ЯМР-спектроскопия. 
Физико-химические методы определения стероидных гормонов

ЯМР-Спектроскопия обладает исключительно высокой избирательностью, но очень низкой чувствительностью, поэтому для выполнения определений требуется, по меньшей мере, несколько миллиграммов вещества. Этот недостаток, конечно, не позволяет использовать его в количественном биоклиническом анализе, но не исключает его применения в фармацевтическом анализе стероидов.

Например, Авдович и др. определяли содержание местранола в массе фабричного продукта, регистрируя его спектр в дейтеропиридине (дифенилуксусная кислота применялась в качестве внутреннего стандарта) и измеряя интенсивность линии протонов метоксии этинильной групп. Та или другая из этих групп отсутствует в потенциальных примесях местранола (эстроне и этинилэстрадиоле), поэтому метод достаточно селективен. Те же авторы предложили определять А^1,4-3-кетостероиды в лекарственных препаратах по линии С-1 протона.

Описанные выше и аналогичные им методики можно рассматривать в качестве оригинального практического приложения ЯМР-спектроскопии в довольно узкой области анализа стероидов. ЯМР-Спектроскопия никогда не заменит существующие стандартные методы, однако в отдельных случаях уникальная селективность этого метода облегчает решение гораздо более сложных задач.

В качестве примера можно привести методику одновременного определения изомеров эстрадиол-3-метилового эфира, предложенную Хойером.

При гидрировании тем или иным способом 3-метокси-1,3,5(10), 8,9-эстра-тетраен-17в-ола (I) по Д⁸-двойной связи продукт реакции может содержать небольшие количества исходного вещества, три изомера метилового эфира эстрадиола ["природного"3-метокси-8бН, 9аН-1,3,5(10)-эстратриен-17в-ола (II), 3-метокси-8бН, 9бН-1,3,5(10)-эстратриен/17в-ола (III) и 3-метокси-8вН, 9вН-1,3,5-(10)-эстратриен-17в-ола (IV)] и 3-метокси-1,3,5(10), 6,8(9)-эстрапентаен-17в-ола (V). На химический сдвиг ангулярной 13-метильной группы влияет наличие протонов в положениях 8 и 9, а также их конфигурация; следовательно, возможно одновременное определение этих соединений.

Как видно из табл. 2, химические сдвиги 13-метильных групп соединений I, II, III + IV и V в дейтеробензоле в качестве растворителя достаточно хорошо разрешены (спектры сняты на приборе, работающем на частоте 100 МГц); следовательно, их можно избирательно определить по соответствующей интегральной интенсивности. Что касается соединений III и IV, то можно определить лишь их сумму, но сами изомеры можно разделить методами газовой хроматографии.

Табл. 2. Химические сдвиги 13-метильной группы в спектрах продуктов восстановления 3-метокси-1,3,5 (10), 8(9)-эстратетраен-17в-ола в различных растворителях.