Разработка и изучение иммунобиологических свойств нового лекарственного средства — бактиспоринпласта

Актуальность темы

Профилактика и лечение гнойных ран является одной из важных задач современной научной и клинической медицины, так как ежегодно в России и странах СНГ регистрируется около 5 млн. больных с гнойно-воспалительными заболеваниями (А. А. Воробьев и др., 1996). В связи с повышением устойчивости бактерий к антибиотикам, возникла необходимость разработки альтернативных лечебно-профилактических мероприятий, среди которых важное место занимает использованиепробиотиков, в том числе из бактерий рода Bacillus, обладающих антимикробной активностью. Бактерии В. subtilis продуцируют более 70 различных антибиотиков (В.В. Смирнов и др., 1982, 2001). Лабильность структуры антибиотического вещества, продуцируемого живой бактериальной клеткой, предотвращает адаптацию возбудителя к препарату, не формируются устойчивые штаммы инфекционных агентов. Использование живых бактериальных клеток, продуцирующих широкий спектр антибиотиков в минимальных количествах, предотвращает подавление местного и системного иммунитета и развитие побочных осложнений в виде дисбактериоза или аллергических реакций (В.В. Смирнов, 2002; В. И. Никитенко, 2002).

Антибактериальная активность бактерий рода Bacillus усиливается действием продуцируемых литических ферментов, активно лизирующих клетки как грамположительных, так и грамотрицательных микроорганизмов. Синтезируемые этими бактериями протеолитические ферменты стимулируют регенерационные процессы тканей теплокровных, обладают тромболитическим действием (В.В. Смирнов, 2001). Пробиотики из бактерий рода Bacillus широко представлены препаратами для перорального применения. Однако их сложно использовать местно для лечения ран.

В последнее время получило развитие новое направление в совершенствовании лекарственных форм для местного лечения ранразработка аппликационных покрытий для эпидермального введения биологически активных соединений в организм. Наиболее перспективным направлением является создание раневых покрытий на основе биодеградируемого природного полимера коллагена (Л.П. Истранов, 1984; Р. К. Абоянц, 1999; А. Б. Шехтер, 1999).

Таким образом, разработка нового комплексного ранозаживляющего микробиологического препарата для местного применения на основе биорастворимого полимера — коллагена и Bacillus subtilis, а также изучение его фармакологической активности является актуальной задачей.

Цель исследования.

Создание нового иммунобиологического препарата — бактиспоринпласта, изучение его специфической и фармакологической активностей.

Задачи исследования.

Разработать медицинский микробиологический препарат на основе бактерий В. subtilis ЗН в форме коллагеновой губки для местного лечения ран и профилактики гнойных осложнений.

Изучить биологические свойства созданного препарата: количество живых клеток Bacillus subtilis, антагонистическую активность в отношении тестовых штаммов условно-патогенных микроорганизмов.

Определить оптимальные условия хранения и срок годности — бактиспоринпласта.

Провести оценку безвредности созданного препарата.

Изучить ранозаживляющую эффективность аппликационного лекарственного средства на животных.

Научная новизна.

Впервые: разработана технология получения нового ранозаживляющего лекарственного средства бактиспоринпласта для местного применения;

— установлена стабильность биологических свойств бактерий штамма В. subtilis ЗН в созданной лекарственной форме;

— показано, что бактиспоринпласт обладает высокой антагонистической активностью в отношении условно-патогенных бактерий;

— показана высокая ранозаживляющая активность бактиспоринпласта на модели условно-чистых и гнойных ран экспериментальных животных.

Научно-практическая значимость.

1. Создан новый препарат — Бактиспоринпласт для профилактики осложнений и лечения гнойных ран, показана его эффективность при заживлении экспериментальных ран у животных.

2. По результатам исследований разработана нормативно-техническая документация на Бактиспоринпласт.

3. Изготовлены экспериментально — производственные серии нового препарата — Бактиспоринпласта.

Основные положения, выносимые на защиту.

— Создание нового лекарственного средства на основе эубиотика бактиспорина и уксусно-кислого раствора коллагена в форме пластины для нанесения на рану.

— Новая лекарственная форма превосходит по ранозаживляющей активности пероральный препарат — «Бактиспорин сухой», а по спектру антибактериальной активности, стабильности не уступает ему.

— Бактиспоринпласт представляет удобную лекарственную форму для местного применения. При практическом использовании подавляет инфекцию, очищает раны от гнойно-некротических тканей и стимулирует репаративные процессы в ране.

Апробация работы.

Материалы диссертации доложены и обсуждены на II конкурсе научных работ молодых ученых и аспирантов АН РБ и УНЦ РАН (Уфа, 2003) — Межрегиональной науч. конф, посвященной 100-летию со дня рождения академика АМН СССР С. П. Карпова. (Томск, 2003), Межрегиональной конф. биохимиков Урала, Западной Сибири и Поволжья. (Оренбург, 2003), Всероссийской научной конференции молодых ученых. — «Актуальные вопросы инфекционной патологии человека, клинической и прикладной иммунологии» (Уфа, 2004).

Публикации.

По теме диссертации опубликовано 15 научных работ, из них 2 в центральной печати: «Экспериментальная и клиническая фармакология» и ЖМЭИ.

Объем и структура диссертационной работы.

Диссертация изложена на 132 страницах, иллюстрирована 18 таблицами и 22 рисунками. Она состоит из введения, обзора литературы (2 главы), раздела собственных исследований (5 глав), заключения, выводов и библиографического списка литературы, содержащего 182 источника, в том числе 121 отечественных и 61 зарубежных работ.

ВЫВОДЫ.

1. Разработан Бактиспоринпласт — новый иммунобиологический препарат, на основе коллагена и концентрата биомассы бактиспорина, для местного лечения ран, профилактики гнойных осложнений.

2. Новая лекарственная форма не изменяет морфологических и биохимических свойств штамма Bacillus subtilis.

3. Разработанная технология получения Бактиспоринпласта обеспечивает содержание в одной дозе препарата не менее 1×109 колониеобразующих единиц.

4. Новый препарат обладает высокой антагонистической активностью по отношению к тест-штаммам Staphylococcus aureus «Никифоров», Staphylococcus aureus «Филипов», Proteus mirabilis, Proteus vulgaris, Escherichia coli 157, Shigella flexneri, зона задержки роста составляет 11−20 мм, а грибов Candida albicans 25 — 34 мм.

5. Созданная лекарственная форма — Бактиспоринпласт стабильна при хранении в течение 2 лет при температуре (4−22) °С.

6. Бактиспоринпласт безвреден, не обладает местнораздражающим и аллергизирующим действием.

7. Применение Бактиспоринпласта при лечении экспериментальных условно-чистых и гнойных ран у животных стимулирует репаративные процессы и позволяет сократить сроки заживления.

Заключение

.

Проблема профилактики и лечения гнойных ран и раневой инфекции является актуальной со времен Гиппократа и продолжает оставаться одной из наиболее важных задач современной клинической медицины.

Наблюдающееся в последние годы возрастание устойчивости патогенной микрофлоры к антибиотикам, снижение иммунологической резистентности организма человека, наличие сопутствующих заболеваний (сахарный диабет, дисбактериоз и др.), — все эти причины приводят к увеличению длительности процесса заживления ран и нарастанию вероятности раневых гнойно-воспалительных осложнений. Возникновение осложнений заметно ухудшает результаты лечения, удлиняет сроки временной нетрудоспособности, приводит к значительным экономическим потерям и нередко ухудшает качество жизни пациентов (И.А. Ерюхин, 1998). По данным ряда авторов 30−35% всей хирургической патологии связаны с гнойной инфекцией и до 7% из них заканчиваются летальным исходом (А.А. Воробьев и др., 2002).

Эффективность применения антибиотиков при лечении гнойно-воспалительных заболеваний снижается за счет формирования широкой резистентности к антибиотикам патогенных микроорганизмов (С.В. Сидоренко, 1999; Г. К. Решедько, 2001; Д.Дж. Дикема и др, 2001; JI.C. Страчунский, 2003; Л. Г. Воронина и др., 2004; П. В. Буданов и др., 2004). Причинами возрастания антибиотикоустойчивости микроорганизмов является нерациональное использование антибиотиков, снижение иммунитета и ухудшающаяся экология (А.М Егоров, 2001; И. В. Николаева и др., 2001; В. А. Малов, 2002; Ю. В. Лобзин и др., 2001; Klein G., 2000; Ouchi Kazunobi, 1999). Так загрязнение природных экосистем тяжелыми металлами ведет к росту антибиотикоустойчивости бактерий за счет непрямой селекции (Мс. Arthur et al., 2000).

Открытие и широкое применение новейших антибактериальных средств не только не разрешило этой проблемы, но привело к возникновению и росту устойчивой к антибиотикам флоры, что выдвинуло новые сложные задачи перед медицинской наукой и практикой здравоохранения. (В.М. Тимербулатов и др., 1997). В связи с этим возникает необходимость разработки альтернативных лечебно-профилактических мероприятий, среди которых важное место занимает местное лечение.

В качестве альтернативы антибиотикам для профилактики раневой инфекции, подавления патогенных микроорганизмов и нормализации состава микрофлоры экологических ниш организма, все больше авторов предлагают применять биопрепараты из живых сапрофитных микроорганизмов, способных оказывать выраженное антагонистическое действие на патогенную и условно-патогенную микрофлору (Н.Н. Ворошилина и др., 1983; Г. Е. Афиногенов и др., 1984; Э. В. Горшевикова и др., 1992; I.B.Saraculova et al, 1997; Г. М. Пичхадзе и др., 2000).

В качестве лекарственных средств, имеющих некоторое преимущество перед антибиотиками, могут быть использованы препараты — пробиотики, в том числе из бактерий рода Bacillus, обладающие широкой антагонистической активностью в отношении патогенных и условно-патогенных микроорганизмов (Г.М. Пичхадзе и др., 2000; Т. М. Фурзикова и др., 2000).

Бактерии рода Bacillus характеризуются более разнообразной и выраженной антимикробной активностью, чем многие другие микроорганизмы (В.В. Смирнов и др., 2001). Этот эффект связан прежде всего с продукцией антибиотических веществ, число которых приближается к 200. Наиболее продуктивным видом бацилл является В. subtilis, которые образуют более 70 различных антибиотиков.

Описываются все новые антибиотики, продуцируемые бациллами, в т. ч. В. subtilis. Широкое разнообразие антибиотических веществ, имеющих в основном полипептидную природу, объясняется лабильностью структуры полипептида. Изменение нескольких аминокислот в полипептидной цепочке приводит к образованию нового антибиотического вещества. Поэтому выделяют группы антибиотических веществ (бацилломицины, бациллопептины и др.) (В.В. Смирнов, 1982, 1996).

Антимикробная активность бактерий рода Bacillus усиливается действием продуцируемых литических ферментов, активно лизирующих клетки как грамположительных, так и грамотрицательных микроорганизмов. Синтезируемые бактериями протеолитические ферменты стимулируют регенерационные процессы тканей теплокровных, обладают тромболитическим действием (В.В. Смирнов, 2001).

Бациллы продуцируют также метаболиты, например лектины, стимулирующие активность лимфоцитов и повышающие уровень эндогенного интерферона. При разных способах введения живых бацилл, выделяемые ими метаболиты, приводят к увеличению активности фагоцитов, способны оказать как локальный, так и системный иммуномодулирующий эффект (В.В. Смирнов и др., 1982, 1991, 1996, 2001).

Создание лекарственного средства на основе живых бактерий рода Bacillus решает задачу многофакторного подхода к лечению раны, включающего: антибиотическое, ранозаживляющее, противовоспалительное и иммуномодулирующее действие.

Таким образом, преимущества бактерий B. subtilis при лечении ран перед антибиотиками очевидны: под его влиянием не наступает адаптации возбудителя, и, следовательно, не формируются устойчивые штаммы, не происходит подавления иммунитета, возникновения дисбактериоза.

В ГУЛ «Иммуиопрепарат» (г. Уфа) было освоено производство препарата-пробиотика «Бактиспорин» для перорального применения на основе штамма В. subtilis ЗН. Клинические испытания Бактиспорина показали его высокую эффективность в гинекологической и урологической практике для лечения бактериального вагиноза и урогенитальных инфекцийв профилактике послеоперационных гнойно-септических осложненийв профилактике перинатальной патологии у новорожденных, в восстановительной терапии туберкулезных больныхпри лечении гастродуоденальной патологии и язвенных больных (О.В. Галимов и др., 1999; Н. С. Бродинова и др., 1999; JI. Н. Мазанкова и др. 1997 г.- А. А. Фазылова и др., 1998, 1999,2000; Р. Р. Загидуллина, ГлебоваН.Н., 2000; Э. С. Симонова и др., 2000, Р. Х. Гатауллина., 2001, 2002; Р. Х. Гисматов и др, 2002; Т. В. Хасанова, 2001,2002).

По данным микробиологического исследования этот пробиотик обладает высокой антибактериальной активностью в отношении целого ряда условно — патогенной микрофлоры — гемолизирующих эшерихий, протеев, стафилококков, стрептококков, клебсиелл, псевдомонад, дрожжевых грибов и других (Михайлова Н.А. и др., 1997). Помимо пробиотических свойств, у Бактиспорина показано наличие иммунокорригирующей и ферментативной, в частности, протеолитической активности (Михайлова Н.А. и др., 1998; Хасанова Т. В., 2003).

Поэтому при создании местного ранозаживляющего средства, для нанесения на очаг повреждения, выбрали концентрат биомассы препарата Бактиспорин, в котором действующим началом является штамм B. subtilis ЗН.

Для создания местной аппликационной формы необходимо было подобрать формообразующий материал, который бы абсорбировал на себе бактериальные клетки. Изыскание безопасных аппликационных лекарственных форм для эпидермального введения биологически активных соединений в организм для лечения воспалительных заболеваний кожных и слизистых покровов представляет большой интерес. Немалое значение при создании различных носителей придается сейчас не только вопросу повышения эффективности медикаментов, но и непосредственному воздействию фиксирующих материалов на раневой процесс. Максимально отвечают вышеуказанным требованиям покрытия на основе биоадекватного природного полимера коллагена.

В лаборатории коллагеновых препаратов НИЦ ММА им. И. М. Сеченова под руководством профессора Абоянц Р. К., Истранова Л. П. и др. ведутся исследования по созданию и внедрению в медицинскую практику лечебных препаратов для местного применения. Формообразующей основой вышеназванных препаратов является коллагеновая губка. Коллаген нетоксичен, безвреден, обеспечивает медленное рассасывание раневого покрытия и пролонгированное действие лекарственного вещества в ране. Кроме того, покрытие обеспечивает защиту от инфекции и плазмопотери, выполняет дренажную функцию. Коллаген и продукты его лизиса стимулируют репаративные процессы в ране.

Для поддержания оптимальной концентрации препарата в месте введения, снижения побочных эффектов целесообразно применение лекарствееных форм пролонгированного действия на основе полимеров медицинского назначения.

Учитывая положительные свойства бактиспорина и коллагена целью работы явилось создание на основе этого природного биополимера нового оригинального отечественного препарата антибактериального и ранозаживляющего действия, а также перспектива его использования в практической медицине.

Экспериментальный раздел работы посвящен получению нового ранозаживляющего иммунобиологического препарата для местного применения, изучению его биологических свойств и клинической эффективности в модельных опытах на животных.

На первом этапе исследований было установлено, что уксуснокислый раствор коллагена совместим с концентратом бактиспорина, при этом количество живых бактерий остается стабильным в подобранных условиях гомогенизации, состава композиционной смеси и режима сублимационного высушивания коллагеновой композиции. Разработана технология получения сухой коллагеновой губки, содержащей биомассу живых бактерий Bacillus subtilis.

В результате проведенных исследований был получен препарат, получивший название «Бактиспоринпласт». Бактиспоринпласт представляет собой пористую губку размером 50×40 мм, толщиной от 5,0 до 9,0 мм, массой от 0,25 до 0,35 г.

Губки имеют высокую прочность, проницаемы для паров воды, сильно набухают в воде, так как в структуре материала имеются водородные, ионные, вандерваальсовы и другие слабые силы между макромолекулами и отсетствуют прочные ковалентные межмолекулярные связипоэтому они легко растворимы и имеют низкие показатели структурной стабильности. Губки имеют большую внутреннюю поверхность, гидрофильны.

Бактерии штамма B. subtilis ЗН в бактиспоринпласте, образуют новую композицию, описания которой нет в литературе. При лиофильном высушивания бактиспоринпласта возможна сорбция или иммобилизация бактерий на коллагене. Поскольку бактерии рода Bacillus обладают выраженной адаптивной изменчивостью свойств, в зависимости от условий существования, проведено изучение стабильности основных свойств штамма B. subtilis ЗН, экстрагированного из бактиспоринпласта.

Изучение морфологических и биохимических свойств штамма B. subtilis ЗН до соединения с коллагеном и после экстракции из бактиспоринпласта показало, что свойства сравниваемых бактерий аналогичны друг другу. Т.о. установлено, что в новой лекарственной форме бактериальные клетки штамма B. subtilis не изменяют своих свойств.

На основании изучения микробиологических и биохимических свойств бактерий в бактиспоринпласте был сделан вывод о стабильности свойств микробной популяции штамма В. subtilis ЗН при изготовлении новой лекарственной формы — Бактиспоринпласта.

Экстракция бактериальных клеток физ. раствором из Бактиспоринпласта показала, что полученный препарат обладает высокой специфической активностью: количество живых бацилл в пластине составляет от 2,4'109 до 3,1*109. В тесте определения антагонистической активности зона задержки роста тест — штаммов была не менее 10 мм на всех этапах получения препарата: St. aureus — 11 — 20 мм, Pr. mirabilis — 13 — 19 мм, Pr. Vulgaris — 14−21 мм, Е. coli — 10 — 16 мм, S. flexneri — 15 — 20 мм, С. albicans 28 — 34 мм.

Установлено, В. subtilis достаточно хорошо связываются коллагеновой субстанцией, придавая ей антимикробные свойства. При определении зон задержки роста тест — штаммов ряда бактерий установлено, что В. subtilis из коллагеновой губки свободно диффундируют в питательную среду из бактиспоринпласта и обладают такой же активностью, как и бактиспорине сухом для перорального применения, при этом сорбированные белком бактерии В. subtilis постепенно высвобождаются.

Моноспоровый рассев бактериальной популяции на всех этапах получения бактиспоринпласта выявлял однотипные колонии штамма В. subtilis ЗН в R форме диаметром от 2,0 до 2,5 мм, шероховатые с волнистым краем, непрозрачные, бежевого или желтовато — бежевого цвета, сухой консистенции. Отсутствие диссоциации бактериальной популяции В. subtilis ЗН при создании новой лекарственной формы — Бактиспоринпласта, свидетельствует о стабилизации свойств бактерий иммобилизованных на коллагене и обеспечивает выраженный лечебный эффект, характерный для R-форм популяции бактерий В. subtilis (Смирнов В.В., 1982).

Следующим этапом исследований явилось изучение ранозаживляющей активности Бактиспоринпласта. Известно, что пероральный прием препаратов из споровых бактерий ускорял заживление ран (В.И. Никитенко, 1996). Бациллы из желудка проникают в кровь, лимфу, накапливаются в селезенке, лимфатических узлах, печени области очагов воспалений или ран, оказывая свое лечебно-профилактическое действие (В.И.Никитенко, 2003).

Поэтому необходимо было сравнить эффективность заживления ран при пероральном приеме препарата Бактиспорина и при использовании Бактиспоринпласта — местно. Изучение ранозаживляющей активности бактиспоринпласта провели в экспериментах на белых крысах.

В первом опыте определяли влияние коллагеновых препаратов на заживление плоскостной раны, которую создавали иссечением участка кожи с подкожной клетчаткой и подшиванием к краям раны фторопластового кольца диаметром 15 мм. Кольцо удаляли на четвертые сутки и с этого момента оценивали площадь раневой поверхности. Наиболее явным ранозаживляющим действием, обладал бактиспоринпласт. В данной группе крыс время полного заживления составлило (11,0±0,7) суток, что на 10 суток раньше чем в контрольной группе. Несколько медленнее на (13,0±2,0) сутки происходило заживление раны при пероральном применении «Бактиспорина сухого» однако существенно быстрее, чем при использовании коллагеновой губки без препарата — на (17,0±2,0) сутки. Применение препаратов во всех случаях приводило к ускоренному восстановлению раневой поверхности в сравнении с контрольной группой (23,0±1,7) сут.

Т.о. использование нового местного ранозаживляющего средства «Бактиспоринпласт» превышало по эффективности пероральное действие известного препарата пробиотика «Бактиспорна». Кроме этого, использование Бактиспорина вызывает бессимптомную бактериемию, как и применение любого другого препарата-пробиотика из спорообразующих бактерий рода Bacillus (Смирнов В.В., 1986; Никитенко В. И., 2003). Явление бактеримии не всегда проходит бессимптомно для организма, прием препаратов из спорообразующих бактерий иногда сопровождаются побочными явлениями, в том числе эндокардитами, пиелонефритами и др. (Смирнов В.В., 1982). Использование же Бактиспоринпласга, как показали наши исследования, не сопровождается проникновением бактериальных клеток в кровяное русло, т. е. является более безопасным способом использования бактериального препарата из бактерий рода Bacillus.

Проведенные исследования лечения гнойных ран, во втором опыте на крысах, подтвердили полученные ранее результаты. Ранозаживляющая эффективность была изучена на моделях гнойной раны (абсцесса и плоскостной), в качестве инфицирующего материала использовали патогенную культуру S. aureus в концентрации 3,6−109 кл/мл. Для развития гнойного процесса культура стафилококка была выбрана исходя из того обстоятельства, что по данным исследований, проведенных в Институте хирургии им. А. А. Вишневского (Кузин М.И. и др., 1979; Патритий В. К. и др., 1991, Хасанова Т. В., 2003), основными возбудителями острых гнойных заболеваний мягких тканей являются грамположительные бактерии и, прежде всего, S. aureus. Частота выделения стафилококков при гнойных осложнениях ран достигает 91,5%.

Наиболее высокий показатель скорости заживления ран отмечен при использовании бактиспоринпласга — 8,2±0,5% за одни сутки. При этом определение СЗР по фазам раневого процесса выявило интересный факт: наибольший показатель во второй фазе отметили в группе, где использовали пластины Люцерон (12,4±0,5%), и группе бактиспоринпласт — 11,2±0,4% за сутки. Исследования сроков очищения от гнойно-некротических масс экспериментальных гнойных плоскостных ран показали, что в группе, где применяли бактиспоринпласт срок очищения составил — 7,3±0,1 сут., Бактиспорин сухой — 8,2±0,3 сут., пластину Люцерон — 10,9±0,3 сут., мазь левомеколь — 10,5±0,3 сут., в контрольной группе — 14,7±0,4 сут Из проведенных исследований следовало, что Бактиспоринпласт наиболее эффективно вызывал заживление гнойной раны.

Эффективность нового противораневого средства Бактиспоринпласта обеспечивается комплексным действием коллагена и живых бактериальных клеток. Подавление инфекции в ране, отторжение и расплавление некротических тканей обеспечивают бактерии В. subtilis, освобождающиеся при лизисе губки и выделяющие антибиотические вещества, подавляющие рост наиболее часто встречающихся возбудителей хирургической инфекции. Живые бактериальные клетки вырабатывают протеолитические ферменты, способствующие некролизу поврежденных тканей, выделяют биологически активные вещества, нормализующие гомеостаз в ране. (В.В. Смирнов, 2002). Коллаген вызывает адсорбцию продуктов микробного и тканевого распада, способствует очищению раны, пролонгирует выделение бактерий В. Subtilis в ране. Сочетание действия живых метаболически — активных бактерий в ране с влиянием коллагена оказывает комплексный лечебный эффект.

Бактиспоринпласт уменьшает воспалительные явления, активизирует реакцию макрофагов, стимулирует пролиферацию и дифференцировку фибробластов, фибриллогенез, созревание грануляционной ткани и эпителизацию. Препарат оказывает стабилизирующее воздействие на процессы регенерации тканей кожи и их производных. На фоне благоприятного течения всех трех фаз воспалительного процесса отмечается восстановление кровообращения раневой зоны кожи с одновременным развитием капиллярной сети дермы кожи, способствующей восстановлению метаболического процесса регенерирующих тканей кожи. Бактиспоринпласт обладает, прежде всего, антибактериальным свойством, этим самым он помогает в первые часы после травмы защитным свойствам нейтрофильных лейкоцитов, макрофагов, плазматических клеток и многих других клеточных структур. Также бактиспоринпласт содержит в своем составе белок коллаген, влияющий на метаболизм клеток, с которыми он контактирует, оказывает регуляторное воздействие на различные клеточные структуры. В то же время, элементы лизиса коллагеновых волокон являются ориентиром для клеток при их размножении и дифференцировке.

Поскольку при пероральном приеме бактиспорина происходит бессимптомная транслокация штамма B. subtilis через слизистые оболочки желудка в кровь в количестве до 1/1000 (В. И. Никитенко, 2003; В. В. Смирнов, 2001), нами проведено исследование возможности проникновения микроорганизмов в кровь, при местном применении коллагеновых пластин с В. subtilis. Для этого на раневую поверхность животных накладывали бактиспоринпласт с последующим забором венозной крови в динамике. Нанесение препарата на раневую поверхность крыс не приводило к появлению бактерий в крови через 15, 30, 60, 120 минут и через 24 часа. Таким образом, использование бактиспоринпласта на моделях условно-чистых и гнойных ран крыс не сопровождается проникновением микроорганизмов из губки в кровоток, что свидетельствует об отсутствии опасности сепсиса при использовании препарата путем непосредственного наложения на рану.