Морфофункциональные особенности лимфоцитов при апластической анемии у больных разных возрастных групп

Актуальность проблемы Апластическая анемия (АА) у взрослых — тяжёлое приобретенное заболевание системы крови, известное специалистам более века. Клинические проявления болезни изучены достаточно хорошо (Ф.Э. Файнштейн, 1965, А. И. Воробьев, 1985, K.M. Абдулкадыров, 1995). Более того, в последние два десятилетия появились эффективные программы лечения, позволяющие получить положительные результаты и длительные гематологические ремиссии, вплоть до выздоровления, при этой тяжелой болезни. Среди существующих методов лечения апластической анемии лидирует иммуносупрессивная терапия (ИСТ). С ее применением выживаемость больных достоверно увеличилась и иммуносупрессивные средства — антитимоцитарный (АТГ), антилимфоцитарный (АЛГ) глобулины и циклоспорин, А (ЦСА) в настоящее время считаются препаратами первой линии в лечении апластической анемии. Несмотря на обнадеживающие результаты терапии апластической анемии иммунодепрессантами, число летальных исходов остается еще достаточно высоким, составляя до 30−40% (Lauria, 1992, Р. Н. Шишина, 1998) и более. Поэтому сохраняется актуальность дальнейших исследований механизмов развития болезни и поиска патогенетических подходов к ее лечению.

Другим актуальным вопросом являются особенности клиники и лечения АА у пациентов после 60 лет. Известно, что у них нередко могут возникать лечебные трудности из-за наличия сопутствующих заболеваний и физиологического снижения компенсаторных возможностей организма. Этой проблеме посвящены лишь единичные работы.

В связи с этим, изучение клинико-лабораторных данных и результатов лечения АА у пациентов разных возрастных групп, определение взаимосвязи между состоянием иммунокомпетентных клеток и клиническими проявлениями болезни, несомненно, будет способствовать эффективности терапии в целом при этом тяжелом заболевании.

Поскольку основным объектом современных программ ИСТ при АА являются лимфоциты и именно на них направлено действие иммуносупрессантов, мы сочли, что с теоретической и практической точки зрения, важно более полно и многофакторно изучить эти клетки и оценить их роль в механизмах развития болезни.

Цель настоящей работы — совершенствование диагностики, прогнозирования и лечения АА на основе комплексного изучения морфофункционального состояния лимфоцитов периферической крови у больных различных возрастных групп.

Задачи исследования.

1. Изучить морфологические, цитохимические и иммунологические параметры лимфоцитов периферической крови в периоде развернутых клинических проявлений апластической анемии до лечения с учетом тяжести болезни и возраста больных.

2. Исследовать морфометрические характеристики лимфоцитов при апластической анемии у больных различных возрастных групп в острый период болезни.

3. Провести сравнительное изучение лечебной эффективности программ монои комбинированной иммуносупрессивной терапии при апластической анемии с учетом возраста больных и морфоцитохимических, иммунологических и морфометрических особенностей лимфоцитов периферической крови в острый период болезни.

4. Определить качественную и количественную информативность комплекса морфо-цитохимических параметров лимфоцитов при апластической анемии и оценить их вклад в совершенствование диагностики, лечения и прогноза заболевания.

Научная новизна работы Впервые проведено комплексное изучение лимфоцитов периферической крови при АА у больных различных возрастных групп, включающее морфологические, цитохимические и иммунологические параметры с учетом тяжести заболевания. Выявлена значительная морфофункциональная дефектность лимфоидных клеток, которая коррелировала со степенью тяжести заболевания.

Показано, что из исследованных нами цитохимических реакций определение содержания гликогена и активности кислой фосфатазы наиболее адекватно отражает уровень функционального состояния лимфоцитов. Впервые проведен морфометрический анализ лимфоцитов у больных АА разных возрастных групп на отечественном анализаторе клеточного изображения АСПЕК.

Показано, что наиболее информативным морфометрическим параметром является площадь ядра лимфоцитов, которая может рассматриваться как фактор, ассоциирующийся с течением и исходом АА.

Определены и систематизированы особенности морфологических, цитохимических и иммунологических параметров периферической крови при АА у больных после 60 лет.

Подтверждено, что комбинированная ИСТ является более эффективным методом лечения приобретенной АА у взрослых и имеет преимущество перед монотерапией.

Научно-практическая значимость работы Установлено, что для дискриминации лимфоцитов больных апластической анемией различной степени тяжести информативным морфометрическим параметром является площадь ядра клетки. Информативность параметра не зависит от возраста больных.

Оценка распределения лимфоцитов по морфометрическим параметрам и выделение модальных классов клеток, явилась дополнительным тестом тяжести течения апластической анемии и определила более адекватный и дифференцированный выбор иммуносупрессивной терапии.

Практическое внедрение полученных результатов Настоящее исследование выполнено в Российском научно-исследовательском институте геронтологии Федерального Агентства по здравоохранению и социальному развитию в рамках темы НИР: «Совершенствование свойств антилимфолина с целью повышения его лечебной эффективности в качестве иммуномодулятора и иммунодепрессанта у больных разных возрастных групп» (1995;2000, № 602/021/019).

Полученные результаты внедрены в практику гематологической клиники Российского научно-исследовательского института геронтологии. Разработан протокол по применению отечественного АТГ и ЦСА в лечении больных АА.

Написано и утверждено Министерством здравоохранения РФ пособие для врачей «Применение программ иммунотерапии при миелодепрессиях», М., 2000 г.

Апробация работы Основные положения работы представлены на научных конференциях:

Российский национальный конгресс «Человек и лекарство», Москва, 16−20 апреля 1996; Всероссийский съезд гематологов и трансфузиологов, Санкт-Петербург, «Актуальные вопросы гематологии и трансфузиологии», 28 ноября 1996; Конференция «Актуальные вопросы диагностики, лечения и профилактики наиболее распространенных заболеваний крови»,.

ТюменьД5−16 января, 2002; VI Всероссийская научная конференция с международным участием «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге», 20−23 мая, 2002; П Международный конгресс «Эндоэкологическая медицина», Халкидики, Греция, 20−25 мая, 2002, Юбилейная конференция «Актуальные проблемы трансфузиологии и гематологии, Санкт-Петербург, 18−20 июня, 2002; Научно-практическая конференция «Заболевания крови у пожилых людей: диагностика, лечение, особенности иммуносупрессии», Москва, 25 марта, 2004; Конференция «Актуальные вопросы гематологии и трансфузиологии», Санкт-Петербург, 8−10 июня, 2004; Научно-практическая конференция «Медицина для пожилых», Москва, 27−29 сентября, 2004.

Фрагменты работы неоднократно докладывались на Ученых Советах института (октябрь 2002 г., апрель и октябрь 2003, апрель 2004 г.).

Результаты диссертации обсуждены на заседании Ученого Совета Российского НИИ геронтологии 30 ноября 2004 г. и межлабораторной конференции 1 ноября 2005 г.

Публикации По материалам диссертации опубликовано 14 научных работ, одно пособие для врачей.

Объем и структура диссертации Диссертация изложена на 146 стр. машинописного текста. Работа состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, результатов собственных исследований, заключения, выводов. Библиографический указатель включает 85 отечественных и 85 иностранных источников литературы. Диссертация иллюстрирована 41 таблицами, 21 рисунками.

129 Выводы.

1. Проведенный комплекс исследований выявил морфоцитохимический атипизм лимфоцитов периферической крови при апластической анемии (острая фаза болезни, до лечения) у больных во всех возрастных группах.

2. Выявлено, что частота морфологических дефектов в лимфоидных клетках у больных в возрасте 16−59 лет в 10 раз, а после 60 лет почти в 20 раз превышали нормальные пределы.

3. Обнаружено, что в период развернутых клинических проявлений апластической анемии независимо от возраста содержание гликогена в лимфоцитах увеличено в 3 раза, а активность кислой фосфатазы снижена в 2 раза по сравнению с нормой.

4. Установлено, что для дискриминации лимфоцитов больных апластической анемией различной степени тяжести информативным морфометрическим параметром является площадь ядра клетки. Информативность параметра не зависит от возраста больных.

5. Высокие значения частоты морфологических дефектов, содержания полисахаридов и площади клеточных ядер лимфоцитов с низкой активностью гидролаз ассоциируются с неблагоприятным течением заболевания и неэффективностью иммуносупрессивной терапии.

6. Оценка распределения лимфоцитов по морфометрическим параметрам и выделение модальных классов клеток, явилась дополнительным тестом тяжести течения апластической анемии и определила более адекватный и дифференцированный выбор иммуносупрессивной терапии.

Практические рекомендации.

1. Разработана методология оценки распределения лимфоцитов (в мазках из лейкоконцентрата периферической крови) по морфометрическим параметрам и выделения модальных классов клеток в качестве дополнительного теста определения тяжести течения апластической анемии.

2. Проведенные исследования показали, что морфологические параметры лимфоцитов периферической крови могут быть использованы при мониторинге ответа больных АА на проводимое лечение.