Методология исследования.
Клинико-лабораторная оценка эффективности сочетанного хирургического и фармаконутритивного лечения больных раком желудочно-кишечного тракта

РефератПомощь в написанииУзнать стоимостьмоей работы

Методология исследования. Клинико-лабораторная оценка эффективности сочетанного хирургического и фармаконутритивного лечения больных раком желудочно-кишечного тракта (реферат, курсовая, диплом, контрольная)

В работу включены результаты обследования больных раком желудка и раком прямой и ободочной кишок до и после хирургического лечения на фоне проведения различных видов нутриционной поддержки в раннем послеоперационном периоде. Исследования нутриционного статуса, биохимических показателей гомеостаза и маркеров оксидативного стресса, молекулярно-генетических маркеров патологии иммунной системы и клеточного генома, а также специфичных для данных заболеваний онкоассоциированных маркеров было проведено у 141 больного с вышеуказанной патологией. В исследование были включены также данные обследования группы из 30 практически здоровых доноров в возрасте от 40 до 62 лет. Таким образом, всего в работу включен 171 человек.

Клиническая характеристика больных раком желудка

Исследование открытое, проспективное, проводилось в течение 2007;2009гг. Использовались критерии включения, не включения и исключения пациентов из исследования (табл. 1), при использовании которых были отобраны 45 больных с вышеуказанной патологией.

Таблица 1

Критерии включения, не включения и исключения пациентов из исследования


Критерии включения.	Критерии не включения.	Критерии исключения.
1. Рак дистального отдела желудка. 2. Стадия онкологического процесса: T₁₋₃N₀₋₁M_0. 3. Характеристика нутриционного статуса — гипотрофия II степени. 4. Вид оперативного вмешательства: дистальная субтотальная резекция желудка по Ру с лимфодиссекцией в объёме D1; гастрэктомия со спленэктомией и лимфодиссекцией в объёме D2. 5. Наличие ССВО в послеоперационном периоде.	1. Поражение опухолью двух и более отделов желудка. 2. Стадия онкологического процесса: T₄N₀₋₃M_0−1. 3. Характеристика нутриционного статуса — кахексия. 4. Наличие у больных сахарного диабета. 5. Выполнение паллиативных или циторедуктивных вмешательств. 6. Наличие сопутствующей патологии, требующей хирургического лечения.	1. Непереносимость больными растворов для парентерального питания и питательных смесей (аллергические реакции). 2. Отказ больных от проведения нутриционной поддержки. 3. Возникновение тяжелой сопутствующей патологии в послеоперационном периоде (острый инфаркт миокарда, острое нарушение мозгового кровообращения, отёк лёгкого, тромбоэмболия легочной артерии и др.).

При изучении пола и возраста больные распределились следующим образом (табл. 2).

Таблица 2

Распределение оперированных больных раком желудка (в скобках %)


В О З Р, А С Т.	Мужчины.	Женщины.	ВСЕГО.
21−30 лет.	— (0).	— (0).	— (0).
31−40 лет.	— (0).	— (0).	— (0).
41−50 лет.	4 (8,88).	1 (2,22).	5 (11,11).
51−60 лет.	11 (24,4).	6 (13,33).	17 (37,77).
61−70 лет.	14 (31,1).	7 (15,55).	21 (46,66).
71−80 лет.	1 (2,22).	1 (2,22).	2 (4,44).
Более 80 лет.	— (0).	— (0).	0 (0).
ИТОГО.	30 (66,66).	15 (33,33).	45 (100).

Среди исследуемых больных преобладали мужчины — 30 больных; женщин было 15. Средний возраст оперированных больных составил 61,09+7,83 года. Большинство пациентов были в возрасте от 51 до 70 лет — 38 человек (86,66%). ген циконит рак желудок нутриционный Среди сопутствующих заболеваний (рис. 1) превалировали болезни сердечно-сосудистой системы (атеросклероз, ишемическая болезнь сердца — у 20 больных); болезни панкреатобилиарной системы (хронический некалькулёзный холецистит — у 11 больных); болезни органов дыхания (хронический бронхит — у 7 пациентов) и болезни вен нижних конечностей (варикозная болезнь — у 2 больных). У 5 пациентов сопутствующей патологии выявлено не было.

Рис. 1. Сопутствующие болезни у больных раком желудка.

Степень тяжести сопутствующих заболеваний, наличие обострений учитывали при выполнении операций, проведении анестезиологического обеспечения и ведении послеоперационного периода.

У всех включенных в исследование больных объём кровопотери во время операции не превысил 250,0−300,0 мл, что объясняется сокращением сроков оперативных вмешательств. Последнее достигалось также с помощью применения сшивающих аппаратов для наложения линейного механического шва при формировании малой кривизны культи желудка и ушивания культи двенадцатиперстной кишки производства Auto Suture (Швейцария) и ETHICON (США). Также широко использовались синтетические шовные материалы — рассасывающиеся нити: дексон, викрил, окцелон, полисорб и др.

При проведении оперативных вмешательств тщательно соблюдали общепринятые в хирургии принципы наложения швов:

— оценивали состояние тканей (наличие воспалений, рубцов);
— их кровоснабжение;
— определяли степень натяжения тканей формируемых анастомозов;
— выполняли тщательный гемостаз;
— максимально соблюдали асептичность выполнения операции.

Оперативные вмешательства заканчивались дренированием брюшной полости в подпеченочном и поддиафрагмальном пространствах.

Анестезиологическое обеспечение и схемы проведения интенсивной терапии в восстановительном периоде проводили по общепринятым методикам. Антибактериальная профилактика развития послеоперационных гнойно-септических осложнений выполнялась по рекомендациям В. С. Савельева и Б. Р. Гельфанда [2006]. По этим критериям различий у исследуемых больных не отмечалось. Среднее время пребывания исследованных больных в ОРИТ после оперативных вмешательств составило 2,11+0,56 суток.

Вышеуказанные 45 пациентов, соответствующие критериям включения, были распределены на две группы по таблице случайных чисел. Четное число соответствовало основной группе, нечетное — группе сравнения. Группу сравнения составили 22 пациента. Основную группу — 23 человека. По полу, возрасту, сопутствующим заболеваниям, видам оперативных вмешательств, ведению послеоперационного периода данные группы были однородными.

Больным группы сравнения со вторых суток послеоперационного периода в среднем, в течение 5−7 суток проводилось частичное парентеральное питание растворами аминокислот («Инфезол 100» 500,0мл/сут, что составляло 50г/сут аминокислот; или «Хаймикс» 800,0мл/сут 8%-ного раствора, что соответствовало 64г/сут аминокислот; или «Аминостерил КЕ» 500,0мл/сут 10%-ного раствора, что составляло 50г/сут аминокислот) и концентрированными растворами глюкозы (20%-ный раствор, 800,0мл/сут; что составляло 160г/сут глюкозы).

Введение

осуществлялось через центральную вену. Скорость введения растворов аминокислот не превышала 100,0мл/ч, скорость введения глюкозы не превышала 80,0 мл/ч. При этом через каждые 4 часа проводили контроль уровня глюкозы крови и, если его уровень не превышал 8,0ммоль/л, то инсулинокоррекция не осуществлялась. При этом учитывали тот факт, что в результате метаболического ответа на агрессию (операционная травма) развивается гипергликемия, обусловленная увеличением эндогенной выработки глюкозы, и повышается её толерантность к инсулину. При стрессе снижено также действие инсулина и его азотсберегающий эффект, хотя содержание инсулина в крови повышено (Попова Т.С. [и др.], 2002, с.197−199).

Больным основной группы со вторых суток послеоперационного периода в среднем в течение 5−7 дней проводили комбинированное парентерально-энтеральное питание системами «всё — в одном» («Кабивен-центральный», 2053,0мл/сут (1900,0ккал/сут) или «Оликлиномель № 7−1000» 1500,0мл/сут (1800,0ккал/сут) с введённым в них 200,0мл/сут 20%-ного раствора дипептида N (2)L-аланин-L-глутамина «Дипептивен»), и через установленные во время операции назоинтестинальные зонды диаметром 5,0 мм и 6,85мм — питание полуэлементной питательной смесью «ПЕПТАМЕН» от 600,0мл/сут до 1500,0мл/сут 10%-ного раствора.

Парентеральное введение вышеуказанных средств осуществлялось в центральную вену. Скорость введения не превышала 100,0мл/ч. Через каждые 4 часа проводили контроль уровня глюкозы крови и, если его уровень не превышал 8,0 ммоль/л, то инсулинокоррекция также не осуществлялась. Перед введением питательной смеси через назоинтестинальные зонды проводили тест на клиническую переносимость смеси [Хорошилов И.Е., 2000, с. 223]. Растворы питательной смеси вводили с помощью кишечного насоса-инфузора «KANGAROO-324» (Швейцария). При этом применяли специальные мешки-контейнеры для растворов питательных смесей объёмами 1500,0мл ТУСО (Швейцария).

Клинические, рентгенологические, инструментальные и лабораторные методы исследования у больных раком желудка После госпитализации в клинику, сбора жалоб, составления анамнеза заболевания и анамнеза жизни, сбора физикальных данных и постановки предварительного диагноза все больные подвергались общепринятым методам клинического обследования.

К основным биохимическим исследованиям состояния гомеостаза у исследуемых больных относили: глюкозу сыворотки крови, количество эритроцитов в 1л крови, уровень гемоглобина, уровень общего белка, альбумина и глобулинов сыворотки крови, альбумино-глобулиновый коэффициент, уровень электролитов крови (калий, натрий и хлор).

Из основных способов адекватной оценки состояния питания, доступных в повседневной клинической практике, использовали соматометрические и лабораторные методы. Из соматометрических методов применяли: индекс массы тела (ИМТ), окружность плеча, окружность мышц плеча; толщина кожно-жировой складки над трицепсом, ИМТ или индекс Кетле, определяли как отношение массы тела (в кг) к росту (в метрах), возведенному в квадрат.

Из лабораторных методов оценки состояния питания использовались следующие: определение содержания в сыворотке крови общего белка, альбумина, трансферрина (общая железосвязывающая способность сыворотки крови); в периферической крови — абсолютного количества лимфоцитов. Учитывали также потери воды (в л): суточный диурез, перспирация (около 0,8л [Хорошилов И.Е., 2000, с.368]), потери жидкости по зондам и дренажам.

Вышеуказанные биохимические методы оценки состояния гомеостаза и способы оценки статуса питания у больных раком желудка проводили до операции, в день после операции и на 7-е сутки послеоперационного периода.

Эндоскопические вмешательства выполняли гастроинтестиноскопами фирмы «OLYMPUS» (модель «XP-20»). Все исследования проводили натощак, а при наличии содержимого в желудке — после предварительного промывания через назогастральный зонд. При выполнении эндоскопических вмешательств у больных раком желудка оценивали следующие показатели: характер и количество содержимого, размеры складок слизистой, степень воспалительных изменений со стороны слизистой, активность перистальтики, площадь поражения опухолью желудка и степень проходимости данного анатомического отдела.

Из зоны поражения онкологическим процессом при ФЭГДС с целью морфологической верификации диагноза осуществляли прицельный забор фрагментов из 4 участков: по малой кривизне, по большой кривизне, со слизистой передней и задней стенок. Использовали стандартные гистологические и цитологические методики.

Рентгенологический метод (рентгеноскопия и рентгенография) включал в себя контрастное исследование водной взвесью сульфата бария пищевода, желудка, двенадцатиперстной кишки в вертикальном и горизонтальном положениях больного, в известных и строго определенных для каждого отдела и стенок желудка позициях при разной степени контрастирования бариевой взвесью и воздухом.

При этом обращали внимание на положение, форму и размер желудка, на его моторно-эвакуаторную функцию, на протяженность поражения опухолью выходного отдела и на степень стенозирования выходного отдела желудка; на анатомические взаимоотношения с прилегающими органами. Кроме того, выполнялась обзорная рентгенография органов грудной клетки с целью диагностики отдаленных метастазов. Все исследования проводились рентгенологическим аппаратом «APELEM X-Ray Unit DX 90» (Франция). Ультразвуковые исследования (аппарат «Аloka-1700», Япония) осуществляли с целью выявления метастатического поражения печени и поджелудочной железы, а также для диагностики сопутствующей патологии (заболевания гепато-панкреато-билиарной системы). В сложных для диагностики случаях, с целью выявления отдаленных метастазов, выполняли компьютерную и ядерно-магнитно-резонансную томографии. Электрокардиографию (ЭКГ) проводили у всех больных с целью оценки состояния сердечно-сосудистой системы перед операцией и в послеоперационном периоде.

Клиническая характеристика больных раком прямой и ободочной кишок В данном случае с использованием критериев включения, не включения и исключения из исследования (табл. 3) также в открытое, проспективное исследование, которое проводилось в течение 2007;2009гг. были включены 96 человек.

Таблица 3

Критерии включения, не включения и исключения пациентов из исследования.


Критерии включения.	Критерии не включения.	Критерии исключения.
1. Поражение онкологическим процессом одного из отделов прямой или ободочной кишки. 2. Стадия онкологического процесса: T₂₋₃N₀₋₁M_0. 3. Характеристика нутриционного статуса — гипотрофия I-II степеней. 4. Вид оперативного вмешательства: правосторонняя и левосторонняя гемиколонэктомии, резекция сигмовидной кишки, резекция поперечно-ободочной кишки, передняя резекция прямой кишки.	1. Поражение опухолью двух и более отделов толстой кишки. 2. Стадия онкологического процесса: T₄N₀₋₁M_0−1. 3. Характеристика нутриционного статуса — кахексия. 4. Наличие у больных сахарного диабета. 5. Выполнение паллиативных или циторедуктивных оперативных вмешательств. 6. Наличие сопутствующей патологии, требующей хирургического лечения.	1. Непереносимость больными растворов для парентерального питания и питательных смесей (аллергические реакции). 2. Отказ больных от проведения нутриционной поддержки. 3. Возникновение выраженной сопутствующей патологии в послеоперационном периоде (острый инфаркт миокарда, острое нарушение мозгового кровообращения, желудочно-кишечные кровотечения, отёк лёгкого и др.).

При изучении пола и возраста больные распределились следующим образом (табл. 4).

Таблица 4

Распределение оперированных больных раком прямой и ободочной кишок по возрасту и полу, (в скобках %).


В О З Р, А С Т.	Мужчины.	Женщины.	ВСЕГО.
21−30 лет.	— (0).	— (0).	— (0).
31−40 лет.	— (0).	2 (2,08).	2 (2,08).
41−50 лет.	8 (8,33).	10 (10,41).	18 (18,75).
51−60 лет.	18 (18,75).	17 (17,70).	35 (36,45).
61−70 лет.	13 (13,54).	16 (16,66).	29 (30,02).
71−80 лет.	5 (5,20).	7 (7,29).	12 (12,5).
Более 80 лет.	— (0).	— (0).	0 (0).
ИТОГО.	44 (45,34).	52 (54,65).	96 (100).

Женщин было 52, мужчин — 44. Средний возраст оперированных больных составил 52,84+8,25 года. Большинство больных были в возрасте от 51 года до 70 лет — 64 человека (66,66%).

Среди сопутствующих заболеваний (рис. 2) превалировали болезни органов дыхания (хронический бронхит — у 34 пациентов (35,41%)); болезни панкреато-билиарной системы (хронический некалькулёзный холецистит — у 13 больных (13,54%)); хронический панкреатит — у 15 человек (15,62%). У 11 пациентов, 11,45% - болезни сердечно-сосудистой системы (атеросклероз, ишемическая болезнь сердца). Болезни вен нижних конечностей (варикозная болезнь) — у 10 больных, 10,41%. У 13 человек, 13,54% сопутствующей патологии выявлено не было.

Рис. 2. Сопутствующие болезни у больных раком прямой и ободочной кишок Степень тяжести сопутствующих заболеваний, наличие обострений учитывали при выполнении операций, проведении анестезиологического обеспечения и ведении послеоперационного периода.

У всех больных, включенных в исследование, объём кровопотери во время операции не превысил 200,0 — 250,0мл, что объяснялось сокращением сроков оперативных вмешательств. Это также достигалось также с помощью:

1. Широкого использования видеолапароскопической техники (проведение видеолапароскопически ассистированных правосторонней и левосторонней гемиколонэктомии (всего — у 34 больных), что улучшает окончательную диагностику онкопроцесса, позволяет более рационально спланировать ход оперативного вмешательства и значительно уменьшить его травматичность.
2. Применения сшивающих аппаратов для наложения циркулярного механического шва при формировании межкишечных анастомозов Auto Suture (ШВЕЙЦАРИЯ) и ETHICON-ENDO (США).

Анестезиологическое обеспечение и схемы проведения интенсивной терапии в восстановительном периоде проводили по общепринятым методикам. Антибактериальную профилактику развития послеоперационных гнойно-септических осложнений осуществляли по рекомендациям В. С. Савельева и Б. Р. Гельфанда [2006]. По этим критериям различий у исследуемых больных не наблюдалось. Среднее время пребывания в ОРИТ составило 1,89+0,48 суток.

Вышеуказанные 96 больных, соответствующие критериям включения, были распределены на две группы по таблице случайных чисел. Четное число соответствовало основной группе, а нечетное — группе сравнения. Группу сравнения составили 46 пациентов. Основную группу — 50 больных. По полу, возрасту, сопутствующим заболеваниям и видам оперативных вмешательств данные группы были однородными.

Больным группы сравнения со вторых суток послеоперационного периода в среднем в течение 5−7 суток проводили частичное парентеральное питание растворами аминокислот («Инфезол 100» 500,0 мл/сут, что составляло 50г/сут аминокислот; или «Хаймикс» 800,0мл/сут 8%-ного раствора, что соответствовало 64г/сут аминокислот; или «Аминостерил КЕ» 500,0мл/сут 10%-ного раствора, что составляло 50г/сут аминокислот) и концентрированными растворами глюкозы (20%-ный раствор 800,0 мл/сут, что составляло 160 г/сут глюкозы). Скорость введения растворов аминокислот не превышала 100,0 мл/ч, скорость введения глюкозы не превышала 80,0мл/ч. Через каждые 4 часа проводили контроль уровня глюкозы крови и, если его уровень не превышал 8,0ммоль/л, то инсулинокоррекцию не выполняли. Больным основной группы со вторых суток послеоперационного периода, в среднем в течение 5−7 дней проводили полное парентеральное питание системами «всё — в одном» («Кабивен-центральный», 2053,0мл/сут (1900,0ккал/сут) или «Оликлиномель № 7−1000» 1500,0мл/сут (1800,0ккал/сут) с введённым в них 100,0мл/сут 20%-ного раствора дипептида N (2)L-аланин-L-глутамина «Дипептивен»).

Введение

вышеуказанных средств осуществляли в центральную вену. Скорость введения не превышала 100,0мл/ч. Через каждые 4 часа проводили контроль уровня глюкозы крови и, если его уровень не превышал 8,0ммоль/л, то инсулинокоррекцию также не осуществляли. С 3-х суток послеоперационного периода начинали энтеральное пероральное питание в режиме sip feeding питательной смесью «Модулен» в объёме от 400,0 до 800,0мл/сут 10%-ного раствора. Скорость введения составляла 100,0 мл/ч. «Модулен» использовался нами для профилактики послеоперционных воспалительных осложнений со стороны прежде всего вновь наложенных межкишечных соустий.

Клинические, рентгенологические, инструментальные и лабораторные методы исследования у больных раком прямой и ободочной кишок После госпитализации в клинику, сбора жалоб, составления анамнеза заболевания и анамнеза жизни, сбора физикальных данных и постановки предварительного диагноза все больные подвергались общепринятым методам клинического обследования. Основные биохимические показатели состояния гомеостаза у исследуемых больных, способы оценки нутриционного статуса и сроки их выполнения не отличались от таковых у больных раком желудка. Эндоскопические манипуляции выполняли гибкими колоноскопами фирмы «OLYMPUS» (модели «CF-30I» и «CF-P20L»). Все исследования проводили натощак, после соответствующей в предыдущий день перед исследованием подготовки. При выполнении фиброколоноскопии (ФКС) у больных раком прямой и ободочной кишок оценивали следующие критерии: уровень поражения опухолью кишки, анатомические особенности толстой кишки (например, наличие долихосигмы или долихоколон), активность перистальтики, размеры сужения просвета кишки в зоне опухоли. Из зоны поражения онкологическим процессом при ФКС с целью морфологической верификации диагноза выполнялся прицельный забор не менее 4 фрагментов. Использовали стандартные гистологические и цитологические методики. Рентгенологический метод включал в себя выполнение ирригоскопии с двойным контрастированием. Подготовка к данному исследованию была аналогичной подготовке к ФКС. При этом оценивали область и протяженность поражения опухолью кишки, проходимость пораженного отдела, активность перистальтики и анатомические особенности ободочной кишки (долихоколон, колоноптоз и др.) и анатомические взаимоотношения с прилегающими органами. Распределение по уровню поражения у больных раком прямой и ободочной кишок в исследуемых группах по данным ФКС и ирригоскопии представлено в таблице 5.

Таблица 5

Распределение больных раком прямой и ободочной кишок по локализации онкологического процесса


Локализация опухоли.	Основная группа, n=50.	Группа сравнения, n=46.
1. Рак слепой кишки.	4 (8,0%).	4 (8,69%).
2. Рак восходящей ободочной кишки.	5 (10,0%).	4 (8,69%).
3. Рак печеночной кривизны ободочной кишки.	2 (4,0%).	2 (4,34%).
4. Рак поперечно-ободочной кишки.	1 (2,0%).	1 (2,17%).
5. Рак селезеночной кривизны ободочной кишки.	1 (2,0%).	1 (2,17%).
6. Рак сигмовидной кишки.	18 (36,0%).	16 (34,78%).
7. Рак прямой кишки (средне-ампулярный отдел и выше).	19 (38,0%).	18 (39,13%).
ИТОГО.	50 (100,0%).	46 (100,0%).

Кроме того, выполняли обзорную рентгенографию органов грудной клетки с целью диагностики отдаленных метастазов. Все исследования проводили рентгенологическим аппаратом «APELEM X-Ray Unit DX 90» (Франция). Ультразвуковые исследования (аппарат «Аloka-1700», Япония) осуществлялись с целью выявления метастатического поражения печени и поджелудочной железы, а также для диагностики сопутствующей патологии (заболевания гепато-панкреато-билиарной системы). В сложных для диагностики случаях, с целью выявления отдаленных метастазов, выполняли компьютерную и ядерно-магнитно-резонансную томографии. Электрокардиография (ЭКГ) проводилась у всех больных с целью оценки состояния сердечно-сосудистой системы перед операцией и в послеоперационном периоде.

Исследования маркеров патологии иммуно-регуляторных систем и клеточного генома выполнялись в Центральной научно-исследовательской лаборатории Саратовского государственного медицинского университета. Забор крови у больных раком желудка, прямой и ободочной кишок как в основных группах, так и в группах сравнения, а также у здоровых доноров производили натощак, в утренние часы. С целью стандартизации использовали пробирки для забора крови «Vacuette» с разными химическими наполнителями:

— для исследования сыворотки — пробирки с активатором свёртывания (кремнеземом) и разделительным гелем, образующим барьер между сывороткой и свернувшейся кровью после центрифугирования;
— для исследования цельной крови — пробирки с К2ЭДТА (1,8 мг/мл);
— для исследования глюкозы — пробирки с литий-гепарином и натрий-гепарином;
— для выделения и исследования мононуклеаров из крови — пробирки с 0,1 М цитрата натрия, разделительным гелем и раствором фикола для создания градиента плотности (BD Vacutainer CPT, Италия).

С целью выделения фракции мононуклеаров после взятия крови пробирки центрифугировали в течение 20 минут при 1500−1800 х g. После этого выделяли вместе с плазмой над разделительным гелем кольцо, содержащее мононуклеары (лимфоциты и моноциты). Готовили суспензию мононуклеаров в плазме и проводили подсчет количества выделенных клеток и их состав с помощью гематологического анализатора. В полученной взвеси определяли содержание факторов апоптоза (растворимый FAS-рецептор и FAS-лиганд) и показателя состояния инактивации опухоль-подавляющего генома — гена р53 с помощью твердофазного иммуноферментного анализа с использованием реактивов фирмы Bender Med Systems (Австрия). Единицы измерения FAS-рецептора и FAS-лиганда — нг/мл. Единицы измерения гена Р53 — U/ml. Содержание цитокинов в сыворотке крови (IL-1?, IL-4, IL-6, IL-8 и ФНО-a) также определяли с помощью твердофазного иммуноферментного анализа с использованием реактивов фирмы BIOSOURCE (США). Единицы измеренияпг/мл.

Определение уровня малонового диальдегида (МДА) проводили методом, основанном на образовании окрашенного комплекса при его взаимодействии с тиобарбитуровой кислотой [Камышников В.С., 2004, с. 589]. Единицы измерения — мкмоль/л. Активность супероксиддисмутазы (СОД) устанавливали по методу Mistra и Fridovich [1972] в модификации О. С. Брусова с соавторами [1983]. Метод основан на способности СОД тормозить реакцию автоокисления адреналина при рН 10. Единицы измерения — условные единицы на 1мл пробы.

Определение окисленного и восстановленного глютатиона проводили по методу В. Г. Чернышева [1983]. Единицы измерения — мкмоль/л. эритроцитов. C-реактивный белок (СРБ) и церулоплазмин определяли в сыворотке крови с помощью фотометрического измерения.

Для исследования СРБ использовали реакцию антиген-антитело между антителами к человеческому СРБ и СРБ, находящуюся в образце с использованием наборов фирмы Diagnostic Systems GmbH (Германия).

Результаты выражали в г/л. Для определения церулоплазмина применяли набор реактивов Sentinel Diagnostics (Италия). Результаты также выражали в г/л. Определение онкоассоциированных маркёров — ракового эмбрионального антигена (РЭА) и СА19−9 осуществляли методом твердофазного иммуноферментного анализа с использованием реактивов фирмы «Вектор-Бест» (Россия). Единицы измерения — нг/мл. Результаты исследований вышеуказанных показателей у практически здоровых доноров представлены в таблице 11.

Таблица 11

Результаты исследования основных исследуемых показателей у здоровых доноров (n=30)


Исследуемый показатель.	Фирма-изготовитель набора.	Величина нормы (фирма-изготовитель).	Величина нормы (результаты исследования практически здоровых лиц).
IL-1 В.	BIOSOURCE (США).	0−11 пг/мл (средняя -1,6)	5,27±2,11 пг/мл.
IL-4.	BIOSOURCE (США).	0−10 пг/мл (средняя — 1,66)	95,67+28,96 пг/мл.
IL-6.	BIOSOURCE (США).	0−15 пг/мл (средняя — 1,59)	11,38±5,98 пг/мл.
IL-8.	BIOSOURCE (США).	0−30 пг/мл (средняя).	5,29±1,99 пг/мл.
ФНО-б.	BIOSOURCE (США).	0−5,9 пг/мл (средняя 0,5)	2,38±1,67 пг/мл.
РЭА.	Вектор-Бест (Россия).	0−5 нг/мл (средняя 1,77)	3,64±1,06 нг/мл.
СА19−9.	Вектор-Бест (Россия).	0−45 нг/мл. (средняя 6,7).	5,37±1,47 нг/мл.
МДА.	-;	2,5−6,0 мкмоль/л.	2,80±0,1 мкмоль/л.
СОД.	-;	-;	7,39±2,76 у.е. на мл пробы.
Глютатион окисленный.	-;	-;	0,1±0,17 мкмоль/л эритроцитов.
Глютатион восстановленный.	-;	2,5−6,0 мкмоль/л. эритроцитов.	1,02±0,18 мкмоль/л эритроцитов.
АроFAS.	Bender Med Systems (Австрия).	160,9 нг/мл.	124,45±67,14 нг/мл.
FASL.	Bender Med Systems (Австрия).	0 нг/мл.	0,01±0,01 нг/мл.
P53.	Bender Med Systems (Австрия).	0,6−1,2 U/ml.	2,32±0,84 U/ml.
С-РБ.	Diagnostic Systems (Германия).	1,47−2,55 г/л.	1,27±0,31 г/л.
Церулоплазмин.	Sentinel Diagnostics.	0,2−0,6 г/л.	0,35±0,18 г/л.

Методы статистической обработки материала

Статистическая обработка результатов исследований выполнена на персональном компьютере с использованием пакета статистических прикладных программ Microsoft Statistica 6.0 и применением специальных программ непараметрической статистики, определяющих достоверность различий малых групп данных.

Были использованы следующие статистические методы:

1. Вычисление сpедней, ошибки, довеpительного интервала, асимметрии, эксцесса, максимального и минимального значений. Доверительный интервал — 95%, при его вычислении предполагался нормальный закон распределения случайной величины.

2. t-критерий Стьюдента. Использовали для получения критерия при сравнении средних значений.
3. Критерий Манна-Уитни для двух независимых совокупностей. Предназначен для проверки гипотезы о неравенстве средних. Это непараметрический критерий, его использовали, когда не выполнены условия, при которых возможно применение обычного t-критерия.
4. Оценка нормальности распределения случайной величины. Применялась для проверки распределения на нормальность. Критическая область выше верхней 5%-ной точки распределения х² при 3 степенях свободы.
5. Для оценки клинической эффективности исследуемых качественных и порядковых признаков использовали коэффициент ранговой корреляции Спирмена, характеризующий силу связи между исследуемыми признаками.

Показать весь текст

Заполнить форму текущей работой