Получение экстрактов для определения различных классов фенольных соединений
Определение содержания суммы растворимых фенольных соединений проводилось с использованием реактива Фолина-Дениса. Для этого в пластиковые пробирки «эппендорф» наливали 75 мкл спиртового экстракта, ь 75 мкл реактива Фолина-Дениса. Через 3 минуты добавляли 150 мкл концентрированного раствора соды и 1200 мкл воды. В качестве контроля использовали раствор, где экстракт заменяли 96%-ным этанолом… Читать ещё >
Получение экстрактов для определения различных классов фенольных соединений (реферат, курсовая, диплом, контрольная)
Для получения экстрактов растительное содержимое каждого конверта из фольги (семядольные листья и гипокотили по 50 мг) было перенесено с помощью пинцета в пластиковые пробирки — «эппендорфы» (объем 1,5 мл) с конусовидным донышком. В каждую пробирку с помощью пипетки приливали 500 мкл 96% спирта и перетирали содержимое с помощью пестика. К полученному гомогенату добавляли 1 мл 96% спирта, затем все пробирки выдерживали в термостате при 45оС в течение 45 мин. Про прошествии этого времени эппендорфы доставали, перемешивали и центрифугировали в течение 2 минут на максимальных оборотах (16 000 об/мин).
После центрифугирования с помощью пипетки надосадочную фракцию переносили в другие пробирки и подписывали вариант растительного материала на крышечке. В таком виде экстракты хранились в холодильнике при t=+ 4±6 °С) и использовались для определения различных соединений фенольной природы.
Определение суммарного содержания фенольных соединений.
Определение содержания суммы растворимых фенольных соединений проводилось с использованием реактива Фолина-Дениса. Для этого в пластиковые пробирки «эппендорф» наливали 75 мкл спиртового экстракта, ь 75 мкл реактива Фолина-Дениса. Через 3 минуты добавляли 150 мкл концентрированного раствора соды и 1200 мкл воды. В качестве контроля использовали раствор, где экстракт заменяли 96%-ным этанолом. После 45 мин. инкубации смеси при 240С, раствор центрифугировали (16 000 об/ мин., 2 мин). Надосадочную жидкость отделяли и проводили определение оптической плотности раствора в кварцевых кюветах (путь 0,5 см) при длине волны 725 нм на спектрофотометре Specord.
Содержание суммы фенольных соединений рассчитывали по следующей формуле:
С (мг/г сыр. массы) (Е725* К * R * V) / 1000 * m.
С (мг/г сух. массы) С (мг/г сыр. массы) / m сух. вещ-ва Е725 — экстинкция раствора, Ккоэффициент (по рутину) -1030,.
Rразбавление,.
V — объем экстракта (1,5 мл), mнавески — масса навески (г).
1000 — переводной коэффициент.