Антитела к дезоксирибонуклеиновой кислоте в сыворотке крови

При ишемическом инсульте в результате массивного разрушения высоко-детерминированной мозговой ткани и функциональной несостоятельности структур гематоэнцефалического барьера, в сыворотке крови появляются свободные внеклеточные олигонуклеосомальные фрагменты ДНК. Фрагменты ДНК является иммунногенным и в ответ на их появление в крови больных ишемическим инсультом появляются антитела. Выяснение роли антител как в развитии так и во вторичном поражении головного мозга при ишемическом инсульте у больных АГ представляет научный интерес.

Определение антител к ДНК осуществлялось методом непрямого ИФА. Проводили сенсибилизацию полистириловых планшетов антигеном — коммерческим высокополимерным препаратом ДНК из эритроцитов цыплят фирмы Reanal (Венгрия) в фосфатном буфере. Затем испытуемые сыворотки вносили в лунки планшета и последовательно инкубировали с антигеном, растворами конъюгатов моноклональных антител к IgM и IgG, субстратом (ортофенилендиамин с перекисью водорода) с последующим промыванием лунок планшетов фосфатным буфером между фазами реакции. Затем вновь инкубировали и останавливали реакцию с помощью внесения в лунки планшета по 0,05 мл «стоп-реагента"-2М раствора серной кислоты. Приготовление рабочего разведения антигена и испытуемых сывороток проводилось в соответствии с результатами разработок А. В. Резайкиной [1988], дальнейший ход исследования осуществляли в объеме 100 мкл согласно инструкции ИФА-тест-системы «Lues Screen». Показатель оптической плотности определяли с помощью регистрирующего устройства АКИ-Ц-01 при длине волны 492 нм. Реактивность оценивали в сравнении со средними отрицательными значениями — контрольных сывороток (доноров). Значение оптической плотности пробы, превышающее М±1б отрицательной сыворотки, расценивали как положительный результат.