Изучение реакций преобразования энергии в NADH: убихинон-оксидоредуктазах митохондрий и прокариот

ДиссертацияПомощь в написанииУзнать стоимостьмоей работы

Подобраны условия для измерения протон-транслоцирующей активности Комплекса I в составе суббактериальных частиц Р. denitrificans. Для максимальной протон-транслоцирующей активности необходимо присутствие в среде измерения ионов Mg^", и «активация» суббактериальных частиц сопряженным окислением N A D H или сукцината.5. Определен стехиометрический коэффициент для протон транслоцирующего… Читать ещё >

Содержание

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
Организация дыхательной цепи
Строение Комплекса
Комплекс I митохондрий эукариот
Комплекс I прокариот
Пространственная организация Комплекса
Каталитические активности Комплекса
Нечувствительные к ротенону активности Комплекса
КАВН:феррицианид-редуктазная реакция
МАВН:гексааминорутений-редуктазная реакция
Генерация супероксид-аниона Комплексом
Трансгидрогеназная реакция
Чувствительные к ротенону активности Комплекса
Энергонезависимые реакции Комплекса I
Разобщенная ИАОН-оксидазная реакция
КАВН:убихинон-редуктазная реакция
Энергозависимые реакции Комплекса
АТР-поддерживаемая реакция обратного переноса электронов
Сукцинат-поддерживаемая реакция обратного переноса электронов
Гистерезисное поведение Комплекса
Очищенные препараты Комплекса
Ингибиторы Комплекса I
Ингибиторы, действующие по нуклеотид-связывающим центрам Комплекса I
Ингибиторы, действующие по хинон-связывающему центру Комплекса I
Механизм электрохимического сопряжения в Комплексе
Определение стехиометрического коэфициента п (Н*/2е) для Комплекса I митохондрий эукариот и бактерий
МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Препаративные методы
Получение митохондрий сердца быка
Получение субмитохондриальных частиц из митохондрий сердца быка
Получение активированных и деактивированных субмитохондриальных частиц
Выращивание бактерий Рагасоссш ёетЫАсат
Получение препарата суббактериальных частиц Рагасоссш ЛепИпАсат
Аналитические методы
Определение белка
Измерение активности ферментов дыхательной цепи
Измерение МАЭН-оксидазной активности. а) Полярографическое определение ЫАОН-оксидазной активности. б) Спектрофотометрическое определение КАОН-оксидазной активности
Измерение сукцинат-оксидазной активности

Измерение реакций окисления ИАОН различными искусственными акцепторами электронов. а) Измеренине КАОН:(}гредуктазной активности. б) Измерение КАОН: феррицианид-редуктазной активности. в) Измерение КАОН: гексааминорутений-редуктазной активности.

Измерение скорости обратного переноса электронов. а) Аэробное восстановление NAD+ сукцинатом. б) Аэробное восстановление феррицианида сукцинатом.

Измерение активности протон-транслоцирующей трансгидрогеназы в составе СМЧ. а) Измерение ЫАОРН→АРАВ±трансгидрогеназной активности СМЧ б) Измерение АРАОН-^ЧАБР±трансгидрогеназной активности СМЧ

Регистрация протон-транслоцирующей активности и окисления NADH

Регистрация мембранного потенциала СМЧ.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

Амфифильные ингибиторы Комплекса 1.

Влияние Тритона Х-100 наТЧАОН: акцептор-редуктазные активности, катализируемые Комплексом I в составе СМЧ.

Влияние Тритона Х-100 на ингибирование Комплекса I ротеноном.

Влияние Тритона Х-100 на процессы активации/деактивации Комплекса

Влияние Тритона Х-100 на обратный перенос электронов.

Влияние лаурил сульфата натрия на различные активности СМЧ.

Влияние Тритона Х-100 и лаурил сульфата натрия на активности суббактериальных частиц P. denitrificans.

Транслокация протонов NDH-1 в составе СБЧ бактерии P. denitrificans.

Активация протон-транслоцирующей активности Комплекса I СБЧ

P. denitrificans.

Определение коэфициента п (Н+/2ё) для N ADI1: у б и х и, но н-ре ду ктаз н о й реакции СБЧ.

ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.

Амфифильные ингибиторы Комплекса 1.

Транслокация протонов бактериальным Комплексом 1.

ВЫВОДЫ.

Изучение реакций преобразования энергии в NADH: убихинон-оксидоредуктазах митохондрий и прокариот (реферат, курсовая, диплом, контрольная)

1. Тритон Х-100 специфически и обратимо ингибирует Комплекс I в составе СМЧ митохондрий сердца быка. Тритон Х-100 избирательно действует на прямую и обратную реакции, катализируемые Комплексом I в составе СМЧ. Константы ингибирования K i для прямой и обратной реакций составляют 10 и 50 мкМ, соответственно.2. Действие Тритона Х-100 на Комплекс I аналогично действию другого ингибитора — ротенона. Тритон Х-100 и ротенон конкурируют за место связывания с Комплексом I.3. Лаурил сульфат натрия специфически ингибирует Комплекс I в составе СМЧ митохондрий сердца быка. Лаурил сульфат избирательно действует на прямую и обратную реакции, катализируемые Комплексом 1 в составе.

4. Подобраны условия для измерения протон-транслоцирующей активности Комплекса I в составе суббактериальных частиц Р. denitrificans. Для максимальной протон-транслоцирующей активности необходимо присутствие в среде измерения ионов Mg^"^, и «активация» суббактериальных частиц сопряженным окислением N A D H или сукцината.5. Определен стехиометрический коэффициент для протон транслоцирующего КАОНгхинон-редуктазного участка дыхательной цепи Р. denitrificans, равный 4 протонам на одну молекулу окисленного В ы р, а ж, а ю г л у б о к у ю благодарность, А н д р е ю Д м и т р и е в и ч у В и н о г р, а д о в у за п р е д л о ж е н н у ю тему и научное р у к о в о д с т в о. Б л, а г о д, а р ю В е р у Г е о р г и е в н у Гривенникову за н е о ц е н и м у ю п о м о щ ь в работе. Б л, а г о д, а р ю Э л е о н о р у В л, а д и м и р о в н у Г, а в р и к о в у за п о м о щ ь в р, а б о т е с бактериями. Б л, а г о д, а р ю всех коллег из н, а ш е й л, а б о р, а т о р и и з, а п о д д е р ж к у и т е п л у ю, а т м о с ф е р у в лаборатории. Выполнение работы финансировалось Российским фондом фундак4ентальных исследований (гранты 99−04−48 082 и 02−04−48 679), программой «Ведущие нуачные школы» (грант № 00−15−97 798), шведской Королевской академией наук (грант 12 557) и Fogarly Inlernalioiial Research Collaboration Award (FIRCA) Grant 1 R03 TW06041.

Показать весь текст

Заполнить форму текущей работой

Другие работы

Синтез фталимидсодержащих кетостабилизированных илидов серы и исследование их внутримолекулярной циклизации

Илиды серы являются ценными синтетическими интермедиатами. Обладая нуклеофильным характером, они применяются для циклопропанирования олефинов и синтеза эпоксидов из карбонильных соединений. Особого внимания заслуживают реакции илидов, позволяющие синтезировать гетероциклические соединения, многие из которых перспективны в качестве лекарственных препаратов. Одной из таких реакций является…

Диссертация