Определение лекарственных препаратов в биожидкостях методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

В связи с увеличением в последнее время числа острых и смертельных отравлений различными лекарственными препаратами все более актуальным становится вопрос химико-токсикологических и судебно-химических исследований по идентификации лекарственных препаратов и определения их концентраций в биологических средах. Также важное значение в химико-токсикологическом анализе занимает вопрос мониторинга лекарственных препаратов в крови, поскольку с этим связан выбор метода лечения пациентов. В связи с этим с каждым годом растут требования, предъявляемые к судебно-химическим исследованиям, поскольку расширяется список определяемых препаратов, увеличивается число отравлений комбинацией двух и нескольких лекарственных препаратов, повышаются требования к чувствительности методик, к избирательности. Все это требует разработки новых методик анализа, основывающихся на современных инструментальных методах исследования.

Химико-токсикологический и судебно-химический анализ различных лекарственных препаратов в биологических средах представляет значительные трудности в связи с существенными различиями как самих биологических матриц, так и анализируемых лекарственных препаратов. Кроме того, важно учитывать метаболизм лекарственных препаратов. Химическое исследование лекарственных препаратов в биологических средах включает несколько последовательных стадий: стадии извлечения лекарственного препарата из биологического объекта, стадии очистки от соэкстрактивных веществ, стадии концентрирования и стадии анализа. Традиционно для извлечения лекарственных препаратов из биологических объектов используют жидкость-жидкостную экстракцию раздельно для веществ кислого и основного характера, и основным методом исследования остается метод тонкослойной хроматографии (ТСХ). Как уже отмечалось, с каждым годом растет перечень лекарственных препаратов в химико-токсикологической экспертизе, и определение лекарственного препарата в биологических объектах становится все более сложной задачей. Используемый в настоящее время метод ТСХ имеет ряд недостатков: данный метод неспецифичен, поскольку идентификация неизвестного лекарственного препарата этим методом часто неоднозначна (а иногда невозможна) из-за совпадения параметров нескольких лекарственных препаратов, не дает количественной оценки вещества и требует затрат большого количества реактивов и времени.

В настоящее время все более широко внедряются инструментальные методы анализа, обладающие высокой чувствительностью и избирательностью: газовая хроматография с масс-селективным детектором (ГХ/МСД), высокоэффективная жидкостная хроматография с многоволновым детектированием (ВЭЖХ), капиллярный электрофорез (КЭ). Все эти методы можно также использовать в скрининговом варианте.

Известны варианты скрининга методом ТСХ и УФ-СФМ, методом ТСХ и ГХ/МСД, есть варианты методом ВЭЖХ. Метод ГХ/МСД требует дорогостоящего оборудования, дополнительной пробоподготовки для перевода лекарственных препаратов в более летучие соединения и расхода дорогостоящих реактивов. Несомненным достоинством метода ГХ/МСД является наличие библиотеки (базы данных) лекарственных, наркотических препаратов и их метаболитов. Методы ВЭЖХ и КЭ отличаются простотой, небольшими трудозатратами, малым расходом реактивов, но не имеют библиотек, подобных ГХ/МСД, которые необходимо создавать самостоятельно в процессе работы.

Были проведены сравнительные исследования количественного содержания лекарственных препаратов, извлекаемых из биологических жидкостей по предлагаемому методу и методу А. А. Васильевой, результаты представлены в таблице. Экспериментально установлено, что степень извлечения лекарственных веществ из крови предлагаемым методом в среднем в 20−30 раз выше, чем по методу А. А. Васильевой.

Таким образом, полученные данные на примере модельных смесей на основе крови, мочи и желчи и реальных пробах показали, что для идентификации лекарственного препарата при отравлениях можно использовать предлагаемый метод однократной экстракции из 0,6 мл биологических жидкостей смесями растворителей: хлороформа с ацетоном и хлороформа с ацетонитрилом. Степень извлечения лекарственных веществ из крови предлагаемым методом в 20−30 выше, чем в извлечениях по методу А. А. Васильевой. Кроме того, данный метод позволяет количественно определять лекарственные препараты в биологических матрицах. Предлагаемый метод имеет ряд преимуществ: значительно снижает трудоемкость анализа, снижает стоимость анализа за счет уменьшения объемов используемых реактивов, сокращает случайные и систематические ошибки в процессе подготовки проб, избирателен и чувствителен.