Лабораторная работа №1. Морфологические особенности бактериальных клеток

Цель работы: Ознакомиться с морфологическим разнообразием бактерий и основными признаками, используемыми при их идентификации.

Задачи работы: Изучить различные сложные и дифференциальные методы окраски бактерий и их структур и разобраться в сущности этих методов и цели их использования. Освоить технику окраски бактерий по Граму и спор бактерий по Шефферу-Фултону.

Оборудование: Микроскоп; препаровальные иглы; бактериологические петли; предметные и покровные стекла; спиртовка; иммерсионное масло; фильтровальная бумага; набор красок для окраски по Граму (фильтровальные бумажки с генцианвиолетом, растворы Люголя и фуксина рабочего) и окраски спор по Шефферу-Фултону (растворы бриллиантовой зелени и сафранина); 96%-ный этиловый спирт: лоток с рельсами для предметных стекол; промывалка; чистые культуры бактерий: Staphylococcus albus; Sarsina flava; Escherichia coli; Bacillus subtilis.

Ход работы:

Определение систематической принадлежности микроорганизмов — сложная задача, требующая длительных наблюдений, значительного количества специфических исследований и биохимических анализов.

При идентификации микроорганизмов учитывали:

• — морфолого-цитологические признаки. При микроскопировании изучали форму, строение, расположение в соотношении друг к другу, тинкториальные свойства, могут ли бактерии образовывать споры, капсулы, есть ли подвижность, жгутики, видны ли в клетках включения;
• — физиолого-биохимические признаки. При изучении физиолого-биохимических признаков устанавливают отношение микроорганизмов к различным источникам углерода и азота, потребность в кислороде, температурные границы роста, солеустойчивость, чувствительность к антибиотикам, ферментативные тесты;
• — культуральные признаки. К таким признакам относятся особенности роста микроорганизмов на плотных и жидких питательных средах.

Основными признаками, позволяющими распределить микроорганизмы на группы, являются морфологические признаки, которые легко и достаточно быстро можно определить с помощью микроскопа.

Окраска бактерий по Шефферу-Фултону Применение такого метода, при микроскопировании позволяет получать препарат на котором при окрашивании бриллиантовым зеленым и выдерживании соответствующей температуры малопроницаемая оболочка спор будет окрашиваться, а цитоплазма вегетативной клетки будет обесцвечиваться и ее нужно дополнительно окрашивать сафранином. И в микробиологическим мазке можно увидеть споры — зеленого цвета, а клетки — красного.

Техника окраски по Шефферу-Фултону На краю предметного стекла (на расстоянии примерно 1,5−2,0 см от края) готовят густой нефиксированный мазок из чистой культуры спорообразующих бактерий;

На раствор наносят водный раствор бриллиантовой зелени, и мазок с краской нагревают над пламенем горелки до появления пара. Нельзя допускать прикипания краски к мазку. Поэтому препарат периодически отстраняют от пламени. Нагревание мазка с краской проводят в течение 3 мин;

Краску сливают, препарат быстро промывают водой и просушивают фильтровальной бумагой;

Окрашивают мазок раствором сафранина 2…3 мин, затем краску сливают, мазок вторично промывают водой и подсушивают фильтровальной бумагой.

Далее на мазок наносят каплю иммерсионного масла и рассматривают под объективом на х90 или х100 при максимальном освещении.

Результат работы: После окрашивания спор и бактерий для нас под микроскопом появилась возможность определить морфологические особенности или признаки, имеющихся у нас в мазке бактерий. Оценку морфологических признаков проводили по форме, размеру и обмену веществ микроорганизмов, а также взаимное расположение, способность образовывать споры и капсулы, подвижность.

В мазке были обнаружены кокки, при чем присутствовали и монококки и диплолококки И кокки, которые можно было отнести к стрептококкам и энтерококкам (рис. 1).

Рис. 1. Мазок

В мазке 2 были обнаружены палочковидные бактерии, при чем при определении длины она составляла от 2 до 7 мкм, диаметр был от 0,5 до 1 мкм.

Оценку производили по взаимному расположению и способности образовывать споры и имеется ли подвижность.

При микроскопии (рисунок) мы легко определили наличие палочковидных бактерий расположенных как поодиночке (диплобактерии), так и цепочками (стрептобактерии). При внимательном рассмотрении нами было установлено наличие спор, под микроскопом они были мало окрашены и имели округлую форму. На нашем рисунке такие споры — клостридии, так как имеют форму веретена. По размеры микробактерии — средние. По форме концов — обрубленные (бациллы). По характеру взаиморасположению — есть как одиночные, так и спириллы.

Рис. 2 Палочковидные бактерии