Материалы и методы

Методика тестирования животных в тесте «открытое поле»

Данный тест имеет множество интерпретаций, но строго говоря тест «открытое поле» был предложен (Hall, 1936) для регистрации поведения животных в ответ на «новые, потенциально опасные стимулы» [Буреш, Бурешова, Хьюстон, 1991].

Процедура включает подготовительный период и собственно тестирование.

Не менее чем за 60 минут до тестирования животных необходимо поместить в тихое, слабо освещенное помещение. В этот период исключаются перегруппировка животных, кормление, взятие в руки и другие активные манипуляции. Инъекции фармакологических веществ, проводимые в подготовительный период, должны быть выполнены максимально стандартным способом, так, чтобы погрешность опыта имела систематический характер.

Такие процедуры, как метка, перемещение из домашней клетки в другую, формирование новых групп (перегруппировка) и т. д. нужно провести c животными не менее чем за 24 часа до тестирования.

Помещение животного внутрь арены.

Существуют несколько способов помещения животного в открытое поле (ОП): в центр арены или у ее стенки. Считается, что помещение животного в центр арены не влияет на его последующее поведение в 4−5-минутный тестовый период (относительно поведения животного, помещенного в арену у ее стенки).

Также распространен способ помещения животного в ОП вместе с боксом, где оно находилось в подготовительный период. Животное само выходит в освещенное пространство через открытую дверцу бокса. По сути, это является комбинацией тестов «Темная камера с отверстием» или «Темно-светлая камера» и ОП. С одной стороны, такие комбинации могут давать крайне интересные результаты и быть полезны для решения ряда задач. С другой стороны, в отличие от посадки в боксе, помещение животного непосредственно на пол арены создает условия для регистрации реакции животного на эмоциогенный фактор «неожиданность» (в ответ на неожиданный стимул крысы демонстрируют реакцию замирания (freezing)).

Регистрируемы параметры (формы поведения) В тесте «Открытое поле» регистрируют горизонтальную и вертикальную двигательную активность, груминг, дефекацию. Кроме того, в ОП удобно наблюдать за отклонениями в моторной сфере, такими как шаткость походки, тремор и т. п.

Горизонтальная двигательная активность (ГДА) животных в ОП включает побежки по разным траекториям, вплоть до кружения вокруг одного места. Основным критерием для идентификации данной формы поведения является участие в перемещении животного всех четырех лап.

Пол арены расчерчен на три ряда секторов одинаковой площади, поэтому за единицу перемещения при визуальной регистрации поведения удобно принять один пересеченный сектор. Так как животное имеет длину, иногда даже равную длине основания сектора, то проблема регистрации перемещения решается следующим образом. Если животное находилось в пределах одного сектора (всеми четырьмя лапами), а затем перешло в смежный с ним (задние лапы пересекли разделяющую их линию), то считается, что пересечен один сектор.

Регистрируют ГДА на периферии, в 2/3 и в центре арены. Обсчет результатов целесообразно вести как по общей ГДА, так и по ГДА в различных зонах арены.

Вертикальная двигательная активность (ВДА) животных в ОП представлена двумя видами стоек: задние лапы животного остаются на полу арены, а передние упираются в стенку поля (Climbing) или остаются на весу (Rearing). Обсчет результатов можно вести как по общей ВДА, так и разделяя на Climbing и Rearing.

Груминг животных в ОП можно условно разделить на две категории: короткий и длительный. Короткий груминг характеризуется 1−2 быстрыми круговыми движениями лап вокруг носа и небольшой области около него, а длительный — умыванием области глаз, заведением лап за уши и переходом на умывание всей головы, лап, боков, туловища, ано-генитальной области, хвоста. Целесообразно раздельно обсчитывать число актов короткого и длительного груминга за тестовый период.

Обследование отверстий (находящихся в полу арены) представляет собой обнюхивание краев отверстий или засовывание головы внутрь отверстий «по глаза». Чаще всего «обследованием отверстий» называют вторую форму поведения.

Уровень дефекации считается индексом «эмоциональности» животного. Для определения уровня дефекации (и, соответственно, эмоциональности) многие исследователи подсчитывают число болюсов, оставленных животным во время пребывания в экспериментальной установке. Однако следует учесть, что вид корма, степень наполненности кишечника, а также различные фармакологические агенты могут существенно влиять на активность желудочно-кишечного тракта животного. Поэтому мы рекомендуем подсчитывать не число болюсов, а число актов дефекации.

Длительность эксперимента.

Данный параметр определяется исходя из целей конкретного эксперимента. Необходимо лишь учитывать, что поведение животных в первые 2−4 минуты тестирования связано с такими эмоциогенными факторами, как внезапность, необычность и новизна. В дальнейшем оно переходит в поведение патрулирования, которое внешне не отличается от первоначального, но имеет иные нейрохимические механизмы. Эти различия особенно важны для фармакологических исследований.

Арену протирают влажной губкой после тестирования каждого животного.