделение микроколичеств веществ с высокой степенью эффективности в течение короткого времени.

В качестве неподвижной фазы (НФ) применяются мелкоиористые инертные носители, покрытые пленкой различных полимеров, нерастворимых в органических растворителях^[1]. Заполнение колонок (их диаметр 0,5—50 мм) неподвижной фазой проводят под давлением в 150—300 атм, благодаря чему добиваются высокой однородности и плотности заполнения и, следовательно, эффективности разделения. Элюирование разделяемых веществ осуществляется пропусканием через колонку какого-либо подходящего органического растворителя или их смеси под давлением в 50—200 атм. При этом режим термостатирования и состав элюирующей смеси могут изменяться в ходе анализа в соответствии с заданной программой. Для непрерывного определения состава выходящей из колонки смеси применяются детекторы, реагирующие на изменение показателя преломления (интерферометры), теплоты адсорбции, ультрафиолетового поглощения, сигнал которых регистрируется автоматическим потенциометром. Метод жидкостной хроматографии высокого давления широко применяется в биологии и медицине для определения аминокислотного состава белков, анализа сахаров и разделения сложных природных смесей.

• [1] В настоящее время выпускается НФ и для работы с водными растворами.