Сравнительный анализ геномов половой и бесполой распланарии Girardia tigrina методом вычитающей гибридизации

ДиссертацияПомощь в написанииУзнать стоимостьмоей работы

Содержание

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ. Методы сравнения двух образцов ДНК
- 1. 1. Дифференциальный скрининг
- 1. 2. Методы дифференциального дисплея
- 1. 3. Методы вычитающей гибридизации
- 1. 4. Некоторые из результатов сравнения эукариотических геномов
ГЛАВА 2. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
- 2. 1. Морфологические и функциональные особенности пресноводных планарий
- 2. 2. Получение библиотек фрагментов ДНК, обогащенных последовательностями, дифференциально представленными в геномах половой и бесполой рас планарий
- 2. 3. Анализ обогащенной библиотеки фрагментов суммарной ДНК
- 2. 4. Структура полученных фрагментов ДНК
- 2. 5. Специфичный для бесполой расы планарий вирусоподобный элемент (PEVE)

Сравнительный анализ геномов половой и бесполой распланарии Girardia tigrina методом вычитающей гибридизации (реферат, курсовая, диплом, контрольная)

Строение каждого живого существа определяется последовательностью нуклеотидов геномной ДНК. Различия в строении живых организмов есть следствие различий в строении их геномов.

Определение различий в организации геномов близкородственных организмов является первым шагом на пути к пониманию процессов видообразования и механизмов уникальных биохимических процессов, лежащих в основе клеточного метаболизма, свойственных данному организму или группе организмов. Несмотря на большое разнообразие методов, до сих пор нет достаточно совершенного инструмента, позволяющего найти уникальные последовательности ДНК, различающиеся в двух эукариотических геномах. Разработка эффективных методов поиска таких различий позволит сравнивать структуры генома, детерминирующие тот или иной биологический процесс на молекулярном уровне.

В настоящий момент вычитающая гибридизация занимает все более важное место в ряду методов, используемых для выделения транскриптов, отличающих один тип клеток от другого, или последовательностей, отличающих один геном от другого. Вычитающая гибридизация позволяет быстро получать структурную информацию о различиях между клетками и использовать полученную информацию для дальнейшего функционального анализа. Разработанный нами метод зеркально ориентированной селекции, базирующийся на методе вычитающей гибридизации, значительно повышает вероятность нахождения дифференциально представленных последовательностей в образцах ДНК с высокой сложностью, таких, как кДНК клеток мозга или геномная ДНК эукариот.

Целью данной работы являлось создание нового эффективного метода вычитающей гибридизации сложных образцов ДНК, а также применение разработанного метода для сравнительного анализа эукариотических геномов на примере пресноводной планарии Girardia tigrina.

Разработанный метод, получивший название «метод зеркально ориентированной селекции, mirror orientation selection, MOS», был успешно применен в ряде экспериментов, включая сравнение образцов кДНК коры.

выводы.

Разработана модификация метода супрессионной вычитающей гибридизации, включающая дополнительный раунд гибридизации. На модельной системе показано, что метод позволяет снизить количество фоновых молекул в результирующей библиотеке на порядок. С помощью нового подхода проведено сравнение тотальных препаратов ДНК половой и бесполой рас пресноводной планарии G. tigrina. Обнаружен ряд последовательностей, специфичных для каждой из рас, включая впервые обнаруженный для планарий вирусоподобный субгеномный элемент. Исследовано распределение ДНК и паттерн экспрессии генов специфичного для бесполой расы планарий вирусоподобного элемента (Planarian Extrachromosomal Virus-like Element, PEVE) в теле планарий. Показано присутствие больших количеств PEVE в определенном типе клеток паренхимы.

Определена полная последовательность и охарактеризована структура генома вирусоподобного элемента. Проведен анализ последовательностей предполагаемых белков PEVE, обнаружено присутствие в геноме сразу двух возможных хеликаз, ранее описанных для разных групп вирусов.

Показать весь текст

Список литературы

Akopyants NS, Fradkov A, Diatchenko L, Hill JE, Siebert PD, Lukyanov SA, Sverdlov ED, Berg DE., (1998) PCR-based subtractive hybridization and differences in gene content among strains of Helicobacter pylori. Proc Natl Acad SciUS A. 95, 13 108−13 113.
Ausubel F.M. (1992) Short Protocols in Molecular Biology. N.Y. Harvard Medical School.
Baguna J. (1976) J. Mitosis in the intact and regenerating planarian Dugesia meditirania n. sp. 1 Mitotic stadies during growth, feeding and starvation. J. Exp. Zool. 195, 53−64.
Baguna J.(1981) Planarian neoblasts. Nature 296, 14−15.
Baguna J., Salo E., Collet J. and Auladell M.C. (1989) Regeneration and pattern formation in planarians. Ill Evidence that neoblasts are totipotent stem cells and the source of blastema cells. Development 107, 77−86.
Baguna, J., Salo, E., Romero, R., Garcia-Fernandez, J., Bueno D., Munoz-MarmolA.M., Bayascas-Ramirez, J.R., Casali, A. (1994) Regeneration and pattern formation in planarians, cell, molecules and genes. Zool. Sci. 11, 781−795.
Ball, IR: (1971) Systematic and biogeographical relationships of some Dugesia species (Tricladida, Paludicola) from Central and South America. Am. Mus. Novit., 2472, 1−25
Bautz E. K. and Reilly E. (1966) Gene-specific messenger RNA: isolation by deletion method. Science, 151, 328−330.
Brondsted H.V. (1969) Planarian regeneration. Oxford/London, Pergadon Press Ltd., 276 P.
Chang Y, Cesarman E, Pessin MS, Lee F, Culpepper J, Knowles DM, Moore PS., (1994) Identification of herpesvirus-like DNA sequences in AIDS-associated Kaposi’s sarcoma. Science. 266, 1865−1869.
Chenchik, A., Zhu, Y., Diatchenko, L., Li, R., Hill, J. and Siebert, P. (1998) in Methods for Gene Cloning and Analysis. P.D.Siebert, Larrick J.W. Editors, BioTechniques Books, MA, pp 305−319.
Chomczynski, P., and Sacchi, N. (1987) Single-step method of RNA isolation by acid guanidinium thiocyanate-phenol-chlorophorm extraction. Anal. Biochem. 162, 156−159.
Coche Th. and Dewer M. (1994) Reducing bias in cDNA sequence representation by molecular selection. Nucl. Acids Res., 22,4545−4546.
Coral M. (1986) Isolation and characterisation of complementary cDNA clones for genes overexpressed in chemically induced rat hepatomas. Cancer Res., 46, 5119−5124.
Davis RW, Thomas M, Cameron J, St John TP, Scherer S, and Padgett RA. (1980) Rapid DNA isolations for enzymatic and hybridization analysis. Methods Enzymol, 65, 404−411.
Debouck, C. (1995) Curr. Opinion Biotechnol., 6, 597−599.
Diatchenko, L., Lukyanov, S., Lau, Y.F.C. and Siebert, P.D. (1999) Suppression subtractive hybridization: a versatile method for identifying differentially expressed genes. Meth. Enzymol., 303, 349−380.
Donnison IS, Siroky J, Vyskot B, Saedler H, Grant SR., (1996) Isolation of Y chromosome-specific sequences from Silene latifolia and mapping of male sex-determining genes using representational difference analysis. Genetics. 144, 1 893 901.
Drobysheva I.M. (1986) Physiological regeneration of the digestive parenchyma in Convoluta convoluta and Oxyposthia praedator (Turbellaria, Acoela) Hydrobiologia 132,189−193.
Duguid J. R. and Dinauer M.C. (1990) Library subtraction of in vitro cDNA libraries to identify differentially expressed genes in scrapie infection. Nucl. Acids Res., 18,2789−2792.
Duguid J. R., Rohwer R. G. and Seed B. (1988) Isolation of cDNAs of scrapie-modulated RNAs by subtractive hybridization of a cDNA library. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 85, 5738−5742.
Enbom M., (2001) Multiple sclerosis and Kaposi’s sarcoma—chronic diseases associated with new human herpesviruses? Scand J Infect Dis. 33:648−658.
Endoh D, Cho КО, Tsukamoto K, Morimura T, Kon Y, Hayashi M., (2000) Application of representational difference analysis to genomic fragments of Marek’s disease virus. J Clin Microbiol. 38,4310−4.
Everts RE, Versteeg SA, Renier C, Vignaux F, Groot PC, Rothuizen J, van Oost BA., 2000. Isolation of DNA markers informative in purebred dog families by genomic representational difference analysis (gRDA). Mamm Genome. 11, 741−7.
Fujisawa M, Hayashi K, Nishio T, Bando T, Okada S, Yamato KT, Fukuzawa H, Ohyama K., (2001) Isolation of X and Y Chromosome-Specific DNA Markers From a Liverwort, Marchantia polymorpha, by Representational Difference Analysis. Genetics. 159, 981−985.
Galau G., Klein W., Britten R. and Davidson E. (1977) Significance of rare mRNA sequences in liver. Arch. Biochem. Biophys., 179, 584−599.
Garcia-Fernandez, J, Marfany, G, Baguna, J, Salo, E: (1993) Infiltration of mariner elements. Nature, 364, 109−110
Gastel J. and Sutter T. (1996) A control system for cDNA enrichment reactions. Biotechniques, 20, 870−875.
Gibbs, M. J., and G. F. Weiller. (1999) Evidence that a plant virus switched hosts to infect a vertebrate and then recombined with a vertebrate-infecting virus. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 96, 8022−8027.
Gorbalenya, A. E., E. V. Koonin, and Y. I. Wolf. (1990) A new superfamily of putative NTP-binding domains encoded by genomes of small DNA and RNA viruses. FEBS Lett. 262, 145−148.
Gorbalenya, AE, Koonin, EV, (1993) Helicases: Amino acid sequence comparisons and structure-function relationship. Curr. Opin. Struct. Biol., 3, 419
Gu W, Aguirre GD, Ray K., (1998) Detection of single-nucleotide polymorphism. Biotechniques. 24, 836−7.
Hampson I., Pope L., Cowling G., Dexter T. (1992) Chemical cross linking subtraction (CCLS): a new method for the generation of subtractive hybridisation probes. Nucl. Acids Res., 20, 2899.
Hanai, R., and J. C. Wang. (1993) The mechanism of sequence-specofoc DNA cleavage and strand transfer by ФХ174 gene A protein. J. Biol. Chem. 268, 23 830−23 836.
Нага E., Kato Т., Nakada S., Sekiya S. and Oda K. (1991) Subtractive cDNA cloning using oligo (dT)30-Latex and PCR: isolation of cDNA clones specific to undifferentiated human embryonal carcinoma cells. Nucleic Acids Res., 19, 70 977 104.
Harland RM. (1991) In situ hybridization: an improved whole-mount method for Xenopus embryos. Methods Cell Biol. 36, 685−95.
Hedrick S. M., Cohen, D. I., Nielsen E. L. and Davis M. M. (1984) Isolation of cDNA clones encoding T cell-specific membrane-associated proteins. Nature. 308, 149−153.
Hesse H., Frommer W. B. and Willmitzer L. (1995) An improved method for generating subtracted cDNA libraries using phage lambda vectors. Nucl. Acids Res. 23, 3355−3356.
Hori I. (1985) Further observation on the fine structure of intact and regenerating gastrodermis of the planarian Dugesia japonica (Turbellaria) J. Submicrosc.Cytol. 17, 569−581.
Hubank M. and Schatz D.G. (1994) Identifying differences in mRNA expression by representational difference analysis of cDNA. Nucleic Acids Res., 22, 56 405 648.
Ilyina, Т. V., and E. V. Koonin. (1992). Conserved sequence motifs in the initiator proteins for rolling circle DNA replication encoded by diverse replicons from eubacteria, eucaryotes and archaebacteria. Nucleic Acids Res. 20, 3279−3285.
Ivanova, N., and Belyavsky, A. (1995) Identification of differentially expressed genes by restriction endonuclease-based gene expression fingerprinting. Nucleic Acids Res., 23,2954−2958.
Kato, K. (1996) RNA fingerprinting by molecular indexing. Nucleic Acids Res., 24, 394−395.
Kenk, R: (1976) Freshwater planarians (Turbellaria) of North America. Cincinnati, U.S. Environmental Protection Agency,
Ко M.S. (1990) An equalized cDNA library by the reassociation of short double-stranded cDNAs. Nucl. Acids. Res., 18, 5705−5711.
Kuklin A, Munson K, Gjerde D, Haefele R, Taylor P., (1997) Detection of single-nucleotide polymorphisms with the WAVE DNA fragment analysis system. Genet. Test- 1,201−206
Kunkel L., Monaco A. Middlesworth W., Ochs Hans D. and Latt S.A. (1985) Specific cloning of DNA fragments absent from the DNA of a male patient with an X chromosome deletion. Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 82, 4778−4782.
Lamar E. and Palmer E. (1984) Y-encoded, species-specific DNA in mice: evidence that the у chromosome exists in two polimorphic forms in inbred strains. Cell, 37, 171−177.
Laufs, J., I. Jupin, C. David, S. Schumacher, F. Heyraud-Nitchke, B. Gronenborn. (1995) Geminivirus replication: genetic and biochemical characterization of Rep protein function. Biochimie. 77, 765−773.
Li W.-B., Gruber C., Lin J., Lim R., Alessio J. and Jessee J. (1994) The isolation of differential expressed genes in fibroblast growth factor stimulated BC3HI Cells by subtractive hybridization. Biotechnique, 16, 722−729.
Liang, P., and Pardee, A. (1992) Differential display of eukaryotic messenger RNA by means of the polymerase chain reaction. Science, 257, 967−971.
Liang, P., and Pardee, A. (1995) Recent advances in differential display. Current Opinion Immunol, 7,274−280.
Lin F, Yu YP, Woods J, Cieply K, Gooding B, Finkelstein P, Dhir R, Krill D, Becich MJ, Michalopoulos G, Finkelstein S, Luo JH., (2001) Myopodin, a synaptopodin homologue, is frequently deleted in invasive prostate cancers. Am J Pathol. 159,1603−1612.
Liotta L. A. (1991) Cancer metastasis and angiogenesis: an imbalance of possitive and negative regulation. Cell, 64, 327−336.
Lisitsyn N., Lisitsyn N. and Wigler M. (1993) Cloning the differences between two complex genomes. Science, 259, 946−951.
Luk’yanov S.A., Gurskaya N.G., Luk’yanov K.A., Tarabykin V.S., and Sverdlov E.D. (1994) Highly efficient subtractive hybridization of cDNA. Journal of Bioorganic Chemistry, 20, 386−388.
Luo J.-H., Puc J.A. Solsberg E.D., Yao Y., Bruce J.N., Wright T.C., Becich M.J., and Parsons R. (1999) Differential subtraction chain, a method for identifying differences in genomic DNA and mRNA. Nucleic Acids Res. 27: el9.
Mankertz, A., J. Mankertz, K. Wolf, and H.-J. Buhk. (1998) Identification of a protein essential for replication of porcine circovirus. J. Gen. Virol. 79, 381−384.
Masterson, P. J., M. A. Stanley, A. P. Lewis, and M. A. Romanos. (1998) A C-terminal helicase domain of the human papillomavirus El protein binds E2 and the DNA polymerase a-primase p68 subunit. J. Virol.72, 7407−7419.
Matz M, Usman N, Shagin D, Bogdanova E, Lukyanov S. (1997) Ordered differential display: a simple method for systematic comparison of gene expression profiles. Nucleic Acids Res. 25, 2541−2542.
McClelland, M., Honeycutt, R., Mathieu-Daude, F., Vogt, Т., Welsh, J. (1997) Fingerprinting by arbitrarily primed PCR. Methods Mol. Biol., 85,13−24.
McClelland, M., Mathieu-Daude, F., and Welsh, J. (1995) RNA fingerprinting and differential display using arbitrarily primed PCR. Trends in Genet., 11, 242−246.
McKusick, V.A. (1991) Current trends in mapping human genes. FASEB J. 5, 1220.
Meszaros M. and Morton D.B. (1996) Subtractive hybridization strategy using paramagnetic oligo (dT) beads and PCR. Biotechnique, 20, 413−418.
Milner J., Cecchini E., Dominy P.J. (1995) A kinetic model for subtractive hybridization. Nucl. Acids Res., 23, 176−187.
Muller K, Heller H, Doerfler W., (2001) Foreign DNA integration. Genome-wide perturbations of methylation and transcription in the recipient genomes. J Biol Chem. 276, 14 271−8.
Myers R.M. (1993) The Pluses of Subtraction, Science, 259, 942−943.
Navin A, Prekeris R, Lisitsyn NA, Sonti MM, Grieco DA, Narayanswami S, Lander ES, Simpson EM., (1996) Mouse Y-specific repeats isolated by whole chromosome representational difference analysis. Genomics. 36, 349−53.
Nishizawa T, Okamoto H, Konishi K, Yoshizawa H, Miyakawa Y, Mayumi M., (1997) A novel DNA virus (TTV) associated with elevated transaminase levels in posttransfusion hepatitis of unknown etiology. Biochem Biophys Res Commun. 241, 92−97.
Orozco, В. M., and L. Hanley-Bowdoin. (1998) Concerved sequence and structural motifs contribute to the DNA binding and cleavage activities of a geminivirus replication protein. J. Biol. Chem. 273,24 448−24 456.
Patanjali S.R., Parimoo S., and Weissman Sh.M. (1991) Construction of a uniform-abundance (normalized) cDNA library. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 88, 1943−1947.
Putilina Т., Smith S., Gentleman S. and Chader G. (1992) Rapid PCR-based construcion of specifically enriched libraries from small retina samples. Letter., Exp. Eye Res. 54, 825−826.
Rebagliati M., Weeks D., Harvey R. and Melton D. A. (1985) Identification and cloning of localized maternal RNAs from Xenopus Eggs. Cell, 42, 769−777.
Rivolta M.N. and Wilcox E. R. (1995) A novel and simple methodology to generate subtracted cDNA libraries. Nucl. Acids Res. 23, 2565−2566.
Robinson M., Simon M.I. (1991) Determining transcript number using the polymerase chain reaction: Pgk-2, mP2, and PGK-2 transgene mRNA levels during spermatogenesis. Nucleic Acid Res. 19, 1557−1562.
Rosenberg M., Przybylska M. and Straus D. (1994) TI RFLP subtraction: A method for making libraries of polymorphic markers. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 91,6113−6117.
Ross PL, Lee K, Belgrader P., (1997) Discrimination of single-nucleotide polymorphisms in human DNA using peptide nucleic acid probes detected by MALDI-TOF mass spectrometry. Anal Chem. 15,4197−4202.
Rubenstein J.L.R., Brice A.E.J., Ciaranello R.D., Denney D., Porteus M.H. and Usdin T.B. (1990) Subtractive hybridization system using single-stranded phagemids with directional inserts. Nucleic Acids Res., 18, 4833−4842.
Sambrook J., Fritsch E.F., Maniatis T. (1989) Molecular Cloning, A Laboratory Manual. Cold Spring Harbor Lab. Press, Cold Spring Harbor.
Sargent T. and Dawid I. B. (1983) Differencial gene expression in the gastrula of Xenopus laevis. Science, 222, 135−139.
Sargent T.D. (1987) Isolation of differentially expressed genes. Methods Enzymol., 152, 423−432.
Sasaki Y.F., Ayusava D., Oishi M. (1994) Construction of a normalized cDNA library by introduction of a semi-solid mRNA-cDNA hybridization system. Nucl. Acids Res. 22, 987−992.
Sauzin M.J. (1967) Etude ultrastructurale de la differenciation du neoblaste au cours de la regeneration de la planaire Dugesia gonocephala. 1. Differenciation en cellule nerveuse. Bull.Soc.Zool.France 92, 313−318.
Shiosoka Т. and Saunders G. F. (1982) Differential expression of selected genes in human leukemia leukocytes. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 79, 4668−4571.
Shummer M., Scheurlen I., Schaller C., Galliot В., (1992) HOM/HOX homeobox genes are present in hydra (Chlorohydra viridissima) and are differentially expressed during regeneration. EMBO. 11, 1815−1823.
Siebert, P.D., Chenchik, A., Kellogg, D.E., Lukyanov, K.A. and Lukyanov, S.A. (1995) An improved PCR method for walking in uncloned genomic DNA. Nucleic Acids Res., 23, 1087−1088.
Sive H.L. and St. John T. (1988) A simple subtractive hybridization technique employing photoactivatable biotin and phenol extraction. Nucl. Acids Res. 16, 10 937.
Soares M.B., Bonaldo M.F., Jelene P., Su L., Lawton L., Efstratiadis A. (1994) Construction and characterization of a normalized cDNA library. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 91, 9228−9232.
Straus D. and Ausubel F.M. (1990) Genomic subtraction for cloning DNA corresponding to deletion mutations. Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 87, 1889−1893.
Suzuki, H., Yaoi, Т., Kawai, J., Hara, A., Kuwajima, G., Watanabe, S. (1996) Restriction landmark cDNA scanning (RLCS): a novel cDNA display system using two-dimensional gel electrophoresis. Nucleic Acids Res., 24, 289−294.
Sverdlov ED, Ermolaeva OD. (1993) Subtractive hybridization. Theoretical analysis, and a principle of the trap. Bioorg Khim. 19, 1081−1088. Russian
Sverdlov ED, Ermolaeva OD., (1994) Kinetic analysis for subtractive hybridization of transcripts. Bioorg Khim. 20, 506−514. Russian.
Tarabykin VS, Lukyanov KA, Potapov VK, Lukyanov SA., (1995) Detection of planarian Antennapedia-like homeobox genes expressed during regeneration. Gene. 158,197−202.
Tautz, D. (1990) Genomic finger printing goes simple. Bioessays. 12:44−46.
Timberlake W. E. Developmental gene regulation in Aspergillus nidulans, Dev. Biol., 1980, 78,497−500.
Timblin C., Battley J. and Kuehl W. H. (1990) Application of PCR technology to subtractive cDNA cloning: identification of genes expressed specifically in murine plasmacytoma cells. Nucl. Acids Res., 18,1587−1593.
Toyota M, Ushijima T, Suzui M, Murakumo Y, Imai K, Sugimura T, Matsuyama M., (1998) Generation of polymorphic markers tightly linked to the thymus enlargement loci by phenotype-directed representational difference analysis. Mamm Genome. 9,735−739.
Travis G.H. and Sutcliffe J. G. (1988) Phenol emulsion-enchanced DNA-driven subtractive cDNA cloning: Isolation of low-abundance monkey cortex-specific mRNA. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 85,1696−1700.
Ueki T, Toyota M, Skinner H, Walter KM, Yeo CJ, Issa JP, Hruban RH, Goggins M., (2001) Identification and Characterization of Differentially Methylated CpG Islands in Pancreatic Carcinoma. Cancer Res. 61:8540−8546.
Wang Z. and Brown D.D. (1991) A gene expression screen. Proc.Natl. Acad. USA, 88,11 505−11 509.
Welsh, J., Chada, K., Dalai, S.S., Ralph, D" Cheng, R" McClelland, M. (1992) Arbitrarily primed PCR fingerprinting of RNA. Nucleic Acids Res., 20, 4965−4970.
Welsh, J., McClelland, M. (1990) Fingerprinting genomes using PCR with arbitrary primers. Nucleic Acids Res. 18, 7213−7218.
Wieland I., Bolger, G., Asouline G. and Wigler M. (1990) A method for difference cloning: gene amplification following subtractive hybridization. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 87, 2720−2724.
Williams, J., G., K., Kubelic, A., R., Livak, K., J., Rafalski, J., A., Tingey, S., V. (1990) DNA polymorphysms amplified by arbitrary primers are useful as genetic markers. Nucleic Acids Res. 18, 6531−6535.
Zaraisky A.G., Lukyanov S.A., Vasiliev O.L., Smirnov Y.V., Belyavsky A.V. and Kazanskaya, O.V. (1992) A novel homeobox gene expressed in the anterior neural plate of Xenopus embryo. Devel. Biol., 152, 373−382.
Zeng J., Gorski R. A. and Hamer D. (1994) Differential cDNA cloning by enzymatic degrading subtraction (EDS). Nucleic Acids Res., 22,4381−4385.
Zimmerman C., Orr W., Leclerc R., Barnard E., Timberlake W. (1980) Molecular cloning ans selection of genes regulated in Aspergillus development, Cell, 21,709−714.

Заполнить форму текущей работой