Окраска ядерного вещества у бактерий

О наличии нуклеуса у бактерий при цитохимических исследованиях судят по качественной реакции на ДНК, которая входит в его состав.

Метод Романовского-Гимза

Этим методом в клетках микроорганизмов одновременно выявляют ядерные вещества и волютин. Препарат фиксируют 5 мин метиловым спиртом или фиксатором Карнуа. В последнем случае для удаления следов уксусной кислоты препарат промывают спиртом и тщательно высушивают на воздухе. Окрашивают, препарат красителем Романовского-Гимза в течение суток, затем ополаскивают слабощелочной (pH 7,2) водой, высушивают и микроскопируют. Ядерные вещества окрашиваются в красно-фиолетовый цвет, цитоплазма — в слабо-розовый. Краситель Карнуа содержит абсолютный спирт, хлороформ, ледяную уксусную кислоту в соотношении 6:3:1. Промышленность выпускает краситель Романовского-Гимза из смеси азура (органический краситель, полученный из метиленового синего), эозина и метиленового синего. Непосредственно перед применением к 10 мл дистиллированной воды, имеющей нейтральную или слабощелочную реакцию (pH 7,2), прибавляют десять капель красителя.

Реакция Фельгена

Ее применяют для окраски ДНК. При слабом кислотном гидролизе ядерных нуклеопротеидов происходит отщепление пуриновых и пиримидиновых оснований, ведущее к высвобождению дезоксирибозы, входящей в ДНК. При гидролизе дезоксирибоза переходит в гидроксилевулиновый альдегид, который взаимодействует с сернистой частью бесцветной фуксинсернистой кислоты, выделяя фуксин красного цвета. В результате ядерные вещества становятся окрашенными.

Препараты бактерий обрабатывают фиксатором Карнуа 5 мин, промывают абсолютным спиртом, гидролизуют 7 мин в растворе 1 н. HCI, подогретой до 60 °C, погружают на 1—2 мин в холодную 1 н. HCI и переносят в фуксинсернистую кислоту (реактив Шиффа) на 3—4 ч. Препараты последовательно промывают в трех кюветах с сернистой водой по 20 мин в каждой, затем ополаскивают дистиллированной водой, высушивают и микроскопируют. Ядерное вещество окрашивается в фиолетовый цвет [4].