Методы клинической оценки течения раневого процесса у больных с ранами

Основным критерием оценки течения раневого процесса является его клиническая характеристика. В процессе лечения гнойных ран клинически оценивались:

• 1. Сроки исчезновения отека и перифокальной инфильтрации мягких тканей (в сутках).
• 2. Сроки появления грануляционной ткани в ране (в сутках).
• 3. Сроки появления краевой эпителизации (в сутках).
• 4. Сроки появления островковой эпителизации.
• 5. Сроки полной эпитализации раны (в сутках).
• 7. Сроки нормализации температуры тела (в сутках).

Методы лабораторного исследования репаративного процесса.

1. Сроки нормализации количества лейкоцитов в периферической крови, лимфоцитов и моноцитов.

Исследование уровня белка плазмы крови

Исследование уровня общего белка крови проводилось рефрактометрическим методом. Исследования выполнялись на 1, 5, 10 сутки наблюдения.

Методика бактериологических исследований.

Бактериологические исследования проводились в баклаборатории 333 ОВКГ Сиб.ВО. Материал из раны брался стерильным тампоном и в стерильной пробирке доставлялся в лабораторию, где пересевался на питательные среды.

Затем материал помещают в термостат (температура 37С). Через сутки подсчитывают число колоний по всей чашке:

• а) до 10 колоний — 1 степень обсемененности.
• б) от 10 до 25 колоний — 2 степень обсемененности.
• в) от 25 до 50 колоний — 3 степень обсемененности.
• г) от 50 колоний и больше — 4 степень обсемененности.

Исследования на раневую микрофлору проводилось согласно приказу Минздрава N 535 от 22 апреля 1985 г. «Об унификации микробиологических (бактериологических) методов исследования применяемых в клинико-диагностических лабораториях лечебно-профилактических учреждений» .

Цитологические исследования.

Цитологическая диагностика важна на любом этапе заживления раны. Она позволяет судить о характере морфологических изменений, состоянии неспецифических факторов защиты, четко определять фазы течения раневого процесса. Мы получали цитологические отпечатки с раневой поверхности по методу М. П. Покровской и М. С. Макарова (1942). Цитологию эксудата изучали с помощью мазков — отпечатков. Препараты окрашивали по Романовскому. При исследовании каждого отпечатка подсчитывали не менее 200 клеток. Подсчитывали количество — фибробластов, лимфоцитов, макрофагов, эпителиальных клеток, моноцитов, эозинофилов, нейтрофилов, дегенерирующих клеток, наличие микрофлоры.

Гистологическое исследование грануляционной ткани Гистологическое исследование грануляционной ткани проводилось в патологоанатомической лаборатории Сибирского Военного округа. Материал забирали до начала лечения предложенными методами, в первые сутки лечения 3, 5, 7, 10. Препараты окрашивали гематоксилин — эозином и по Ван Гизону. В грануляционной ткани исследовали наличие капилляров, сосудистых петель, наличие фибробластов и эпителиальных клеток, лейкоцитов, эозинофилов и макрофагов. Определяли тип воспалительной регенерации.

Иммунологические методы исследования периферической крови Развитие иммуносупрессии — закономерная реакция иммунной системы на заболевание или тяжелую травму. В первые же минуты после такого воздействия возникают первичные изменения факторов неспецифической резистентности, выражающиеся в усилении секреции лизосомальных катионных белков, вследствие чего уменьшается число нейтрофилов, содержащих эти белки. Функциональная активность фагоцитов падает. Одновременно увеличивается лизосомальная активность сыворотки крови за счет поврежденных фагоцитов.

Оценка иммунологической реактивности включала в себя количественную характеристику Т-клеточного звена иммунитета в системе фагоцитирующих клеток. Определяли общее количество активных Т-лимфоцитов, баланс иммунорегуляторных клеток (индукторно-хелперной и эффекторно-супрессорной субпопуляций Т-лимфоцитов, а также их соотношение).

Исследование мазков отпечатков на лактат катионные белки (ЛКТ) нейтрофилов Роль фагоцитов в патогенезе воспаления далеко не исчерпывается их способностью очищать очаг от инфекции и других нарушителей гомеостаза. Течение воспаления в значительной мере зависит от способности фагоцитов вырабатывать эффекторные молекулы с флокогенными свойствами.

Поэтому изучение свойств фагоцитов в клинике не должно ограничиваться оценкой их поглотительной и микробицидной активностью, но важно знать их функциональные резервы.

Исследования второй половины XX века выявили в лейкоцитах ряд факторов неспецифической резистентности организма. Среди них лизоцим, лактоферрин, миелопероксидаза, неферментные катионные белки. Доказана антибактериальная функция указанных веществ. Наименее исследованы неферментные катионные белки, открытые в 60-х годах нашего века во время поисков антибактериальных структур в лейкоцитах. Неферментные катионные белки содержатся во вторичных, специфических гранулах полиморфноядерных лейкоцитов. По своей природе катионные белки являются продуктами частичного протеолиза ядерных гистонов, богатых цистеином и лизином. Им присущ широкий спектр биологических эффектов. Так, в малых концентрациях они активируют обменные процессы в клетке, в больших — угнетают их. Они способны повреждать клеточные и сосудистые мембраны. Последнее дало повод отнести их к «медиаторам воспаления» Неферментные катионные белки в лейкоцитах исследуют цитохимическим методом с применением красителей — прочного зеленого либо бромфенолового синего. Неферментные катионные белки определяли по следующей методике. Делали мазки отпечатки с раны, фиксировали спиртом. В лаборатории иммунологии 333 Окружного Военного клинического госпиталя окрашивали их бромфеноловым синим. На свежие мазки крови наносили 5 -6 капель сульфосалициловой кислоты и фиксировали в течение 1,5 минуты, затем тщательно промывали препарат дистиллированной водой и высушивали, Окрашивали 0,1% раствором бромфенолового синего в течение 1−2 минут, нанося на мазки по 5 -6 капель красителя. Краситель смывали несколькими каплями баратного буфера. После тщательного отмывания дистиллированной водой, мазки высушивали и докрашивали раствором основного фуксина в течение 1- 2 секунд. Остатки красителя отмывали проточной водой и после высыхания микроскопировали с увеличением х90 с масляной иммерсией. Катионный белок выявляется в цитоплазме нейтрофилов в виде синих гранул. При оценке активности внутриклеточного фермента чаще пользовались полуколичественным анализом результатов, используя принцип Астальды, основанный на выявлении различной степени интенсивности специфической окраски. В зависимости от нее исследуемые элементы делятся на 4 группы:

с отрицательной реакцией (-);

слабоположительной (+);

положительной (++);

резко положительной (+++).

Подсчитывали 100 клеток, дифференцируя их по указанному принципу, затем число клеток с одинаковой интенсивностью окраски умножали на соответствующие данной группе количество плюсов, сумма этих произведений составляет условные единицы. Удобнее использовать средний цитохимический коэффициент (СЦК). С этой целью количество полученных единиц активности делят на 100 клеток. Нормальные величины ЛКТ у здоровых людей в нейтрофилах обнаружено 120 — 170 ед или СЦК 1,2 1,7, при этом не отмечено различий у здоровых лиц обоего пола. Необходимые реактивы:

• 5% раствор сульфасалициловой кислоты;
• 0,05 N боратный буфер pH 8,2;
• 0,1% раствор бромфенолового синего на боратном буфере;
• 0,05% раствор основного фуксина.