Характеристика ферментов амилазного комплекса термофильной бактерии Thermotoga Neapolitana
Экстремально термофильные эубактерии рода Thermotoga, живущие в геотермальных источниках при температурах 55−90°С, являются облигатными гетеротрофами и используют для роста различные углеводородные субстраты, в частности, крахмал. В настоящее время известно несколько амилолитических ферментов Thermotoga maritime, обладающих исключительно высокой активностью и устойчивостью к воздействию различных… Читать ещё >
Содержание
- Список сокращений
- 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
- 1. 1. Классификация амилаз
- 1. 2. Структура крахмала и других a-D-глюканов
- 1. 3. Субстратная специфичность амилаз
- 1. 4. Классификация гликозилгидролаз на основе гомологии аминокислотных последовательностей
- 1. 5. Способы действия амилаз на полисахаридный субстрат: «одноцепочечный», «многоцепочечный», «множественная атака»
- 1. 6. Строение активных центров амилаз. Концепция Хироми-Тома
- 1. 7. Общие черты каталитического механизма, характерные для гликозилгидролаз в целом
- 1. 8. Особенности механизма действия амилаз
- 1. 9. Пространственная структура амилаз
- 1. 10. Кальций и другие металлы в молекулах амилаз. Основные физико-химические свойства амилаз
- 1. 11. Применение микробных амилаз
- 1. 12. Термостабильные амилазы
- 1. 13. Гипертермофильные эубактерии рода Thermotoga
- ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТ
- 2. ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
- 2. 1. Бактериальные штаммы и плазмиды
- 2. 2. Химические реагенты и ферменты
- 2. 3. Выделение хромосомной ДНК Th. neapolitana
- 2. 4. Конструирование геномной библиотеки Th. neapolitana и создание библиотеки рекомбинантных клонов
- 2. 5. Выделение и анализ плазмидной ДНК
- 2. 6. Определение нуклеотидной последовательности
- 2. 7. Определение амилолитической активности на чашках
- 2. 8. Приготовление клеточных экстрактов и первичная очистка белка
- 2. 9. Определение субстратной специфичности и анализ продуктов гидролиза
- 2. 10. Определение концентрации белка
- 2. 11. Электрофоретические методы исследования белков
- 2. 12. Определение активности термостабильных амилолитических ферментов в клеточных экстрактах
- 2. 13. Очистка из Е. coli рекомбинантных а-глюкозидазы и цикломальтодекстриназы
- 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
- 3. 1. Создание банка генов Th. neapolitana. Отбор клонов, продуцирующих термостабильные амилазы
- 3. 2. Определение и сравнительный анализ нуклеотидной последовательности участка ДНК Th. neapolitana из клонов, проявляющих активность на полимерных субстратах
- 3. 3. Характеристика рекомбинантной мальтодекстрин-гликозилтрансферазы Th. neapolitana
- 3. 4. Сравнение свойств мальтодекстрин-гликозилтрансфераз из Th. neapolitana и Th. maritima
- 3. 5. Сравнительный анализ аминокислотной последовательности мальтодекстрин-гликозилтрансферазы из Th. neapolitana
- 3. 6. Характеристика фрагмента хромосомной ДНК из клонов, гидролизующих метилумбел л ифер и л л-a-D-м ал ьтози д
- Сокращения, используемые в тексте диссертации
- Да — Дальтон
- ДНК — дезоксирибонуклеиновая кислота
- ДСН — додецилсульфат натрия
- ДТТ — дитиотрейтол ед. — единица активности фермента
- ПААГ — полиакриламидный гель п.н. — пар нуклеотидов т.п.н. — тысяч пар нуклеотидов среда LB — среда Luria-Bertan
- ФМСФ — фенил-метил-сульфонилфторид, ингибитор сериновых протеиназ
- ЭДТА — этилендиаминтетрауксусная кислота
- I. PTG — изопропил-[3−0-тиогалактопиранозид
Характеристика ферментов амилазного комплекса термофильной бактерии Thermotoga Neapolitana (реферат, курсовая, диплом, контрольная)
Гидролиз крахмала до глюкозы под действием ферментов — амилаз, является одной из отраслей биотехнологии. В связи с широкой распространенностью растений, богатых крахмалом, амилазы занимают важное место в биохимических исследованиях, направленных на решение задач биотехнологии, связанных с получением Сахаров из возобновляемых источников сырья.
Особый интерес проявляется в отношении термостабильных ферментов. Проведение биотехнологических процессов при высоких температурах с использованием термостабильных ферментов позволяет ускорить гидролиз за счет увеличения скоростей реакций, понижения вязкости растворов как исходных веществ, так и продуктов гидролиза, а также избежать опасности микробного заражения сред.
Экстремально термофильные эубактерии рода Thermotoga, живущие в геотермальных источниках при температурах 55−90°С, являются облигатными гетеротрофами и используют для роста различные углеводородные субстраты, в частности, крахмал. В настоящее время известно несколько амилолитических ферментов Thermotoga maritime, обладающих исключительно высокой активностью и устойчивостью к воздействию различных денатурирующих агентов при температурах 70−100°С, что делает их перспективными для применения в ряде промышленных производств. Например, при ферментативном гидролизе крахмала, при получении глюкозо-фруктозных сиропов, необходимо действие амилаз на крахмал при температуре 70 °C и выше. Амилазы Thermotoga могут выдерживать такую температуру без потери активности и интенсивности гидролиза. Высокая термостабильность амилаз Thermotoga позволяет использовать их в качестве удобной модели для исследований механизмов, обуславливающих термостабильность белковых молекул. Поэтому поиск амилолитических ферментов из разных видов.
Ibermotoga, изучение их физико-химических свойств и оптимальных условий действия представляют значительный интерес.
Целью настоящей работы стало изучение ферментов амилазного комплекса гипертермофильной эубактерии Thermotoga neapolitcina.
В ходе работы решались следующие задачи:
— создание банка генов Th. neapolitana в клетках Е. coliпоиск генов, кодирующих термостабильные амилазы, действующие на полимерные субстраты и олигосахариды;
— определение нуклеотидных последовательностей клонированных генов;
— создание штаммов-продуцентов отобранных амилазразработка способов очистки рекомбинантных белков из клеток Е. coli;
— изучение физико-химических и ферментативных свойств найденных амилаз;
Выводы:
1. Сконструирован банк генов Th. neapolitana на базе плазмидного вектора pUC18 в клетках Е. coli XL 1-Blue. Из банка отобрано четыре клона, два из которых проявляют термостабильную амилазную активность на полисахаридах, а два других — на мальтоолигосахаридах.
2. Определены нуклеотидные последовательности и проведен сравнительный анализ клонированных фрагментов ДНК Th. neapolitana. Рекомбинантные плазмиды из клонов, проявляющих амилазную активность на полисахаридах, содержат ген мальтодекстрин-гликозилтрансферазы. Рекомбинантные плазмиды из клонов, проявляющих амилазную активность на мальтоолигосахаридах, содержат гены а-глюкозидазы и цикломальтодекстриназы.
3. Разработаны схемы препаративного выделения и очистки рекомбинантных мальтодекстрин-гликозилтрансферазы, а-глюкозидазы и цикломальтодекстриназы из клеток Е. coli.
4. Исследована субстратная специфичность найденных нами ферментов. Мальтодекстрин-гликозилтрансфераза действует на мальтоолигои полисахариды, гидролизуя 1,4-а-гликозидную связь и перенося образовавшуюся часть цепи на другую молекулу субстрата. а-Глюкозидаза гидролизует мальтозу. Цикломальтодекстриназа гидролизует цикломальтодекстрины и мальтодекстрины до глюкозы и мальтозы.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
.
В результате проведенных исследований из сконструированного нами в клетках E. coli XL 1-Blue банка генов Th. neapolitana, были отобраны клоны, проявляющие термостабильную амилазную активность на крахмале, и клоны, проявляющие термостабильную амилазную активность на мальтотриозе. Из отобранных клонов выделены рекомбинантные плазмиды, определены нуклеотидные последовательности их вставок.
Проведен сравнительный анализ нуклеотидных последовательностей с последовательностями из базы данных EMBL. Показано, что плазмиды pTnal и рТпа2 из клонов, гидролизующих крахмал, содержат ген мальтодекстрин-гликозилтрансферазы, а плазмиды pTnml и pTnm2 из клонов, гидролизующих мальтотриозу, содержат расположенные рядом гены цикломальтодекстриназы и а-глюкозидазы — malA и aglA.
Рекомбинантная мальтодекстрин-гликозилтрансфераза была очищена из клеток E.coli. Достигнута 10-кратная очистка белка. Молекулярная масса мальтодекстрин-гликозилтрансферазы составила 52 кДа, что соответствует вычисленной на основании анализа нуклеотидной последовательности (51,9 кДа).
Гены — malA и aglA были разделены и субклонированы в плазмидный вектор pQE-32. Созданы штаммы-продуценты E. coli XL1-Blue, несущие плазмиды: pQE-32-malA и pQE-32-ag/A. Получены очищенный в 233 раза препарат цикломальтодекстриназы и очищенный в 87 раз препарат а-глюкозидазы.
Исследованы субстратная специфичность и свойства найденных ферментов. Обнаружено, что мальтодекстрин-гликозилтрансфераза гидролизует 1,4-а-гликозидные связи олигомерных и полимерных 1,4-а-глюканов (мальтоолигосахаридов, амилозы, амилопектина, крахмала) и переносит одну часть цепи на акцепторные мальтодекстрины. В результате реакции образуется набор мальтоолигосахаридов, начиная от мальтотриозы и длинее. Активность фермента возрастает на 70% в присутствии 10 мм СаСЬ.
Цикломальтодекстриназа гидролизует цикломальтодекстрины с образованием линейных мальтоолигосахаридов, а затем гидролизует их до глюкозы и мальтозы. а-Глюкозидаза гидролизует мальтозу и мальтоолигосахариды до глюкозы. Активность фермента на мальтозе значительно выше, чем на мальтоолигосахаридах. Фермент активен лишь в присутствии НАД+ и ДТТ, оптимальные концентрации которых — 0.5 мМ и 200 мМ соответственно. В присутствии 2 мМ МпСЬ активность а-глюкозидазы возрастает в 2.5 раза.
Оптимумы активности для всех трех ферментов совпадают и составляют 85−90°С, рН 7−7.5, что принципиально важно для проведения одностадийного гидродиза крахмала.
При проведении сравнительного анализа выведенной аминокислотной последовательности мальтодекстрингликозилтрансферазы из Th. neapolitana с белками из баз данных EMBL и SWISSPROT обнаружен высокий уровень идентичности (93%) с мальтодекстрин-гликозилтрансферазой из близкого организма — Th. maritima. Мальтодекстрин-гликозилтрансферазы Thermotoga имеют высокую степень гомологии (35−65%) с а-амилазами и цикломальтодекстрин-гликозилтрансферазами (семейство 13 гликозил-гидролаз по классификации Хенриссата). Гомология с мальтодекстрин-гликозилтрансферазами из других организмов составляет меньше 25%. Таким образом, мальтодекстрин-гликозилтрансферазы из Thermotoga, вероятно, следует отнести к особому подсемейству мальтодекстрин-гликозилтрансфераз в пределах большого семейства 13 гликозил-гидролаз, к которому относятся альфа-амилазы и родственные им ферменты.
Аминокислотная последовательность цикломальтодекстриназы из Th. neapolitana имеет в своем составе участки, высокогомологичные консервативным регионам и потенциальным активным центрам гликозил-гидролаз семейства 13. Гомология с белками этого семейства составляет 44−54%, на основании чего, цикломальтодекстриназу из Th. neapolitana можно отнести к семейству 13 (альфа-амилаз и родственных им ферментов).
В полностью секвенированном геноме Th. maritima обнаружена нуклеотидная последовательность, предположительно кодирующая цикломальтодекстриназу и высокогомологичная (82%) клонированному нами гену цикломальтодекстриназы из Th. neapolitana.
Сходство аминокислотных последовательностей мальтодекстрин-гликозилтрансферазы и цикломальтодекстриназы из Th. neapolitana с семейством альфа-амилаз указывает на эволюционную близость этих ферментов и возможное сходство их пространственных структур.
Первичная структура альфа-глюкозидазы из Thermotoga neapolitana высоко гомологична (91% идентичности, 97% сходства) первичной структуре альфа-глюкозидазы из близкого организма — Th. maritima. Альфа-глюкозидазы из Thermotoga не проявляют существенной гомологии с альфа-глюкозидазами из других организмов (сходство — меньше 20%). Гораздо выше сходство с альфа-галактозидазами и 6-фосфо-бета глюкозидазами (41−48%), принадлежащими к семейству 4 гликозил-гидролаз по классификации Хенриссата. Эти ферменты осуществляют гидролиз гликозидной связи по общему для гликозил-гидролаз каталитическому механизму. Пространственная структура не известна ни для одного из белков семейства 4 гликозил-гидролаз. Однако известно, что на N-конце каждого из этих белков расположен регион, предположительно принимающий участие в связывании НАД. У альфа-глюкозидазы из Th neapolitana это аминокислоты с 6 по39.
Несмотря на высокий (88−95%) уровень идентичности белковых последовательностей Th. neapolitana и Th. maritima, в расположении их генов имеются некоторые отличия. Например, у Th. maritima участок ДНК.
Список литературы
- Номенклатура ферментов / Под ред. А. Е. Браунштейна. М.: ВИНИТИ, 1979. 320 с.
- Hiromi Keitaro, Ohnishi Masatake. Некоторые замечания к классификации амилаз // Ibid. 1984. — 31, N 2. Р 74−82.
- Tonozuka Т, Ohtsuka М, Mogi S, Sakai Н, Ohta Т, Sakano Y. А neopullulanase-type alpha-amylase gene from Thermoactinomyces vulgaris R-47. Biosci Biotechnol Biochem, 1993, Mar- 57(3):395−401.
- Liebl W, et al. Purification and characterization of a novel thermostable 4-alpha-glucanotransferase of Thermotoga maritima cloned in Escherichia coli. Eur J Biochem. 1992, Jul 1- 207(l):81−8.
- И.Н. Галич. Амилазы микроорганизмов. Киев. Наукова думка. 1987.
- Bacon J. S. D. Factors Limiting the Action Polysaccharide Degrading Enzymes. Microbial Polysaccharides and Polysaccharases, N.Y.: Acad. Press, 1979, p.269−284.
- Fogarty W. M., Kelly С. T. Amylases, Amyloglucosidases and Related Enzime. Economyc Mycrobiology. N.Y.: Acad. Press, 1980, v. 5, p.115−170.
- Critical Rewiews in Biochemistry and Molecular Biology. CRC Press Inc., v. 24, p. 329−418.
- Takagi Т., Toda H., Isemura T. Bacterial and mold amylases. Enzymes, 1971, v. 5, p. 235−271.
- Harada Tokuya. Bacterial isoamylases and pullulanases. J.Jap. Soc.Starch. Sci., 1984, v. 31, N2, p. 38−47.
- Жеребцов H.A. Амилолитические ферменты в пищевой промышленности. М.: Лег. и пищ. пром-сть, 1984,160 с.
- Хорлин А.Я. Активные центры карбогидраз // Структура и функции активных центров ферментов. М., Наука, 1974, с. 39−69.
- Henrissat В. A classification of glycosyl hydrolases based on amino-acid sequence similarities. Biochem. J, 1991, v. 280, p. 309−316.
- Henrissat В., Bairoch A. New families in the classification of glycosyl hydrolases based on amino- acid sequence similarities. Biochem. J, 1993, v. 293, p. 781−788.
- Heinrich P., Huber W., and Liebl W. Expression in Escherichia coli and Structure of the Gene Encoding 4-a-Glucanotransferase from Thermotoga maritima. System Appl. Microbiol, 1994, v. 17, p. 297−305.
- Henrissat В., Bairoch A. Updating the sequence-based classification of glycosyl hydrolases. Biochem J., 1996, v. 316, p.695−696.
- Meyer K.N., Gonon W.F. Analisis of action pattern of a-amylases. Clin. Acta, 1951, v.34. p. 294−298.
- Robit J.R., French D. Multiple attak hypothesis of a-amylase action: action of porcine pancreayic, human salivary and Aspergillus oryzae a-amylases. Arch. Biochem. Biophys, 1967, v. 122, N 1, p. 8−16.
- Greenwod C.T., Milne E.A. Starch-degrading enzymes: properties and action pattern of the a-amylases from barley, oats., rye and wheat. Strake, 1968, v.20, p.139−143.
- Клесов А.А. Ферментативный катализ. М., МГУ, 1984, т.2, 216 с.
- Квеситадзе Т.И. Грибные и бактериальные амилазы. Тбилиси, Мецнереба, 1984,154 с.
- Bayley J.M. French D. The significans of multiple reactions in enzime-polimer systems. J.Biol.Chem., 1957, v. 266, N 1, p.1−14.
- Suetsugu N., Koyama S., Yakeo K., Kuge T. Kinetic studies on the hydrolyses of a-, |3- and y-cyclodextrines by Taka-amylase A. J. Biochem., 1974, v.76, p.57−63.
- Abdullah M., French D., Robyt J.F. Multiple attack by a-amylases. Arch.Biochem.Biophys., 1966., v. 144., N 3., p.595−598.
- French D., Levine M.L., Pazur J.H., Norberg E. Studies on the Schardinger dextrines. The action of soy bean beta-amylase on amyloheptaose. J.Amer.Chem.Soc., 1959, v. 72, N4, p. 1746−1748.
- Kondo H., Nakatani H., Hiromy K., Matsuno R. Multiple attack in porcine pancreatic a-amylase-catalysed hydrolysis of amylose studied with a fluorescence probe. J.Biochem., 1978, v. 84, N. 2, p. 403−417.
- Allen J.D., Thoma J.A. Repetitive attack by Aspergillus orizae a-amylases. Biopolymers, 1976, v. 15, p.729−746.
- Thoma J.A. Model for depolymerizing enzymes. Application to a-amylases. Biopolymers, 1976, v. 15, p. 729−746.
- Hutny J., Ugorski M. Kinetics of hog pancreas a-amylase development of the multiple attack model. Arch.Biochem.Biophys., 1981, v.206, N 1, p. 29−42.
- Robyt J.F., French D. Multiple attack and polarity of action porcine pancreatic a-amylase. Arch.Biochem.Biophys, 1970, v. 138, N 2, p. 662−670.
- Kondo H., Nakatani H., Hiromi K., Matsuno R. Product distribution in amylase-catalysed hydrolysis of amylose. Comparison of experimental results with theoretical predictions. J. Biochem., 1980, v. 87, N 4, p. 10 531 070.
- Robyt J. F. Mechanism and Product specificity of alpha-amylases. 1989, v. 36, N. 4, p. 287−301.
- French D., Youngguist R.M. Abst Papers Amer. Assoc. Cereal Chem, 1960, 45th Meeting. Abst., p.42.
- Thoma J.A., Brothers C., Spradlin J. Subsiete mapping of enzymes. Studiies on Bacillus subtilis amylas. Biochemistry, 1970, v. 9, N 8., p. 1768−1775.
- Thoma J. A., Rao G.V.K., Brothers C. El al. Subsiete mapping of enzimes. Correlation of product patterns with Michaelis parameters and substrate-induced strain. J. Biol. Chem., 1971., v.246, N 18, p. 5621−5635.
- Allen J.D., Thoma J.A. Depolimerse computer modeling. Biochem. J., 1976, v.159, N 1, p.105−120.
- Allen J.D., Thoma J.A. Subsiete mapping of enzimes. Application of the depolimerse computer modeling of two amylases. Biochem. J., 1976, v. 159, N 1, p.121−132.
- Allen J.D. Subsiete mapping of enzimes: application to polysaccharide depolymerases. Methods in Enzymology, 1980, v. 66, p. 248−277.
- Thoma J.A., Spradlin J.E. Action pattern of amylases I. Tha Brewers Digest, 1970, January, v. l, p. 58−63.
- Thoma J.A., Spradlin J.E. Action pattern of amylases П. The Brewers Digest, 1970, February, v. ll, p.66−70.
- Thorgerson E.M., Brewer L.G., Thoma J.A. Subsite mapping of enzimes Use of subsite map to simulate complete time course of hidrolysis of a polimeric substrat. Arch. Biochem. And Biophys, 1979, v. 196, N 1, p. 13−19.
- Hiromi K. Interpretation of dependency of rate parameters on the degree of polymerization of substrate in enzyme-catalysed reaction. Bioche. Biophys. Res. Commun., 1970, v.40, N 1, p. 1−6.
- Suganuma Т., Matsuno R., Ohnishi M., Hiromy K. A study of the mechanism of action of Taka-amylase A on linear oligosaccharides by product analisis and computer simulation. J.Biochem., 1978, v. 84, N. 2, p. 293−316.
- Kondo H., Nakatani H., Matsuno R., Hiromy K. Product distribution in amylase-catalysis hydrolysis of amylose. J. Biochem., 1980, v. 87, N.4, p.1053−1070.
- Suganuma Т., Ohnishi M., Hiromi., Morita Y. Evaluetion of subsite afinnities of soybean |3-amylase by product analysis. Agric. Biol. Chem., 1980, v. 44, N 5, p.1111−1117.
- Hiromi K., Nitta I., Numata C., Ono S. Subsite affinities of glucoamylase: examination of the validity of the subsite of theory. Biochem. Biophys Acta, 1973, v. 302, N2, p. 362−375.
- Blake C.C. F., Koenig D.F., Mair G. A, North A.C.T., Phillips D. C, Sarma V.R., Nature, Lond., 1965, v. 206, p. 757.
- Э. Фершт. Структура и механизм действия ферментов / под ред. Б. И. Курганова. М., Мир, 1980, с. 41−42, 395−396.
- Беленький Д.М. Особенности ферментативного гидролиза а-1,4-глюкозидных связей .Успехи биол. химии, 1971, 12, с.164−181.
- Thama J., Wakim J., Steart L. Comparison of the active sites of alpha- and beta-amylase. Biochem and Biophys. Res. Communs, 1963, v. 12, p.350−361.
- Matsuura Y, et al. Low resolution crystal structures of Taka-amylase A and its complexes with inhibitors. J Biochem (Tokyo), 1979 Dec- v. 86(6), p. 1773−83.
- Matsuura Y, Kusunoki M, Harada W, Kakudo M. Structure and possible catalytic residues of Taka-amylase A. J Biochem (Tokyo), 1984 Mar- v. 95(3), p. 697−702.
- Swift HJ, et al. Structure and molecular model refinement of Aspergillus oryzae (TAKA) alpha-amylase: an application of the simulated-annealing method. Acta Crystallogr В., 1991 Aug 1- v. 47 (Pt 4), p. 535−44.
- Brady RL, et al. Solution of the structure of Aspergillus niger acid alpha-amylase by combined molecular replacement and multiple isomorphous replacement methods. Acta Crystallogr В., 1991 Aug 1- v. 47 (Pt 4), p. 52 735.
- Matsuura Y, et al. Molecular structure of taka-amylase A. I. Backbone chain folding at 3 A resolution. J Biochem (Tokyo), 1980 May- v. 87(5), p. 1555−8.
- Kusunoki M, Matsuura Y, Tanaka H, Kakudo M. X-Ray structure and catalytic mechanism of Taka-amylase A. J. Jap. Soc. Starch. Sci., 1983, v. 30, N2, p.141−147.
- Hofmann BE, et al. Three-dimensional structure of cyclodextrin glycosyltransferase from Bacillus circulans at 3.4 A resolution. J Mol Biol., 1989 Oct 20- v. 209(4), p.793−800.
- Knegtel RM, et al. Crystallographic studies of the interaction of cyclodextrin glycosyltransferase from Bacillus circulans strain 251 with natural substrates and products. J Biol Chem., 1995 Dec 8- v. 270(49), p.29 256−64.
- Knegtel RM, et al. Crystal structure at 2.3 A resolution and revised nucleotide sequence of the thermostable cyclodextrin glycosyltransferase from Thermonanaerobacterium thermosulfurigenes EMI. J Mol Biol. 1996 Mar 1- v. 256(3), p. 611−22.
- Klein С, et al. Catalytic center of cyclodextrin glycosyltransferase derived from X-ray structure analysis combined with site-directed mutagenesis. Biochemistry, 1992 Sep 22- v. 31(37), p.8740−6.
- Penninga D, et al. Site-directed mutations in tyrosine 195 of cyclodextrin glycosyltransferase from Bacillus circulans strain 251 affect activity and product specificity. Biochemistry, 1995 Mar 14- v. 34(10), p. 3368−76.
- Bender H. On the role of histidine residues in cyclodextrin glycosyltransferase: chemical modification with diethyl pyrocarbonate. Carbohydr Res., 1991 Jan 15- v. 209, p. 145−53.
- Kamitori S, et al. Crystal structure of Thermoactinomyces vulgaris R-47 alpha-amylase II (TVAll) hydrolyzing cyclodextrins and pullulan at 2.6 A resolution. J Mol Biol., 1999 Apr 16- v. 287(5), p. 907−21.
- Mikami B, et al. Structure of raw starch-digesting Bacillus cereus beta-amylase complexed with maltose. Biochemistry, 1999 Jun 1- v. 38(22), p. 7050−61.
- Aleshin AE, et al. Refined structure for the complex of acarbose with glucoamylase from Aspergillus awamori var. XI00 to 2.4-A resolution. J Biol Chem., 1994 Jun 3- v. 269(22), p. 15 631−9.
- Fisher E.H., Stein E.A. a-Amylases. The enzymes.-2-ed.-N.Y- London, Acad. Press, 1960, v. 4, p.313−343.
- Liebl W, et al. Properties and gene structure of the Thermotoga maritima alpha-amylase AmyA, a putative lipoprotein of a hyperthermophilic bacterium. J Bacterid., 1997 Feb- v. 179(3), p. 941−8.
- Machius M, et al. Activation of Bacillus licheniformis alpha-amylase through a disorder~>order transition of the substrate-binding site mediated by a calcium-sodium-calcium metal triad. Structure, 1998 Mar 15- v. 6(3), p. 28 192.
- Цыперович A.C. Ферменты (основы химии и технологии). Киев, Техника, 1971, 358 с.
- Иммобилизованные ферменты: Современное состояние и перспективы. Под ред. И. В. Березина, В. К. Антонова, К. Мартинека.М., Изд-во Моск. Ун-та, 1976, 358 с.
- Sin К, Nakamura A, Kobayashi К, Masaki Н, Uozumi Т. Cloning and sequencing of a cyclodextrin glucanotransferase gene from Bacillus ohbensis and its expression in Escherichia coli. Appl Microbiol Biotechnol., 1991 Aug- v. 35(5), p. 600−5.
- Bovetto LJ, Backer DP, Villette JR, Sicard PJ, Bouquelet SJ. Cyclomaltodextrin glucanotransferase from Bacillus circulans E 192. I. Purification and characterization of the enzyme. Biotechnol Appl Biochem., 1992 Feb- v. 15(1), p. 48−58.
- Wimmer B, Lottspeich F, Ritter J, Bronnenmeier K. A novel type of thermostable alpha-D-glucosidase from Thermoanaerobacter thermohydrosulftiricus exhibiting maltodextrinohydrolase activity. Biochem J., 1997 Dec 1- v. 328 (Pt 2), p. 581−6.
- Krohn BM, Barry GF, Kishore GM. An isoamylase with neutral pH optimum from a Flavobacterium species: cloning, characterization and expression of the iam gene. Mol Gen Genet., 1997 May 20- v. 254(5), p. 469−78.
- Kim 1С, Cha JH, Kim JR, Jang SY, Seo ВС, Cheong TK, Lee DS, Choi YD, Park KH. Catalytic properties of the cloned amylase from Bacillus licheniformis. J Biol Chem., 1992 Nov 5- v. 267(31), p. 22 108−14.
- Dong G, Vieille C, Zeikus JG. Cloning, sequencing, and expression of the gene encoding amylopullulanase from Pyrococcus furiosus and biochemical characterization of the recombinant enzyme. Appl Environ Microbiol., 1997 Sep- v. 63(9), p. 3577−84.
- Д.Б. Лифшиц, Б. Ц. Михайловская, Г. И. Козловский. А.с. 614 130 СССРб МКИ2 С 12 D 13/10. Комплексный ферментный препарат для получения пивного сусла из несоложеного ячменя. Опубл. 05.07.78, Brcm. N 25.
- Ладур Т. А. Производство сахаристых продуктов из крахмалосодержащего сырья с применением ферментов. М., ЦНИИТЭпищепром, 1978, 472 с.
- Argos P., Rossmann M.G., Grau U.M., Zuber Н., Frank G. and Tratschin J.D. Thermal stability and protein structure. Biochemistry, 1979, v.18, N 25, p.5698−5703.
- Имшенецкий А. А. Микробиологические процессы при высоких температурах.М.- Л., Изд-во АН СССР- 1984, 164 с.
- Campbell L.L., Manning G.B. Thermostable a-amylase of Bacillus stearothermophilus. Ibid., 1961, v. 236, N 11, p.2962−2965.
- Логинова Л.Г., Головачева P.С., Егорова Л. А. Жизнь микроорганизмов при высоких температурах. М., Наука, 1966, 269 с.
- Логинова Л.Г., Егорова Л. А. Новые формы термофильных бактерий. -М, Наука, 1977, 175 с.
- Kriegshauser G, et al. Pullulanase from the hyperthermophilic bacterium Thermotoga maritima. purification by beta-cyclodextrin affinity chromatography. J Chromatogr В Biomed Sci App., 2000 Jan 14- v. 737(1−2), p. 245−51.
- Bibel M, et al. Isolation and analysis of genes for amylolytic enzymes of the hyperthermophilic bacterium Thermotoga maritima. FEMS Microbiol Lett., 1998 Jan l-v. 158(1), p. 9−15.
- Meissner H, et al. Thermotoga maritima maltosyltransferase, a novel type of maltodextrin glycosyltransferase acting on starch and malto-oligosaccharides. Eur J Biochem., 1998 Dec 15- v. 258(3), p. 1050−8.
- Bergey’s Manual of determinative bacteriology. (1994) J.G. Holt et al (eds.) 9th ed., Williams and Wilkins, Baltimore.
- Huber R., Langworthy T.A., Konig H., Thomm M., Woese C. R., Sleytr U. V., StetterK. O. Arch. Microbiol., 1986, v. 144, p. 324−333.
- Huber R., Stetter К. O. The Order Thermotogales. In: The Procaryotes. A Handbook on the Biology of Bacteria, Ecophysiology, Isolation, Identification, Applications. New York: Springer-Verlag. 1992, v. II, p. 3809−3815.
- Nelson КБ, et al. Evidence for lateral gene transfer between Archaea and bacteria from genome sequence of Thermotoga maritima. Nature, 1999 May 27- v. 399(6734), p. 323−9.
- Dakhova ON, et al. Cloning and expression in Escherichia coli of Thermotoga neapolitana genes coding for enzymes of carbohydrate substrate degradation. Biochem Biophys Res Commun., 1993 Aug 16- v. 194(3), p. 135 964.
- Zverlov VV, et al. Highly thermostable endo-l, 3-beta-glucanase (laminarinase) LamA from Thermotoga neapolitana: nucleotide sequence of the gene and characterization of the recombinant gene product. Microbiology, 1997 May- v. 143 (Pt5), p. 1701−8.
- Zverlov VV, et al. Thermotoga neapolitana bglB gene, upstream of lam A, encodes a highly thermostable beta-glucosidase that is a laminaribiase. Microbiology. 1997 Nov- v. 143 (Pt 11), p. 3537−42.
- Slater M.R., Hartnett J. R, Huand F., Bolshakova E.V., Otto D.R., Novikov A.A., Velikodvorskaya G.A. themophilic DNA polymerases from Thermotoga neapolitana. 06.07.1995, USA Patent Applications, N 08/484, 661
- Liebl W, et al. Analysis of a Thermotoga maritima DNA fragment encoding two similar thermostable cellulases, CelA and CelB, andcharacterization of the recombinant enzymes. Microbiology, 1996 Sep- v. 142 (Pt 9), p. 2533−42.
- Saul DJ, et al. Sequence and expression of a xylanase gene from the hyperthermophile Thermotoga sp. strain FjSS3-B.l and characterization of the recombinant enzyme and its activity on kraft pulp. Appl Environ Microbiol. 1995 Nov- v. 61(11), p. 4110−3.
- Wassenberg D, et al. Xylanase XynA from the hyperthermophilic bacterium Thermotoga maritima: structure and stability of the recombinant enzyme and its isolated cellulose-binding domain. Protein Sci., 1997 Aug- v. 6(8), p. 1718−26.
- Ruile P, et al. Isolation and analysis of a gene encoding alpha-glucuronidase, an enzyme with a novel primary structure involved in the breakdown of xylan. Mol Microbiol., 1997 Jan- v. 23(2), p. 267−79.
- King MR, et al. Thermostable alpha-galactosidase from Thermotoga neapolitana: cloning, sequencing and expression. FEMS Microbiol Lett., 1998 Jun 1- v. 163(1), p. 37−42.
- Bullock W. O. et al. Bio techniques, 1987, v. 5, p. 376−378.
- MBI Fermentas. Catalog and product application guide. 1996/1997, p. 186 -188.
- Maniatis Т., Fritsch E. F., Sambrook J. Molecular Cloning: a Laboratory Manual. New York: Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1982.99
- Bradford M. M. Anal. Biochem., 1976, v. 72, p. 248−254.
- Laemmli U. K. Nature, 1984, v. 227, p. 680−685.
- Препараты ферментные. Методы определения амилолитической активности. ГОСТ 20 264.4−74
- Синицын А. П., Черноглазое В. М., Гусаков А. В. Итоги науки и техники. Сер. Биотехнология. М., ВИНИТИ, 1990, с. 59−66.
- Chaplin М. F. and Kennedy J. F. Carbohydrate Analysis: a Practical Approach. Oxford: 1RL Press, 1986, p. 1−36
- Miller G. L., Blum R., Glenon W.E. and Burton A.L. Anal. Biochem., 1960, v. 2. p. 127−132.