Влияние нативного яда некоторых представителей аспидовых змей на реологические свойства крови

Актуальность проблемы. Ежегодно на земле, по данным Всемирной организации здравоохранения, от змеиных укусов страдает около 1 000 000 человек из них 50 000 погибают, а часть из оставшихся становятся инвалидами [Бердыева А.Т., 1994]. Это определяет необходимость глубокого изучения характера повреждающего действия зоотоксинов на различные системы органов человека для выявления спектра средств и способов специфического и неспецифического воздействия на организм пострадавшего.

Общим является мнение, о том что под влиянием яда кобр развивается комплекс реакций, вызывающих существенные изменения метаболической и функциональной активности клеток красной крови. При этом своеобразие наблюдаемых эффектов зависит главным образом от состояния эритроцитарной мембраны и внутренних эритроцитарных факторов, степень повреждения которых находит объективное отражение в нарушении реологии крови.

Фундаментальные исследования А. М. Чернуха (1975) позволили установить, что реологические свойства крови — вязкость, способность эритроцитов образовывать крупные и устойчивые агрегаты, а также способность эритроцитов к деформации при прохождении через капилляры, диаметр которых меньше их собственного, в значительной мере влияют на состояние микрои макрогемодинамики. Несмотря на то, что эти показатели во многом определяют интегральную картину отравления, в литературе имеются лишь отдельные, не систематизированные, сведения о гемореоло-гических расстройствах при интоксикации ядами змей [Корнеева Н.В., 1986, Орлов Б. Н., 1987].

В связи с этим проведение широкого круга исследований реологии крови при интоксикации ядами змей продиктовано не только практической необходимостью, но имеет и немаловажное теоретическое значение. Это объясняется тем, что гемореологи-ческие расстройства, в частности повышение вязкости крови и склонность эритроцитов к образованию агрегатов, лежат в основе нарушения микроциркуляции жизненно важных органов и являются одной из ведущих причин их функциональной недостаточности. Детальное исследование изменений реологических особенностей крови под влиянием природных химических раздражителей, с которыми человек сталкивается в процессе естественных взаимоотношений с природой, поможет полнее установить возможные последствия и определить наиболее эффективные пути их коррекции в условиях действия биотических эколого-химических факторов окружающей среды.

Кроме этого немаловажное значение имеет развитие и расширение арсенала новейших методов исследования, являющихся неотъемлемым условием научного прогресса. Современные требования к аппаратуре подобного рода заключается в высокой чувствительности, точности, простоте, экспрессности и обеспечении автоматизированной оценки полученных результатов.

Достаточно перспективной в этом отношении является компьютерная морфометрия, основанная на комплексном оптико-геометрическом подходе к анализу морфофункциональных характеристик форменных элементов периферической крови, которые во многом определяют её реологические свойства [Жукоцкий А. и др., 1992; Коган Э. М. и др., 1994].

Всё вышеизложенное определяет актуальность выбранного направления исследований, а использование новых более совершенных и высокочувствительных методов анализа позволяет установить неизвестные ранее особенности реакции организма на воздействие зоотоксинов.

Целью настоящего исследования является изучение изменения реологических свойств крови при остром отравлении натив-ным ядом красной кобры (Naja pallida).

В соответствии с этой целью представлялось важным уделить внимание решению следующих конкретных задач:

1.Определить токсичность используемого яда;

2.Изучить изменение основных реологических показателей периферической крови при действии различных доз нативного яда Naja pallida в экспериментах in vitro;

3.Изучить изменение основных реологических показателей периферической крови при действии различных доз нативного яда Naja pallida в экспериментах in vivo;

4.Изучить особенности морфофункционального состояния эритроцитов в норме и при интоксикации с использованием методов сканирующей электронной микроскопии и прижизненной компьютерной фазометрии;

5.Установить наиболее существенные и информативные показатели, определяющие характер ответной реакции эритроцитов, на основе анализа динамики их фазовых изображений;

6.Показать возможность практического использования метода прижизненной компьютерной фазометрии для объективной оценки степени морфофункциональных нарушений эритроцитов в условиях интоксикации, прогнозирования возможных последствий и определения эффективных способов коррекции выявленных нарушений.

Научная новизна работы. Представленная работа выполнена с использованием нативного яда змей Naja pallida.

Впервые проведён сравнительный анализ изменений реологических свойств крови в динамике интоксикации при действии различных доз нативного яда Naja pallida в системах in vitro и in vivo;

Апробирована технология прижизненной компьютерной фазовой морфометрии на основе принципиально нового компьютерного фазово-интерференционного микроскопа «Цитоскан», включающая способ подготовки исследуемых препаратов, алгоритмы анализа изображений эритроцитов, методов статистической обработки данных.

Проведена комплексная оценка морфофункционального статуса эритроцитов периферической крови человека и крыс в норме и при интоксикации на основе многомерного анализа метрических и динамических оптико-геометрических показателей, объективно отражающих состояние клеточного гомеостаза.

Впервые получены прижизненные спектральные характеристики фазовых изображений эритроцитов в норме и при воздействии нативного яда. Установлены конкретные частоты, отражающие степень нарушения метаболической активности клеток красной крови при интоксикации в условиях in vivo и in vitro.

Научно-практическая ценность. Выявлены особенности влияния нативного яда аспидовых змей на реологические свойства крови и установлена зависимость динамики развития гемореоло-гических нарушений от времени и уровня интоксикации.

Полученные результаты расширяют существующие представления об общих механизмах действия яда Naja pallida с учетом клеточного и субклеточного уровней реализации регистрируемых токсических реакций, позволяют оценить роль компенсаторноприспособительных возможностей живого организма в условиях прогрессирующей интоксикации.

Метод прижизненной фазовой морфометрии клеток периферической крови может быть использован в практике для проведения цитодиагностики развития токсических состояний, а также при оценке эффективности и адекватности проводимых лечебных мероприятий.

Основные положения выносимые на защиту.

1.В патогенезе токсических состояний при отравлении ядами змей важная роль отводится нарушению гемореологических свойств периферической крови, которые являются объективным показателем тяжести состояния и стадии развития интоксикации у реципиента.

2.Метрические и динамические параметры фазовых изображений эритроцитов периферической крови объективно отражают морфо-функциональное состояние живых цитообъектов и могут служить показателями состояния нормы и степени отклонения от неё.

3.Реакции эритроцитов на времязависимое действие натив-ного яда Naja pallida в системах in vivo и in vitro носит различный характер.

Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на международном симпозиуме «Биологическая подвижность: Современные методы исследования» (Пущино, 1998) — XVI научно-практической конференции «Морфо-метрия в диагностике болезней» (Москва, 1998) — семинаре кафедры биофизики МГУ им. М. В. Ломоносова «Фазометрия клеток периферической крови» (1999).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 5 научных работ.

Объём и структура диссертации. Работа изложена на 143 страницах машинописного текста, иллюстрирована 31 рисунком и 17 таблицами. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, главы с описанием материалов и методов исследования, трёх глав, отражающих результаты собственных исследований и их обсуждение, общего заключения и выводов. Список цитируемой литературы включает 55 отечественных и 121 зарубежных источников.

124 ВЫВОДЫ.

1. Установлено, что под влиянием нативного ядовитого секрета красной кобры развивается комплекс гемореологических нарушений, проявляющийся в изменении структурной и динамической вязкости крови, снижении агрегационной активности и деформируемости эритроцитов.

2. В экспериментах in vitro показано, что характер изменения реологии крови после её инкубации с нативным ядом Naja pallida зависит от дозы яда. Действие сублетальной дозы используемого секрета ядовитых желёз (0,02LD50) вызывает уменьшение структурной вязкости крови вследствие снижения агрегационной активности эритроцитов без изменения их деформационных свойств. Действие летальной дозы яда (2LD50) приводит к увеличению вязкости крови, в основе которой лежат снижение деформационной способности эритроцитов, пойкило-цитоз и гемолиз.

3. В экспериментах in vivo установлено, что острое отравление нативным ядом кобры приводит к увеличению вязкости крови, снижению агрегационной активности, уменьшению деформационной способности эритроцитов и повышению гематокрита. Разнонаправленность изменения таких показателей, как вязкость крови и агрегация эритроцитов, свидетельствует о специфичности механизма воздействия используемого секрета ядовитых желёз на систему крови, в частности, на белки плазмы. При этом степень гемореологических нарушений находится в прямой зависимости от времени и уровня интоксикации.

4. Реализация токсических эффектов используемого ядовитого секрета сопровождается стереоструктурными повреждениями эритроцитов. Это приводит к изменению популяционного состава клеток красной крови: снижению количества нормоцитов, увеличению числа эхиноцитов и появлению деформированных форм клеток.

5. Действие нативного яда находит объективное отражение в прижизненном изменении метрических параметров фазовых изображений эритроцитов: времязависимом уменьшении диаметра, периметра и увеличении фазовой высоты клеток в опытах in vitro и in vivo.

6. Характер изменений динамических показателей фазовых изображений эритроцитов позволяет оценить уровень перестройки внутриклеточных процессов в условиях токсического воздействия секрета ядовитых желёз кобры. В экспериментах in vitro выявлено времязависимое тотальное снижение мощности клеточного спектра, отражающее процесс трансформации диско-цитов в эхиноциты и связанное с повышением регидности мембран эритроцитов. В системе in vivo — незначительное снижение интенсивности характерных частот с увеличением ппотности гармонических компонент спектра в диапазоне 2−4, 14−16 Гц на терминальной стадии интоксикации.

7. Разработан комплекс критериев прижизненной оценки морфо-функционального статуса эритроцитов периферической крови на основе комбинации метрических (диаметр, периметр, высота, площадь, объем) и динамических (Фурье-спектр) показателей их фазовых изображений, который может быть использован для дискриминации измененных клеток при анализе степени воздействия на организм факторов окружающей среды, в частности, ядов змей.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

.

Изучение биологически активных веществ, с помощью которых живые организмы воздействуют друг на друга в природе, давно привлекает внимание многих исследователей. К этой категории относятся и ядовитые секреты змей, сведения о биологических свойствах и действии которых широко представлены в работах отечественных и зарубежных авторов [Сахибов Д.Н., Сорокин.

B.М., Юкельсон Л. Я., 1972; Орлов Б. Н., Вальцева И. А., 1977; Lee.

C.Y. et al., 1979].

Современная физиология позволяет расширить наше представление о механизмах действия зоотоксинов, новых сторонах их биологической активности, ранее не известных свойствах ядовитых секретов. Однако ряд вопросов остается еще не до конца изученным. Так, практически не исследованным к настоящему времени является действие животных ядов на реологические свойства крови.

В литературе практически полностью отсутствуют сведения относительно тех закономерностей, согласно которым развиваются гемореологические расстройства при остром отравлении ядами аспидовых змей. Не выявлена специфичность основных проявлений гемореологических нарушений и степень гемореологических сдвигов в зависимости от особенностей патогенеза и тяжести отравления.

Следует подчеркнуть, что общая оценка показателей гемо-реологии при интоксикации ядами змей и определение механизмов, приводящих к изменению текучести крови — проблемы чрезвычайно актуальные. Это обусловлено тем, что при укусах кобры вследствие преобладающего воздействия яда на центральную и периферическую нервную систему на первый план выступают общие симптомы интоксикации, маскирующие нарушения реологических свойств крови.

Также необходимо отметить, что изменяя биофизические характеристики кровотока, реологические свойства крови в некоторых случаях могут являться одним из звеньев патогенеза основного заболевания, в других — усугублять его течение вплоть до развития недостаточности функциональных систем организма [Александрова Н.П., 1987].

Всё это послужило основанием для проведения настоящей работы, целью которой являлось изучение изменения реологических свойств крови при остром отравлении нативным ядом красной кобры (Naja pallida).

В соответствии с поставленной целью нами решались задачи по определению токсичности используемого яда и изучению изменений основных реологических показателей периферической крови при действии различных доз нативного яда Naja pallida в системах in vivo и in vitro. Была проведена сравнительная оценка морфо-метрических параметров эритроцитов в норме и при интоксикации с использованием методов сканирующей электронной микроскопии и прижизненной компьютерной фазометрииустановлены наиболее существенные и информативные показатели, определяющие характер ответной реакции эритроцитов, на основе анализа динамики их фазовых изображенийпоказана возможность практического использования метода прижизненной компьютерной фазометрии для объективной оценки степени морфофункциональных нарушений эритроцитов в условиях интоксикации, прогнозирования возможных последствий и определения эффективных способов коррекции выявленных нарушений.

Представленная работа выполнена с использованием нативного яда Naja pallida. Материалом для исследований служила кровь белых нелинейных крыс и практически здоровых людей.

Для разрешения поставленных задач в работе были использованы методы определения вязкости крови, агрегационной активности эритроцитов, гематокрита, деформируемости эритроцитов. Для установления механизма полученных изменений исследовали особенности клеточной поверхности и формы эритроцитов при помощи сканирующей электронной микроскопии. Кроме того, нами была апробирована оригинальная технология прижизненной компьютерной фазовой морфометрии цитологических объектов, позволяющая проводить комплексную оценку морфофункциональ-ного статуса клеток красной крови в норме и в условиях интоксикации используемым зоотоксином.

В рамках очерченных задач в настоящем исследовании получены 3 группы результатов, представляющих определённое теоретическое и практическое значение. Во-первых, в динамике изучен комплекс реологических изменений крови белых нелинейных крыс и практически здоровых людей, подвергшейся воздействию нативного яда кобры в системе in vitro.

Проведённые исследования показали, что многокомпонентный состав яда в организме оказывает одновременное и подчас разнонаправленное влияние на все (или почти все) реологические параметры крови.

Установлено, что действие ядовитого секрета кобры в условиях in vitro, в дозе 0,02LDso вызывает снижение структурной вязкости крови и угнетение агрегационной активности эритроцитов без изменения их деформационных свойств. Данные изменения наблюдались как у человека, так и экспериментальных животных только при 5-минутной инкубации. Увеличение времени токсического воздействия 0,02LD5o нативного яда до 30 минут и 1 часа приводит к повышению структурной и динамической вязкости крови, снижению агрегационной активности эритроцитов и снижению их деформируемости.

Инкубация периферической крови человека и экспериментальных животных с летальной дозой нативного зоотоксина (2LD50) на всех этапах наблюдения вызывает повышение структурной и динамической вязкости крови, снижение агрегационной активности и деформируемости эритроцитов. При больших сроках инкубации эти изменения микрореологических свойств эритроцитов и текучести крови выражены наиболее ярко.

Анализ экспериментальных данных выявил наличие достоверной взаимосвязи между гемореологическими нарушениями и изменениями морфологии эритроцитов при действии ядовитого секрета Naja pallida.

Морфологические исследования показали, что под влиянием используемого нативного зоотоксина эритроциты человека и крыс трансформируются из дискоцитов в эхиноцитоподобные клетки. Причина наблюдаемых изменений, вероятно, связана со снижением уровня АТФ и блокадой или угнетением работы Са2+, Мд2±АТФазы [Fourie A.M. et a I., 1983]. Это приводит к повышению концентрации внутриклеточного Са2+ и увеличению регидности эритроцитов [Сорокова В.И. и др., 1994]. По мере увеличения сроков инкубации отмечается прогрессирующее ухудшение морфологического состояния эритроцитов и их реологических свойств, о чем свидетельствует снижение фильтруемости, и гемолиз красных клеток крови.

Полученный экспериментальный материал даёт основание предположить возможные механизмы изменения вязкости крови при воздействии нативного ядовитого секрета Naja pallida в условиях in vitro.

В основе увеличения вязкости под действием зоотоксина лежит снижение деформационной способности эритроцитов, пойкилоцитоз, и гемолиз красных клеток крови.

Наблюдаемая картина гемореологических изменений отличается от таковой при классическом синдроме гипервязкости, причиной которого является усиление агрегации и снижение деформируемости эритроцитов при условии сохранённого белкового компонента плазмы крови.

По-нашему мнению, объектами, наиболее чувствительными к действию нативного яда Naja pallida являются, в первую очередь, белки и липиды плазмы, а также мембраны эритроцитов. В пользу этого свидетельствует отсутствие агрегационного процесса в исследованных образцах крови, обязательным условием которого является наличие фибриногена и других высокомолекулярных белков. На этом фоне изменяются эластические свойства красных клеток. Они становятся жёсткими и увеличивают вязкость крови прямо пропорционально их количеству и качеству. Кроме того, на повышение степени вязкости крови большое влияние оказывает ярко выраженный пойкилоцитоз. Появление в результате действия нативного яда регидных сфероэхиноцитов сопровождается их разрушением и выходом свободного гемоглобина в кровоток, также способствующего увеличению вязкости цельной крови.

Выявленное увеличение вязкости крови, снижение деформируемости и подавление агрегационной активности эритроцитов наблюдались не только в опытах in vitro, но и при экспериментальной интоксикации, о чём свидетельствует вторая группа результатов. Установлено, что при внутрибрюшинной инъекции крысам нативного яда Naja pallida подобный эффект достигается только при введении летальной дозы, причём с увеличением срока инкубации степень изменения этих показателей возраста.

Следует отметить, что при применении малых доз яда вызванная in vivo трансформация эритроцитов является обратимой и не влечёт за собой гемолиз. Отсутствие гемолиза, вероятно, объясняется рядом причин: количеством лизолецитина, присоединённого к эритроциту, и продолжительностью его прикрепления, которые в свою очередь будут зависеть, во-первых, от первоначального уровня лецитина в плазмево-вторых, от уровня плазменных белков, способных защищать сфероидные клетки от разрушения, и, в-третьих, от функционального состояния селезёнки. Анализ данных литературы свидетельствует о существующем более высоком уровне лецитина в плазме человека. Поэтому не исключено, что, по сравнению с полученными результатами при экспериментальном отравлении крыс, в аналогичных ситуациях in vivo у человека гемолиз может иметь место.

Одним из механизмов увеличения вязкости крови при действии яда кобр является и повышение сосудистой проницаемости, связанной с изменением агрегатного состояния кислых мукополи-сахаридов.

Усиление фильтрации жидкости из капилляров в ткань приводит к тому, что, в первую очередь, из капилляров уходит вода, растворенные в ней соли и мелкодисперсные альбумины и, следовательно, увеличивается гематокрит.

Ещё один возможный механизм повышения вязкости связан с воздействием яда на высокомолекулярные белки плазмы. Так, в результате разрушения структуры фибриногена [Kini R.M., Evans H.J., 1991] снижается онкотическое давление плазмы, жидкая её часть выходит в интерстециальное пространство. Таким образом, отмечается как бы двойной эффект: 1) яд действует на стенку сосуда- 2) яд действует на плазменные белки крови. Всё это отражается на её реологии (деформируемость, Ht, вязкость).

Вышеизложенные факты могут служить причиной наблюдаемого нами резкого увеличения вязкости крови на терминальной стадии отравления ядом Naja pallida, которое приводит к нарушению кровообращения. Это несомненно усугубляет общую картину отравления, и, вероятно, является одним из факторов, определяющим летальный исход.

В этих условиях нормализация реологических свойств крови затруднена, так как гемореологические расстройства сами по себе в организме выступают как факторы патогенеза.

С целью оценки влияния яда аспидовых змей на морфофунк-циональное состояние эритроцитов и определения степени реактивности популяции клеток в рамках настоящего исследования нами была апробирована оригинальная технология прижизненной компьютерной фазовой морфометрии цитологических объектов. Экспериментальные данные этих исследований составили третью группу результатов.

Для эффективного получения и обработки данных компьютерной фазовой морфометрии (КФМ) была предпринята попытка создания алгоритма, который обеспечивал бы комплексный подход к анализу статистических и динамических показателей, объективно характеризующих поведение живой клетки с учётом её основных физиологических функций.

На основании метрических (максимальный диаметр, периметр, высота, площадь, объём) и динамических (спектр Фурье) параметров фазовых клеточных изображений разработаны информативные критерии, характеризующие состояние нормы и степени отклонения от неё.

Указанные параметры клеток являются традиционным набором, эффективно используемым при решении цитодиагностических задач в рамках количественной морфометрии [Погорелов В.М. и др., 1995; Козинец Г. И. и др., 1998; Tichell А. Et al., 1992]. Необходимо отметить, что в контексте данного метода эти величины несут дополнительную информационную нагрузку.

Результаты автоматизированной оценки морфофункциональ-ного состояния эритроцитов периферической крови человека и белых крыс дали возможность оценить в реальном времени некоторые особенности стуктурно-метаболических изменений связанных с воздействием ядовитого секрета некоторых представителей ас-пидовых змей, в живых функционирующих клетках.

Использование разработанного алгоритма оценки морфо-функционального статуса красных клеток крови в условиях воздействия нативного яда Naja pallida позволило выделить типологические особенности их реактивности: уменьшение максимального диаметра, периметра и увеличение высоты фазовых изображений эритроцитов по сравнению с интактными клеткамиизменения характера распределения анализируемых цитологических параметров в диаграммах.

Фазовые изображения непривычны для зрительного восприятия и, как правило, представляются или в псевдоцвете, когда они подобны гипсометрическим географическим картам поверхности, или в виде рельефа (трёхмерное изображение). В случае оптически неоднородных объектов, а также при соизмеримых с длинной волны размерах структурных элементов профиль в фазовом изображении может заметно отличаться от реального геометрического. В ряде случаев возникают неустранимые разрывы поверхности волнового фронта (дислокации), не соответствующие реальной поверхности, и другие артефакты. Интерпретация фазовых изображений, как, впрочем, и других функциональных изображений, например температурных или получаемых на туннельных микроскопах, иногда вызывает затруднения. В связи с этим, как правило, необходимы некоторый опыт, априорная информация или одновременная регистрация обычного и фазового изображений. С этой точки зрения сочетание использования сканирующей электронной микроскопии и компьютерной фазовой микроскопии несомненно перспективным и научно оправданным.

Морфометрические показатели в значительной мере отражают функциональное состояние клеток. Развитие новейших автоматизированных методов морфологического анализа открывает перспективы более глубокого и точного изучения изменений структурно-функциональных отношений в биологической системе. Можно считать установленным, что начало любого патологического процесса или различные внешние физико-химические воздействия приводят к нарушению работы звеньев внутриклеточного конвейера. Эти тончайшие повреждения, ещё не улавливаемые обычными методами морфологических исследований, могут сопровождаться соответствующими объективными функциональными проявлениями [Саркисов Д.С., 1993].

С этой точки зрения особый интерес представляют результаты анализа динамических показателей эритроцитов периферической крови человека и экспериментальных животных при интоксикации нативным ядом кобры в условиях in vitro и in vivo.

Известно [Бродский В.Я., 1966, 1988; Гринченко С. Н., 1989; Кроль А. Ю. и др., 1989], что исследование иерархии клеточных ритмов на основе методов прижизненной микроскопии непосредственно характеризует эффекты взаимодействия трёх основных относительно автономных гомеостатических систем (ионной, энергетической и пластической) регулирующих структурно-метаболическую организацию клетки. Однако, многочисленные попытки установить причинно-следственные связи регистрируемой различными способами внутриклеточной динамики с морфологическими и биохимическими (биосинтетическими) изменениями цитообъектов, ещё не привели к однозначным выводам в отношении интерпретации получаемых результатов. Анализ имеющихся научных фактов показывает, что некоторые ритмы энергетики, трофики и ионного обмена могут определяться в живой клетке даже в состоянии её покоя. Например, колебания в гликолетической цепи составляют 1−3 минуты, окисление сукцината происходит с периодом около 15 сек [Кондрашова М.Н., Каминский Ю. Г., 1971; Hess В., 1976]. При этом, несмотря на интенсивные разработки данной проблемы, многие вопросы касающиеся внутриклеточной динамики, остаются невыясненными и достаточно дискутабельными.

В наших исследованиях был оценён характер импульсной активности эритроцитов периферической крови человека и крыс с частотой от 0 до 17 Гц, что соответствует процессам, происходящим с интервалом 0,05−1 сек. Этот период не ограничен возможностями прибора. Мы сочли его приемлемым на этапе стандартизации метода динамической компьютерной фазометрии.

Полученные результаты в определённой мере выявляют некоторые качественные и количественные изменения пространственно временной конфигурации клеток в отношении частоты, мощности и амплитуды регистрируемых сигналов, соответствующих состоянию нормы или патологии определяемой воздействием используемого ядовитого секрета.

Так, анализ динамических показателей интактных эритроцитов и клеток, подвергнутых действию нативного яда в системах in vitro и in vivo, показал наличие общих константных частот, соответствующих 9.67 и 12.10 Гц, и характерных «зон молчания» в области 3.8−9.6 Гц. При этом в группе клеток, подвергнутых действию нативного яда, были выявлены специфические особенности влияния используемого зоотоксина на мембрану и метаболическую активность эритроцитов, которые нашли отражение в тотальном снижении мощности клеточного спектра при исследовании in vitro и in vivo, а также в увеличении плотности периодических компонент в диапазоне 2−4, 14−16 Гц при экспериментальном отравлении на терминальной стадии интоксикации.

Несмотря на значительный прогресс в попытках конкретной интерпретации получаемых результатов мы не можем сейчас дать удовлетворительное объяснение некоторым процессам которые наблюдались нами на микроскопе «Цитоскан» в эритроцитах периферической крови человека и нелинейных крыс, эта область научных исследований находится практически на уровне феноменологического описания соответствующих явпений. В определённой мере сдерживающим фактором в развитии данного направления является сложность, громоздкость или отсутствие методов, позволяющих идентифицировать природу внутриклеточных событий, обуславливающих изменение тех или иных параметров цитообъек-та, особенно регистрируемых с помощью КФМ сигналов в клеточных спектрах. Вместе с тем применённый нами метод уже способствовал установлению некоторых общих закономерностей развития некоторых патологических процессов и механизмов воздействия различных лекарственных препаратов [Vasilenko i.A. et al., 1998; Кривцова И. В., 1998].

Разумеется, проведённое исследование не может исчерпывающе ответить на многие в высшей степени сложные вопросы динамики развития гемореологических нарушений при остром от-равпении секретами активноядовитых животных. В этой области остаются ещё спорные или неясные вопросы. Тем не менее, полученные результаты представляют большой интерес и дают направления будущим исследованиям.