Дипломы, курсовые, рефераты, контрольные...
Срочная помощь в учёбе

Электрохимический метод определения патогенных микроорганизмов (Salmonella Thyphimurium) с использованием магнитных наночастиц

Диссертация: Электрохимический метод определения патогенных микроорганизмов (Salmonella Thyphimurium) с использованием магнитных наночастиц
ДиссертацияПомощь в написанииУзнать стоимостьмоей работы

Разработан новый вариант электрохимического определения S. thyphimurium SL 7207, основанный на их взаимодействии с наночастицами Fe304 с последующей магнитной сепарацией несвязанных наночастиц и магнитным концентрированием образующегося конъюгата и определением его концентрации. В качестве источника информации использована концентрация ионов железа, найденная методом ИВ, в растворе образующемся… Читать ещё >

Содержание

  • СПИСОК УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ И СОКРАЩЕНИЙ
  • ГЛАВА 1. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР
  • Биосенсоры
    • 1. 1. Ферментные сенсоры
    • 1. 2. Сенсоры на основе микроорганизмов
    • 1. 3. Сенсоры на основе надмолекулярных структур клетки
    • 1. 4. Иммуносенсоры
    • 1. 5. ДНК-сенсоры
    • 1. 6. Постановка задачи
  • ГЛАВА 2. АППАРАТУРА И ТЕХНИКА ЭКСПЕРИМЕНТА
    • 2. 1. Оборудование и средства измерений
    • 2. 2. Реактивы, рабочие растворы
    • 2. 3. Методики эксперимента
  • ГЛАВА 3. СИНТЕЗ И ИССЛЕДОВАНИЕ НАНОЧАСТИЦ Ге
    • 3. 1. Выбор метода синтеза наночастиц Ре
    • 3. 2. Определение динамики изменения размеров агрегатов наночастиц Ре304 в водных суспензиях
  • ГЛАВА 4. ИССЛЕДОВАНИЕ ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ НАНОЧАСТИЦ Ге304 С РАЗЛИЧНЫМИ КУЛЬТУРАМИ КЛЕТОК
    • 4. 1. Электронно-микроскопическое исследование взаимодействия наночастиц Ре304 с различными культурами клеток
    • 4. 2. Жизнеспособность клеточных культур при воздействии наночастиц
    • 4. 3. Определение количества наночастиц, поглощенных клетками
  • ГЛАВА 5. ПРИМЕНЕНИЕ НАНОЧАСТИЦ Ге304 В ГИБРИДНОМ ИММУНОАНАЛИЗЕ
    • 5. 1. Метод детектирования магнитной нанометки. ВО
    • 5. 2. Применение магнитного поля
    • 5. 3. Определение правильности и специфичности метода электрохимического иммуноанализа
    • 5. 4. Анализ реальных объектов
    • 5. 4. Антитела, меченные наночастицами РезС>
    • 5. 5. Использование микроорганизмов Escherichia coli в качестве модельной системы
  • ВЫВОДЫ

Электрохимический метод определения патогенных микроорганизмов (Salmonella Thyphimurium) с использованием магнитных наночастиц (реферат, курсовая, диплом, контрольная)

Актуальность темы

Сальмонеллез является одним из наиболее распространенных в развитых странах инфекционных заболеваний. Заболеваемость сальмонеллезом повсеместно имеет тенденцию к росту, особенно это касается крупных городов с централизованной системой продовольственного снабжения.

Диагноз сальмонеллеза традиционно подтверждается бактериологическими, серологическими (реакция агглютинации (РА), реакция непрямой гемагглютинации (РНГА)) методами, а также иммуноферментным анализом (ИФА) и методом полимеразной цепной реакции (ПЦР). Недостатками этих методов являются: в ряде случаев низкая чувствительность и специфичность, поздние сроки подтверждения диагноза (РА, РНГА), высокая стоимость используемых реагентов (ИФА) и оборудования (ПЦР), необходимость создания специальных условий и длительность проведения анализа (бактериологический метод).

Объединение достижений и знаний в области нанотехнологий, толстопленочной печати, органической, полимерной, аналитической химии, электрохимии и биохимии ведет к рождению новой генерации сенсоров и иммуносенсоров. Не в малой степени интерес к иммуносенсорам обусловлен уникальной специфичностью иммунореакции образования комплексов антител с антигенами или гаптенами.

Диссертация посвящена развитию новых подходов к созданию гибридного электрохимического метода иммуноанализа, включающего стадию магнитной сепарации наночастиц и интенсификацию процесса концентрирования определяемых компонентов в магнитном поле, для диагностики сальмонеллеза. Предлагается использовать магнитные наночастицы оксида металла (Ре304) в качестве детектируемой (электрохимической) сигналообразующей метки и магнитное концентрирование коньюгата на специальном твердом субстрате.

Работа является частью исследований, проводимых на кафедре физики и химии Уральского государственного экономического университета в рамках заданий Министерства промышленности и науки Свердловской области «Нанотехнологии в биои химических сенсорах для мониторинга окружающей среды и здоровья человека». Исследования выполнены при поддержке Международного научно-технического центра (МНТЦ, грант «Разработка электрохимических биосенсоров с использованием наноструктуированных материалов на основе углеродсодержащих соединений» (2006;2008 гг. Выполненные исследования соответствуют приоритетному направлению развития науки, технологии и техники «03. Индустрия наносистем и материалов» и критической технологии РФ «07. Нанотехнологии и наноматериалы» (Пр-842 от 21.06.2006).

Цель работы Создание нового гибридного электрохимического метода иммуноанализа для определения патогенных микроорганизмов, основанного на применении магнитных наночастиц для магнитной сепарации и концентрирования конъюгатов микроорганизм — наночастицы на поверхности твердофазной подложки.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачиосуществить синтез наночастиц с воспроизводимыми целевыми характеристикамиисследовать структуру полученных наночастиц, их физико-химические свойства и динамику изменения размера агрегатов в водной суспензиивыбрать условия и способы иммобилизации наночастиц на/в поверхности/объеме клеткивыбрать рабочие условия формирования иммунокомплекса антиген (патогенный микроорганизм — сальмонелла) — антителонайти условия формирования электрического сигналасравнить результаты анализа инфицированных сальмонеллезом проб, полученные с использованием предложенного подхода и традиционных методовпоказать возможность расширения предложенного подхода для других видов микроорганизмов.

Научная новизна работы. Впервые в качестве метки в электрохимическом иммуноанализе использованы магнитные наночастицы оксида переходного металла Fe304.

Впервые проведено комплексное исследование процессов агрегации наночастиц Fe304 в зависимости от их концентрации в водной суспензии. Показано, что накопление наночастиц на/в клетке и их электрохимическая активность зависит от природы клеток. Влияние наночастиц Fe304 на жизнеспособность клеточных культур на примере их взаимодействия с культурой клеток L41 (онкогенная клеточная линия человека (кровь больного лейкемией)), клетками эмбрионального легкого человека, трансформированного вирусом SV-40 (клетки WI-38), микроорганизмами Salmonella typhimurium, Staphylococcus aureus не значительно.

Получены зависимости количества поглощенных клетками наночастиц от времени их взаимодействия. Показана взаимосвязь электрохимического отклика с количеством наночастиц, содержащихся в иммунокомплексе и концентрацией искомых возбудителей в растворе.

Предложен новый гибридный вариант иммуноанализа, включающий: стадию магнитной сепарации, что позволило осуществить отделение несвязанных наночастицстадию магнитного концентрирования, что позволило сократить время анализа и увеличить его чувствительность.

Практическая значимость работы. Предложен алгоритм реализации гибридного иммуноэлектрохимического метода диагностики сальмонеллеза.

Предложенный алгоритм гибридного иммуноэлектрохимического метода анализа отличается от известных исключением: применения нестабильных ферментов и дорогостоящего оборудованиявведения в анализируемый раствор специальных субстратов, обеспечивающих протекание сигналообразующей реакциинеобходимости создания специальных условий для проведения анализа.

Метод обеспечивает возможность подтверждения диагноза в ранние сроки заболевания.

Предложено использование бактериального антигена для определения патогенных микроорганизмов, позволяющее увеличить чувствительность анализа.

Предложенный метод анализа обеспечивает предел обнаружения 8.18 КОЕ/см3 для бактерии и антигена 1.51 хЮ" 6 мг/см3 Salmonella thyphimurium, что соответствует характеристикам ПЦР анализа.

Простота и экономическая эффективность метода позволяет организовать иммуноанализ на месте в небольших клиниках.

На основе результатов работы получен патент РФ № 2 397 243 от 20.08.2010.

Проведены испытания предложенного иммуноэлектрохимического метода количественного определения Salmonella thyphimurium в сравнении с традиционно используемыми методами — ПЦР анализа и бактериального посева в ФГУН ГНЦ ВБ «Вектор», г. Новосибирск. Получен акт испытаний, подтверждающий возможность использования предложенного электрохимического способа иммуноанализа для диагностики патогенных микроорганизмов.

Результаты диссертационной работы использованы ФГУН «Екатеринбургский медицинский научный центр профилактики и охраны здоровья рабочих промпредприятий» Роспотребнадзора при выполнении.

Федеральной целевой программы «Развитие инфраструктуры наноиндустрии в Российской Федерации на 2008 — 2010 годы» для разработки нормативно-методического обеспечения и средств контроля содержания наночастиц на объектах производственной сферы.

На защиту выносятся:

— результаты экспериментальных исследований структуры, размерного состава наночастиц Fe304, синтезированных различными методами, полученные с помощью измерения дифракции и электронной микроскопии высокого разрешения (ПЭМ). Выбор оптимального способа получения стабильных в суспензии наночастиц с узким распределением по размерам, определенной формы, состава, структуры;

— результаты исследования взаимодействия наночастиц Fe304 с различными культурами клеток с целью выбора оптимальных условий, их взаимодействия;

— способ количественного определения патогенных микроорганизмов, основанный на формировании иммунокомплексов с участием меченых магнитными наночастицами бактерий (антигенов) и отличающийся повышенной чувствительностью и сокращенным временем анализа;

— алгоритмы количественного определения бактерий Salmonella typhimurium, Escherichia coir,.

— результаты анализа фекальных масс животных, инфицированных Salmonella typhimurium, подтвержденные данными независимого стандартного бактериологического метода.

Апробация работы. Результаты исследований представлены на XVIII Менделеевском съезде по общей и прикладной химии (Москва, Россия 2007 г.), на Международном семинаре-ярмарке «Российские технологии для индустрии» «Нанотехнологии в электронике, энергетике, экологии и медицине» (Санкт-Петербург, Россия, 2007 г.), на VII Всероссийской конференции по электрохимическим методам анализа с международным участием «Электрохимические методы анализа (ЭМА-2008)» (Уфа, Россия, 2008 г.), на.

Третьей Всероссийской конференции по наноматериалам «НАНО-2СЮ9» (Екатеринбург, Россия, 2009 г.), на выставке-ярмарке продукции и технологий промышленных предприятий и научных организаций Свердловской области «Нанотехнологии 2009» (Екатеринбург, Россия, 2009; г.), на 9 Семинаре «(Био)сенсоры и биоаналитические микротехнологии для защиты окружающей среды и клинического анализа» (Монреаль, Канада, 2009 г.), на III Всероссийской конференции с международным участием «Аналитика России» (Краснодар, Россия, 2009 г.), на научно-практической конференции «Нанотехнологии — производству» (Екатеринбург, Россия, 2009 г.), Съезде аналитиков России (Москва (пансионат «Клязьма») 2010 г.), на Симпозиуме с международным участием «Теория и практика электроаналитической химии» (Томск, Россия, 2010 г.).

Публикации. По содержанию диссертационной работы опубликовано 18 работ, в том числе 1 патент РФ, 3 статьи в журналах, рекомендованных ВАК, 1 глава в монографии, тезисы 13 докладов на всероссийских и международных конференциях.

Личное участие автора состоит в решении основных задач исследования, планировании и проведении экспериментов, обработке, интерпретации и систематизации результатов исследования.

Автор выражает искреннюю благодарность: научному консультанту, доц. кафедры аналитической химии Уральского федерального университета им. первого Президента России Б. Н. Ельцина (г. Екатеринбург) к.х.н. Козициной А.Н.- с.н.с. ФГУН ГНЦ ВБ «Вектор», (г. Новосибирск) к.б.н. Агафонову А. П. за предоставление биологических образцов, результатов ПЦР анализа и бактериального посева, а также за помощь в проведении электронно-микроскопических исследованийколлективам Института физики металлов УрО РАН (г. Екатеринбург) и клинико-диагностического центра (лабораторной диагностики ВИЧ, инфекционных патологий, болезней матери и ребенка) (г. Екатеринбург) за помощь в проведении электронно-микроскопических исследованийд. ф-м.н., проф. Сафронову А. П. (УрГУ им. A.M. Горького, г. Екатеринбург) за предоставление результатов исследований суспензий методом динамического рассеяния света.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 145 страницах машинописного текста, включая 16 таблиц, 49 рисунков и состоит из введения, пяти глав, выводов, списка литературы из 150 наименований и 3 приложений.

ВЫВОДЫ.

1. Сравнительный анализ размерного состава наночастиц Fe304 полученных в различных условиях (соосаждение, использование ПАВ) показал возможность получения суспензий с узким размерным составом с максимумом при 50 и 10 нм. Комплексом физических методов (измерение электронной дифракции, ПЭМ, динамическое светорассеяние) подтверждена ожидаемая химическая структура наночастиц, а также дана оценка их агрегативной устойчивости. Выбраны условия получения наночастиц, позволившие получить высокоустойчивые суспензии, не склонные к агрегации в течение, по крайней мере 24 ч и имеющие максимальную долю частиц с линейными размерами около 10 нм.

2. Показано, что взаимодействие наночастицt Fe304 с клетками микроорганизмов и тканей человека зависит от природы клеток. Наблюдается накопление наночастиц как на поверхности клеток, так и в цитозоле и субклеточных структурах клетки. Характер взаимодействия, как и структура полученных агрегатов, определяются природой клеток и связаны, по-видимому, с особенностями строения клеточной мембраны.

3. Исследования цитотоксичности полученных наночастиц Fe304 по отношению к различным культурам клеток показали их низкую активность, что позволило использовать суспензии наночастиц в иммунохимических экспериментах.

4. Разработан новый вариант электрохимического определения S. thyphimurium SL 7207, основанный на их взаимодействии с наночастицами Fe304 с последующей магнитной сепарацией несвязанных наночастиц и магнитным концентрированием образующегося конъюгата и определением его концентрации. В качестве источника информации использована концентрация ионов железа, найденная методом ИВ, в растворе образующемся после кислотного разложения иммунокомплексов. Способ позволяет достичь предела обнаружения 8.18 КОЕ/см3 и 1.51×10″ 6 мг/см3 (1.51 КОЕ /см3) для бактерий и бактериального антигена, соответственно. Надежность и правильность результатов электрохимического иммуноанализа подтверждены результатами, полученными на модельных и реальных объектах, а также путем сравнения с традиционными вариантами бактериального анализа.

Показать весь текст

Список литературы

  1. Г. К. Биосенсоры как новый аналитических устройств. // Соросовский образовательный журнал. 1996. — № 12. — С. 26 -32.
  2. Bacon N.C., Hall Е.А.Н. A sandwich enzyme electrode giving electrochemical scavenging of interferents // Electroanalysis. 1999. — V 11. — №.10−11. — P.749−756.
  3. Albarela-Sirvent M., Merkoci A., Alegret S. Thick-film biosensors for pesticides produced by screen-printing of graphite-epoxy composite and biocomposite pastes // Sensors and Actuators B. 2001. — № 79. — P. 48−57.
  4. Wang J., Chen L., Liu J. Critical comparison of metallized and mediator-based-carbon paste glucose biosensors // Electroanalysis. 1997. — V 9. — № 4. — P. 298−301.
  5. Saby C., Mizutani F., Yabuki S. Glucose sensor based on carbon paste electrode incorporating poly (ethylene glycol) modified glucose oxidase and various mediators // Analytica Chimica Acta. — 1995. — № 304. — P. 33−39.
  6. Wang J., Pamidi Р.У.А., Park D.S. Screen-printed sol-gel enzyme: containing carbon inks // Analytical Chemistry. 1996. — V 68. — № 15. — P. 2705−2706.
  7. Christie I.M., Vadgama P. Modification of electrode surfaces with oxidized phenols to confer selectivity to amperometric biosensors for glucose determination // Analytica Chimica Acta. 1993. — № 274. — P. 191−199.
  8. Cummings E.A., Linquette-Mailley S., Mailley P., Cosnier S., Eggins B.R., McAdams E.T. A comparison of amperometric screen-printed, carbon and theirapplication to the analysis of phenolic compounds present in beers // Talanta. 2001. -№ 55.-P. 1015−1027.
  9. Loechel C., Chemnitius G.-C., Borchardt M., Cammann K. Amperometric bienzyme based biosensor for the determination of lactose with an extended linear range // Zeitschrift fur Lebensmitteluntersuchung und forschung A. 1998. — 207. -P. 381−385.
  10. Prodromidis M.I., Karayannis M. I. Enzyme based amperometric biosensors for food analysis // Electroanalysis. 2002. -V 14. — № 4. — P. 241−261.
  11. Lenarczuk T., Wencel D, Glab S., Koncki R. Prussian blue-basedi optical glucose biosensor in flow-injection analysis // Anal Chim Acta. 2001. — № 447. — Pi 23−32.
  12. Cosnier S., Perrot H., Wessel R. Biotinylated polypyrrole modified quartz crystal microbalance for the fast and reagentless determination of avidin concentration // Electroanalysis.-2001.-V 13.-№ 11.-P. 971−974.
  13. Catterall K., Morris K., Gladman C., Zhao H., Pasco N., John R. The use of microorganisms with broad range substrate utilisation for the ferricyanide-mediated rapid determination of biochemical oxygen demand // Talanta. 2001. — V 55. — P. 1187−1194.
  14. Petanen T., Romantschuk M. Use of bioluminescent bacterial sensors as an alternative method for measuring heavy metals in soil extracts // Analytica Chimica Acta. -2002. № 456. — P. 55−61.
  15. Lee J.I., Karube I. Reactor type sensor for cyanide using an immobilized microorganism // Electroanalysis. 1996. — V 8. — № 12. — P. 1117−1120.
  16. Koblizek M., Masojidek J., Komenda J., Kucera T., Pilloton R., Mattoo A.K., Giardi M.T. A sensitive Photosystem II-based biosensor for detection of a class of herbicides // John Wiley & Sons, Inc. 1998. — P. 664−669.
  17. Harms II, Wells MC, van der Meer JR. Whole-cell living biosensors are they ready for environmental application? // Appl Microbiol Biotechnol: — 2006: — № 701 -P. 273−280.
  18. Warsinke A., Benkert A., Scheller F.W. Electrochemical- immunoassays // Presenilis J Anal. Chem. 2000. — V 366. — P. 622−634.
  19. Медянцева Э: П., Халдеева E.B., Будников Г. К. Иммуносенсоры в< биологии и медицине: аналитические возможности, проблемы и перспективы // Ж. Аналитической химии. 2001. — Т. 56. — № 10. — С. 1015−1031.
  20. Skladal P. Advances in electrochemical5 immunosensors // Electroanalysis. -19.97. V 9. — № 10. — P. 737−745. .
  21. Stefan R.-I., Ikoos van Staden J.E., Aboul-Enein H.Y.Immunosensors. in, clinical analysis// Fresenius J^AnaL Chem:-2000L- № 366-—P: 659−668−25: Hage D.S. Immunoassays // Anal. Chem. 1999 — V 71. — P. 294R-304R.
  22. Ghindilis- A.L., Atanasov P., Wilkins M., Wilkins E. Immunosensors: electrochemical sensing and other engineering approach // Biosens. Bioelectron. -1998. V 13.- № 1, — P. 113−131.
  23. Berggren C., Bjarnason В., Johansson G. Capacitive biosensors // Electroanalysis. 2001.- V 13. — № 3. — P. 173−180.
  24. Li Q., Luo G., Feng J. Direct electron transfer for heme proteins on nanocrystalline Ti02 film // Electroanalysis. 2001. — V 13. — № 5. — P. 359−363.
  25. Bataillard P., Gardies F., Jaffrezic-Renault N., Martelet C. Direct detection of immunospecies by capacitance measurements // Anal. Chem. — 1988. № 60. — P. 2374−2379.
  26. Berggren C., Johansson G. Capacitance measurements of antibody-antigen interactions in a flow system // Anal. Chem. 1997. — № 69. — P: 3651−3657.
  27. Varlan A.R., Suls J., Sansen W., Veelaert D., Deloof A. Capacitance sensor for the allastostatin direct immunoassay // Sensors .and Actuators B. 1997. — № 44. -P. 334−340.
  28. Berney Hi, Alderman. J, Lane W-, Collins JRK. A differential, capacitance biosensor using polyethylene glycol to overlay the biolayer // Sensors- and Actuators B- 1997. — № 44. — Pi 578−584. -
  29. B. Konig, M: Gratzel. A novel immunosensor for Herpes viruses // Anal. Chem. 1994, 66, 3 410 344.
  30. Su X., Chew F.T., Li S.F.Y. Piezoelectric quartz crystal based label-free analysis for allergy disease // Biosensors & Bioelectronics. 2000. — № 15. — P. 629−639.
  31. Fung Y.S., Wong Y.Y. Self-assembled monolayers as the coating quartz piezoelectric crystal immunosensor to detect Salmonella in aqueous solution // Anal. Chem. 2001. — № 73. — P. 5302−5309.
  32. Sakai G., Saiki T., Uda T., Miura N., Yamazoe N. Evaluation of binding of, human serum albumin (HAS) to mono polyclonal antibody by means of piezoelectric immunosensing// SensorsandActuators B!, — 1997- №*42. — P:89−94l
  33. Masson M, YumK. S-, Haruyama Ti,.Kobatake E., Aizawa M: Quartz crystal-microbalance bioaffinity sensor for biotin // Anal. Chem. 1995, 67, p. 2212- 2215
  34. Bendov I., Willner I., Zisman E. Piezoelectric immunosensors for urine specimens of Chlamydia trachomatis employing, quartz crystal microbalance microgravimetric analyses // Anal. Chem. 1997. — № 69. — P. 3506- 3512.
  35. Parkovsky D.B., Riordan T.C., Guilbault G.G. An immunosensor based on the glucose oxidase label and optikal oxygen detection // Anal. Chem. 1999. — № 71. -P. 1568−1573.
  36. Surugiu I., Danielsson B., Ye L., Mosbach K., Haupt K. Chemiluminescence imaging ELISA using an imprinted polymer as the recognition element instead of an antibody // Anal. Chem. -2001. №"73: — P: 487−491.
  37. Delehanty J.B., Ligher F.S. A microarray immunoassay for simultaneous detection of proteins and bacteria // Anal. Chem. 2002. — № 74. — P. 5681−5687.
  38. Sapsford K.E., Charles P. T, Patterson C.H., Lighler F.S. Demonstration of four immunoassay formats using the array biosensor // Anal. Chem. 2002. — № 74. — P. 1061−1068.
  39. Penalva J., Puchades R., Maquieira A. Analytical properties of immunosensors working in organic media // Anal. Chem. 1999. — № 71. — P. 3862−3872.
  40. Petrou P. S., Kakabakos S.E., Christofidis I., Argitis P., Misiakos K. Multi-analyte capillary immunosensor for the determination hormones in human serum samples // Biosensors & bioelectronics. 2002. — № 17. — P. 261−268.
  41. Yakovleva J., Davidsson R., Lobanova A., Bengtsson M., Eremi S., taurell Т., Emneus J. Microfluidic enzyme immunoassay using- silicon microchip with immobilized antibodies and chemiluminescence detection // Anal. Chem. 2002. — № 74.-P. 2994−3004. *
  42. Turiel E., Fernandez P., Perez-Conde C. Oriented antibody immobilization for atrazine determination by a flow-through fluoroimmunosensor // Fresenius J Anal Chem. 1999. — № 365. — P. 658−662.
  43. C.C. Иммуноферментный анализ альфа-фетопротеина, использование в диагностике заболеваний человека // Новости «Вектор-Бест». — 1997.-№ 6Б.
  44. Scharnweber Т., Ficher М., Suchanek М., Knopp D. Monoclonal antibody to polycyclic aromatic hydrocarbons based on a new benzoa. pyrene immunogen // Fresenius J Anal Chem. 2001. — № 471. — P. 578−585.
  45. Darwish I.A., Blake D.A. Development and validation of a one-step immunoassay for determination of cadmium in human serum // Anal. Chem. 2002. -№ 74.-P. 52−58.
  46. Galve R., Nichkova M., Camps F., Sanchez-Baeza F., Marco M.-P. Development and evaluation of an immunoassay for biological monitoring chlorophenols in urineas potential indicators of occupational exposure // Anal. Chem. 2002. — № 74. — P. 468−478.
  47. Eremenko A.Y., Bauer C.G., Makower A., Kanne B., Baumgarten H., Schelller F.W. The development of a non-competitive immunoenzymometr cocaine // Anal.Chim. Acta. 1998. -V 358. — № 1. — P. 5−13
  48. Dai S., Meyerhoff M.E. Nonseparation binding / immunoassay using polycation-sensetive membrane electrode detection // Electroanalysis. 2001. — V 13. — № 4. — P. 276−283.
  49. Ercole C., Gallo M.D., Pantalone M., Santucci S., Mosiello L., Laconi C., Lepidi A. A biosensor for Escherichia coli based on a potentiometric alternating biosensing (PAB) transduser // Sensors and Actuators B. 2002. — № 83. -P. 48−52.
  50. Liu G.-D., Yan J.-T., Shen G.-L., Yu R.-Q. Renewable amperometric immunosensor for complement 3 (C3) assay in human serum // Sensors and Actuators B. 2001. — № 80. -P. 95−100.
  51. Milligan C., Ghindilis A. Laccase based sandwich scheme immunosensor employing mediatorless electroanalysis // Electroanalysis. — 2002. V 14. — № 6. — P. 415−419.
  52. Peng T., Cheng Q., Stevens R. Amperometric detection of Escherichia coli heat-labile enterotoxin by redox diacetylenic vesicles on a sol-gel thin-film electrode // Anal. Chem. 2000. — № 72. — P. 1611−1617.
  53. Fernandez-Sanchez C., Gonzalez-Garcia M.B., Costa-Garcia A. AC voltammetric carbon paste-based enzyme immunosensors // Biosensors & Bioelectronics. 2000. -№ 14.-P. 917−924.
  54. Wilner I., Blonder R., Dagan A. Application of photoisomerizable antigenic monolayer electrodes as reversible amperometric immunosensors // American Chemical Society. 1994. — № 116. — P. 9365−9370.
  55. Ju H., Yan G., Chen F., Chen H. Enzyme-linked immunoassay of a-1-fetoprotein in serum by differential pulse voltammetry // Electroanalysis. 1999. — V 11. — № 2. -P. 124−127.
  56. Van Es R.M., Setford S.J., Blankwater Y.U., Meijer D. Detection of gentamicin in milk by immunoassay and flow injection analysis with electrochemical measurement // Anal. Chim. Acta. 2001. — № 429. — P. 37−47.
  57. Keay R.W., Mcneil C J. Separation-free electrochemical immunosensor for rapid determination of atrazine // Biosensors & Bioelectronics. -1998. № 13. — P. 963−970.
  58. Carlo M.D., Lionti I., Taccini M., Cagnini A., Mascini M. Disposable screen-printed electrodes for the immunochemical detection of polychlorinated biphenyls // Anal. Chim. Acta. 1997. — № 342. — P. 189−197.
  59. O’Regan T.M., Pravda M.,. O’Sullivan C. K, Guilbaut G.C. Development of disposable immunosensor for the detection of human heart fatty-acid binding protein in human whole blood using screen-printed carbon electrodes // Talanta. 2002. — № 57.-P. 501−510.
  60. Liu G.D., Wu Z.Y., Wang S.P., Shen G.L., Yu R.Q. Renewable amperometric immunosensor for Schistosoma japonium antibody assay // Anal. Chem. — 2001. № 73.-P. 3219−3226.
  61. Liu C.-H., Liao K.-T., Huang H.-J. Amperometric immunosensors based on protein A coupled polyaniline-perfluorosulfonated ionomer composite electrodes // Anal. Chem. 2000. — 72. — P. 2925−2929.
  62. Pravda M., O’Meara C., George G., Guilbaut G. Polishing of screen-printed electrodes improves IgG adsorbtion // Talanta. 2001. — № 54. — P. 887−892.
  63. Krishnan R., Ghindilis A.L., Atanasov P., Wilkins E., Montoya J., Koster F.T. Amperometric immunoassay for Hantavirus infection // Electroanalysis. 1996. — V 8. — № 12.-P. 1131−1134.
  64. Pumera M., Sanchez S., Ichinose I., Tang J. Electrochemical nanobiosensors. // Sensors and Actuators B. 2007. -№ 123. — P. 1195−1205.
  65. Huang X.-J., Choi Y.-K. Chemical sensors based on nanostructured materials. // Sensors and Actuators B. 2007. -№ 122. — P. 659−671.
  66. Riu J., Maroto A., Rius F. X. Nanosensors in environmental analysis. // Talanta. 2006. — № 69. — P.887−892.
  67. Yang J., Yang Т., Feng Y., Jiao K. A DNA electrochemical sensor based on nanogold-modified poly-2,6-pyridinedicarboxylic acid film and detection of PAT gene fragment. // Anal. Biochem. 2007. — № 1. — P.24−30.
  68. Wang H., Li J.S., Ding Y.J., Lei C.X., Shen G.L., Yu R.Q. Novel immunoassay for Toxoplasma gondii-specific immunoglobulin G using a silica nanoparticle-based biomolecular immobilization method. // Anal. Chim. Acta. 2004. — № 501. — P.37 -43.
  69. JI. А., Богатырев В. А. Наночастицы золота: получение, функционализация, использование в биохимии и иммунохимии. // Успехи химии. 2007. — Т. 76. — № 2. — С. 199−213.
  70. Ruo Y., Ying Z., YaQin C., Ying Z. and Ali S. Highly sensitive, reagentless amperometric immunosensor based on a novel redox-active organic-inorganiccomposite film // Sensors and Actuators B: Chemical. 2006. — V 132. — № 2. -P. 625−631
  71. Wang S.-F., Tan Y.-M. A novel amperometric immunosensor based on Fe3C>4 magnetic nanoparticles/chitosan composite film for determination of ferritin. // Anal. Bioanal. Chem. 2007. — № 378. — P. 703−708.
  72. Tang D., Yuan R., Chai Y., Fu Y. Peculiarities of the electrochemical behavior of modified electrodes containing single-wall carbon nanotubes. // Electrochemistry Communications. 2005. — V 7. — № 2. — P. 177−182.
  73. Wang J. Carbon-Nanotube Based Electrochemical Biosensors: A Review // Electroanalysis. 2005. — V 17. — № 1. — P.7−14.
  74. Trojanowicz M. Analytical applications of carbon nanotubes. // Trends in Anal. Chem. 2006. — № 25. — P. 480−489.
  75. O’Connor M., Kim S.N., Killard A.J., Forster R.J., Smyth M.R., Paradimitrakopoulos F., Rusling J. F. Mediated amperometric immunosensing using single walled carbon nanotube forests. // Analyst. 2004. — № 129. — P. 1176−1180.
  76. Viswanathan S., Wu L.-C., Huang M.-R., Ho J.-A. Electrochemical immunosensor for cholera toxin using liposomes and poly (3,4-ethylenedioxythiophene)-coated carbon nanotubes, // Anal. Chem. — 2006. № 78. — P. 1115−1121.
  77. Okuno J., Mehashi K., Keman K., Takamura Y., Matsumoto K., Tamiya E. Label-free immunosensor for prostate-specific antigen based on single-walled carbon nanotube array-modified microelectrodes.// Biosensors Bioelectronics. 2007. — № 22.-P. 2377−2381.
  78. Zhang L., Yuan R1., Chai Y., Chen S., Wang N. and Zhu Q. Layer-by-layer selfjassembly of films of nano-Au and Co (bpy)33+ for the determination of Japanese B
Заполнить форму текущей работой

Заказал и сдал!