Электрические свойства водоросли Chlorella pyrenoidosa в оценке действия пентахлорфенола на функциональное состояние клеток
В числе наиболее перспективных методов исследования следует отметить пока слабо изученное поведение клеток водорослей при прохождении через них переменного электрического тока в зависимости от его частоты, которое сводится к регистрации и анализу их электрических свойств в широком диапазоне частот. Электрические свойства в общем случае определяются двумя основными параметрами клеток… Читать ещё >
Содержание
- I. ВВЕДЕНИЕ
- II. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
- 2. 1. Загрязнение экосистем фенольными соединениями и их взаимодействие с водорослями
- 2. 2. Проблемы биотестирования и мониторинга фенольного загрязнения пресных вод
- 2. 3. Электрические свойства клеток как способ оценки функционального состояния водорослей
- 2. 4. Изученность вопросов оценки функционального состояния водорослей по их электрическим свойствам
- 2. 5. Влияние фенольных соединений на фотосинтетическую активность зеленых водорослей
- Цель и задачи исследования
- III. ОБЪЕКТ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
- 3. 1. Объект исследования
- 3. 2. Методы исследования. культуры водоросли С. pyrenoidosa в широком диапазоне ^ частот
- 4. 1. 1. Выбор фазы развития культуры для использования водоросли в качестве тест-объекта
- 4. 1. 2. Частотная зависимость электрических параметров клеток и коэффициент поляризации
- 4. 1. 3. Импедансная диаграмма в комплексной плоскости
- 4. 2. Электрические свойства клеток водоросли С. pyrenoidosa при действии ингибиторов метаболизма
- 4. 2. 1. Электрические свойства клеток водоросли при действии 2,4® динитрофенола
- 4. 2. 2. Электрические свойства клеток водоросли при действии диурона
- 4. 3. Электрические свойства клеток водоросли С. pyrenoidosa при действии пентахлорфенола
- 4. 3. 1. Частотная зависимость электрических параметров клеток водоросли и коэффициент поляризации в присутствии пентахлорфенола
- 4. 3. 2. Комплексная импедансная диаграмма суспензии клеток водоросли при действии пентахлорфенола
- 4. 4. Влияние действия пентахлорфенола на фотосинтетическую активность водоросли С. pyrenoidosa по характеристикам флуоресценции
- VI. ВЫВОДЫ
Электрические свойства водоросли Chlorella pyrenoidosa в оценке действия пентахлорфенола на функциональное состояние клеток (реферат, курсовая, диплом, контрольная)
В ближайшем будущем пресная вода станет не менее значимым лимитирующим развитие человечества фактором, чем энергетические ресурсы планеты. Сохранение или улучшения качества воды в естественных и искусственных водоемах при современном уровне антропогенного загрязнения водных экосистем крайне актуально для Российской Федерации, богатейшей в мире по запасам пресной воды (Рыбальский, 1993; Ваганов и др., 2002). Глобальное загрязнение особенно опасно для пресных вод, поскольку они составляют около 3% от общих запасов воды на планете и являются наиболее пригодными для использования в промышленных и бытовых целях (Израэль и др., 1991; Кожова, Бейм, 1993; Галазий и др., 1995).
Загрязнение пресных вод промышленными стоками, содержащие в зависимости от используемых технологий различные фенольные соединения (Ф), такие как фенол, бутилфенол, дифенилпропан, хлори нитрофенолы, а также и пестициды с фенольными ядрами, нитрофенолы, является наиболее распространенным (Pentachlorophenol, 1987; Корте и др., 1997; Фёдоров, Яблоков, 1999). Некоторые из хлорфенольных соединений, например, пентахлорфенол (ПХФ) обладают ярко выраженным бактерицидным, фунгицидным, гербицидным и альгицидным действием. Эти свойства определяет область практического применения ПХФ для защиты изделий из дерева, консервирования кожи и текстиля, средства борьбы с термитами, пестицида и дефолианта, а в качестве гербицида ПХФ до начала 1970;х г. г. использовался на рисовых полях в Японии (Pentachlorophenol, 1987; Корте и др., 1997). Следует также учитывать образование ряда хлорированных соединений, а также и ПХФ при широко распространенном хлорировании питьевой воды и промышленных стоков на очистных сооружениях (Стом и др., 1990; Strobel, Deiter, 1990; Руководство. 1994).
В целях защиты поверхностных вод от отрицательного загрязнения необходима регламентация их состава и количества. Для этого используют приемы экспериментальной токсикометрии: подбор соответствующих тест-объектов и тест-функций оценки опасности вод, по данным которых разрабатываются и обосновываются величины предельно-допустимых концентраций (ПДК) (Рыбальский и др., 1993; Aunaas, Zachariassen, 1994; Булгаков, 2002).
Фотосинтез — основной процесс новообразования органического вещества в водоемах за счет энергии НАДФН и АТФ. Активность фотосистемы 2 (ФС 2) определяет первичную продукцию водорослей (Oquist et al., 1982; Baker et al., 1989; Маторин, Венедиктов, 1990; Krall, Gerald, 1992; Маторин, 1993). Известно, что проницаемость клеток растений находится в тесной связи с энергообеспеченностью клетки, а АТФ является посредником между фотосинтетическими реакциями и транспортными процессами в мембранной системы (Spanswick, 1972; Альварес и др., 1982).
Взаимодействие Ф как и гербицидов с клетками находятся в зависимости от процессов поглощения, связанных со спецификой проницаемости внешних мембран и отражаются в изменениях функциональных реакций водорослей, на чем и основано использование этих показателей состояния микроводорослей, в частности хлорококковых, для целей биологического мониторинга. Микроводоросли могут служить биомаркерами (или биоиндикаторами) при острых или долговременных токсических воздействий (Repetto et al., 2001; Булгаков, 2002; Podola et al., 2004).
Вопросы влияния Ф или ФС 2 — гербицидов на водоросли — основу функционирования водных экосистем — исследованы недостаточно, что относится и к высокотоксичному ПХФ — компоненту стоков и пестициду. Работы проводили в основном с фенолом, не учитывая активности промежуточных продуктов окисления Ф, ФС 2 — гербицидов и рассматривали, как правило, их влияние на рост численности клеток и фотосинтез. Недостаточно изучены начальные процессы взаимодействия химического загрязнителя с клетками водорослей, в частности с внешним мембранным комплексом. В целях биотестирования применяется оценка функционирования клеточных мембран с помощью микроэлектродных методов (Юрин и др., 1979; Воробьёв, Мусаев, 1979; Воробьёв, 1980; Плеханов, Максимова 1997; Плеханов, 1999). Однако, крайне трудно выбрать те функциональные реакции водорослей, которые бы объективно и специфически отражали влияние Ф на водоросли, позволяли использовать их для токсикометрии Ф и совершенствования нормативных величин ПДК.
В настоящее время наблюдается стремление к использованию высокочувствительных откликов биосистем на клеточном и субклеточном уровнях вплоть до специфических мембранных структур и отдельных биохимических реакций (Aunaas, Zachariassen, 1994; Степанова и др., 1998). Это связано с ростом требований к нормированию содержания загрязняющих веществ в биологических объектах, а также с необходимостью определения механизмов их токсического действия (Юрин, 2002; Yen et al., 2002; Huang et al., 2003).
В числе наиболее перспективных методов исследования следует отметить пока слабо изученное поведение клеток водорослей при прохождении через них переменного электрического тока в зависимости от его частоты, которое сводится к регистрации и анализу их электрических свойств в широком диапазоне частот. Электрические свойства в общем случае определяются двумя основными параметрами клеток сопротивлением R (проводимостью с) и ёмкостью С (диэлектрической проницаемостью е), величины, которых зависят от частоты электрического поля и состояния внешних мембран (Шван, 1963; Pethig, Kell, 1987; Келл, 1992; Markx, Davey, 1999; Grimnes, Martinsen, 2000). В отличие от микроэлектродных методов, измерение электрических параметров не повреждает клетки, в связи с чем, позволяет изучать клетки без нарушения их основных функций. Зависимость электрических свойств от частоты позволяет путем выбора соответствующих диапазонов измерений и исследуемых параметров провести детальный анализ функциональных характеристик клеток водорослей.
В настоящей работе представлены результаты разработки метода измерения электрических свойств и поиска тех чувствительных функциональных параметров зеленых водорослей, которые связаны с жизнеспособностью и состоянием главного барьера проницаемости клеток, при действии Ф, в частности ПХФ. Исследование направлено на объективную оценку физиологических эффектов и последствий влияния ПХФ на водоросли в целях совершенствования методов биотестирования и биологического мониторинга водных экосистем.
II. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
2.1. Загрязнение поверхностных вод феиольными соединениями и их взаимодействие с водорослями
Основными представителями среди токсических органических загрязнений водоемов являются Ф, которые присутствуют в сточных водах самых различных предприятий, например, нефтехимических, органического синтеза, переработки древесины, лакокрасочной и фармацевтической (Флёров, 1973; Харлампович, Чуркин, 1974; Корте и др., 1997). Попадая в водоемы со сточными водами техногенные Ф вовлекаются подобно их природным аналогам, в естественный круговорот веществ, в связи с чем исследование их взаимодействия с водорослями представляет особенный интерес, поскольку оно напрямую связано с возможностями самоочищения, а также с особенностями функционирования водорослей в условиях загрязнения.
Сточные воды лакокрасочной промышленности содержат фенол, бутилфенол, дифенилпропан, а-нафтол, нитрофенолы (Корте и др., 1997). При производстве пестицидов в стоках присутствуют хлори нитрофенолы, пестициды с фенольными ядрами являются источниками Ф в водоёмах (Мельников и др., 1977). В стоках красильного производства присутствует 1,4-бензохинон в количествах 300−800 мг/л (Thielemann,
1974). Резорцин характерен для сточных вод производства лекарственных препаратов, нефтехимических заводов (Грушко, 1976). Основным источником поступления Ф и других органических веществ в водоёмы являются сточные воды целюлозо-бумажных комбинатов (ЦБК) (Лейте,
1975). Древесина исходно содержит водорастворимые Ф — флавоноиды, оксикоричные кислоты и ряд других (Блажей, Шутый, 1977). Один из главных органических компонентов стоков ЦБК с сульфатным способом варки целлюлозы — лигнин и фенольные продукты его деструкции. Лигнин — это сложный фенолсодержащий полимер, в виде которого в стоки уходит до 30% обрабатываемой древесины (Стом и др., 1990). В продуктах деструкции лигнина, образующихся при варке целлюлозы обнаружены гваякол, пирокатехин, 4-метилпирокатехин, фенол, крезолы, ванилиновая, уксусная, n-оксибензойная кислота, протокатеховый и оксикоричный альдегиды и ряд других (Непелин, 1963). В сточных водах Байкальского ЦБК лигнин находят во взвесях в концентрации 4 мг/л и в растворе — 20 мг/л (Стом и др., 1990). При деструкции лигнина в водоёме постоянно и длительное время образуются токсические продукты — Ф, спирты, органические и жирные кислоты, меркаптаны, кетоны (Грушко, 1976). Нелетучие Ф — второй по объёмам органический компонент стоков ЦБК (411 мг/л), почти половина из которого составляет плохо метаболизируемый гваякол (Стом и др., 1974). Летучие Ф в водоёмах окисляются преимущественно биохимически, а окислительная трансформация многоатомных Ф идёт в основном путем автоокисления (Роговская, 1972). Для производств, где отбеливание целлюлозы осуществляется с применением хлора (Байкальский ЦБК, Котласский ЦБК и другие), наблюдали повышенное содержание хлорированных Ф до 20 соединений.
Некоторые из хлорфенольных соединений используются в качестве гербицидов, в том числе и ПХФ. Собственно ПХФ не аккумулируется по трофической цепи, но его производные, например, тетрахлоргваякол, накапливаются в клетках планктона. В водной среде хлорфенолы под влиянием бактерий или действием света разлагаются. Токсическое действие ПХФ наиболее эффективно сохраняется в почвах на протяжении
1−3-х месяцев, тогда как в водной среде значительно дольше (Мельников и др., 1977; Pentachlorophenol, 1987; Корте и др., 1997).
Нормы сброса стоков рассчитываются в надежде на их многократное разбавление и большую ассимиляционную емкость водоемов (Кожова, Бейм, 1993). Однако, непрерывность процесса загрязнения, длительное разрушение отдельных органических компонентов, например лигнина, трансформация, миграция в экосистемах заставляет искать возможности биотестирования, прогнозирования последствий загрязнения для продукционных процессов в водоемах и исследования механизмов действия отдельных компонентов стоков.
Основным способом освобождения стоков от Ф является биологическая очистка, благодаря которой из стоков удаляется до 97% Ф, причём главным образом в прудах-аэраторах (Meinck, 1970; Черноусов, 1972). Большое значение в биологической очистке стоков имеют представители фитопланктона. В основном это хлорококковые, эвгленовые и вольвоксовые водоросли, менее существенна роль диатомовых и цианобактерий (Афанасьева, Телитченко, 1980). В литературе имеются сведения о том, что одноклеточные водоросли, в частности рода Chlorella, способствуют дефеноляции сточных вод (Костяев, 1972, 1975; Werner, Pawlitz, 1978), в том числе и путем активного поглощении Ф клетками хлореллы (Лукина, 1972). Ранее существовало мнение, что водоросли не способны разрушать Ф, а могут лишь только замедлять или ускорять его деструкцию через влияние на фенол-разрушающие бактерии. При достаточном количестве биогенных элементов, — когда водоросли не подавляют жизнедеятельность бактерий в результате конкуренции за биогены, — кислород, продуцируемый водорослями, стимулирует деятельность аэробных фенолразрушающих бактерий. Однако при этом на
17 видах водорослей с использованием альгологически чистых культур установлено наличие стимулирующих и ингибирующих рост концентраций фенола, причем наиболее устойчивыми оказались хлорококковые водоросли (Костяев, 1972, 1975). Несмотря на это альгицидное действие фенола связывается лишь с продуктами их распада под действием бактерий.
Возможно, что Ф по аналогии с другими ксенобиотиками, окисляются в клетках водорослей пероксидазами с участием цитохрома Р-450, обнаруженного у растений и цитохрома Ь-5 (Арчаков, 1975). Вопрос о ферментах, разрушающих Ф в растениях, в настоящее время изучен не до конца. Более распространенным у водорослей принято считать окисление Ф экзогенного происхождения фенолоксидазами (Стом и др., 1974; Hoist, Youpp, 1976; Стом, 1982). Эндогенные Ф в водной среде могут метаболизироваться водорослями и другими гидробионтами за счет трансформации ферментными системами, в основном оксидазного типа (Минаева, 1978; Котелевцев, 1997).
VI. выводы
1. Разработана методика определения электрических свойств культуры водоросли Chlorella в широком диапазоне частот и анализа данных для оценки жизнеспособности клеток микроводорослей, проницаемости внешних мембран и общего уровня метаболизма. Установлено наличие Р-дисперсии для клеток С. pyrenoidosa в области частот 1 кГц-10 МГц.
2. Выполнена экспериментальная проверка возможностей и показана адекватность разработанного метода исследования электрических свойств культур микроводорослей с помощью классических ингибиторов метаболизма — 2,4-ДНФ и ДХММ.
3. Максимальная функциональная активность клеток культуры по электрическим параметрам проявляется на 5−7 сут. роста культуры, тогда как по фотосинтетической активности — на 3−5 сут., что указывает на отставание по времени изменений энергозависимых параметров клеток, определяемых по их электрическим свойствам, по отношению к световым процессам фотосинтеза и определяет оптимальную фазу развития культуры при использовании водоросли как тест-объекта.
4. В концентрациях 0,1−1,0 мМ ПХФ-Na вызывал уменьшение величины Rs суспензий клеток водоросли С. pyrenoidosa только на низких частотах. Повышение концентрации ПХФ-Na до 10 мМ приводило к снижению величины Rs как на высоких, так и низких частотах, сопровождающееся изменением характера дисперсионной кривой. Величина коэффициента поляризации Кп при этом снижалась от 2,56±0,05 у интактных клеток до 2,34±0,07 при 1,0 мМ и до 1,83±0,05 при 10 мМ ПХФ-Na. Полученные результаты указывают на увеличение проницаемости внешнего мембранного комплекса и снижение жизнеспособности клеток.
5. Использование импедансной диаграммы в анализе действия ПХФ-Na на клетки культуры водоросли С. pyrenoidosa показало что в концентрациях 0,1−1,0 мМ ПХФ-Na вызывает изменение только величины сопротивления клеток RK суспензии, тогда как сопротивление межклеточной среды RMK остаётся неизменным. При увеличении концентрации ПХФ-Na до 10 мМ снижается величина сопротивления как самих клеток RK, так и межклеточной среды RMK. Это является свидетельством нарушения барьерных функций внешнего мембранного комплекса и снижения жизнеспособности клеток.
6. Судя по скорости выделения кислорода, ПХФ-Na уже в концентрации 0,001 мМ подавляет фотосинтетическую активность водоросли С. pyrenoidosa. Исходя из измерений характеристик флуоресценции, ПХФ-Na только при высоких концентрациях — от 0,01 мМ и более вызывает ингибирование ЭТ и подавление активности ФС 2.
7. Анализ токсических эффектов и возможных путей воздействия ПХФ-Na на клетки хлорококковых водорослей по электрическим параметрам и флуоресценции Хл показал возможность их использования в целях биотестирования. При этом становится доступным анализ действия ПХФ-Na как на начальные процессы преобразования поглощенной энергии, так и на энергозависимые параметры, связанные с состоянием внешних мембран клеток.
У. ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Определение опасности химических загрязнителей для биологических объектов в принипе сводится к определению минимально недействующих и максимально допустимых концентраций этого вещества. В этих целях используются тест-объекты, в частности лабораторные культуры пресноводных зеленых микроводорослей, ответные реакции которых на действие исследуемого вещества является количественным и качественным критерием оценки его токсичности. Особенно часто в качестве тест-объекта применяются водоросли Chlorella благодаря их высокой чувствительности к токсикантам и методической несложности проведения отдельных тестов.
Методы оценки токсичности с использованием тест-объектов часто бывают как недостаточно точными и специфическими, так и излишне трудоёмкими. Вместе с этим, для успешной разработки и адекватного применения таких методов необходимо детально представлять общие механизмы токсического действия на клеточном уровне. Поскольку большинство токсикантов действует на клетки путем вмешательства в механизмы клеточного гомеостаза, то исследование характера ответных реакций делает перспективным применение методов экспресс-тестирования для оценки жизнеспособности клеток и уровня их метаболизма.
Предполагается, что исследуемое вещество, для того чтобы оказать влияние на физиологические состояние тест-объекта должно на первом этапе взаимодействовать с поверхностными структурами клетки и затем проникнуть внутрь неё. Внешний мембранный комплекс клеток водоросли, постоянно контролирующий обмен энергией, питательными веществами и продуктами метаболизма, одновременно выполняет функцию наиболее чувствительного индикатора этих процессов. Мембранный комплекс, если в нём не происходит каких-либо структурных или функциональных изменений, находится в состоянии адаптивного равновесия, отвечающего оптимальным условиям существования клетки. Изменение этого равновесного состояния является одним из ведущих компонентов действия токсиканта, которой в дальнейшем определяет практически всю структуру ответной реакции тест-объекта.
Вовлечение различных техногенных соединений Ф в естественный круговорот веществ определяет непрерывность процесса загрязнения окружающей среды, а их трансформация и миграция в экосистемах заставляет искать возможности биотестирования, прогнозирования последствий загрязнения для продукционных процессов в водоемах и исследования механизмов токсического действия. Как сам ПХФ, так и его водорастворимая соль ПХФ-Na являются заметным компонентом в сбросах различных химических производств, причем даже уже в очищенных водах присутствуют их весьма высокие концентрации.
К числу наиболее перспективных методов исследования, которые могут с успехом использоваться при работе с тест-объектами, относится изучение реакций клеток водоросли на прохождение через них переменного электрического тока в зависимости от его частоты, т. е. оценка их электрических свойств. В отличие от других методов, которые применяются в биотестировании, измерение электрических свойств не повреждает клетки, что позволяет изучать реакции клеток без нарушения их основных функций на действие токсикантов. Зависимость электрических свойств от частоты позволяет путем выбора соответствующих диапазонов измерений и определяемых параметров провести детальный анализ функциональных характеристик клеток водорослей.
В настоящей работе представлены результаты разработки метода измерения электрических свойств и поиска тех чувствительных функциональных параметров зеленых водорослей, которые связаны с жизнеспособностью и состоянием проницаемости клеток при действии соединений Ф, в частности ПХФ. Основное направление исследований состояло в объективной оценке физиологических эффектов и последствий влияния ПХФ-Na на водоросли в целях совершенствования методов биотестирования и биологического мониторинга водных экосистем.
В результате проведенных исследований была разработана методика определения электрических свойств клеток культуры водоросли С. pyrenoidosa в диапазоне частот от 1 кГц до 10 МГц. Предложенный метод анализа электрических свойств клеток водоросли продемонстировал его применимость для оценки жизнеспособности клеток микроводорослей, проницаемости внешних мембран и общего уровня метаболизма.
Исходя из определения энергозависимых характеристик клеток водоросли по их электрическим параметрам и фотосинтетической активности установлена оптимальная фаза развития культуры для использования водоросли в качестве тест-объекта. Показано, что максимальная функциональная активность клеток культуры по электрическим параметрам проявляется на 5−7 сут. роста культуры, тогда как по фотосинтетической активности — на 3−5 сут.
Выполненная экспериментальная апробация и оценка возможностей разработанного нами метода определения электрических свойств клеток водоросли и анализа полученных данных с использованием традиционно применяемых ингибиторов метаболизма (2,4-ДНФ и ДХММ) позволила установить его высокая чувствительность. Сравнительное исследование действия 2,4-ДНФ и ДХММ на клетки водоросли на основе определения их электрических свойств показало общий характер действия ингибиторов при концентрациях 0,1 мМ, заключающийся в нарушении проницаемости и снижении уровеня метаболизма клеток водоросли. Вместе с этим, влияние ДХММ в концентрации 0,01 мМ состояло, исходя из результатов определения электрических свойств, в активации обменных процессов клеток водоросли без изменения проницаемости внешнего мембраного комплекса.
Влияние ПХФ-Na на мембраны клеток водоросли, как было установлено, заключалось в характерной для многих разобщителей фазности в действии в зависимости от их концентрации. Эта особенность была обнаружена в исследованиях действия ПХФ-Na при различных концентрациях — активация при 0,1 мМ, ингибирование при 1,0 мМ и необратимое нарушение функционирования мембран при 10 мМ. Исходя из полученных результатов, действие ПХФ-Na при концентрации 10 мМ и ДХММ в концентрации 0,1 мМ может рассматриваться как однонаправленное и разобщающее. Вместе с тем, характер влияния ПХФ-Na в концентрации 1,0 мМ и ДХММ в концентрации 0,01 мМ имел существенные различия, несмотря на общность в результирующем активирующем действии. В присутствии ПХФ-Na в концентрации 1,0 мМ отмечалось изменение в проницаемости мембран клеток водоросли, тогда как действие ДХММ в концентрации 0,01 мМ состояло в активации метаболизма, которое не сопровождалось каким-либо нарушением транспортных функций внешнего мембранного комплекса.
Исходя из полученных результатов, действие ПХФ-Na на СВК может определяться влиянием на фотосинтетический ЭТ и изменениями в темновом метаболизме. Таким образом, в использованных нами концентрациях ПХФ-Na мог действовать и как разобщитель, что приводило к существенному снижению фотосинтетической активности. Таким образом, использование СВК, исходя из результатов воздействия ПХФ-Na, является перспективным для целей биотестирования или скрининга, поскольку может производиться быстро и требует лишь стандартного оборудования.
В присутствии ПХФ-Na в среде в относительно низких концентрациях процессы ФЭТ не нарушаются вплоть до Qa, происходит разделение заряда в РЦ и эффективность работы ФС 2 не снижается. Только при более высоких концентрациях ПХФ-Na начинается снижение Fm, затем Fc и Fv/Fm. Неспецифическая деструкция фотосинтетического аппарата происходит при длительном повышении концентрации ПХФ-Na. Таким образом, ПХФ-Na только в высоких концентрациях снижает эффективность функционирования ФС 2, а при низких — нарушения фотосинтеза происходит после ФС 2. Несмотря на отличия в кинетике параметров быстрой флуоресценции при действии ПХФ-Na по сравнению с интактными клетками, Fv/Fm в высоких концентрациях подавлялся незначительно и за счет снижения Fm. Очевидно, в низких концентрациях ПХФ-Na вызывает нарушение сопряжения ЭТ и фосфорилирования, тогда как в высоких приводит к ингибированию ЭТ и подавлению активности ФС 2. Это отражается в дальнейшем на энергообеспеченности клеток водорослей и связанных с ней функциональных параметрах внешних мембран.
Выполненный анализ токсических эффектов ПХФ-Na и возможных путей реализации его воздействия на клетки водорослей по электрическим параметрам и флуоресценции Хл показал возможность их использования в целях биотестирования. При этом становится доступным анализ действия ПХФ-Na как на начальные процессы преобразования поглощенной энергии, так и на энергозависимые параметры, связанные с состоянием внешних мембран клеток.
Таким образом, использование метода измерения электрических свойств и последующим анализом, включая построение импедансных диаграмм в комплеской плоскости, позволяет значительно повысить информативность метода оценки функционального состояния клеток водоросли и открывает новые возможности для биотестирования широкого класса химических загрязнителей окружающей среды.
Список литературы
- Альберт А. Избирательная токсичность. В 2-х томах. T.l. М.: Медицина, 1989.400 с.
- Альварес П.П., Булычев А. А., Денеш М., Курелла Г. А. Светозависимые электрические реакции в клетках морских зеленых сифоновых водорослей // Научн. докл. высш. школы. Биол. науки. 1982. № 7. С.39−44.
- Андреев B.C. Кондуктометрические методы и приборы в биологии и медицине. М.: Медицина, 1973.336 с.
- Апарцин М.С., Саксонов М. Н., Стом Д. И. К вопросу о действии пирокатехина и n-бензохинона на клетки Нителлы // Докл. АН СССР. 1979. Т.244, № 2. С.510−512.
- Арчаков А.И. Микросомальное окисление. М.: Наука, 1975. 327 с.
- Афанасьева А.Ф., Телитченко М. М. Интенсификация очистки аэрированием биопрудов и математическая модель этого процесса // Самоочищение и биоиндикация загрязненных вод. М., 1980. С. 159 165.
- Бакуненко Л.И., Стонов Л. Д., Маторин Д. Н. Использование замедленной флуоресценции хлореллы для определения гербицидных свойств соединений // Химия в сельском хозяйстве. 1977. Т. 15, № 33. С.67−70.
- Барабой В.А. Биологическое действие растительных фенольных соединений. Киев: Наукова думка, 1976.260 с.
- Блажей А., Шутый JI. Фенольные соединения растительного происхождения. М.: Мир. 1977. 239 с.
- Воробъёв Л.Н. Регулирование мембранного транспорта в растениях. // Итоги науки и техники. Сер. Физиология растений. М.: ВИНИТИ, 1980. Т.4. С.5−77.
- Воробьёв Л.Н., Мусаев Н. А. Электрические характеристики клеточной оболочки и плазмалеммы клеток Nitellopsis obtusa. Низкочастотный импеданс // Физиология растений. 1979. Т.26, вып.4. С.711−720.
- Галазий Г. И., Тарасова Е. Н., Мамонтов А. А., Мамонтова Е. А. Опыт и проблемы химического мониторинга Байкала // Проблемы экологии. 1995. Новосибирск: Наука. Т.2. С.11−17.
- Гапочка Л.Д. Об адаптации водорослей. М.: Изд-во Моск. ун-та. 1981.80 с.
- Гизе А. Физиология клетки. М.: ИЛ, 1959. 455 с.
- Гольдфельд М.Г., Карапетян Н. В. Физико-химические основы действия гербицидов // Итоги науки и техники. Сер. Биологическая химия. М.: ВИНИТИ, 1989. Т.ЗО. 164 с.
- Готовский Ю.В., Перов Ю. Ф. Особенности биологического действия физических и химических факторов малых и сверхмалых интенсивностей и доз. М.: Изд-во ИМЕДИС, 2003. 388 с.
- Грушко Я.М. Вредные органические соединения в промышленных сточных водах. Л.: Химия, 1976.128 с.
- Израэль Ю.А., Анохин Ю. А., Кокорин А. О. Мониторинг состояния озера Байкал. Л.: Гидрометеоиздат, 1991. 260 с.
- КагаваЯ. Биомембраны. М.: Высшая школа, 1985. 303 с.
- Келл Д.Б. Изучение электрического импеданса. Принципы и возможности спектроскопии электрического адмитганса // Биосенсоры: основы и приложения: Пер. с англ. Под ред. Э. Тернера, И. Краубе, Дж. Уилсона. М.: Мир, 1992. С.344−374.
- Кёртис Г. Биоэлектрические измерения // Биофизические методы исследования / Под ред. Ф.Юбера. М.- ИЛ. 1956. С.126−149.
- Климов В.В. Окисление воды и синтез молекулярного кислорода // Соросовский образоват. журн. 1996. № 11. С.9−12.
- Кожова О.М., Бейм A.M. Экологический мониторинг Байкала. М.: Экология, 1993.352 с.
- Кол К. С. Нервный импульс (теория и эксперимент) // Теоретическая и математическая биология. М.: Мир, 1968. С. 154−193.
- Корте Ф., Бахадир М., Клайн В. и др. Пентахлорфенол (ПХФ) // Экологическая химия. М.: Мир, 1997. С.332−358.
- Костяев В.Я. Действие фенола на Scenedesmus acuminatus Lagerh. Chod. II Тр. Ин-та биол. внутр. вод АН СССР. JL: Наука. 1969. Т.19, № 22. С.90−93.
- Костяев В.Я. Биологические факторы разрушения фенола // Антропогенные факторы в жизни водоемов. JL: Наука, 1975. С.85−88.
- Костяев В.Я. Влияние фенола на водоросли и роль водорослей в биологической деструкции фенола // Автореф. дис. канд. биол. наук. М., 1972.21 с.
- Костяев В.Я. Влияние фенола на гидрохимический режим, фитопланктон и фитообрастания в искусственных водоемах // Влияние фенола на гидробионтов. JL: Наука, 1973. С.119−151.
- Костяев В.Я.а. Влияние фенола на водоросли // Там же. С.98−113.
- Котелевцев С.В. Функциональный отклик мембранных структур клеток животных на воздействие антропогенных факторов окружающей среды// Автореф. дис. докт. биол. наук. М., 1997. 77 с.
- Куценко С.А. Основы токсикологии. Научно-методическое издание. СПб.: Изд-во Фолиант, 2004. 720 с.
- Лейте В. Определение органических загрязнений питьевых, природных и сточных вод. М.: Химия. 1975. 199 с.
- Либерман Е.А. Переносчики ионов через биологические мембраны // Биологические мембраны. М.: Медицина, 1974. С.48−66.
- Лукина Г. А. Детоксицирующая активность хлореллы // Инф. бюлл. Института биол. внутр. вод. 1972. № 13. С.12−15.
- Лядский В.В., Горбунов М. Ю., Венедиктов П. С. Импульсный флуориметр для исследования первичных реакций фотосинтеза у зеленых растений // Научн. докл. высшей школы. Биол. науки. 1987. № 12. С.96−102.
- Максимов В.Н. Многофакторный эксперимент в биологии. М.: Изд-во МГУ, 1980.279 с.
- Максимова И.В. Коллекция культур микроводорослей кафедры микробиологии МГУ // Культивирование коллекционных штаммов водорослей / Под ред. Громова Б. В. JL: Изд-во ЛГУ, 1983. С. 74.
- Маторин Д.Н. Воздействие природных факторов среды и антропогенных загрязнений на первичные процессы фотосинтеза микроводорослей // Автореф. дис. докт. биол. наук. М.: МГУ. 1993. 45 с.
- Маторин Д.Н., Вавилин Д. В., Попов И. В., Венедиктов П. С. Метод биотестирования природных вод с применением регистрации замедленной флуоресценции микроводорослей // Методы биотестирования качества водной среды. М.: Изд-во МГУ, 1989. С.10−20.
- Маторин Д.Н., Венедиктов П. С. Люминесценция хлорофилла в культурах микроводорослей и природных популяциях фитопланктона // Итоги науки и техн. Сер. Биофизика. 1990. Т. 40, вып.1. С.49−100.
- Маторин Д.Н., Венедиктов П. С., Рубин А. Б. Замедленная флуоресценция и её использование для оценки состояния растительного организма // Изв. АН СССР. Сер. биол. 1985. № 4. С.508−520.
- Мельников Н.Н., Волков А. И., Короткое О. А. Пестициды и окружающая среда. М.: Химия. 1977. 240 с.
- Минаева В.Г. Флавоиоиды в онтогенезе растений и их практическое использование. Новосибирск: Наука, 1978.252 с.
- Мирошников А.И., Фомченков В. М., Иванов А. Ю. Электрофизический анализ и разделение клеток. М.: Наука, 1986. 184 с.
- Патин С.А. Влияние загрязнения на биологические ресурсы и продуктивность Мирового океана. М.: Пищевая промышленность, 1979. 304 с.
- Перов Ю.Ф. Материалы к изучению физико-химических основ гемолиза//Автореф. дисс. канд. мед. наук. Воронеж, 1971. 22 с.
- Плеханов С.Е. Первичные функциональные реакции пресноводных зеленых водорослей на химическое загрязнение // Автореф. дис. докт. биол. наук. 1999. М., МГУ. 50 с.
- Плеханов С.Е., Максимова И. В. Внеклеточное органическое вещество водоросли Clorella: количественные аспекты // Вестник Моск. ун-та. Сер. 16. Биология. 1997. № 2. С.25−28.
- Плохинский Н.А. Алгоритмы биометрии. Под ред. Б. В. Гнеденко. М.: МГУ, 1980.150 с.
- Погосян С.И., Лебедева Г. В., Ризниченко Г. Ю. Связь функциональной структуры популяции одноклеточных водорослей с ее динамикой // Проблемы экологического мониторинга и моделирования экосистем. Л.: Гидрометиздат. 1991. Т. XIII. С.280−297.
- Реттер У., Лозе X. Электрохимическая импедансная спектроскопия // Электроаналитические методы. Теория и практика. / Под ред. Ф.Шольца. М.: БИНОМ. Лаборатория знаний, 2006. С. 150−167.
- Роговская Ц.И. Интенсификация процессов биохимической очистки промышленных сточных вод // Теория и практика биологического самоочищения загрязненных вод. М., 1972. С. 105−112.
- Руководство по контролю качества питьевой воды. 2-е изд. Т.1. Всемирная организация здравоохранения, 1994. 258 с.
- Рыбальский К.Г., Малярова М. А., Горбатовский В. В., Рыбальская В. Ф., Красюкова Т. В., Левин С. В. Экология и безопасность. М.: ВНИИПИ, 1993.320 с.
- Саляев Р.К. Поглощение веществ растительной клеткой. М.: Наука, 1969. 206 с.
- Скулачев В.П. Аккумуляция энергии в клетке. М.: Наука, 1969.440 с.
- Скулачев В.П. Энергетика биологических мембран. М.: Наука, 1989. 564 с.
- Степанова Н.Ю., Петров A.M., Шагидуллин А. Г., Габайдуллин А. Г. Разработка комплексного подхода для оценки воздействия выпусков сточных вод на окружающую среду // Тез. докл. 1 съезда токсикологов России. М., 1998. С. 319.
- Стойнов З.Б., Графов Б. М., Савова-Стойнова Б.С., Елкин В. В. Электрохимический импеданс. М.: Наука, 1991. 336 с.
- Стом Д.И. Фитотоксичность и механизм детоксикации фенолов водными растениями // Автореф. дис. докт. биол. наук. Киев, 1982. 48 с.
- Стом Д.И., Бейм A.M. Действие фенолов на некоторые виды водорослей // Гидробиол. ж. 1976. Т. 12, № 6. С.53−57.
- Стом Д.И., Бобовская Л. П., Тимофеева С. С. Влияние фенолов и продуктов их окисления на водные растения и содержание в них сульфгидрильных групп // Докл. АН СССР. 1974. Т. 216, № 3. С.698−701.
- Стом Д.И., Гурман В. И., Константинов Г. Н., Кашина Н. Ф., Зилова Е. А. Некоторые перспективы оценки влияния продуктов техногенеза на экосистему оз. Байкал // Геохимия техногенных процессов. М.: Наука, 1990. С.117−123.
- Струбицкий И.В. Регуляция фенольными соединениями иферредоксин: тиоредоксиновой системой энергетического обмена Microcystis aeruginosa Kutz. emend. Elenk II Автореф. дис.канд. биол. т наук. Киев, 1986.20 с.
- Тарусов Б.Н. Электропроводность как метод определения жизнеспособности тканей // Арх. биол. наук. 1938. Т.52, вып. 2. С.178−181.
- Фёдоров Л.А., Яблоков А. В. Пестициды токсический удар по биосфере и человеку. М.: Наука, 1999.462 с.
- Федтке К. Биохимия и физиология действия гербицидов. М.: Аг-ропромиздат, 1985. 223 с.
- Флёров Б. А. Экспериментальное исследование фенольного отравления у рыб // Влияние фенола на гидробионтов. Л., 1973. С.5−38.
- Хоботьев В.Г., Капков В. И. Культивирование зеленых водорослей и использование их в токсикологических экспериментах // Методики биологических экспериментов. М.: Наука, 1971. С.219−231.
- Черноусов Ю.И. Изучение фенолов сточных вод сульфатцеллюлоз-ного производства// Автореф. дис. канд. хим. наук. JL, 1972.23 с.
- Шван Г. Спектроскопия биологическтих веществ в поле переменного тока // Электроника и кибернетика в биологии и медицине. М., ИЛ. 1963. С.71−108.
- Элиас В.В. Исследование физиологических реакций харовых и хлорококквых водорослей на фенолы сточных вод //Автореф. дис. канд. биол. наук. М., 2005. 25 с.
- Юрин В.М. Основы ксенобиологии. Минск: Новое знание, 2002. 267 с.
- Юрин В.М., Бобров В. А., Коренец Л. А., Плакс А. В., Стом Д. И. Действие фенольных соединений на электрофизиологические свойства плазмалеммы и тонопласта клеток Nitella flexilis II Физиол. раст. 1979. Т. 26, вып. 4. С.703−710.
- Юрин В.М., Гончарик М. Н., Галактионов С. Г. Перенос ионов через мембраны растительных клеток. Минск: Наука и техника, 1977. 160 с.
- Юрин В.М., Сафронова Н. И. Комбинированное действие химических соединений на биоэлектрическую реакцию клеток Nitella II Гид-робиол. ж. 1981. Т. 17, № 3. С.100−107.
- Юрин В.М., Соколик А. И., Кудряшов А. П. Регуляция ионного транспорта через мембраны растительных клеток. Минск: Наука и техника. 1991. 271 с.
- Яглова JI.Г. Электропроводимость биологических систем // Биофизика. Под. ред. Б. Н. Тарусова и О. Р. Кольс. М.: Высшая школа, 1968. С. 186−210.
- Aunaas Т., Zachariassen К.Е. Physiological biomarkers and the Trondheim biomonitoring system // Biomonitoring of Coastal Waters and Estuaries / K.Y.M. Kramer ed. Boca Raton: CRC Press. 1994. P. 107−133.
- Bernhardt J., Pauly H. Dielectric measurements of Nitellopsis obtusa cells with intracellular electrodes // Rad. Environm. Biophys. 1974. V. ll, N.l. P.91−100.
- Blinks L.R. The direct current resistance of Nitella I I J. Gen. Physiol. 1930. V.13, N.4, P.495−508.
- Bordi F., Cametti C., di Biasie A. Passive electrical properties of biological cell membranes determined from Maxwell-Wagner conductivity dispersion measurements // Bioelectrochem. Bioenerg. 1989. V.22, N.2. P.135−144.
- Buchel C., Wilhelm C. In vivo analysis of slow chlorophyll fluorescence induction kinetics in algae: progress, problems, and perspectives // Photochem. Photobiol. 1993. V.58, N.2. P.137−148.
- Cole K.S. Electric phase angle of cell membranes // J. Gen. Physiol. 1932. V.15, N.6. P.641−649.
- Cole K.S. Membranes, Ions and Impulses. Berkely and Los Angeles, Univ. California Press, 1968. 456 p.
- Curtis H.J., Cole K.S. Transverse electric impedance of Nitella II J. Gen. Physiol. 1938. V.21, N.l. P.198−201.
- Davey C.L., Davey H.M., Kell D.B. On the dielectric properties of cell suspensions at high volume fractions // Bioelectrochem. Bioenerg. 1992. V.28, N. l/2. P.319−340.
- Demmig В., Bjorkman O. Comparison of the effect of excessive light on chlorophyll fluorescence (77 K) and photonyield of O2 evolution in leaves of higher plants//Planta. 1989. V. 171, N.2. P.171−184.
- Firstenberg-Eden R., Eden G. Impedance Microbiology. Research Studies Press: Letchworth, 1984.170 p.
- Firstenberg-Eden R., Zindulis J. Elecrtochemical changes in media due to microbial growth // J. Microbiol. Methods. 1984. V.2. N.2, P. 103 115.
- Gabrielli C. Electrochemical impedance spectroscopy: principles, instrumentation, and application // Physical Electrochemistry / I. Rubinstein ed. Marcel Dekker, New York, 1995. P.243−247.
- Grimmes S., Martinsen 0.G. Cole electrical impedance model a critique and an alternative // IEEE Trans. Biomed. Eng. 2005. V.52, N.l. P.132−155.
- Grimnes S., Martinsen 0.G. Bioimpedance and Bioelectricity Basics. New York. Academic, 2000. 237 p.
- Harris C.M., Kell D.B. On the dielectrically observable consequences of the diffusional motions of lipids and proteins in membranes. 2. Experiments with microbial cells, protoplasts and membrane vesicles // Eur. Biophys. J. 1985. V.13, N.l. P. l 1−24.
- Hause L.L., Komorowski R.A., Gayon F. Elecrtode and electrolyte impedance in the detection of bacterial growth // IEEE Trans. Biomed. Eng. 1981. V.28, N.5. P.403−410.
- Hoist R.W., Yopp J.H. An algal polyphenol oxidase characterization of the o-diphenol-oxidase from the charophyte Nitella mirabilis II Phycologia. 1976. V.15,N.2. P. 119−124.
- Holt J.S., Powles S.B., Holtum J.A.M. Mechanisms and agronomic aspects о f herbicide resistance // Annu. Rev. Plant. Physiol. Plant Mol. Biol. 1993. V. 44, N.2. P.203−229.
- Huang G.L., Mao Y., Headley J.V., Sun H.W. Themporal changes in the toxicity of pentachlorphenol to Chlorella pyrenoidosa algae // Environ. Sci. Health. B. 2003. V.38, N.5. P.551−559.
- Kleczkowski L. Inhibitors of photosynthetic enzymes/carriers and metabolism // Annu. Rev. Physiol. Plant. Mol. Biol. 1994. V.45, N.4. P.339−367.
- Krall J.P., Edwards G.E. Relationship between photosystem II activity and C02 fixation in leaves // Physiol. Plantarum. 86. Copenhagen., 1992. P.180−187.
- Kwan H., Pavel S. The effect of pentachlorphenol on electrical conductivity of lipid bilayers // Biphys. J. 1975. V.15, N.2. Part 2. P.309.
- Luyet B. Variation of the electric resistance of plant tissues for alternating currents of different frequences during death // J. Gen. Physiol. 1932. V.15, N. 3. P.283−287.
- Mackey B.M., Derrick C.M. Conductance measurements of the lag phase of injured Salmonella typhimurium II J. Appl. Bact. 1984. V.57, N. 2. P.299−308.
- Malkin S., Siderer Y. The effect of salt concentration on the fluorescence parameters of isolated chloroplast // Biochim. Biophis. Acta. 1974. V. 368. P.422−431.
- Markx G.H., Davey C.L. The dielectric properties of biological cells at radiofrequencies: applications in biotechnology // Enz. Microb. Technol. 1999. Vol.25, N.3−5. P.161−171.
- Meinck F. Das Abwasser Problem der Zellstoff und Papierindustrie in den Vereinigten Staten // Papier. 1970. V. 24, N.9. P.589−591.
- Moreland D.E. Mechanisms of action of herbicides // Ann. Rev. Plant Phisiol. 1980. V.31. P.597−638.
- MorelandD.E., Hilton J.L. Actions onphotosynthetic systems // Herbicides / L.J.Audus ed. NewYork. Academic Press. 1976. V.l. P.493−523.
- Mostafa F.L., Hellng C.S. Impact of four pesticides on the growth and metabolic activities of two photosyntetic algae // J. Environ. Sci. Health.B. 2002. V.37, N.5. P.417−444.
- Oettmeier W., Reimer S., Link K. Quantitative structure-activity relationship of substituted benzoquinones as inhibitors of photosynthetic electron transport // Z. Naturforsch.C. 1978. V.33, N.4.P.695−703.
- Oettmeier, W., Masson K. Synthesis and thylakoid membrane binding of the radioactively labeled herbicide dinoseb // Pestic. Biochem. Physiol. 1980. V.14. P.86−97.
- Oquist G., Hardstrom A., Aim P., Samuelson G., Richardson K. Chlorophyll a fluorescence as an alternative method for estimating primary production // Mar. Biol. 1982. V. 68. N.l. P.71−75.
- Osterhout W.J.V. Injury, Recovery and Death, in Relation to Conductivity and Permeability. J.B.Lippincott: Philadelphia and London, 1922.276 p.
- Pentachlorophenol / Environmental Health Criteria- 71. World Health Organization, Geneva, 1987. 137 p.
- Pethig R., Kell D.B. The passive electrical properties of biological systems- their role in physiology, biophysics and biotechnology // Phys. Med. Biol. 1987. Vol.32, N. 8. P.933−970.
- Pfister K., Schreiber U. Comparison of diuron- and phenol- type inhibitors: additional inhibitory action at the photosystem II donor site // Z. Naturforsch. C. 1984. V.39, N.5. P.389−392.
- Pfister K., Lichtenthaler H.K., Burger G., Musso H., Zahn M. The inhibition of photosynthetic light reactions by halogenated naphthoquinones // Ibid. 1981. V.36. N.4. P.645−655.
- Podola В., Nowack E.C., M. Melkonian. The use of multiple-strain algal sensor chips for detection and identification of volatile organic compoungs // Biosens. Bioelectron. 2004. V.15, N.19. P.1253−1260.
- Rao P. S., Durve V.S., Khangarot B.S., Shekhwart S.S. Acute toxity of pentachlorophenol and sodium pentachlorophenate to a freshwater ostracod Crypris subglobosa // Acta hydrochim. hydrobiol. 1983. V. ll, N.4. P.457−465.
- Rehbach M., Sluyters J.H. On the impedance of galvanic cell. IV. Determination of the rate constants of rapid electrode reaction from electrode impedance measurements//Rec. trav. с him. 1 962. V.81, N.4. P.301−306.
- Repetto G., Jos A., Hazen M.J., Molero M.L., del Peso A., Salguero M., Castillo P.D., Rodrigez-Vicente M.C., Repetto M. A test battery forthe toxicological evaluation on pentachlorphenol // Toxicol in Vitro. 2001. V.15, N.4−5. P.503−509.
- Schwan H.P. Dielectric spectroscopy, dielectrophoresis and field interactions with biological matherials // Energy Transfer Dynamics studies and Essays in Honor of Herbert Frohlich on his Eightieth Birthday. Springer Verl., Berlin, 1987. P.317−327.
- Slayman C.L. Movement of ions and electrogenesis in microorganisms // Am. Zoologist. 1970. V.10, N.3. P. 377−392.
- Sluyters J.H. On the impedance of galvanic cell. I. Theory // Rec. trav. chim. 1960. V.79,N.8. P.1092−1100.
- Sluyters-Rehbach M., Sluyters J.H. Sine wave method in the study of electrode processes // Electroanalytical Chemistry / A.J. Bard ed. V.4. Marcel Dekker, New York, 1970. P. 1−14.
- Spanswick R.M. Evidence for an electrogenic ion pump in Nitella translucens. I. The effect of pH, K+, Na+, light and temperature on the membrane potential and resistance // Biochim. Biophys. Acta. 1972. V. 288, N.l.P. 73−89.
- Stangenberg M. Toxic effects of Microcystis aeruginosa Kg. extracts on Daphnia longispina O.F. Muller and Eucypris virens Jurine // Hydrobiologia. 1968. V.32, N. l/2. P.81−97.
- Stom D.I., Ivanova G.G., Bashkatova G.V. et al. About the role of quinones in the action of some polyphenols on the streaming of protoplasm in Nitella sp. Cells // Acta hydrochim. hydrobiol. 1974. Bd.2, H.5. S.407−412.
- Strobel K., Diter H.H. Toxocological risk / benefit aspects of drinking water chlorination and alternative disinfection procedures // Z. Wasser-Abwasser-Forsch. 1990. V.23, H.2. P. 152−162.
- Thiel A., Boger P. Binding of ioxynil to photosynthetic membranes I I Pestic. Biochem. Physiol. 1986. V.25. P.270−278.
- Thielemann H. Zur identifiierung und bestimmung von 1,4-Benzochinon in Abwassernder Kohleverarbeitenden Industrie // Z. Wasser und Abwasser Forsch. 1974. Bd.7, H.3. S.91−93.
- Trebst A., Draber W. Structure-activity correlations of resent herbicides in photosynthetic reactions // Advances in pesticide science / H. Geissbuhler ed. Pergamon Press, Oxford and New York. 1979. P. 11−23.
- Van Rensen J.J.S. Herbicides interacting with photosystem II // Herbicides and Plant Metabolism. Cambridge Univer. Press. 1989. P.21−36.
- Van Rensen J.J.S., van der Vet W., van Vliet W.P.A. Inhibition and uncoupling of electron transport in isolated chloroplasts by the herbicide 4,6-dinitro-o-cresol // Photochem. Photobiol. 1977. V.25. P.579−583.
- Vasil’ev I.R., Matorin D.N., Lyadsky V.V., Venediktov P. S. Multiple action sites for photosystem II herbicides as revealed by delaed fluorescence // Photosynth. Res. 1988. V.15, N.l. P.33−39.
- Werner D., Pawlitz H. Differential elimination of phenol by diatoms and other unicellular algae from low concentrations // Bull. Environm. Contam. Toxicol. 1978. V.20. P.303−312.
- Yen J.H., Lin K.H., Wang Y.S. Acute lethal toxicity of environmental pollutants to aguatic organisms // Ecotoxicol. Environ. Saf. 2002. V.52, N.2. P.113−116.