ΠΠ΅ΡΡΠ΅ΡΠ½-Π±Π»ΠΎΡ Π°Π½Π°Π»ΠΈΠ·.
ΠΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎΡΡΡ ΠΊΠ°Π»ΡΡΠΈΠΉΠ·Π°Π²ΠΈΡΠΈΠΌΡΡ
ΠΏΡΠΎΡΠ΅ΠΈΠ½Π°Π· Π² ΠΌΠΎΠ·Π³Π΅ ΠΊΡΡΡ Ρ ΡΠΊΡΠΏΠ΅ΡΠΈΠΌΠ΅Π½ΡΠ°Π»ΡΠ½ΠΎΠΉ Π½Π΅ΠΉΡΠΎΠΏΠ°ΡΠΎΠ»ΠΎΠ³ΠΈΠ΅ΠΉ
ΠΠ°Π»Π΅Π΅ ΠΌΠ΅ΠΌΠ±ΡΠ°Π½Ρ ΠΏΠΎΠ΄Π²Π΅ΡΠ³Π°Π»ΠΈ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΠΌΡ ΡΠΊΡΠΏΠΎΠ½ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΡ Ρ ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠΊΠ»ΠΎΠ½Π°Π»ΡΠ½ΡΠΌΠΈ Π°Π½ΡΠΈΡΠ΅Π»Π°ΠΌΠΈ ΠΊ ΠΊΠ°Π»ΡΠΏΠ°ΡΡΠ°ΡΠΈΠ½Ρ (ΡΠ°Π·Π²Π΅Π΄Π΅Π½ΠΈΠ΅ 1: 2500 Π² Π±ΡΡΠ΅ΡΠ΅ TBST; 1 Ρ) ΠΈ Ρ Π°Π½ΡΠΈΡΠ΅Π»Π°ΠΌΠΈ ΠΊ IgG ΠΊΡΠΎΠ»ΠΈΠΊΠ°, ΠΊΠΎΠ½ΡΡΠ³ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΡΠΌΠΈ Ρ ΠΏΠ΅ΡΠΎΠΊΡΠΈΠ΄Π°Π·ΠΎΠΉ (ΡΠ°Π·Π²Π΅Π΄Π΅Π½ΠΈΠ΅ 1: 2000 Π² Π±ΡΡΠ΅ΡΠ΅ TBST; 1 Ρ); ΠΊΠ°ΠΆΠ΄ΡΠΉ ΠΈΠ· ΡΠΊΠ°Π·Π°Π½Π½ΡΡ ΡΡΠ°ΠΏΠΎΠ² Π·Π°Π²Π΅ΡΡΠ°Π»ΡΡ ΠΌΠ½ΠΎΠ³ΠΎΠΊΡΠ°ΡΠ½ΠΎΠΉ ΠΎΡΠΌΡΠ²ΠΊΠΎΠΉ Π±ΡΡΠ΅ΡΠΎΠΌ TBST. ΠΠ΅ΠΌΠ±ΡΠ°Π½Ρ ΠΏΠΎΠ΄Π²Π΅ΡΠ³Π°Π»ΠΈ ΡΡΠ°Π½Π΄Π°ΡΡΠ½ΠΎΠΉ ΠΎΠ±ΡΠ°Π±ΠΎΡΠΊΠ΅ ΡΠΈΡΡΠ΅ΠΌΠΎΠΉ Immune-Star (Bio-Rad, Π‘Π¨Π… Π§ΠΈΡΠ°ΡΡ Π΅ΡΡ >
ΠΠ΅ΡΡΠ΅ΡΠ½-Π±Π»ΠΎΡ Π°Π½Π°Π»ΠΈΠ·. ΠΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎΡΡΡ ΠΊΠ°Π»ΡΡΠΈΠΉΠ·Π°Π²ΠΈΡΠΈΠΌΡΡ ΠΏΡΠΎΡΠ΅ΠΈΠ½Π°Π· Π² ΠΌΠΎΠ·Π³Π΅ ΠΊΡΡΡ Ρ ΡΠΊΡΠΏΠ΅ΡΠΈΠΌΠ΅Π½ΡΠ°Π»ΡΠ½ΠΎΠΉ Π½Π΅ΠΉΡΠΎΠΏΠ°ΡΠΎΠ»ΠΎΠ³ΠΈΠ΅ΠΉ (ΡΠ΅ΡΠ΅ΡΠ°Ρ, ΠΊΡΡΡΠΎΠ²Π°Ρ, Π΄ΠΈΠΏΠ»ΠΎΠΌ, ΠΊΠΎΠ½ΡΡΠΎΠ»ΡΠ½Π°Ρ)
ΠΠ΅ΡΡΠ΅ΡΠ½-Π±Π»ΠΎΡ Π°Π½Π°Π»ΠΈΠ· ΠΏΠΎ ΡΠ΅ΡΡΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΡ ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²Π° ΠΊΠ°Π»ΡΠΏΠ°ΡΡΠ°ΡΠΈΠ½Π° Π²ΠΊΠ»ΡΡΠ°Π» ΡΠ°Π·Π΄Π΅Π»Π΅Π½ΠΈΠ΅ ΡΠΊΠ°Π½Π΅Π²ΡΡ Π±Π΅Π»ΠΊΠΎΠ² (30 ΠΌΠΊΠ³ Π½Π° Π΄ΠΎΡΠΎΠΆΠΊΡ) ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄ΠΎΠΌ ΡΠ»Π΅ΠΊΡΡΠΎΡΠΎΡΠ΅Π·Π° Π² 12% ΠΠΠΠ Π² ΠΏΡΠΈΡΡΡΡΡΠ²ΠΈΠΈ SDS (Laemmli, 1970) Ρ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΡΡΡΠΈΠΌ ΠΏΠΎΠ»ΡΡΡΡ ΠΈΠΌ ΠΏΠ΅ΡΠ΅Π½ΠΎΡΠΎΠΌ ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠΏΠ΅ΠΏΡΠΈΠ΄ΠΎΠ² Π½Π° Π½ΠΈΡΡΠΎΡΠ΅Π»Π»ΡΠ»ΠΎΠ·Π½ΡΡ ΠΌΠ΅ΠΌΠ±ΡΠ°Π½Ρ (Π±ΡΡΠ΅Ρ: 48 ΠΌΠ Π’ΡΠΈΡ-HCl, 39 ΠΌΠ Π³Π»ΠΈΡΠΈΠ½, 0.0375% SDS, 20% ΠΌΠ΅ΡΠ°Π½ΠΎΠ», pH 9.2). ΠΠΎΡΠ»Π΅ ΠΈΠ½ΠΊΡΠ±Π°ΡΠΈΠΈ (2 Ρ, 20Β°C) ΠΌΠ΅ΠΌΠ±ΡΠ°Π½Ρ Π² Π±ΡΡΠ΅ΡΠ΅ TBS (50 ΠΌΠ Π’ΡΠΈΡ-HCl-Π±ΡΡΠ΅Ρ, 150 ΠΌΠ NaCl, pH 7.5) ΠΏΡΠΎΠ²ΠΎΠ΄ΠΈΠ»ΠΈ Π±Π»ΠΎΠΊΠΈΡΠΎΠ²ΠΊΡ ΡΠ°ΠΉΡΠΎΠ² Π½Π΅ΡΠΏΠ΅ΡΠΈΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΎΠ³ΠΎ ΡΠ²ΡΠ·ΡΠ²Π°Π½ΠΈΡ 5% ΡΠ°ΡΡΠ²ΠΎΡΠΎΠΌ ΠΎΠ±Π΅Π·ΠΆΠΈΡΠ΅Π½Π½ΠΎΠ³ΠΎ ΠΌΠΎΠ»ΠΎΠΊΠ° Π² Π±ΡΡΠ΅ΡΠ΅ TBST (TBS Ρ Π΄ΠΎΠ±Π°Π²Π»Π΅Π½ΠΈΠ΅ΠΌ 0.1% Tween 20, pH 7.5) Π² ΡΠ΅ΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅ 1 Ρ.
ΠΠ°Π»Π΅Π΅ ΠΌΠ΅ΠΌΠ±ΡΠ°Π½Ρ ΠΏΠΎΠ΄Π²Π΅ΡΠ³Π°Π»ΠΈ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΠΌΡ ΡΠΊΡΠΏΠΎΠ½ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΡ Ρ ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠΊΠ»ΠΎΠ½Π°Π»ΡΠ½ΡΠΌΠΈ Π°Π½ΡΠΈΡΠ΅Π»Π°ΠΌΠΈ ΠΊ ΠΊΠ°Π»ΡΠΏΠ°ΡΡΠ°ΡΠΈΠ½Ρ (ΡΠ°Π·Π²Π΅Π΄Π΅Π½ΠΈΠ΅ 1: 2500 Π² Π±ΡΡΠ΅ΡΠ΅ TBST; 1 Ρ) ΠΈ Ρ Π°Π½ΡΠΈΡΠ΅Π»Π°ΠΌΠΈ ΠΊ IgG ΠΊΡΠΎΠ»ΠΈΠΊΠ°, ΠΊΠΎΠ½ΡΡΠ³ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΡΠΌΠΈ Ρ ΠΏΠ΅ΡΠΎΠΊΡΠΈΠ΄Π°Π·ΠΎΠΉ (ΡΠ°Π·Π²Π΅Π΄Π΅Π½ΠΈΠ΅ 1: 2000 Π² Π±ΡΡΠ΅ΡΠ΅ TBST; 1 Ρ); ΠΊΠ°ΠΆΠ΄ΡΠΉ ΠΈΠ· ΡΠΊΠ°Π·Π°Π½Π½ΡΡ ΡΡΠ°ΠΏΠΎΠ² Π·Π°Π²Π΅ΡΡΠ°Π»ΡΡ ΠΌΠ½ΠΎΠ³ΠΎΠΊΡΠ°ΡΠ½ΠΎΠΉ ΠΎΡΠΌΡΠ²ΠΊΠΎΠΉ Π±ΡΡΠ΅ΡΠΎΠΌ TBST. ΠΠ΅ΠΌΠ±ΡΠ°Π½Ρ ΠΏΠΎΠ΄Π²Π΅ΡΠ³Π°Π»ΠΈ ΡΡΠ°Π½Π΄Π°ΡΡΠ½ΠΎΠΉ ΠΎΠ±ΡΠ°Π±ΠΎΡΠΊΠ΅ ΡΠΈΡΡΠ΅ΠΌΠΎΠΉ Immune-Star (Bio-Rad, Π‘Π¨Π).
ΠΡΡΠ³ΠΈΠ΅ ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄Ρ
ΠΠΎΠ½ΡΠ΅Π½ΡΡΠ°ΡΠΈΡ Π±Π΅Π»ΠΊΠ° Π²ΠΎ ΡΡΠ°ΠΊΡΠΈΡΡ ΠΎΠΏΡΠ΅Π΄Π΅Π»ΡΠ»ΠΈ ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄ΠΎΠΌ ΠΡΡΠ΄ΡΠΎΡΠ΄ (Bradford, 1976) Ρ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ΠΌ Π±ΡΡΡΠ΅Π³ΠΎ ΡΡΠ²ΠΎΡΠΎΡΠΎΡΠ½ΠΎΠ³ΠΎ Π°Π»ΡΠ±ΡΠΌΠΈΠ½Π° (BSA) Π² ΠΊΠ°ΡΠ΅ΡΡΠ²Π΅ ΡΡΠ°Π½Π΄Π°ΡΡΠ°.
ΠΠ΅Π½ΡΠΈΡΠΎΠΌΠ΅ΡΡΠΈΡ ΠΏΠΎΠ»ΠΎΡ Π½Π° Π·ΠΈΠΌΠΎΠ³ΡΠ°ΠΌΠΌΠ°Ρ ΠΈ ΡΠ΅Π½ΡΠ³Π΅Π½ΠΎΠ²ΡΠΊΠΎΠΉ ΠΏΠ»Π΅Π½ΠΊΠ΅ ΠΏΡΠΎΠ²ΠΎΠ΄ΠΈΠ»Π°ΡΡ Ρ ΠΏΠΎΠΌΠΎΡΡΡ ΡΡΠ°Π½Π΄Π°ΡΡΠ½ΠΎΠΉ ΠΏΡΠΎΠ³ΡΠ°ΠΌΠΌΡ «Image J».
Π‘ΡΠ°ΡΠΈΡΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΡΡ ΠΎΠ±ΡΠ°Π±ΠΎΡΠΊΡ Π΄Π°Π½Π½ΡΡ ΠΏΡΠΎΠ²ΠΎΠ΄ΠΈΠ»ΠΈ Ρ ΠΏΡΠΈΠΌΠ΅Π½Π΅Π½ΠΈΠ΅ΠΌ ΠΎΠ±ΡΠ΅ΠΏΡΠΈΠ½ΡΡΡΡ ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄ΠΎΠ² Π²Π°ΡΠΈΠ°ΡΠΈΠΎΠ½Π½ΠΎΠΉ ΡΡΠ°ΡΠΈΡΡΠΈΠΊΠΈ Ρ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ΠΌ ΠΏΠ°ΠΊΠ΅ΡΠΎΠ² ΠΏΡΠΎΠ³ΡΠ°ΠΌΠΌ MS Excel ΠΈ StatGraphics. ΠΠΎΡΡΠΎΠ²Π΅ΡΠ½ΠΎΡΡΡ ΡΠ°Π·Π»ΠΈΡΠΈΠΉ ΠΎΡΠ΅Π½ΠΈΠ²Π°Π»ΠΈ Ρ ΠΏΠΎΠΌΠΎΡΡΡ Π½Π΅ΠΏΠ°ΡΠ°ΠΌΠ΅ΡΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΎΠ³ΠΎ ΠΊΡΠΈΡΠ΅ΡΠΈΡ U (ΠΊΡΠΈΡΠ΅ΡΠΈΠΉ ΠΠΈΠ»ΠΊΠΎΠΊΡΠΎΠ½Π°-ΠΠ°Π½Π½Π°-Π£ΠΈΡΠ½ΠΈ), Π° ΡΠ°ΠΊΠΆΠ΅ Ρ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ΠΌ ΠΎΠ΄Π½ΠΎΡΠ°ΠΊΡΠΎΡΠ½ΠΎΠ³ΠΎ Π΄ΠΈΡΠΏΠ΅ΡΡΠΈΠΎΠ½Π½ΠΎΠ³ΠΎ Π°Π½Π°Π»ΠΈΠ·Π° (ΠΠΎΡΠΎΡΠΎΠ², ΠΠΎΡΠ±Π°Ρ, 2007).
ΠΊΠ°Π»ΡΡΠΈΠΉΠ·Π°Π²ΠΈΡΠΈΠΌΡΠΉ Π½Π΅ΠΉΡΠΎΠ΄Π΅Π³Π΅Π½Π³Π΅ΡΠ°ΡΠΈΠ²Π½ΡΠΉ ΠΊΠ°Π»ΡΠΏΠ°ΠΈΠ½ ΠΊΡΡΡΠ°.