Дипломы, курсовые, рефераты, контрольные...
Срочная помощь в учёбе

Совершенствование методов контроля специфической активности пробиотиков

Диссертация: Совершенствование методов контроля специфической активности пробиотиков
ДиссертацияПомощь в написанииУзнать стоимостьмоей работы

В нашей работе молочная сыворотка и дрожжевой аутолизат были использованы при конструировании питательных сред для контроля всех параметров специфической активности большой группы препаратов: •лактобактерина, бифидумбактерина, колибактерина, бификола и ацилакта. Необходимо было отработать технологию получения сывороточно-дрожжевой питательной основы, разработать составы и оценить качество… Читать ещё >

Содержание

  • ГЛАВА 1. Обзор литературы
    • 1. 1. Дисбиотические состояния и способы их коррекции, методы определения антагонистической активности пробиотиков
    • 1. 2. Питательные потребности производственных штаммов бактерий для получения пробиотических препаратов
    • 1. 3. Феномен биолюминесценции, люминесцентные микробиотесты и сфера их применения
  • ГЛАВА 2. Материалы и методы исследования
  • ГЛАВА 3. Унификация набора питательных сред для определения параметров специфической активности препаратов
    • 3. 1. Получение и физико-химические параметры сывороточно-дрожжевой питательной основы
    • 3. 2. Изучение ростовых свойств полужидких вариантов среды
      • 3. 2. 1. Использование полужидких вариантов среды СД при определении количества жизнеспособных бифидобактерий в дозе препарата
      • 3. 2. 2. Использование полужидких вариантов среды СД при определении количества жизнеспособных лактобактерий в дозе препарата
    • 3. 3. Изучение ростовых свойств плотных вариантов среды С Д
    • 3. 4. Использование жидкого варианта среды СД в тесте определения активности кислотообразования пробиотиков
  • ГЛАВА 4. Оптимизация теста отсроченного антагонизма на плотной питательной среде
    • 4. 1. Изучение изо-, гомо- и гетероантагонизма колибактерина и бификола на различных плотных питательных средах
    • 4. 2. Изучение изо-, гомо- и гетероантагонизма лактобактерина на различных плотных питательных средах
    • 4. 3. Изучение изо-, гомо- и гетероантагонизма ацилакта на различных плотных питательных средах
  • ГЛАВА 5. Определение антагонистической активности пробиотиков с помощью теста ингибирования биолюминесценции
    • 5. 1. Определение чувствительности штамма Е. coli lum+ С-50 в тесте отсроченного антагонизма на плотной питательной среде
    • 5. 2. Определение влияния пробиотиков на биолюминесценцию рекомбинантного тест-штамма
      • 5. 2. 1. Определение ИАА лактобактерина
      • 5. 2. 2. Определение ИАА бифидумбактерина
      • 5. 2. 3. Определение ИАА ацилакта
      • 5. 2. 4. Определение ИАА колибактерина
      • 5. 2. 5. Определение ИАА бификола
    • 5. 3. Разработка критериев оценки теста ингибирования биолюминесценции для определения уровня антагонистической активности пробиотиков

Совершенствование методов контроля специфической активности пробиотиков (реферат, курсовая, диплом, контрольная)

Актуальность проблемы.

Организм человека и его нормальная микрофлора являются единой, сложной, строго сбалансированной экологической системой, которая формируется с момента рождения. В настоящее время в связи с неблагоприятной социально-экономической и экологической обстановкой, возрастанием количества стрессовых ситуаций, гипои авитаминозов, нерациональной антибиотико-, гормонои химиотерапией, неполноценным и нерациональным питанием отмечается неуклонный рост числа заболеваний, связанных с нарушением биологического равновесия между макроорганизмом и разнообразными популяциями микробной флоры его отдельных органов и с систем (12, 132, 176).

С целью профилактики и лечения дисбактериозов в медицинской практике используют биопрепараты, изготавливаемые из живых микроорганизмов, являющихся представителями нормальной микрофлоры кишечника человека: кишечной палочки (колибактерин, бификол), бифидобактерий (бифидумбактерин, бифидумбактерин форте, бифилиз), лактобактерий (лактобактерин, ацилакт, аципол). Живые антагонистически активные бактерии содержатся в препаратах пробиотического действия как в виде монокультур, так и в различных комбинациях, чаще всего в лиофильно высушенном состоянии (38, 129).

Практика применения пробиотиков из различных штаммов показала их положительное влияние на восстановление кишечного и вагинального микробиоценоза и повышение общей резистентности макроорганизма (12, 23, 37, 62, 208, 261).

Широкое распространение дисбактериозов и успешное применение пробиотиков при их лечении стимулирует увеличение объемов выпуска последних. Современное производство препаратов пробиотического действия развивается в направлении интенсификации и предполагает усовершенствование методов их контроля, что может быть осуществлено за счет комплексного подхода, направленного на снижение трудоемкости и материальных затрат при сохранении эффективности. Существующие методы контроля биологических показателей препаратов пробиотического действия базируются на использовании различных питательных сред, большого количества патогенных, и условно-патогенных тест-штаммов, а также отличаются значительной продолжительностью.

Для сферы контроля препаратов актуально создание унифицированного комплекса питательных сред, пригодных для определения всех параметров специфической активности (количество жизнеспособных клеток в 1 дозе, активность кислотообразования, уровень антагонистической активности) препаратов пробиотического действия: лакто-, бифидум-, колибактерина, бификола и ацилакта. Это будет способствовать оптимизации их контроля за счет ограничения номенклатуры используемых питательных сред.

При отборе штаммов микроорганизмов для изготовления пробиотиков особое внимание уделяют спектру и уровню их антагонистической активности (36). Однако, определение этих показателей в производственных условиях предусматривает использование нерационально большого количества патогенных и условно-патогенных тест-штаммов, работа с которыми трудоемка и требует специальных условий. Повышение эффективности контроля при сохранении адекватности и снижение материальных затрат на его проведение в данном случае может быть достигнуто благодаря исключению или ограничению применения указанных тест-штаммов.

Оптимизация контроля препаратов пробиотического действия также может базироваться на применении современных методов биоиндикации, в частности, микробиолюминесценции. Перспективной представляется разработка универсального и экспрессного метода с использованием в качестве тест-штамма культуры светящихся энтеробактерий, позволяющего оценить параметры антагонистической активности пробиотиков по степени ингибирования биолюминесценции.

Таким образом, учитывая важность повышения эффективности производства бактерийных препаратов, представляется актуальным решение вопросов, связанных с оптимизацией и унификацией контроля их биологических показателей.

Цель работы.

Совершенствование методов контроля специфической активности препаратов пробиотического действия.

Основные задачи исследования.

1. Разработать унифицированный комплекс питательных сред на основе молочной сыворотки и дрожжевого аутолизата для контроля специфической активности пробиотиков.

2. Провести сравнительное изучение изо-, гомои гетероантагонистической активности производственных штаммов Escherichia coli М-17, Lactobacillus spp. с использованием теста отсроченного антагонизма на плотных питательных средах.

3. Разработать способы контроля антагонистической активности препаратов пробиотического действия без использования патогенных и условно-патогенных тест-штаммов.

4. Оценить возможность применения реакции ингибирования микробиолюминесценции для контроля антагонистической активности пробиотиков.

Научная новизна и практическая значимость работы.

Изучены изо-, гомо и гетероантагонизм производственных штаммов бактерий в тесте отсроченного антагонизма на плотных питательных средах. Определена специфика проведения теста и количественные критерии оценки изоантагонистической активности для каждого штамма и препарата на его основе. Предложен способ контроля антагонизма пробиотиков, ограничивающий применение патогенных и условно-патогенных тест-штаммов.

Разработан оригинальный экспресс-способ определения антагонистической активности препаратов для бактериотерапии на основе реакции угнетения биолюминесценции генно-инженерного тест-штамма Escherichia coli lum+ С-50. Определены методические приемы проведения и количественные критерии оценки результатов теста. Показана его более высокая информативность по сравнению с тестом отсроченного антагонизма, а также высокая корреляция результатов обоих методов. Проведенные исследования способствуют расширению сферы использования люминесцентного микробиотестирования.

Разработан состав и способ получения питательной основы для бактериологических сред, включающей молочную сыворотку и дрожжевой аутолизат. Показана возможность использования данной основы в качестве универсальной при конструировании питательных сред для культивирования лакто-, бифидобактерий и кишечных палочек.

Разработан унифицированный комплекс сывороточно-дрожжевых (СД) питательных сред, включающий жидкие, полужидкие и плотные варианты, для определения показателей специфической активности пробиотиков: количества жизнеспособных бактерий в 1 дозе препарата, активности кислотообразования, антагонистической активности.

Предлагаемый набор сред по показателям эффективности не уступает, а в некоторых случаях превосходит регламентированные питательные среды, удовлетворяет ростовые потребности производственных штаммов бактерий, обеспечивает стабильность их морфологических, биохимических и культуральных свойств.

С целью унификации набора регламентированных питательных сред для контроля лактосодержащих препаратов показана возможность использования вариантов среды МРС при определении параметров специфической активности ацилакта.

Результаты научной работы использованы при разработке НД на лактобактерин порошок, лактобактерин сухой и бифидумбактерин сухой. Подготовлены и утверждены ФСП 42−28 220 201 на бификол сухой и ФСП 42−28 220 301 на колибактерин сухой.

По результатам исследований получены патенты РФ: «Способ определения антагонистической активности пробиотиков» № 2 187 801, приоритет от 10.07.00 г. и «Способ контроля антагонистической активности препаратов для лечения и профилактики дисбактериозов» № 2 177 152 приоритет от 02.12.1999 г.

Основные положения, выдвигаемые на защиту.

1. Унифицированный комплекс питательных сред на основе молочной сыворотки и дрожжевого аутолизата целесообразно применять для проведения контроля специфической активности пробиотиков.'.

2. Использование способа определения антагонистических свойств пробиотиков, включающего оценку изои гомоантагонистической активности, позволяет ограничить применение патогенных и условно-патогенных тест-культур при их контроле.

3. Для экспрессного определения антагонистической активности пробиотических препаратов целесообразно использование реакции ингибирования микробиолюминесценции.

Связь работы с научными программами.

Диссертационная работа выполнена на базе лаборатории пробиотиков в соответствии с планом НИР филиала ФГУП НПО «Микроген» МЗ РФ «Пермское НПО «Биомед» и является частью исследований, проводимых по теме «Оптимизация методов контроля специфической активности пробиотиков» (номер государственной регистрации темы 01.200.1.08828).

Апробация работы и публикации.

Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на Всероссийской конференции «Актуальные вопросы разработки, производства и применения иммунобиологических и фармацевтических препаратов», Уфа, 2000; XIV Коми республиканской Молодежной научной конференции, Сыктывкар, 2000; Всероссийской научной конференции, «Актуальные вопросы вакцинно-сывороточного дела в XXI веке», посвященной 105-летию Пермского НПО «Биомед», Пермь, 2003.

По теме диссертации опубликовано 8 печатных работ. Полученные результаты исследований защищены двумя Патентами РФ на изобретение.

Объем и структура диссертации.

Работа изложена на 159 страницах машинописного текста, содержит 38 таблиц и 9 рисунков. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, трех глав собственных исследований, заключения, выводов, списка цитируемой литературы, включающего 292 литературных источника, из них 172 отечественных и 120 зарубежных авторов, приложения.

ВЫВОДЫ.

1. Отработан способ получения питательной основы, содержащей молочную сыворотку и дрожжевой аутолизат. Показана возможность ее использования при конструировании бактериологических сред для контроля специфической активности пробиотиков.

2. Разработан унифицированный комплекс сывороточно-дрожжевых питательных сред и схема его применения для определения биологических показателей препаратов: количества живых микроорганизмов в дозе препарата, активности кислотообразования и антагонистической активности.

3. В рамках исследования по унификации набора питательных сред для контроля лактосодержащих пробиотиков предложено использовать среду МРС для определения специфической активности ацилакта.

4. Разработан способ контроля антагонистической активности препаратов пробиотического действия на основе теста отсроченного антагонизма на плотной питательной среде с применением непатогенных тест-культур, позволяющий ограничить использование патогенных и условно-патогенных штаммов.

5. Разработан экспрессный метод оценки антагонистической активности пробиотиков на основе теста ингибирования микробиолюминесценции. Определены временные параметры его проведения и количественные критерии оценки.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

.

Отмечающийся в настоящее время неуклонный рост числа заболеваний, связанных с нарушением биологического равновесия между макроорганизмом и его микробной флорой, предполагает значительное увеличение выпуска препаратов пробиотического действия (132, 177). В условиях укрупнения масштабов и необходимости повышения эффективности производства пробиотиков является актуальным решение вопросов, связанных с оптимизацией контроля и направленных на снижение трудоемкости и материальных затрат при его проведении.

При массовом выпуске и широкой номенклатуре препаратов пробиотического действия представляется рациональным развитие элементов унификации на всех этапах их производства. На стадии контроля это может осуществляться в виде комплексного подхода, который включает унификацию методик контроля, разработку экономичных питательных сред и ограничение их номенклатуры, исключение или уменьшение применения патогенных тест-штаммов, разработку экспрессных методов контроля.

Первый раздел наших исследований был посвящен разработке унифицированного комплекса сывороточно-дрожжевых (СД) питательных сред, содержащих молочную сыворотку и дрожжевой аутолизат.

Производственные штаммы бактерий для изготовления пробиотиков характеризуются сложными питательными потребностями, что определяет необходимость применения многокомпонентных сред для их культивирования (35, 61, 282). В состав сред должны входить ингредиенты, богатые аминокислотами и витаминами, например дрожжевой аутолизат, традиционно широко применяемый в производстве пробиотиков (1, 4, 95). Наиболее важным источником энергии для микроорганизмов являются монои дисахариды — глюкоза, лактоза, сахароза (35, 189, 239, 250).

Нашей задачей явилось изучение и экспериментальное обоснование возможности использования, наряду с аутолизатом, молочной сыворотки, содержащей легкоусвояемые источники углеводного питания и другие трофические компоненты, при конструировании питательных сред для контроля биологических показателей препаратов пробиотического действия. Выбор данного вида сырья базировался на имеющихся в литературе сообщениях по различным аспектам использования сыворотки в бактериологическом производстве: в процессе микробного синтеза и культивирования микроорганизмов, в составе криопротекторов и защитных сред для лиофильного высушивания, а также в виде добавок в питательную среду для хранения штаммов (101, 102, 159).

В нашей работе молочная сыворотка и дрожжевой аутолизат были использованы при конструировании питательных сред для контроля всех параметров специфической активности большой группы препаратов: •лактобактерина, бифидумбактерина, колибактерина, бификола и ацилакта. Необходимо было отработать технологию получения сывороточно-дрожжевой питательной основы, разработать составы и оценить качество питательных сред. Предварительный анализ показал, что молочная сыворотка отвечает требованиям доступности, стандартности и биологической ценности. Являясь побочным продуктом переработки молока, она содержит большое количество белковых азотистых соединений, углеводов, липидов, минеральных солей, витаминов, органических кислот, ферментов, микроэлементов (34, 49, 136, 157). Наличие в молочной сыворотке большого количества лактозы делает ее ценным источником углеводного питания для различных видов бактерий.

Начальным этапом этого раздела исследований стала отработка температурного режима и рН осаждения белков молочной сыворотки при подготовке данного компонента питательной основы. Предварительная обработка молочной сыворотки включала осветление (депротеинизацию) путем осаждения белков с последующим их отделением от жидкой фазы: рН сыворотки доводили до (7,4+0,2), затем кипятили в течение 15 мин, декантировали и сепарировали.

Были изучены физико-химические характеристики 12 серий нативной и обработанной молочной сыворотки: определяли содержание аминного азота (АА) и хлоридов. В результате исследований было установлено, что исходное содержание АА в молочной сыворотке было непостоянно и связано с различными факторами (время года, предприятие-изготовитель), хлориды являлись более постоянной величиной.

Концентрация АА оказывает существенное влияние на ростовые свойства питательных сред: содержание его менее 0,8 мг/мл снижает эффективность последних, а оптимальное содержание АА, исходя из потребностей производственных штаммов бактерий, составляет (1,0+0,2) мг/мл. Необходимый уровень АА достигался при смешивании дрожжевого аутолизата с содержанием АА (2,0±0,4) мг/мл с осветленной молочной сывороткой в соотношении 1: (2,5−3) соответственно. Приготовление питательной основы включало раздельную подготовку обоих компонентов и их соединение непосредственно перед изготовлением питательной среды.

При проведении физико-химического анализа 8 серий сывороточно-дрожжевой питательной основы определяли следующие показатели: содержание пептидов, сухого остатка, общего азота, аминного азота, хлоридов, глюкозы, лактозы и рН. Установлено, что во всех сериях определялось стабильное содержание лактозы — (3,79±0,18)%, содержание глюкозы колебалось от 0,6 до 1,5% в зависимости от партии молочной сыворотки. Т.о., общее содержание углеводов было достаточным для обеспечения энергетических потребностей микроорганизмов производственных штаммов бактерий.

Конструирование унифицированного комплекса сред базировалось на следующем методическом подходе: полученная питательная основа, включающая аутолизат дрожжевой и молочную сыворотку, рассматривалась в качестве постоянной (универсальной) части вариантов сывороточно-дрожжевых сред. Переменная (специфичная) составляющая зависела от потребностей конкретного производственного штамма и контролируемого параметра специфической активности. Варианты питательных сред были исследованы по биологическим показателям: эффективности, чувствительности и ростовым характеристикам в сравнении с регламентированными средами.

Для проведения сравнительных испытаний было приготовлено 27 серий вариантов среды СД с различным солевым составом и содержанием агара от 0,075% до 2%. Биологические показатели вариантов среды СД изучались на модели определения количества живых бактерий в 1 дозе (КОЕ) сухих препаратов и лиофилизированных культур штаммов согласно регламентированной для каждого методике путем приготовления ряда десятикратных разведений с последующим постинкубационным подсчетом колоний в максимальном разведении, в котором обнаружен рост бактерийдля полужидких вариантов, или с последующим высевом микробной суспензии на чашки Петри и постинкубационным подсчетом числа выросших колоний — для плотных вариантов.

Одновременно эффективность плотных вариантов среды СД изучалась в тесте отсроченного антагонизма пробиотиков, что позволило дать объективную всестороннюю оценку их пригодности для использования в данных видах контроля.

Биологические показатели жидких вариантов среды СД изучались нами на модели определения активности кислотообразования сухих препаратов и лиофилизированных культур производственных штаммов титриметрическим методом по регламентированной для каждого препарата методике.

Результаты апробации показали, что сывороточно-дрожжевые питательные среды не уступают по чувствительности и эффективности регламентированным питательным средам, обеспечивают стабильность морфологических, биохимических и культуральных свойств микроорганизмов. Количество колоний и их морфология на разработанной среде не отличались, а скорость роста в некоторых случаях превосходила аналогичный показатель на регламентированных питательных средах.

В результате проведенных исследований изучено влияние на рост и развитие микроорганизмов отдельных компонентов среды СД. Экспериментальным путем определен количественный и качественный состав переменной составляющей каждого варианта питательной среды с учетом потребностей конкретного производственного штамма и вида контроля. Всего нами предложено 5 вариантов среды СД:

1) жидкая среда СД-1, содержащая 0,075% агара, 0,05 г/л сульфата марганца, 2 г/л цитрата аммония, 2,5 г/л ацетата натрия и 2 г/л гидрофосфата калия — для контроля активности кислотообразования лактобактерина, ацилакта и бифидумбактерина;

2) полужидкая среда СД-2, содержащая 0,12% агара — для определения КОЕ в 1 дозе лактобактерина, ацилакта и бифидумбактерина;

3) полужидкая среда СД-2А, содержащая дополнительно 0,1 г/л азида натрия для подавления роста кишечной палочки — для определения КОЕ бифидобактерий в 1 дозе бификола;

4) плотная среда СД-3, содержащая 2% агара, 0,48 г/л динатрия фосфата, 0,83 г/л натрия сульфита и 0,03 г/л натрия карбоната — для определения КОЕ в 1 дозе колибактерина;

5) плотная среда СД-4, содержащая 2% агара — для определения уровня антагонистической активности лактобактерина, ацилакта, колибактерина и бификола в тесте отсроченного антагонизма методом поперечных штрихов, а также КОЕ в 1 дозе лактобактерина.

Результаты исследований использованы при разработке НД на лактобактерин порошок, лактобактерин сухой и бифидумбактерин сухой. Предусмотрено использование среды СД-1 при определении активности кислотообразования лактобактерина порошкасреды СД-2 — для определения количества живых лактобактерий в дозе препаратасреды СД-4 — для оценки уровня антагонистической активности производственного штамма лактобактерий методом отсроченного антагонизма.

В рамках исследования по унификации набора известных регламентированных питательных сред была изучена возможность использования вариантов среды МРС при контроле сухого ацилакта и лиофилизированных культур штаммов для его изготовления.

В результате проведенного изучения биохимической активности ацидофильных лактобактерий на модели определения кислотообразования ацилакта и производственных штаммов показана возможность использования среды МРС-1 для определения данного параметра: результаты достоверно не отличались (р>0,05) от значений, полученных на регламентированной питательной среде (обезжиренном молоке), и во всех случаях отвечали требованиям НД. Одновременно снижалась трудоемкость контроля за счет упрощения процесса титрования образцов 0,1N раствором натрия гидроксида из-за отсутствия необходимости предварительного разбивания сгустка, образующегося на обезжиренном молоке.

При изучении чувствительности среды МРС-2 на модели определения живых ацидофильных лактобактерий (КОЕ) в 1 дозе препарата были выявлены ее преимущества перед регламентированой питательной средой — более точное определение выживаемости из-за возможности подсчета количества колоний, тогда как на регламентированной среде (обезжиренном молоке) образуется сгусток, а вычисление КОЕ в дозе производится по специальной таблице, усредняющей показатели (155).

Предложенный вариант контроля биологических показателей сухого ацилакта и лиофилизированных культур штаммов для его изготовления, включающий применение вариантов среды МРС, отличается от регламентированного большей точностью и простотой.

Следующим разделом наших исследований явилось изучение возможности оптимизации метода отсроченного антагонизма на плотных питательных средах с целью исключения или уменьшения использования патогенных и условно-патогенных тест-штаммов.

В литературе широко освещена природа антагонизма бактерий, его механизм, виды (изо-, гомо-, гетероантагонизм), ведущее значение для широты распространения и количественного содержания микроорганизмов в различных экологических системах (114, 133). Контроль уровня и спектра антагонистической активности — показателя качества пробиотиков, определяющего в значительной степени их терапевтический эффект — согласно действующей нормативной документации проводится в тесте отсроченного антагонизма методом перпендикулярных штрихов на регламентированных плотных питательных средах и базируется на определении гетероантагонизма в отношении патогенных и условно-патогенных микроорганизмов (151, 152, 153, 154, 155).

Мы предположили, что в искусственно созданных условиях на плотных питательных средах антагонизм производственных штаммов бактерий может быть оценен по любой его составляющей. Для определения гетерои гомоантагонизма пробиотиков не обязательно использовать патогенные и условно-патогенные штаммы бактерий. Широкая номенклатура пробиотиков и, соответственно, принадлежность производственных штаммов для их изготовления к различным таксономическим группам позволяют применять их в качестве тест-культур для взаимного определения гетероили гомоантагонизма in vitro.

С этой целью было проведено сравнительное изучение специфической активности пробиотиков по отношению к непатогенным и патогенным тест-штаммам на регламентированных питательных средах с использованием утвержденных методик проведения теста отсроченного антагонизма для каждого препарата, включая продолжительность культивирования испытуемой культуры и совместной инкубации с тест-штаммами.

Одновременно, для более полной оценки эффективности среды СД и изучения возможности унификации набора питательных сред при определении уровня антагонистической активности пробиотиков, нами была изучена их изо-, гомои гетероантагонистическая активность на плотном варианте сывороточно-дрожжевой среды (СД-4).

Для выявления возможных отличий в биологических свойствах было проведено раздельное исследование антагонистической активности лиофилизированных культур производственных штаммов бактерий и сухих препаратов на их основе. Результаты показали, что различия в технологии получения не оказывают значимого влияния на уровень и спектр антагонизма. Во всех случаях гетероантагонистическая активность пробиотиков в отношении тест-штаммов различной таксономической принадлежности была выражена сильнее по сравнению с антагонизмом внутри вида или рода.

Показатели изо-, гомои гетероантагонизма на регламентированных средах коррелировали с аналогичными показателями на среде СД-4 (г>0,7) и не имели от них достоверных отличий (р>0,05), что указывает на возможность использования среды СД-4 при контроле специфической активности лиофилизированных культур штаммов и серий препаратов пробиотического действия в тесте отсроченного антагонизма.

Питательная среда СД-4 явилась более адекватным субстратом для постановки теста отсроченного антагонизма ацидофильных лактобактерий по сравнению с регламентированной средой МРС-5.

Оценка результатов, полученных при исследовании образцов 10 серий лиофилизированной культуры штамма Е. coli М-17, 10 коммерческих серий колибактерина и бификола, позволили нам определить количественные показатели антагонистической активности штамма Е. coli М-17 — зона задержки роста изогенного штамма должна составлять не менее 15 мм на среде Гаузе № 2 и среде СД-4, зона задержки роста патогенных и условно-патогенных тест-штаммов на среде СД-4 должна быть также не менее 15 мм и всегда превышать уровень изоантагонистической активности.

Результаты исследований, проведенных на образцах 12 коммерческих серий лактобактерина, 10 серий лиофилизированных культур производственных штаммов L. plantarum 8Р-АЗ и L. fermentum 90Т-С4, позволили установить следующие количественные показатели антагонистической активности лактобактерина — зона задержки роста изои гомологичного штаммов должна составлять не менее 15 мм на среде МРС-5, зона задержки роста патогенных и условно-патогенных тест-штаммов должна составлять не менее 20 мм на среде МРС-5 и СД-4.

Оценка результатов, полученных при исследовании образцов 10 серий лиофилизированных культур штаммов L. acidophilus КЗШ24, L. acidophilus NK1, L. acidophilus 100АШ, 10 коммерческих серий ацилакта, позволили нам определить количественные показатели их антагонистической активности — зона задержки роста изои гомологичного штаммов должна составлять на обеих средах не менее 15 ммзона задержки роста штамма Е. coli М-17, а также патогенных и условно-патогенных тест-штаммов должна быть во всех случаях больше и составлять не менее 15 мм на среде МРС-5 и не менее 20 мм на СД-4.

Определение антагонистической активности пробиотиков, включающее оценку изо- (или гомоантагонизма), позволяет ограничить применение патогенных и условно-патогенных культур.

По результатам исследований получен патент РФ № 2 177 152 «Способ контроля антагонистической активности препаратов для лечения и профилактики дисбактериозов», приоритет от 02.12.1999. Внесены дополнения в действующую документацию: ФСП 42−28 220 301 на колибактерин сухой и ФСП 42−28 220 201 на бификол сухой.

Заключительный раздел наших исследований был связан с разработкой экспресс-метода контроля антагонистической активности препаратов пробиотического действия с использованием в качестве тест-культуры люминесцентных бактерий.

В литературных источниках подробно освещена сфера применения биотестов, основанных на анализе люминесцентной реакции бактериальной клетки в ответ на воздействие ингибиторов биологической активности. Благодаря своим несомненным преимуществам — высокой чувствительности, быстроте, минимальному объему исследуемого образца — они нашли широкое применение при оценке уровня загрязненности воды, почвы, промышленных стоков различными ядами, пестицидами, тяжелыми металлами (54, 85, 111, 122, 147, 160, 187, 249).

Список веществ, анализируемых в тест-системах с использованием светящихся бактерий, продолжает пополняться. Расширение сферы применения люминесцентных биотестов является перспективным направлением в биосенсорных исследованиях. Т.к., люминесцентные тест-организмы проявляют обобщенную реакцию на действие всех биологически активных веществ, представлялось вероятным, что с их помощью можно оценить уровень антагонистической активности препаратов пробиотического действия.

Можно было предполагать, что метаболиты пробиотических микроорганизмов, как и другие биологически активные вещества, воздействуют на уровень свечения люминесцентных бактерий, характеризующий общий физиологический статус микроорганизма (54, 147, 246). При этом качественные и количественные изменения данного параметра поддаются объективному контролю и могут быть зафиксированы с помощью биолюминометра при кратковременной совместной экспозиции препаратов и люминесцентного тест-штамма.

Наш подход к оценке антагонистической активности препаратов основывается на определении величины изменения интенсивности биолюминесценции контрольной и опытной проб и выражается количественно в виде индекса антагонистической активности — ИАА (численно равного проценту подавления свечения по сравнению с исходным уровнем) при расчете среднеарифметического значения из трех параллельных измерений (контроль-опыт).

Первым этапом данного раздела исследований явился выбор физико-химических параметров проведения бактериального люминесцентного теста. Исходя из того, что чувствительность к биологически активным веществам и характер инактивации биосенсора (рекомбинантного тест-штамма) зависит от свойств клеток хозяина, мы остановились на температуре измерительной системы 37° С — оптимальной для Е. coli — штамма-реципиента lux гена (22, 45, 139, 144, 206). Оптимум люминесцентной активности фермента люциферазы наблюдается при значениях рН близких к 7,0, поэтому этот уровень был выбран для регидратированной культуры тест-штамма (76, 112, 226).

В результате наших исследований определены закономерности воздействия пробиотиков на люминесцентный штамм Е. coli lum+ С-50 (разработанный под руководством д.м.н., профессора Р.А. Пшеничнова) в тесте ингибирования биолюминесценции. Выявлено влияние концентрации препарата (цельный или разведенный) в пробе и продолжительности экспозиции на уровень свечения тест-штамма для каждого пробиотика.

Для цельных препаратов (за исключением бифидумбактерина) характерно необратимое гашение свечения. Показатели ИАА, превышавшие 99, можно считать 100%-ным угнетением люминесценции МИТ при учете фонового свечения прибора.

Стимуляцию свечения люминесцентного тест-штамма отдельными разведениями препаратов в начальный период или на протяжении всего срока экспозиции можно объяснить малой концентрацией клеток и их метаболитов, а также воздействием на клетки сенсора компонентов питательной среды и стабилизаторов лиофилизации.

Путем параллельного посева рекомбинантного тест-штамма на среду Эндо определен механизм воздействия на него пробиотиков: цельные препараты не только угнетали биолюминесценцию тест-культуры, но и способствовали отмиранию индикаторных клеток. Индекс антагонистической активности пробиотиков и КОЕ тест-штамма находились в сильной обратной зависимости (г >-0,7), а ингибирование биолюминесценции выявлялось в целом раньше и предшествовало последующему отмиранию индикаторных клеток.

Для обоснования временных параметров проведения (продолжительности экспозиции) и критериев оценки было проведено сравнение результатов и выявлено наличие корреляционной зависимости между результатами, полученными в тесте ингибирования биолюминесценции и регламентированном тесте отсроченного антагонизма на плотной питательной среде. Для всех пробиотиков установлена прямая сильная корреляция между количественными показателями ИАА в период от 30 мин до 2 ч и результатами отсроченного антагонизма в отношении тест-штаммов Е. coli lum+ С-50, Е. coli М-17, Е. coli 157 (г > 0,7).

Высокий уровень корреляции позволяет использовать тест ингибирования биолюминесценции для оценки антагонистических свойств пробиотических препаратов. Преимуществами разработанного способа являются: отсутствие необходимости применения питательных сред и патогенных тест-штаммов, кратковременная совместная экспозиция препарата и тест-культуры, учет влияния исходной концентрации клеток и метаболитов в исследуемом препарате.

Показать весь текст

Список литературы

  1. Н.Г. Разработка технологии производства дрожжевых аутолизатов как основы конструирования питательных сред для чумного микроба и холерного вибриона/ Н. Г. Авдеева, И. А. Дятлов, С. А. Еремин. — Саратов, 2000.-17 с.
  2. В.Г. Микроэкологические нарушения толстого кишечника у больных гастроэнтерологического профиля/ В. Г. Акимкин, Г. И. Заболотнова// Журнал микробиол. 1997. — № 2. — С. 85−86.
  3. И.Г. Питательные среды как искусственная среда роста и развития микроорганизмов/ И. Г. Ахапкина, Л.П. Блинкова// Журнал микробиол. -2001. № 6. — С. 99−104.
  4. И.П. Статистические методы в микробиологических исследованиях/ И. П. Ашмарин, А. А. Воробьев. Л.: Медгиз, 1962. — 180 с.
  5. А.Ю. Дисбактериоз и дисбиоз кишечника/ А. Ю. Барановский, Э. А. Кондрашина. СПб., 2000. — 209 с.
  6. B.C. Экологическое нормирование антропогенных нагрузок/ B.C. Безель, Ф. В. Кряжимский, Л. Ф. Семериков, Н.Г. Смирнов// Экология. -1992.-№ 6.-С. 3−12.
  7. Н.В. Метаболиты анаэробных бактерий (летучие жирные кислоты) и реактивность макроорганизма/ Н. В. Белобородова, С.М. Белобородов// Антибиотики и химиотерапия. 2000. — Т.45, № 2. — С. 28−36.
  8. С.В. Рациональная терапия дисбактериоза кишечника у детей/ С. В. Бельмер, Т.В. Гасилина// Клин. мед. 1998. — Т.76. — № 10. — С.35.
  9. Л.Ю. Биосенсор для количественного определения в воде синтетических поверхностно-активных веществ/ Л. Ю. Бержанская, О.Н.
  10. , Ю.С. Кривошеин//Авт. св., № 1 335 569, кл G 12 Q Я.-1987.- 8с.
  11. Биотехнологические основы переработки растительного сырья/ О. В. Кислухина, И. И. Кюдулас. Каунас, 1997. — 183 с.
  12. А.В. Пути совершенствования этиопатогенетической терапии дисбактериозов/ А. В. Бондаренко, В. М. Бондаренко, Вл.М. Бондаренко// Журн. микробиол. 1998. — № 5. — С. 96−101.
  13. В.М. Иммуностимулирующее действие лактобактерий, используемых в качестве основы препаратов пробиотиков/ В. М. Бондаренко, Э. И. Рубакова, В.А. Лаврова// Журнал микробиол. 1998. -№ 5.-С. 107−112.
  14. В.А. Суппозиторий с лактобактериями для лечения дисбактериозов влагалища/ В. А. Быков, М. В. Далин: Пат. 2 150 268 Россия, МПК6 А61К 9/02, А61К 35/74. 2000. — Бюл. № 6.
  15. А.В. Влияние бифидобактерий на антилизоцимную активность энтеробактерий/ А. В. Валышев, Н.Н. Елагина// Журнал микробиол. — 2000. № 4. — С. 77−79.
  16. Т.Я. Сравнительное изучение действия экзометаболитов Escherichia coli М-17 и фруктоолигосахаридов на рост и антагонистическую активность лактобацилл/ Т. Я. Вахитов, О. В. Добролеж // Журнал микробиол. 2001. — № 3. — С. 80−83.
  17. Т.Я. Роль янтарной кислоты в сохранении жизнеспособности и антагонистической активности культуры Е. coli М-17/ Т. Я. Вахитов, О.В. Добролеж// Рус. журнал «ВИЧ/СПИД и родственные проблемы». 2000. — 4, № 1. —С. 31.
  18. Н.Б. Сухой биопрепарат и способ его получения/ Н. Б. Вербицкая, О. В. Добролеж, А. И. Кобатов, JI.H. Петров: Пат. 2 160 992 Россия, МПК А23С 9/12, А23С 9/123. 2000. — Бюл. № 36.
  19. A.JI. Дисбактериоз кишечника как побочный эффект антихеликобактерной терапии и новый способ его коррекции/ A.JI.
  20. , B.E. Артамонов, И.Ф. Балагурия// Медицинская картотека МИРа. — 1998. -№ 10.
  21. У.Э. Культивирование микроорганизмов/ У. Э. Виестур, М. Ж. Кристапсонс, Е. С. Былинкина. — М., 1980. — 230 с.
  22. А.Ю. Использование консорциума бактериальных культур для их выращивания на молочной сыворотке/ А. Ю. Винаров, Т.Е. Сидоренко// Хранение и переработка сельхозсырья. 1999. — № 1. — С. 16−17.
  23. JI.A. Влияние ионов Na+, К+ на люминесцентную активность интактных клеток Vibrio harveyi при различных рН/ JI.A. Витухновская, А.Д. Исмаилов// Микробиология. 2001. — т. 70, № 4. — С. 525−530.
  24. Д.А. Роль дисбактериоза в формировании хронической неинфекционной патологии у детей/ Д. А. Воеводин, Г. Н. Розанова// Журнал микробиол. 2001. — № 6. — С. 88−93.
  25. А.А. Бактерии нормальной микрофлоры: биологические свойства и защитные функции/ А. А. Воробьев, Е.А. Лыкова// Журнал микробиол. -1999. -№ 6.-С. 102−105.
  26. И.М. Экономичная питательная среда в производстве препарата бифидумбактерина/ И. М. Воронкина, В.Г. Кандюрина// Тезисы докл. конференции 26−27 мая. Махачкала, 1988. — С. 191.
  27. В.Г. Гликопептиды лактобацилл регуляторы гемопоэза и иммунитета/ В. Г. Воспяков, JI.H. Петров// Рус. журн. «ВИЧ/СПИД и родств. проблемы». — 2000. — 4, № 1. — С. 31−32.
  28. Н.Н. Электронно-микроскопические исследования характера ингибирования роста сальмонелл лактобактериями/ Н. Н. Гаврилова, И.А. Ратникова// Биотехнология. — 1999. № 1. — С. 48−54.
  29. В.М. Клеточные сенсоры на основе бактериальной биолюминесценции/ В. М. Ганшин, B.C. Данилов// Сенсорные системы. 1997. — Т. 11, № 6. — С. 245−255.
  30. Н.М. Комплексная оценка загрязнения окружающей среды и уровня генетических повреждений у жителей г. Атбасар (Казахстан)/ Н. М. Геворкян, И. Е. Дробинская, Т.П. Глотова// Гигиена и санитария. 1994. — № 8. — С. 37−40.
  31. A.JI. «Quorum sensing» или социальное поведение бактерий/ A.JI. Гинцбург, Т. С. Ильина, Ю.М. Романова// Журн. микробиол. 2003. — № 5. — С. 86−93.
  32. И.И. Светящиеся бактерии/ И. И. Гительзон, Э. К. Родичева, С. Е. Медведева. Новосибирск: Наука. Сиб. отд-е. — 1984. — 275 с.
  33. И.И. Штамм бактерий Photobacterium leiognathi, используемый в качестве тест-культуры на токсичность ксенобиотиков/ И. И. Гительзон, Т. И. Воробьева, А. Н. Шендеров, И.Ю. Виделец// Авт. св-во № 1 097 947, кл. G 01 № 33/18.- 1983.-7 с.
  34. К.К. Биохимия молока и молочных продуктов/ К. К. Горбатова. -М.: Колос, 1997.-287 с.
  35. Э.С. Неспорообразующие анаэробы в норме и патологии/ Э. С. Горовиц, Т.И. Карпунина// Учебно-методическое пособие. Пермь. — 1999. -139 с.
  36. Е.М. Биологическая характеристика штаммов лактобацилл, перспективных в качестве эубиотиков/ Е. М. Горская, Н. Н. Лизько, А.А. Ленцнер// Журн. микробиол. 1992. — № 3. — С. 17−20.
  37. П.Я. Диагностика и лечение болезней органов пищеварения/ П. Я. Григорьев, Э. П. Яковенко. СПб., 1997. — С. 298−320.
  38. А.В. Разработка и клиническая оценка пробиотика «Бифидумбактерин форте»/ А. В. Григорьев, В. М. Бондаренко, Н.А. Абрамов// Журн. микробиол. 1997. — № 3. — С. 92−96.
  39. В.А. Экологические и медицинские аспекты симбиоза Escherichia coli и человека/ В. А. Гриценко, О.В. Бухарин// Журнал микробиол. 2000. — № 3. — С. 92−99.
  40. Г. Б. Антибиотические свойства Lactobacillus acidophilus «Нарине» и пути их повышения/ Г. Б. Гукасян, Л.Г. Акопян// Журн. микробиол. -2002.-№ 5.-С. 63−65.
  41. М.М. Дисбактериоз при заболеваниях органов пищеварительной системы у лиц, пострадавших вследствие Чернобыльской катастрофы/ М. М. Данилаш, О.Г. Лигирда// Лшар. справа. 2000. — № 2. — С. 20−22.
  42. B.C. Бактериальная биолюминесценция/ B.C. Данилов, Н. С. Егоров М.: Изд-во МГУ. — 1990. — 152 е., ил.
  43. B.C. Бактериальные биосенсоры с биолюминесцентным выводом сигнала/ B.C. Данилов, В.М. Ганшин// Сенсорные системы. 1998. — Т. 12, № 1.-С. 56−68.
  44. B.C. Сенсорные биолюминесцентные системы на основе lux-оперонов разных видов люминесцентных бактерий/ B.C. Данилов, А. П. Зарубина, Г. Е. Ерошников// Вест. Моск. Университета. Сер. 16. Биология. -2002.-№ 3.-С. 20−24.
  45. Е.И. Изменение АТФ в интактных клетках Escherichia coli, содержащих рекомбинантную люциферазу светляков/ Е. И. Дементьева, Н. Н. Угарова, П.Х. Кобболд//Биохимия. 1996. -Т.61,Вып.7. -С. 1285−1293.
  46. .А. Характеристика микроорганизмов, колонизирующих кишечник человека/ Б. А. Ефимов, Н.Н. Володин// Журн. микробиол. — 2002. № 5.- С. 98−104.
  47. Л.П. Питательные среды для изучения анаэробной неспорогенной микрофлоры/ Л. П. Жданова, И. И. Олейник, Б.Д. Быченко// Лаб. дело.1986.-№ 4.-С. 195−201.
  48. М.В. Микробный синтез на молочной сыворотке/ М. В. Залашко, JI.C. Залашко. -Минск: Наука и техника, 1976. 274 с.
  49. М.В. Биотехнология переработки молочной сыворотки/ М. В. Залашко. М.: Агропромтздат, 1990. — С. 6−34.
  50. М.В. Антимикробные и иммуномодулирующие свойства Lactobacillus acidophilus Ке-10/ М. В. Залашко, Н. И. Анисимова, Л.Г. Борткевич// Прикладная биохимия и микробиология. 1997. — Т. ЗЗ, № 3. — С. 305−309.
  51. М.П. Гигиеническая экспресс-диагностика токсичности дезинфектантов питьевой воды с помощью биотестирования/ М. П. Захарченко, С. М. Ткачук, Л. Е. Яковлева, В.В. Гайдамака// Гигиена и санитария. 1994. — № 9. — С. 3−4.
  52. А.Д. Ингибирование бактериальной люминесценции хлорфенолами/ А. Д. Исмаилов, С. И. Погосян, Т.И. Митрофанова// Прикладная биохимия и микробиология. 2000. — Т.36, № 4. — С. 469−473.
  53. ИСО 5667/2. Качество воды. Отбор проб. Ч. 2. ГОСТ 2874–82. Вода питьевая.
  54. А.В. Кисломолочный бифидумбактерин: опыт применения, эффективность/ А.В. Истомин// Нар. медицина России. 1999. — № 3. — С.8−9.
  55. А.И. Пробиотики: Терапия и профилактика заболеваний. Укрепление здоровья/ А. И. Калмыкова. СибНИПТИП СО РАСХН. -Новосибирск, 2001. — 208 с.
  56. Т.И. Повышение эффективности терапевтического действия пробиотиков/ Т. И. Карпунина, Э.С. Горовиц// Журнал микробиологии, эпидемиол., иммунобиол. 1998. — № 2. — С. 104−107.
  57. Каталог светящихся культур/ Под ред. Э. К. Родичевой. Новосибирск: Наука. Сиб. предприятие РАН. — 1997. — 125 с.
  58. A.M. Оценка взаимодействия катионных поверхностно-активных антисептиков с сывороточным альбумином методом бактериальной биолюминесценции/ A.M. Кацев, В.Ю. Семенов// Клиническая лабораторная диагностика. 2002. — № 4. — С. 39−41.
  59. Е.И. Молочнокислые бактерии и пути их использования/ Е. И. Квасников, О. А. Нестеренко. М., 1975. — 389 с.
  60. Н.Ф. Новый бактериальный препарат «АФ» на основе молочнокислых бактерий и его биологические свойства/ Н.Ф. Кигель// Мшробиол. журнал. 2000. — Т. 62, № 3. — С. 49−55.
  61. Е.Р. Применение «ударных» доз бифидумбактерина форте для, лечения больных острыми кишечными инфекциями/ Е.Р. Корвякова// Журн. микробиол. 2000. — № 6. — С. 58−61.
  62. Т.К. Дисбактериоз кишечника у проктологических больных: микробиологические аспекты/ Т.К. Корнева// Рос. журн. гастроэнтерол., гепатол., колопроктол. 1999. — № 3.
  63. Я.И. Микробные сенсоры: достижения, проблемы, перспективы/ Я. И. Корпан, А.В. Ельская// Биохимия. 1995. — Т.60, вып.12. — С.1988−1998.
  64. В.М. Характеристика биологических препаратов и пищевых добавок для функционального питания и коррекции микрофлоры кишечника/ В. М. Коршунов, Б. А. Ефимов, А.П. Пикина// Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 2000. — № 3. — С. 86−91.
  65. В.М. Изучение бифидофлоры влагалища у женщин репродуктивного возраста/ В. М. Коршунов, З.А. Гудиева// Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 1999. — № 4. — С. 74−78.
  66. JI.JI. Усовершенствование производства колибактерина и разработка нового экспериментального препарата из молочнокислыхбактерий штамма Lactobacillus plantarum 8Р-АЗ/ JLJL Красик: Автореф. дис. канд. мед. наук. Пермь, 1972. — 20 с.
  67. Н.А. Иммунный статус и микрофлора кишечника у больных полиартритом инфекционно-аллергической природы в процессе лечения бифидумбактерином/ Н. А. Краскина, Т.К. Лопатина// Иммунология. 1996, № 4.-С. 52−54.
  68. В.А. Люциферазное биотестирование: биофизические основы, методы и применение/ В. А. Кратасюк: Автореф. дис. д.б. н. Красноярск, 1994.-31 с.
  69. В.А. Люциферазный биотест для определения степени поражения фузариозом зерна пшеницы/ В. А. Кратасюк, О.И. Егорова// Прикладная биохимия и микробиология. 1998. — Т. 34, № 6. — С. 688−691.
  70. И.В. Разработка питательных сред и процесса непрерывного культивирования бифидобактерий/ И. В. Критская: Автореф. дис. канд. биол. наук. Москва, 1997. — 27 с.
  71. И.В. Оптимизация состава питательной среды для культивирования бифидобактерий B.bifidum 791/ И. В. Критская, Т. Б. Танирбергенов, Л.Н. Саканян//Биотехнология. 1996. — № 3. — С. 33−38.
  72. И.Б. Антагонистическая активность микробных популяций защитной флоры и ее связи с характеристикой микробиоценоза и факторами питания/И.Б. Куваева, Г. Г. Кузнецова// Вопр. питания. 1993. -№ 3. — С. 46−50.
  73. Н.С. Действие хинонов на ферментативные биолюминесцентные НАДН-зависимые системы/ Н. С. Кудряшова, Е.Н. Есимбекова//Прикладная биохимия и микробиология. 2000. — Т. 36, № 4. -С. 474−478.
  74. А.Н. Применение биолюминесцентного метода определения бактериального аденозинтрифосфата в микробиологии/ А. Н. Кузиков, В. М. Бондаренко, А.Т. Латкин// Журн. микробиол. 2003. — № 1. — С.80−89.
  75. A.M. Использование светящихся бактерий в биотестировании окружающей среды/ A.M. Кузнецов, Э. К. Родичева, С.Е. Медведева// Материалы Международной конференции, 12−18 сентября. Москва, Пермь, 1998.-С. 395.
  76. A.M. Биолюминесцентные методы анализа биологически активных соединений и приборное обеспечение/ A.M. Кузнецов, Н. А. Тюлькова, М.В. Сальников// Материалы V Международной конференции, 18−25 сентября, Волгоград Пермь, 2001. — С.28.
  77. Г. Ф. Метод сравнительного биотестирования питьевой воды с помощью индикаторных штаммов бактерий/ Г. Ф. Леванова, А. С. Юшин, С.Ю. Кашников// Гигиена и санитария. 1999. — № 2. — С. 77−79.
  78. А.А. Актуальные проблемы микроэкологии человека/ А. А. Ленцнер, Х.П. Ленцнер// Республиканский сборник научных трудов. -Горький, 1988.-С. 10−15.
  79. А.А. Лактофлора и колонизационная резистентность/ А. А. Ленцнер, Х. П. Ленцнер, М.Э. Микельсаар// Антибиотики и мед. биотехнология. 1987. — Т. 32, № 3. — С. 173−179.
  80. В.И. Дисбактериозы у больных шигеллезами: причины развития и пути коррекции/ В. И. Лучшев, В. М. Бондаренко, М.З. Шахмарданов// Рос. мед. журн. 2000. — № 3. — С. 35−39.
  81. Е.А. Коррекция пробиотиками микроэкологических и иммунных нарушений при гастродуоденальной патологии у детей/ Е. А. Лыкова, В. М. Бондаренко, Ю.А. Изачик// Журн. микробиол. 1996. — № 2. -С.88−91.
  82. М.Н. Получение биомассы фототрофных бактерий на молочной сыворотке/ М. Н. Малатян, А.Х. Паронян// Прикладная биохимия и микробиология. 1997. — Т. 33, № 2. — С. 238−240.
  83. Н.П. Комплексный подход оценки состояния окружающей среды и риска для здоровья в системе обеспечения гигиенической безопасности населения/ Н. П. Мамгин, О. В. Клепиков, П.В. Чернов// Прикл. инф. аспекты мед. 1999. — Т. 2, № 1. — С. 6−11.
  84. И.В. Клонирование и экспрессия /ш:-оперона Photorhabdus luminescensl И. В. Манухов, С.М. Расторгуев// Генетика. 2000. — Т. 36. -№ 3. — С. 322−330.
  85. И.Л. Микробиолюминесцентная система оценки мутагенного и общетоксического действия поллютантов/ И. Л. Масленникова, Н. В. Голясная, Р. А. Пшеничнов// Материалы Международной конференции, Волгоград Пермь, 2001. — С. 33.
  86. С.Е. АТФ-азная активность светящихся бактерий и их темновых вариантов/ С. Е. Медведева, А. Н. Медведев, Г. А. Примакова, М.В. Сальников// Изв. СО РАН СССР, биология. 1982. — Вып. 2, № ю.-С. 113 117.
  87. М.М. Состояние и перспективы развития производства микробиологических питательных сред/ М.М. Меджидов// Актуальные вопросы разработки препаратов медицинской биотехнологии: Тезисы конференции. Махачкала, 1988. — Ч. 1. — С. 3−8.
  88. В.А. Алгоритм конструирования новых питательных сред/ В. А. Мельникова, И. А. Баснакьян, Б.М. Раскин// Актуальные вопросы разработки препаратов медицинской биотехнологии: Тезисы конференции. Махачкала, 1988. — Ч. 2. — с. 163.
  89. Методические рекомендации к контролю питательных сред по биологическим показателям. Москва, 1980.
  90. Методические рекомендации. Определение токсичности воды и водных экстрактов из объектов окружающей среды по интенсивности биолюминесценции бактерий. 26.02.96, № 01−19/16.17.- 9 с.
  91. Методические указания по применению физико-химических методов контроля питательных сред. М., 1977.
  92. В.Н. Некоторые дополнительные требования к кормовым дрожжам, используемым в качестве сырья при производстве питательных сред/ В. Н. Милютин, М.М. Меджидов// Тезисы координационного совещания. Махачкала, 1982. — С. 9−11.
  93. О.Н. Дисбактериоз кишечника/ О. Н. Минушкин, М. Д. Ардатская, В.Н. Бабин// Рос. мед. журн. 1999. — № 3. — С. 40−44.
  94. T.JI. Биопрепараты и пищевые факторы в коррекции дисбактериоза/ T.JI. Михайлова, Т. Ю. Калинская, В.Г. Румянцев// Рос. журн. гастроэнтерол., гепатол., колопроктол. 1999. — Т. 9, № 3. — С. 67−70.
  95. З.И. Микробиологический мониторинг наземных экосистем/ З. И. Никитина. -Новосибирск: Наука, 1991. 222 с.
  96. Н.М. Оценка мутагенных свойств техногенного загрязнения водной среды/ Н.М. Никитина// Материалы Международной конференции, 18−25 сентября, Волгоград Пермь, 2001. — С. 36.
  97. В.Н. Влияние препарата ацилакта на иммунную систему детей, больных атопическим дерматитом/ В. Н. Николаенко, Т. К. Лопатина, В.В. Поспелова// Иммунология. 1996. — Т. 2. — С. 54−57.
  98. Г. И. Сохранение жизнеспособности и физиологических свойств бифидобактерий при криоконсервации и лиофилизации/ Г. И. Новик, Н.И. Астапович// Микробиология. 1998. — Т. 67, № 5. — С. 637−642.
  99. Г. И. Сохранение жизнеспособности и антагонистической активности бифидобактерий при субкультивировании/ Г. И. Новик, Н. И. Астапович, Н.Е. Рябая// Микробиология. 1998. — Т. 67, № 5. — С. 631−636.
  100. А.И. Влияние источников питания на синтез экзополисахаридов и аминокислот штаммами Bacillus subtilisl А.И. Осадчая, В.А. Кудрявцев// Мшробюл. журн. 1999. — Т. 61, № 5. — С. 56−63.
  101. ИГ. Некоторые аспекты механизма защитного действия колибактерина и споровых эубиотиков и новые методы их контроля/ И. Г. Осипова: Автореф. дис. канд. биол. наук. Москва, 1997. -25 с.
  102. Е.В. Микроэкологические изменения при экспериментальном дисбактериозе и роль бактерицидных систем клеток организма хозяина/ Е. В. Патрушева: Автореф. дис. канд. биол. наук. Волгоград, 2000. — 23 с.
  103. Н.И. Изучение возможности использования гидролизатов кормовых дрожжей и крови животных при изготовлении питательных сред для диагностики кишечных инфекций/ Н.И. Пивоварова// Журн. микробиол. 1985. — № 7. — С. 32−35.
  104. А.П. Первичный скрининг штаммов бифидобактерий и лактобактерий с целью разработки на их основе эффективных препаратов-пробиотиков/ А. П. Пикина, В. В. Смеянов, Б.А. Ефимов// Журн. микробиол. -1999.-№ 6.-С. 34−38.
  105. И.В. Практическое пособие по медицинской статистике/ И. В. Поляков, Н. С. Соколова. JL, Медицина. — 1975. — 150 с.
  106. Л.Ю. Использование светящихся бактерий для создания тест-системы на гексахлорциклогексан/ Л. Ю. Попова, С. Е. Медведева, О. А. Могильная, А.П. Пузырь// Прикладная биохимия и микробиология. 1991. — Т. 27, Вып. 6. — С. 905−910.
  107. Л.Ю. Микробные тест-системы для оценки степени токсичности химических соединений/ Л. Ю. Попова, Н. И. Луцкая, А. Г. Жуков. Красноярск. 1991. — 31с.
  108. О.Н. Влияние поверхностно-активных веществ на люминесцентную систему светящихся бактерий/ О. Н. Постникова, Ю. С. Кривошеин, Л.Ю. Бержанская// Биотехнология. 1992. — № 4. — С. 56−59.
  109. Г. А. Влияние рН на константу скорости затухания люминесценции у различных видов светящихся бактерий/ Г. А. Примакова, Т.П. Сандалова// Прикладная биохимия и микробиология. 1991. — Т. 27, Вып. 1.-С. 142−145.
  110. О.Е. Проблемы оценки жизнеспособности микроорганизмов/ О.Е. Пучков// Микробное разнообразие: состояние, стратегия сохранения, экологические проблемы. Междунар. конференция: Тез. докл. Пермь, 1996.-С. 88−89.
  111. Р.А. Микробная популяция — саморегулируемая система/ Р. А. Пшеничнов, В. М. Колотов, С.Я. Барихин// Экология и популяционная генетика микроорганизмов. — Свердловск, 1975. С. 3−13.
  112. Р.А. Микробиолюминесцентный индикатор токсичности -МИТ: конструирование и применение/ Р. А. Пшеничнов, И. Л. Масленникова, Н.М. Никитина// Материалы V Международной конференции, 18−25 сентября, Волгоград — Пермь, 2001. С. 42.
  113. Р.А. Оценка эффективности пробиотиков в реакции ингибирования микробиолюминесценции с препаратом МИТ/ Р. А. Пшеничнов, В. А. Несчисляев, А.В. Церегородцев// Материалы V Международной конференции, 18−25 сентября, Волгоград Пермь, 2001. -С. 90.
  114. Р.А. Микробиотест для оценки мониторинга загрязнения почв/ Р. А. Пшеничнов, Ф. Н. Закиров, Н.М. Никитина// Экология. 1995. — № 4. -С. 332−334.
  115. Разработка сухой среды для производства колибактерина / Г. В. Султанов, Р.А. Османова// Актуальные вопросы разработки препаратов медицинской биотехнологии: Тезисы конф. Махачкала, 1988. -Ч. 2. — С. 189−190.
  116. Р.С. Питательная среда для роста бифидо- и лактобактерий/ Р. С. Рахманов: Пат. 2 158 302 Россия МПК C12N 1/20, А23С 9/12. 1999.
  117. Регламент производства 705−97. Лактобактерин сухой.
  118. Н.Н. Биолюминесцентный контроль интенсивности патологических окислительных процессов в клетках/ Н. Н. Реммель, В.А. Кратасюк// Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2003. -Т. 135, № 1.-С. 52−54.
  119. А.Н. Биосенсоры и биологические методы анализа объектов окружающей среды/ А.Н. Решетилов// Прикладная биохимия и микробиология. 2000. — Т. 36, № 5. — С. 605−608.
  120. Э.К. Коллекция культур светящихся бактерий ИБСО/ Э. К. Родичева, Г. А. Выдрякова// Материалы Международной конференции, 8−11 октября, Пермь, 1996. С. 93.
  121. И.Ю. Предпосылки к использованию лактобактерина на основе штамма Lactobacillus fermentum 90-TS-4 в гинекологической практике/ И. Ю. Рожкова, Э.Г. Кравцов// Бюллетень эксп. биологии и медицины. -1999. Т. 127. — № 2. — С. 234−236.
  122. В.Г. Дисбактериоз кишечника: клиническое значение и принципы лечения/ В.Г. Румянцев// Рос. журн. гастроэнтерол., гепатол., колопроктол. 1999. — Т. 9, № 3. — С. 61−63.
  123. Г. И. Проблемы прогнозирования токсичности и риска воздействия химических веществ на здоровье населения/ Г. И. Румянцев, С.М. Новиков//Гигиена и санитария. 1997. — № 6. — С. 13−18.
  124. Е.С. Болезни органов пищеварения/ Е. С. Рысс, Б. И. Шулутко. СПб., 1998.-С. 78−105.
  125. С.Э. Применение биотерапевтического агента «Жлемик» для коррекции микрофлоры при бактериальных вагинозах/ С. Э. Саркисов, З.С. Крымшокалова// Журн. микробиол. 2000. — № 1. — С. 88−90.
  126. И.И. Способ коррекции микрофлоры вагины/ И. И. Смирнов, И. Б. Сорокулова: Пат. 2 131 258 Россия, МПК6 А61К 35/74, C12N 1/20. Институт микробиол. и вирусол. НАН Украины. 1999. — Бюл. № 16.
  127. Н.А. Некоторые вопросы экологии антагонизма лактобактерий/ Н. А. Соколова, О.Д. Гольдина// Экология и популяционная генетика микроорганизмов. Свердловск, 1975. — С. 42−46.
  128. Т.А. Экологическая биотехнологическая альтернатива: пробиотики вместо антибиотиков/ Т.А. Спасская// Тез. докл. IV Междунар. научно-практич. конференции, 28−30 сентября, 1998. — Рязань. -С. 201−202.
  129. Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования / Под редакцией М. О. Биргера. М., «Медицина». — 1982.
  130. Состав и свойства молока как сырья для молочной промышленности:" Справочник / Н. Ю. Алексеева, В. П. Аристова, А. П. Патратий. М.: Агропромиздат, 1986. — 232 с.
  131. П.П. Микробиология молока и молочных продуктов/ П. П. Степаненко: Автореф. дис. докт. вет. наук. Москва, 2000. — 30 с.
  132. С.В. Заболевания тонкой кишки (клиника, диагностика, лечение)/ С.В. Столов// Новые С.-Петербургские врачебные ведомости. 2000.- № 1.
  133. М.Г. Фотоиндуцированное подавление биолюминесценции генно-инженерного штамма бактерий Е. coli TGI в присутствии фотодитазина/ М. Г. Страховская, И.М. Пархоменко// Микробиология. -2002. Т. 71, № 3. — С. 345−348.
  134. В.И. Основа питательной среды для культивирования микроорганизмов/ В. И. Сушко, И. И. Школьник, В. В. Щеткин: Пат. 2 108 381 Россия, МПК6 C12N 1/20. 1998.
  135. В.А. Рациональная терапия дисбактериоза кишечника у детей. Методические рекомендации/ В. А. Таболин, С. В. Бельмер, Т. В. Гасилина. -М., 1998.-11 с.
  136. Н.Н. Применение биолюминесцентного метода для экспресс-тестирования загрязненных вод/ Н. Н. Тимошкина, С.В. Юшков// Тезисы докл. конф. мол. ученых. Владивосток, 24−26 мая, 1999. — С. 185−187.
  137. А.Н. Биолюминесцентный метод определения чувствительности микрофлоры к антибиотикам/ А. Н. Титов, Н. А. Романова, Т. М. Данилова, Л.Ю. Бровко// Лабораторное дело. 1990. — № 10. — С. 61−66.
  138. Н.А. Сравнительное исследование влияния температуры на бактериальные люциферазы/ Н. А. Тюлькова, Т.П. Сандалова// Биохимия. -1996. Т. 61, вып. 2. — С. 275−287.
  139. Т.А. Роль дисбактериоза кишечника в формировании иммунной недостаточности у детей/ Т. А. Федотова, А.А. Михайленко// Иммунология. -2001. -№ 3.- С. 41−45.
  140. Д.Э. Яновые пептидные антибиотики-микроцины типов В и С: структура и генетические детерминанты синтеза/ Д. Э. Фоменко, А.З. Мелицкая// Молекулярная биология — 1998. — Т. 32, № 2. С. 382.
  141. В.М. Исследование интегральной токсичности водной среды с использованием бактериальных тестов/ В. М. Фомченков, И.А. Ирхина// Прикладная биохимия и микробиология. 2000. — Т. 36. — № 6. — С. 656−661.
  142. В.Г. Биолюминесцентный метод определения общей бактериальной обсемененности сырого молока/ В. Г. Фрунджян, Л.Ю. Бровко// Прикладная биохимия и микробиология. — 1999. — Т. 35. № 3. — С. 358−365.
  143. ФС 42−3874−99 «Физико-химические, химические, физические, иммунохимические методы контроля медицинских иммунобиологических препаратов».
  144. ФС 42−3539−98 «Питательная среда 199 М (10-кратный концентрат), жидкая».
  145. ФСП 42−28 212 701 бифидумбактерин сухой.
  146. ФСП 42−28 220 301 колибактерин сухой.
  147. ФСП 42−28 220 201 бификол сухой.
  148. ФСП 42−28 208 401 лактобактерин сухой.
  149. ФСП 42−28 208 301 ацилакт сухой.
  150. И.А. Микроцины — пептидные антибиотики энтеробактерий и генетический контроль их синтеза/ И. А. Хмель, А.З. Метлицкая// Тезисы докладов конф. «Дисбактериозы и эубиотики». М., 26−28 марта, 1996.
  151. А.Г. Молочная сыворотка/ А. Г. Храмцов. — М.: Пищевая промышленность, 1979. -272 с.
  152. А.Г. Безотходная технология в молочной промышленности/ А. Г. Храмцов, П. Г. Нестеренко. М., 1989. — 280 с.
  153. А.Г. Способ получения бифидумбактерина/ А. Г. Храмцов, С. Е. Виноградская: Патент 2 160 594 Россия, МПК7 А61К 35/74, А23С 9/12.2000. Бюл. № 35.
  154. JI.B. Оценка суммарной токсичности тяжелых металлов на основе люминесцентного бактериального теста/ JI.B. Хрипач, Ю. А. Ревазова, А.Б. Ходжаян// Гигиена и санитария. 1998. — № 4.- С. 67−72.
  155. М.З. Нарушение микрофлоры кишечника и функциональное состояние лимфоцитов у больных шигеллезом/ М.З. Шахмарданов/7 Эпидемиол. и инфекц. болезни. 1999. — № 1. — С. 35−38.
  156. С.А. Пробиотики, пребиотики и пробиотические продукты. Современное состояние вопроса/ С.А. Шевелева// Вопр. питания. 1999. -Т. 68. -№ 2. -С. 32−39.
  157. .А. Нормальная микрофлора и ее роль в поддержании здоровья человека/ Б.А. Шендеров// Рос. журн. гастроэнтерол., гепатол., колопроктол. 1998. — Т.7. — № 1. — с. 61−65.
  158. .А. Медицинская микробная экология и функциональное питание. Том 3. Пробиотики и функциональное питание/ Б. А. Шендеров. -Москва, 2001. 288 с.
  159. А.Н. Способ биоиндикации загрязнения водной среды/ А. Н. Шендеров, Т. Ф. Сименская, И. Ю. Виделец: Авт. свид. СССР № 1 097 947- кл. G 01 № 33/48.-1985.-7 с.
  160. И. JI. Люминесцентный микробиотест: возможные пути его оптимизации и расширение сферы использования/ И. Л. Шмырина: Дис. к. б. н. Пермь ИЭГМ УрО РАН, 2000. — 171 с.
  161. Г. В. Проблемы медицинской и экологической биотехнологии/ Г. В. Штучная, В. М. Фомченков, А.И. Ирхина// Тез. докл. Оболенск: ГНЦ ПМ, 1999.-С. 214.
  162. П.Л. Микроэкология желудочно-кишечного тракта/ П. Л. Щербаков, И.О. Иваников// Рос. мед. журн. 2001. — № 2. — С. 41−43.
  163. Энтеробактерии. Руководство для врачей под редакцией В. И. Покровского. М., Медицина. — 1985. — 320 с.
  164. Н.Д. Дисбактериоз кишечника: патогенез и фармакотерапия/ Н. Д. Ющук, А.Л. Верткин// Междунар. медицинский журн. 1998. — № 4.
  165. Anand S.K. Antibacterial activity associated with B. bifidumf S.K. Anand, R.A. Srinivasan, L.K. Rao// Cultured Dairy Prod. J. 1985. — Vol. 20, N. 1.
  166. Baird-Parker A.C. Organic acids/ A.C. Baird-Parker // Microbial Ecology of Foods/ Ed. Silliker Y.H., Academic Press New York. 1980. — P. 126−135.
  167. Baquero F. The microcins/ F. Baquero, F. Moreno// Microbiol. Lett. 1984. -Vol. 23.
  168. Barcena J.M. Chemostat production of plantaricin С by Lactobacillus plantarum LL441 / J.M. Barcena, F. Sineriz// Appl. and Environ. Microbiol. 1998. — Vol. 64, N. 9.-P. 3512−3514.
  169. Barkin J.S. Difficult decisions in digestive diseases/ J.S. Barkin, A.J. Rogers. -Mosby, 1994.-440 p.
  170. Bassi A.S. Recent advances in biosensor research for environmental applications/ A.S. Bassi// Can. Chem. News. 2000. — Vol. 52, N. 4. — P. 22−23.
  171. Beloborodov S. The strong vegetarian diet as a risk factor for the digestive tract microflora disbiosis/ S. Beloborodov, A. Ivanov, S. Mitrochin// Microb. Ecology Health and Disease. 1998.-Vol. 10, N.3−4.-P. 198−199.
  172. Bengmark S. Colonic food: pre- and probiotics/ S. Bengmark// Am. J. Gastroenterol. 2000. — Vol. 95, N. 1. — P. 5−7.
  173. Bertazzoni Minelli E. Different probiotics and intestinal microflora in antibiotic treated children/ E. Bertazzoni Minelli, A. Benni// Microb. Ecology Health and Disease. 1998.-Vol. 10, N. 3−4.-P. 201−202.
  174. Bibiloni R. Will a high adhering capacity in a probiotic strain guarantee exclusion of pathogens from intestinal epithelia?/ R. Bibiloni, P. Perez, G. De Antoni// Anaerobe. 1999. — Vol. 5, N. 5. — P. 519−524.
  175. Billard P. Bioluminescence-based assay for detection and characterization of bacteria in clinical laboratories/ P. Billard, M.S. DuBow// Clinical Biochemistry. 1998.-Vol. 31, N. 1. — P. 1−14.
  176. Bjorck L. The lactoperoxadise system/ L. Bjorck// Natural Antimicrobial Systems. IDF. 41. Square Vergote, 1040. Brussels. — 1985. -P. 8−30.
  177. Blum S. Intestinal microflora and the interaction with immunocompetent cells/ S. Blum, S. Alvarez// Ant. Leevewen. 1999. — Vol. 76. — P. 199−205.
  178. Bulich A.A. A practical and reliable method for monitoring the toxicity of aquatic samples/ A.A. Bulich// Process Biochem. 1982. — Vol. 17. — P. 45−47.
  179. Bulich A.A. The luminescent bacterial toxicity test, its potential as an in-vitro alternative/ A.A. Bulich, K.K. Tung, G. Scheibner// J. Biolumin. Chemilum. -1990.-Vol. 5.-P. 71−78.
  180. Burton S.A. The bacterial bioluminescens test/ S.A. Burton, R. Dabbah// Pharmacopeial Forum. 1989. -N. 11. — P. 4812−4814.
  181. Callewaert R. Lactobacillus amylovorus DCE 471 is improved and stabilized by fed-batch fermentation/ R. Callewaert, L. De Vuyst// Appl. and Environ. Microbiol. 2000. — Vol. 66, N. 2. — P. 606−613.
  182. Calvert R.M. Gaged ATP-an internal calibration method for ATP bioluminescence assays/ R.M. Calvert, H.C. Hopkins// Lett. Appl. Microbiol.-2000. Vol. 30, N. 3 — P. 223−227.
  183. Casas I.A. Prebiotics, probiotics, antibiotics and autobiotics/1.A. Casas// Microb. Ecology Health and Disease. 1999. — Vol. 11, N. 2. — P. 108−109.
  184. Coconnier M.H. Antagonistic activity against Helicobacter infection in vitro and in vivo by the human L. acidophilus strain LB/ M.H. Coconnier, V. Lievin// Appl. and Environ. Microbiol. 1998. — Vol. 64, N. 11. — P. 4573−4580.
  185. Codita I. Rapid test for the detection of staphylococci by ATP-dependent bioluminescence/ I. Codita, C. Popesku// Roum. Arch. Microbiol. Immunol. 1996. — Vol. 55, N. 4 — P. 323−331.
  186. Collins M.D. Probiotics, prebiotics, and synbiotics: approaches for modulating the microbial ecology of the gut / M.D. Collins// Am. J. Clin. Nutr. 1999. -Vol. 69.-P. 1052−1057.
  187. Dunny G.M. Cell-cell signaling in bacteria/ G.M. Dunny, S.C. Winnas Wash. DC., ASM Press. — 1999.
  188. Dykers G.A. Selection and fitness in bacteriocin-producting bacteria/ G.A. Dykers, J.W. Hastings// Proc. Roy. Soc. London. 1997. — Vol. 264, N. 1382. -P. 683−687.
  189. Dyrset N. Feed supplement recovered from dairy wastewater by biological and chemical pretreatment/ N. Dyrset, E. Selmer-Olsen// J. Chem.Technol. and Biotechnol. 1998. — Vol. 73, N. 3. — P. 175−182.
  190. Ehrmann M.A. A gene cluster encoding plantaricin 1.25beta and other bacteriocin-like peptides in Lactobacillus plantarum TMW1.25/ M.A. Ehrmann,
  191. A. Remiger, V.G. Eijsink, R.F. Vogel// Biochim Biophys Acta. 2000. — Vol. 1490, N. 3.- P. 355−361.
  192. Eijsink V. Comparative studies of class Ha bacteriocins of lactic acid bacteria/ V. Eijsink, M. Skeie// Appl. and Environ. Microbiol. 1998. — Vol. 64, N. 9. — P. 3275−3281.
  193. Elli M. Growth requirements of Lactobacillus johnsonii in skim and UHT milk / M. Elli, R. Zink, R. Reniero, L. Morelli// Int. Dairy J. 1999. — Vol. 9, N.8. — P. 507−513.
  194. Elmer G.W. Probiotics: 'living drugs' / G.W.Elmer// Am. J. Health. Syst. Pharm. -2001.-Vol. 58, N. 12.-P. 1101−1109.
  195. Elmer G.W. Biotherapeutic Agents and Infection Diseases/ G.W. Elmer, L.W. Mc Farland, C.M. Surawicz. Human Press. — 1999. — 316 p.
  196. El Soda M. The esterolitic and lipolitic activities of lactobacillis/ M. El Soda, M. Korayem, N. Ezzat// Milchwissenschaft. 1986. — Vol. 41, N.6. — P. 353−355.
  197. EPS, Guidance Document on Control of Toxicity Test Precision Using Reference Toxicants/ Report EPS1/RM/12, August 1990, Environmental Protection, Conservation and Protection, Environment Canada. 1990. — 85 p.
  198. Ewe K. Effect of lactose, lactulose and bysacodyl on gastrointestinal transit studied by metal detector/ K. Ewe, B. Ueberschaer, A.G. Press// Aliment. Pharmacol. Ther. 1995. — Vol. 9, N. 1. — P. 69−73.
  199. Fabricant J.D. Bioluminescent strain of Escherichia coli for the assay of biocides/ J.D. Fabricant, J.H. Chalmers, M.W. Bradbuty// Bull. Environ. Contam. Toxicol. 1995. — Vol. 45, N. 2. — P. 90−95.
  200. Famularo G. Microecology, bacterial vaginosis and probiotics/ G. Famularo, M. Pieluigi// Med. Hypotheses. 2001. — Vol. 56, N. 4. — P. 365−378.
  201. Fuller R. Probiotics: the scientific basis/ R. Fuller// London, Chapman & Hall. -1992.
  202. Fuller R. Probiotics and prebiotics: microflora management for improved gut health/ R. Fuller, G.R. Gibson// Clin. Microbiol. Infect. 1998. — Vol. 4. — P. 477 480
  203. Gibson G.R. Regulatory effects of bifidobacteria on the growth of other colonic bacteria/ G.R. Gibson, C. McFarlan// J. Appl. Bacteriol. 1994. — Vol. 77, N. 4.
  204. Gibson G.R. Dietary modulation of the human gut microflora using the prebiotics oligofructose and inulin/ G.R. Gibson// J. Nutr. 1999. — Vol. 129, N.7.-P. 1438−1441.
  205. Gibson G.R. Selective stimulation of bi-fidobacteria in the human colon by oligofructose and inulin/ G.R. Gibson, E.B. Beatty, X. Wang, J.H. Cummings// Gastroenterology. 1995. — Vol. 108. — P. 975−982.
  206. Gibson G.R. Aspects of in vitro and in vivo research approaches directed toward identifying probiotics and prebiotics for human use/ G.R. Gibson, R. Fuller// J. Nutr. -2000. Vol. 130, N.2. — P. 391−395.
  207. Gibson G.R. Dietary modulation of the human colonic microbiota: introducing the concept of prebiotics/ G.R. Gibson, M.B. Roberfroid// J. Nutr. 1995. — Vol. 125.-P. 1401−1412.
  208. Gracia E. In vitro development of S. aureus biofilms using slime-producing variant and ATP-bioluminescence for automatic bacterial quantification/ E. Gracia, A. Fernandez// Luminescence. 1999. — Vol. 14, N. 1 — P. 23−31.
  209. Hastings J.W. Bacterial bioluminescence/ J.W. Hastings, K.H. Nealson// Ann. Rev. Microbiol. -1997. Vol. 31. — P. 549−595.
  210. Havell E. The role of the flora in cytokine responses/ E. Havell// Microb. Ecology Health and Disease. 1999. — Vol. 11, N.2. — P. 104.
  211. Holo H. Plantaricin W from Lactobacillus plantarum belongs to a new family of two-peptide lantibiotics/ H. Holo, Z. Jeknic, M. Daeschel, S. Stevanovic// Microbiology. 2001. — Vol. 147, N. 3. — P. 643−651.
  212. Huang Y. Acetate production from whey lactose using co-immobilized cells of homolactic and homoacetic bacteria in a fibrous-bed bioreactor/ Y. Huang, S. YangII Biotechnol and Bioeng. 1998. — Vol. 60, N. 4. — P. 498−507.
  213. Jake M. Evidens for the involvement of thiocyanate in the inhibition by Lactobacillus acidophilus/ M. Jake, B.J. Wood, D.R. Berry// Microbes. 1990. -Vol. 62.
  214. Jassim S. In vivo bioluminescence/ S. Jassim, A. Ellison, S. Denyer// J. Biolum. Chemilum. 1990.-N. 3.-P. 115−122.
  215. Juckett G. Prevention and treatment of traveler’s diarrhea/ G. Juckett// Am. Fam. Physician. 1999. — Vol. 60, N. l.-P. 119−124, 135−136.
  216. Kaegi E. Unconventional therapies for cancer: 3. Iscador. Task Force on Alternative Therapies of the Canadian Breast Cancer Research Initiative/ E. Kaegi// CMAJ. 1998. — Vol. 158, N. 9. — P. 1157−1159.
  217. Kagermeier-Gallaway A.S. International Committee on Systematic Bacteriology / A.S. Kagermeier-Gallaway/ Minutes of the meetings, 4 and 6 July 1994, Praque, Czech Republic// Int. J. Syst. Evol. Microbiol. 2000. — Vol. 50. -N. 3. -P. 1391−1392.
  218. Kailasapathy K.A. Survival and therapeutic potential of probiotic organisms with reference to Lactobacillus acidophilus and Bifidobacterium spp. l K.A. Kailasapathy, J. ChinII Immunol Cell Biol. 2000. — Vol. 78. — P. 80−88.
  219. Kaiser R.L.E. Photobacterium phosphoreum. Toxicity Data Index/ R.L.E. Kaiser, V.S. Palabrica// Water Poll. Res. J. Canada. 1991. — Vol. 26, N. 3. — P. 361−431.
  220. Kamel B.S. Fermented whole wheat flour and whey in food preparation/ B.S. Kamel// Process Biochem. 1985. — Vol. 20, N. 6. — P. 190−193.
  221. Kar T. Therapeutic properties of whey used as fermented drink/ Т. Kar, A.K. Misra// Rev. Microbiol. 1999. — Vol. 30, N. 2. — P. 163−169.
  222. Katouli M. Composition and diversity of intestinal coliform flora influence bacterial translocation in rats after hemorrhagic stress/ M. Katouli, T. BarkII Infect. Immun. 1994. — Vol. 62. — N. 11. — P. 4768−4774.
  223. Kirjavainen P.V., Gibson G.R. Healthy gut microflora and allergy: Factors influencing development of the microbiota // Ann. Med. 1999. — Vol. 31, No.4. — P. 288−292.
  224. Klebanoff SJ. Viricidal effect of Lactobacillus acidophilus! SJ. Klebanoff, RW. Coombs// J. Exp. Med., 1991. Vol. 174, N. 1.
  225. Kleesen В. Effects of inulin and lactose on fecal microflora, microbial activity, and bowel habit in elderly constipated persons/ B. Kleesen, B. Sykura, H.-J. Zunft, M. Blaut// Am. J. Clin. Nutr. 1997. — Vol. 65. — P. 1397−402.
  226. Korpela M.T. Recombinant Escherichia coli sensor strain for the detection of tetracyclines/M.T. Korpela, J.S. Kurittu, J.T. Karvinen// Anal. Chem. 70. 1998. -N. 6.-P. 4457−4462.
  227. Korschunov V.M. Treatment of Experimental Acute Radiation Disease/ V.M. Korschunov, V.V. Smeyanov// Contract Report 98−102, Bethesda, Maryland, USA. 1998.
  228. Kwan K.K. Mutatox test: A new test for monitoring environmental genotoxic agents/ K.K. Kwan, В.J. Dutka, S.S. Rao, D. Lui D// Environmental Pollution. -1990. Vol. 65, N. 3. — P. 323−332.
  229. Lee P.C. Batch and continuous cultivation of Anaerobiospirullum succiniproducens for the production of succinic acid from whey/ P.C. Lee, W.G. Lee// Appl. Microbiol, and Biotechnol. 2000. — Vol. 54, N. 1. — P. 23−27.
  230. Lewis C.B. Detection of bacteriocins produced by lactic acid bacteria/ C.B. Lewis, T.J. Montville// J. Microbiol. Methods. 1991. — Vol. 13.
  231. Lidbeck A. Lactobacilli, anticarcinogenic activities and human intestinal microflora/ A. Lidbeck// Eur. J. Cancer. Prev. 1992. — Vol. 1, N.5. — P. 341−353.
  232. Linko P. Biotechnology in whey valorization/ P. Linko// Food Industries and Environment. Int. Symp., Budapest, 1982. — P. 221−227.
  233. Luchansky J. Probiotic bifidobacterium strain, Wisconsin Alumni Research Foundation/ J. Luchansky, S. Tsai. N. 5 902 743 USA, МПК6 C12N 1/00, 1/20.- 1999.
  234. Maiorella B.L. Ethanol, biomass and enzyme production for whey waste abatement/ B.L. Maiorella, F. Castillo// J. Proc. Biochem. 1984. — Vol. 19, N. 4.-P. 157−161.
  235. McFarland L.W. Biotherapeutic Agents and Infection Diseases/ L.W. McFarland. Human Press. — 1999.
  236. Mc Farland L.V. Biotherapeutic agents: past, present and future/ L.V. Mc Farland, G.W. Elmer// Microecology Ther. 1995. — Vol. 23. — P.46−73.
  237. McGroarty J.A. Detection of lactobacillus substance that inhibits Escherichia colil J.A. McGroarty, G. Reid// Can. J. Microbiol. 1988. — Vol. 34.
  238. McNicol P.J. The effect of vaginal microbes on in vivo and in vitro expression of human papillomavirus 16 E6-E7 genes (ENG)/ P.J. McNicol, M. Paraskevas, F.B. Guijon// Cancer Detect. Prev. 1999. — Vol. 23, N. 1. — P. 13−21.
  239. Meighen E. Molecular biology of bacterial bioluminescence/ E. Meighen// Microbiol. Rev. 1991. — Vol. 55, N. 1. — P. 123−142.
  240. Messi P. Detection and preliminary characterization of a bacteriocin (plantaricin 35d) produced by a Lactobacillus plantarum strain/ P. Messi, M. Bondi, C. Sabia, R. Battini// Int. J. Food Microbiol. 2001. — Vol. 64, N. 1−2. — P. 193−198.
  241. Meyrath J. Biomass from whey/ J. Meyrath, K. Bayer// Economic Microbiology. London, 1979. — Vol. 4: Microb. Biomass / Ed. A.H. Rose. — P. 207−269.
  242. Minnock A. Photoinactivation of bacteria/ A. Minnock, D.I. Vernon// J. Photochem. Photobiol. В.: Biol. 1996. Vol. 32. — P. 159−164.
  243. Mlobeli N.T. Physiology and kinetics of Bifidobacterium bifidum during growth on different sugars/ N.T. Mlobeli, N.A. Gutierrez, I.S. Maddox// Appl. Microbiol, and Biotechnol. 1998. — Vol. 50, No. 1.
  244. Mogensen G. Functional aspects of pro- and prebiotics. A literature review on immune modulation and influence on cancer/ G. Mogensen, J. Rowland// Microb. Ecology Health and Disease. 2000. — Vol. 12, N. 2. — P. 40−44.
  245. Morris M. Bacterial vaginosis: a public health review/ M. Morris, A. Nicoll// Brit. J. Obstet. and Gynaecol. 2001. — Vol. 108, N. 5. — P. 439−450.
  246. Navarro L. Bacteriocin production by lactic acid bacteria isolated from Rioja red wines/ L. Navarro, M. Zarazaga, J. Sbenz, F. Ruiz-Larrea// J. Appl. Microbiol. -2000.-Vol. 88, N. l.-P. 44−51.
  247. Nieves B. Bacterial vaginosis/ B. Nieves// Anaerobe. 1999. — Vol. 4, N. 3−4-P. 343−345.
  248. O’Sullivan D.J. Screening of intestinal microflora for effective probiotic bacteria/ D.J. O’Sullivan// J.Agr. and Food Chem. 2001. — Vol. 49, N. 4. — P. 1751−1760.
  249. Ouwehand A. Prebiotics and probiotics: safety aspects and risk assessment/ A. Ouwehand, S. Salminen// Microb. Ecology Health and Disease. 1999. — Vol. 11, N. 2.-P. 109.
  250. Oxoid Manual of Culture Media, Ingredients and other Laboratoiy // Publ. by OxoidLim. 1981. — P.ll.
  251. Podoprigora G.I. Stimulatory effect of Gram-Positive and Gram-Negative probiotics on the host mono-nuclear phagocyte system in gnotobiotic mice/ G.I. Podoprigora, L.B. Comunian// Microb. Ecology Health and Disease. 1999. -Vol. 11, N. 2.-P. 113−114.
  252. Ratcliffe B. The potencial for beneficial manipulation of the gut microflora by dietary means/ B. Ratcliffe, J. McMillan// BNF Nutr. Bull. 1999. — Vol. 24, N. 87.-P. 82−90.
  253. Reid G. Lactobacillus therapies/ G. Reid, A.W. Bruce, H.J. Busscher, H. Van der Mei. Urex Biotech, Inc. N. 08/867 002, A61K 35/74. — 2000.
  254. Ribo M.J. Photobacterium phosphoreum Toxicity Bioassay/ M.J. Ribo, R.L. Kaizer// Toxic. Asses. Int. Quart. 1987. — Vol. 2. — P. 305−323.
  255. Roberfroid M.B. Prebiotics and probiotics: are they functional foods?/ M.B. Roberfroid // J. Clin. Nutr. 2000. — Vol. 71, N. 6. — P. 1682−1687.
  256. Rowland I.R. The effects of transgalactosylated oligosaccharides on gut flora metabolism in rats associated with a human faecal microflora/ I.R. Rowland, R. Tanaka// J. Appl. Bacteriol. 1993. — Vol. 74. — P. 667−74.
  257. Rowland J. Gut microflora metabolism what can the microbes do?/ J/ Rowland// Microb. Ecology Health and Disease. — 1999. — Vol. 11, N. 2. — P. 105−106.
  258. Ruil L. Interference of Short Chain Fatty Acids Produced by Anaerobe with endocellular Pathogens: an Experimental model/ L. Ruil, A. Arzese// Abstract
  259. Воос. XIX Intern. Congress Microb. Ecology and Disease. Rome, September 1821, 1994.
  260. Sablon E. Antimicrobial peptides of lactic acid bacteria: mode of action, genetics and biosynthesis/ E. Sablon, B. Contreras, E. Vandamme// Adv Biochem Eng Biotechnol. 2000. — Vol. 68. — P. 21−60.
  261. Sarkis GJ. L5 luciferase reporter mycobacteriophages: a sensitive tool for the detection and assay of live mycobacteria/ GJ. Sarkis, W.R. Jakobs, G.F. Hatfull// Mol. Microbiol. 1995. — Vol. 15, N. 6. — P. 1059−1067.
  262. Scudra L. Studies on whey fermentation using lactic acid bacteria L. acidophilus and L. bulgaricus/ L. Scudra, A. Blija// Acta biotechnol. 1998. — Vol. 18, N. 3-P. 277−288.
  263. Selan L. Reliability of bioluminescence ATP assay for detection of bacteria/ L. Selan, F. Berlutty, C. Passariello// Ibid. 1992. — Vol. 30, N. 7. — P. 1739−1742.
  264. Senthuran A. Lactic acid production by immobilized Lactobacillus casei in recycle batch reactor: A step towards optimization/ A. Senthuran, V. Senthuran // J. Biotechnol. 1999. — Vol. 73, N. 1. — P. 61−70.
  265. Shiffrin E.J. Immunomodulation of human blood cells following the ingestion of lactic acid bacteria/ E.J. Shiffrin // J. Dairy Sci. 1995. — V.78, N.3. — P. 491 497.
  266. Shortt C. Lactobacillus casei Shirota — a biotherapeutic agent/ C. Shortt, T. Saco// Microb. Ecology Health and Disease. 1998. — Vol. 10, N.2. — P. 118 119.
  267. Stafford D.A. Detecting microbes by bioluminescence/ D.A. Stafford. N. 6 440.2, C12Q G01N 21/76. — 2000.
  268. Stanley P.E. Overview of application of bioluminescence/ P.E. Stanley// Bioluminescence and Chemiluminescence. Acad. Press. N.Y. 1981. — P. 275 282.
  269. Steinberg S.M. A review of environmental application of bioluminescence measurements/ S.M. Steinberg, L.G. Poziomek, W.H. Engelmann// Chemosphere. 1995. — Vol. 30. — P. 2155−2197.
  270. Todorov S. Influence of growth medium on bacteriocin production in Lactobacillus plantarum ST31/ S. Todorov, B. Gotcheva// Biotechnol. and Biotechnol. Equip. 2000. — Vol. 14, N. 1. — P. 50−55.
  271. Tomas M. Hotton. The vaginal flora and urinary tract infections/ T. Hotton, W. Stamm/ Ed. Mobley, HLT Warron J.W. Washington ASM press, 1996. — XIV. -P. 67−86.
  272. Toshio M. Antimicrobial Activities of Organic Acids Determined by Minimum inhibitory concentrations at different ph ranged/ M. Toshio, Y. Toshihiro, M. Akihiro// J. Jap. Soc. Food Sci. Technol. 1994. — Vol. 41, N. 10.
  273. Tsunataro K. Method of increasing interferon production in humans. Institut Pasteur De Kyoto, Nitto Pharmaceutical Ind., Ltd./ K. Tsunataro. N. 5 662 900 USA, МПК6 AO IN 63/00, C12N 1/20. — 1997.
  274. Turner D.L. Solution structure of plantaricin C, a novel lantibiotic/ D.L. Turner, L. Brennan, H.E. Meyer, C. Lohaus// Eur. J. Biochem. -1999. Vol. 264, N. 3. -P. 833−839.
  275. Ulitzur S. Established technologies and new approaches in applying luminous bacteria for analytical purposes/ S. Ulitzur// J. of Bioluminescence and Chemiluminescence. -1997. Vol. 12, N. 4. — P. 179−192.
  276. Vallino J.J. Modeling bacterial utilization of dissolved organic matter: Optimization replaces Monod growth Kinetics/ J.J. Vallino, C.S. Hopkinson, J.E. Hoblie// Limnol. Oceanogr. 1996. — Vol. 41, N. 8. — P. 1591−1609.
  277. Van Kraaji C. Lantibiotics: Biosyntesis, mode of action and application/ C. Van Kraaji, M. de Vos Willem// Natur. Prod. Repts. 1999. — Vol. 62, N. 3. — P. 267 277.
  278. Van Loo. Functional food properties of non-digestible oligosaccharides: a consensus report from the ENDO project (DGXII AIRII-CT94−1095)/ Van Loo, J.A. Cummings, J.A. Delzenne, N.A. Englyst// Br. J. Nutr. 1999. — Vol. 81, N. 2.-P. 121−132.
  279. Vassu Т. Lactic acid bacteria used as probiotics-isolation, preservation and biomass obtaining/ T. Vassu, E. Sararman// An. Univ., Bucuresti. Biol. — 1997. — Vol. 46.-P. 87−91.
  280. Waters R. Lactobacillus reuterim and intestinal integrity/ R. Waters, N. Carbajai, I. Casas// Microb. Ecology Health and Disease. 1999. — Vol. 11, N. 2. — P. 126.
  281. Wetzel K. Stress response in Lactococcus lactis and Streptococcus thermophilics induced by carbon starvation/ K. Wetzel, M. Menzel, K.J. Heller// Kiel, milchwirt. Forschungsber. 1999. — Vol. 51, N. 4. — P. 319−332.
  282. Wiedermann U. Increased translocation of Escherichia coli and development of artrithis in vitamin A-deficient rats/ U. Wiedermann, L. A. Hanson// Infect. Immun. 1995. — Vol. 63, N. 8. — P. 3062−3068.
  283. Wilson M. Bacterial perturbation of cytokine networks/ M. Wilson, R. Seymour, B. Henderson// Ibid. 1998. — Vol. 66, N. 6. — P. 2401−2409.
  284. Woodward C. Drug treatment of common STDs: Part II. Vaginal infections, pelvic inflammatory disease and genital warts/ C. Woodward, M.A. Fisher// Am. Fam. Physician. 1999. — Vol. 60, N. 6. — P. 1716−1722.
  285. Yamamoto Y. Structural study on an exocellular polysaccharide produced by Lactobacillus! Y. Yamamoto, S. Murosaki, R. Yamauchi// Carbohydr. Res. -1994.-Vol. 261, N. 1.
  286. Zlotta A.R. Biological response modifiers for the treatment of superficial bladder tumors. (ENG- includes abstract)/ A.R. Zlotta, C.C. Schulman// Eur. Urol. 2000. — Vol. 37, N. 3. — P. 10−15.
Заполнить форму текущей работой

Заказал и сдал!