ΠΡΠ»ΡΡΠΈΠ²ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ ΠΏΠΈΠΊΠΎΡΠ½Π°Π²ΠΈΡΡΡΠΎΠ² Π½Π° ΠΏΡΠΈΠΌΠ΅ΡΠ΅ ΠΏΠΎΠ»ΡΡΠ΅Π½ΠΈΡ ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠΎΠ²ΠΈΡΡΡΠ° ΡΠΈΠΏΠ° 3 Π² ΠΊΡΠ»ΡΡΡΡΠ΅ ΠΊΠ»Π΅ΡΠΎΠΊ HeLa
Π ΠΊΠ»Π΅ΡΠΎΡΠ½ΠΎΠΉ ΡΡΡΠΏΠ΅Π½Π·ΠΈΠΈ Π΄ΠΎΠ±Π°Π²Π»ΡΡΡ Π²ΠΈΡΡΡ Π² ΠΊΠΎΠ½ΡΠ΅Π½ΡΡΠ°ΡΠΈΠΈ 10—50 ΠΠΠ Π½Π° ΠΊΠ»Π΅ΡΠΊΡ; ΠΈΠ½ΠΊΡΠ±ΠΈΡΡΡΡ Π΅Π΅ Π½Π° ΠΌΠ°Π³Π½ΠΈΡΠ½ΠΎΠΉ ΠΌΠ΅ΡΠ°Π»ΠΊΠ΅ Π² ΡΠ΅ΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅ 1 Ρ ΠΏΡΠΈ 35 Β°C. Π ΠΊΠ°ΡΠ΅ΡΡΠ²Π΅ ΠΊΠΎΠ½ΠΊΡΠ΅ΡΠ½ΠΎΠΉ ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄ΠΈΠΊΠΈ ΠΊΡΠ»ΡΡΠΈΠ²ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΡ Π²ΠΈΡΡΡΠΎΠ² ΠΌΠΎΠΆΠ½ΠΎ ΠΏΡΠΈΠ²Π΅ΡΡΠΈ ΡΠΏΠΎΡΠΎΠ± Π²ΡΡΠ°ΡΠΈΠ²Π°Π½ΠΈΡ ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠΎΠ²ΠΈΡΡΡΠ° Π² ΠΏΠ΅ΡΠ΅Π²ΠΈΠ²Π°Π΅ΠΌΡΡ ΠΊΠ»Π΅ΡΠΊΠ°Ρ . ΠΠ»Π΅ΡΠΊΠΈ ΡΠ΅ΡΡΡΠΏΠ΅Π½Π΄ΠΈΡΡΡΡ Π² PBS (5β107ΠΊΠ»/ΠΌΠ») ΠΈ ΠΏΡΠΎΠ²ΠΎΠ΄ΡΡ ΡΡΠΈ ΡΠΈΠΊΠ»Π° Π·Π°ΠΌΠΎΡΠ°ΠΆΠΈΠ²Π°Π½ΠΈΡ — ΠΎΡΡΠ°ΠΈΠ²Π°Π½ΠΈΡ. Π‘ΡΡΠΏΠ΅Π½Π·ΠΈΡ ΡΠ°Π·Π²ΠΎΠ΄ΡΡ ΡΠΎΠΉ ΠΆΠ΅ ΡΡΠ΅Π΄ΠΎΠΉ Π΄ΠΎ ΠΊΠΎΠ½ΡΠ΅Π½ΡΡΠ°ΡΠΈΠΈ… Π§ΠΈΡΠ°ΡΡ Π΅ΡΡ >
ΠΡΠ»ΡΡΠΈΠ²ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ ΠΏΠΈΠΊΠΎΡΠ½Π°Π²ΠΈΡΡΡΠΎΠ² Π½Π° ΠΏΡΠΈΠΌΠ΅ΡΠ΅ ΠΏΠΎΠ»ΡΡΠ΅Π½ΠΈΡ ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠΎΠ²ΠΈΡΡΡΠ° ΡΠΈΠΏΠ° 3 Π² ΠΊΡΠ»ΡΡΡΡΠ΅ ΠΊΠ»Π΅ΡΠΎΠΊ HeLa (ΡΠ΅ΡΠ΅ΡΠ°Ρ, ΠΊΡΡΡΠΎΠ²Π°Ρ, Π΄ΠΈΠΏΠ»ΠΎΠΌ, ΠΊΠΎΠ½ΡΡΠΎΠ»ΡΠ½Π°Ρ)
Π ΠΊΠ°ΡΠ΅ΡΡΠ²Π΅ ΠΊΠΎΠ½ΠΊΡΠ΅ΡΠ½ΠΎΠΉ ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄ΠΈΠΊΠΈ ΠΊΡΠ»ΡΡΠΈΠ²ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΡ Π²ΠΈΡΡΡΠΎΠ² ΠΌΠΎΠΆΠ½ΠΎ ΠΏΡΠΈΠ²Π΅ΡΡΠΈ ΡΠΏΠΎΡΠΎΠ± Π²ΡΡΠ°ΡΠΈΠ²Π°Π½ΠΈΡ ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠΎΠ²ΠΈΡΡΡΠ° Π² ΠΏΠ΅ΡΠ΅Π²ΠΈΠ²Π°Π΅ΠΌΡΡ ΠΊΠ»Π΅ΡΠΊΠ°Ρ .
ΠΡΠ΅ ΠΏΡΠΎΡΠ΅Π΄ΡΡΡ ΠΏΡΠΎΠ²ΠΎΠ΄ΡΡΡΡ Π² ΡΡΠ΅ΡΠΈΠ»ΡΠ½ΡΡ ΡΡΠ»ΠΎΠ²ΠΈΡΡ .
ΠΠΏΡΠ΅Π΄Π΅Π»Π΅Π½Π½ΡΠ΅ ΡΡΠ±Π»ΠΈΠ½ΠΈΠΈ ΠΊΠ»Π΅ΡΠΎΠΊ HeLa (Π½Π°ΠΏΡΠΈΠΌΠ΅Ρ, HeLa S3) ΠΌΠΎΠ³ΡΡ ΡΠ°ΡΡΠΈ Π² ΡΡΠ΅Π΄Π°Ρ Ρ Π½ΠΈΠ·ΠΊΠΎΠΉ ΠΊΠΎΠ½ΡΠ΅Π½ΡΡΠ°ΡΠΈΠ΅ΠΉ ΠΈΠΎΠ½ΠΎΠ² ΠΊΠ°Π»ΡΡΠΈΡ (Π½Π°ΠΏΡΠΈΠΌΠ΅Ρ, CaS2MEM). ΠΠ»Ρ ΡΡΡΠ΅ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎΠ³ΠΎ Π·Π°ΡΠ°ΠΆΠ΅Π½ΠΈΡ ΡΡΡΠ΅ΡΡΠ²Π΅Π½Π½ΠΎ, ΡΡΠΎΠ±Ρ ΠΊΠ»Π΅ΡΠΊΠΈ Ρ ΠΎΡΠΎΡΠΎ ΡΠΎΡΠ»ΠΈ Π² Π²ΠΈΠ΄Π΅ ΠΎΠ΄Π½ΠΎΡΠΎΠ΄Π½ΠΎΠΉ ΡΡΡΠΏΠ΅Π½Π·ΠΈΠΈ. ΠΠ»Π΅ΡΠΊΠΈ ΠΎΡΠ°ΠΆΠ΄Π°ΡΡ Π½ΠΈΠ·ΠΊΠΎΡΠΊΠΎΡΠΎΡΡΠ½ΡΠΌ ΡΠ΅Π½ΡΡΠΈΡΡΠ³ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ΠΌ (15 ΠΌΠΈΠ½ ΠΏΡΠΈ 900 g) ΠΈ ΡΠ΅ΡΡΡΠΏΠ΅Π½Π΄ΠΈΡΡΡΡ Π² ΡΡΠ΅Π΄Π΅ CaS2MEM Π΄ΠΎ ΠΊΠΎΠ½ΡΠ΅Π½ΡΡΠ°ΡΠΈΠΈ ~ 2.107 ΠΊΠ»/ΠΌΠ» (~1/20 ΠΈΡΡ ΠΎΠ΄Π½ΠΎΠ³ΠΎ ΠΎΠ±ΡΠ΅ΠΌΠ°).
Π ΠΊΠ»Π΅ΡΠΎΡΠ½ΠΎΠΉ ΡΡΡΠΏΠ΅Π½Π·ΠΈΠΈ Π΄ΠΎΠ±Π°Π²Π»ΡΡΡ Π²ΠΈΡΡΡ Π² ΠΊΠΎΠ½ΡΠ΅Π½ΡΡΠ°ΡΠΈΠΈ 10—50 ΠΠΠ Π½Π° ΠΊΠ»Π΅ΡΠΊΡ; ΠΈΠ½ΠΊΡΠ±ΠΈΡΡΡΡ Π΅Π΅ Π½Π° ΠΌΠ°Π³Π½ΠΈΡΠ½ΠΎΠΉ ΠΌΠ΅ΡΠ°Π»ΠΊΠ΅ Π² ΡΠ΅ΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅ 1 Ρ ΠΏΡΠΈ 35 Β°C.
Π‘ΡΡΠΏΠ΅Π½Π·ΠΈΡ ΡΠ°Π·Π²ΠΎΠ΄ΡΡ ΡΠΎΠΉ ΠΆΠ΅ ΡΡΠ΅Π΄ΠΎΠΉ Π΄ΠΎ ΠΊΠΎΠ½ΡΠ΅Π½ΡΡΠ°ΡΠΈΠΈ 2.106 ΠΊΠ»/ΠΌΠ» ΠΈ Π΄ΠΎΠ±Π°Π²Π»ΡΡΡ 100 ΠΌΠΊΠΠΈ [3Π]-ΡΡΠΈΠ΄ΠΈΠ½Π°.
ΠΠ»Π΅ΡΠΎΡΠ½ΡΡ ΡΡΡΠΏΠ΅Π½Π·ΠΈΡ ΠΈΠ½ΠΊΡΠ±ΠΈΡΡΡΡ Π² ΡΠ΅ΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅ 8 Ρ, ΠΏΠΎΡΠ»Π΅ ΡΠ΅Π³ΠΎ ΠΎΡΠ°ΠΆΠ΄Π°ΡΡ ΠΊΠ»Π΅ΡΠΊΠΈ Π½ΠΈΠ·ΠΊΠΎΡΠΊΠΎΡΠΎΡΡΠ½ΡΠΌ ΡΠ΅Π½ΡΡΠΈΡΡΠ³ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ΠΌ (15 ΠΌΠΈΠ½ ΠΏΡΠΈ 900 g) ΠΈ ΠΏΡΠΎΠΌΡΠ²Π°ΡΡ ΠΎΠ΄ΠΈΠ½ ΡΠ°Π· ΡΠΎΡΡΠ°ΡΠ½ΡΠΌ Π±ΡΡΠ΅ΡΠ½ΡΠΌ ΡΠ°ΡΡΠ²ΠΎΡΠΎΠΌ (PBS), Π½Π΅ ΡΠΎΠ΄Π΅ΡΠΆΠ°ΡΠΈΠΌ ΠΈΠΎΠ½ΠΎΠ² ΠΌΠ°Π³Π½ΠΈΡ ΠΈ ΠΊΠ°Π»ΡΡΠΈΡ.
ΠΠ»Π΅ΡΠΊΠΈ ΡΠ΅ΡΡΡΠΏΠ΅Π½Π΄ΠΈΡΡΡΡ Π² PBS (5−107ΠΊΠ»/ΠΌΠ») ΠΈ ΠΏΡΠΎΠ²ΠΎΠ΄ΡΡ ΡΡΠΈ ΡΠΈΠΊΠ»Π° Π·Π°ΠΌΠΎΡΠ°ΠΆΠΈΠ²Π°Π½ΠΈΡ — ΠΎΡΡΠ°ΠΈΠ²Π°Π½ΠΈΡ.
ΠΡΡΠ°ΡΠΊΠΈ ΠΊΠ»Π΅ΡΠΎΠΊ ΡΠ΄Π°Π»ΡΡΡ ΡΠ΅Π½ΡΡΠΈΡΡΠ³ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ΠΌ.
Π‘ΡΠΏΠ΅ΡΠ½Π°ΡΠ°Π½Ρ ΡΠΎΡ ΡΠ°Π½ΡΡΡ Π΄Π»Ρ Π΄Π°Π»ΡΠ½Π΅ΠΉΡΠ΅ΠΉ ΠΎΡΠΈΡΡΠΊΠΈ.