Водорастворимые витамины и витаминоподобные соединения

Внимание химиков сначала привлекли интенсивная оранжево-желтая окраска и яркая зеленоватая флуоресценция рибофлавина. Соединения, выделенные из молочной сыворотки, куриных яиц и других объектов из-за желтого цвета были названы флавинами.

Структуру рибофлавина установили в 1933 году Кун и его сотрудники, выделившие 30 мг чистого вещества из 30 кг сухого яичного белка (10 000 яиц). Высокая флуоресцирующая способность рибофлавина была использована при проведении последних стадий очистки. Витамин был синтезирован в 1935 году Каррером.

Роль рибофлавина в биологическом окислении была установлена в результате большого интереса биохимиков, а процессам дыхания клетки. В 20-х годах Варбург обнаружил, что кислород реагирует с каким-то железосодержащим катализатором дыхания. Было установлено, что выделенный из дрожжей желтый белок обладает примечательным свойством обесцвечиваться под действием восстановительной системы.

Витамин В₂ (рибофлавин, витамин роста) относится к флавинам? естественным пигментам овощей, картофеля, молока и др., состоит из гетероциклического кольца изоаллоксазина желтого цвета, соединенного N-гликозидной связью с остатком пятиатомного спирта рибитола.

Физико-химические свойства. Чистый рибофлавин представляет собой оранжево-желтый порошок горького вкуса, относительно трудно растворимый в воде. Рибофлавин легко восстанавливается путем присоединения 2-х атомов водорода, восстановленная форма рибофлавина обесцвечивается. Устойчив в кислой среде, хорошо переносит нагревание (до 290°С), однако легко разрушается на свету и в щелочной среде, особенно при нагревании. Под влиянием солнечного света переходит в неактивные формы (люмифлавин, люмихром) и теряет биологические свойства. При хранении молока на свету за три с половиной часа разрушается до 70% витамина! Не оставляйте молоко на ярком солнечном освещении.

Рибофлавин обладает окислительно-восстановительными свойствами. В окисленной форме рибофлавин окрашен в желтый цвет, а в восстановленной — бесцветный.

Метаболизм витамина В₂. Рибофлавин из пищи всасывается в кишечнике путем простой диффузии. В процессе трансмембранного переноса превращается под действием флавокиназы в ФМН флавинмононуклеотида, а в печени под действием пирофосфорилазы? в флавиндинуклеотида ФАД. Продукты катаболизма рибофлавина, выводятся с мочой.

Биологическая роль. Витамин В₂ в форме ФАД и ФМН является коферментом флавиновых дегидрогеназ, катализирующих различные окислительно-восстановительные реакции, в том числе окислительное декарбоксилирование пирувата и а-кетоглутарата, перенос электронов и протонов в дыхательной цепи митохондрий, окислительное дезаминирование Dи L-аминокислот, окисление жирных кислот, альдегидов, биогенных аминов, пуринов и др.

Рибофлавин необходим для функционирования палочкового аппарата сетчатки, участвует в построении зрительного пурпура, вместе с витамином, А участвует в обеспечении светового и цветового зрения, а также темновой адаптации и остроты зрения, защищает сетчатку глаза от вредного действия ультрафиолетовых лучей.

Необходим для нормального развития плода, включения в гемоглобин железа, отложенного в депо и получаемого с пищей. Препятствует гипертрофии надпочечников, возникающей после приема тироксина, усиливает влияние тиреотропного гормона на обмен веществ и вместе с дезоксикортикостероном способствует задержке хлорида натрия в организме, является коферментом реакций инактивации эстрогенов в печени.

Существует тесное взаимодействие между рибофлавином и другими витаминами группы В, а также аскорбиновой кислотой. Большие дозы витаминов С и B₁ предотвращают или задерживают развитие гиповитаминоза В₂. При недостатке витамина В₂ возникает дефицит аскорбиновой кислоты, а недостаток аскорбиновой кислоты повышает потребность в витамине В₂. Эффекты витамина В₂ ослабевают при дефиците витамина В₁.

Гиповитаминоз B_2. Недостаток витамина B2 встречается у 90% российского населения, особенно у пожилых людей. При недостаточности витамина в первую очередь поражаются глаза и кожа.

Причины гиповитаминоза В₂. Белковая недостаточность, алиментарная дистрофия, потребление алкоголя, ожоги? повышается выделение рибофлавина c мочой. Недостаточное потребление молока и молочных продуктов, хронические заболевания желудочно-кишечного тракта. Прием противомалярийных препаратов атебрина, акрихина и хинина, а также антибиотиков, особенно биомицина, которые нарушают обмен рибофлавина в организме и приводят к его эндогенной недостаточности. Тироксин, угнетая процесс фосфорилирования, задерживает всасывание рибофлавина и ускоряет его выведение из организма. Дефицит рибофлавина часто развивается в последние 3 месяца беременности. Появление трещин на сосках у кормящих женщин также связано с недостаточностью рибофлавина.

Клинические проявления гиповитаминоза В₂. Вертикальные трещинки и десквамация эпителия слизистой оболочки губ (хейлоз), трещинки и болезненность в уголках рта (ангулярный стоматит, в просторечии? «заеды»), глоссит? сухой ярко-красный язык с мелкозернистой поверхностью, сосочки языка уплощаются и затем атрофируются.

Атрофия слизистой оболочки глотки и пищевода, что приводит к затруднению глотания и дисфагии.

Себорейный дерматит на носогубной складке, крыльях носа, ушах, веках. Себорейный дерматит иногда сопровождается ороговением фолликулов и в дальнейшем может перейти в гиперкератоз с образованием, так называемой, акульей кожи. Очаговое выпадение волос.

Со стороны органов зрения развиваются светобоязнь, снижение остроты сумеречного зрения и скорости темновой адаптации, васкуляризация роговой оболочки, конъюнктивит, кератит и в некоторых случаях катаракта.

В ряде случаев возможны нервные расстройства, проявляющиеся мышечной слабостью, гиперкинезами, жгучими болями в ногах, общим упадком сил, депрессией и деградацией личности. Отмечается плохое заживление ран. У детей? отсутствие или задержка роста.

При хронической недостаточности рибофлавина резко снижается выделение аскорбиновой кислоты с мочой. Развивается гипохромная микроцитарная анемия, сопровождающаяся повышенным образованием и выделением с мочой порфиринов и продуктов их распада (билирубина, уробилиногена, уробилина).

Женщины, получающие бедную рибофлавином пищу как до, так и во время беременности, предрасположены к недонашиванию плода и родоразрешению мертворожденным.

Полное лишение организма рибофлавина в течение более или менее продолжительного времени может привести к развитию острого арибофлавиноза, клинически проявляемого внезапным началом, судорогами, падением кровяного давления, резкой слабостью и рвотой.

Суточная потребность в витамине В₂ 1,5−3 мг (0,7 мг на 1000 ккал).

Из всех витаминов группы В рибофлавин является самым остродефицитным. Потребность повышается при тиреотоксикозе, хронических интоксикациях, застойной недостаточности кровообращения.

Оценка обеспеченности организма рибофлавином: определяют количество рибофлавина, выводимого с мочой (норма 120−400 мкг/сут), а также его концентрацию в сыворотке крови (норма 25−30 мкг/л), содержание ФМН и ФАД в эритроцитах и лейкоцитах.

Важным функциональным тестом является определение ФАД-эффекта? степени активации ФАД-зависимого фермента глутатионредуктазы в гемолизате эритроцитов при добавлении избыточного количества ФАД. В норме коэффициент активации (ФАД-эффект) не превышает 1,2.

Для определения суммарного содержания рибофлавина и его коферментных форм в биологических объектах используют микробиологические методы, основанные на измерении скорости размножения Lactobacillus casei или продуцирования им молочной кислоты. Метод позволяет определять 0,02 мкг рибофлавина в 1 мл. Еще более чувствительный метод, регистрирующий 0,0001 мкг рибофлавина в 1 мл, основан на использовании в качестве тест-объекта Leuconostoc mesenteroides.

В биологических жидкостях (кровь, моча и др.) содержание рибофлавина, ФМН и ФАД можно определить спектрофотометрически или флуориметрически по интенсивности свечения рибофлавина или продукта его фотолиза люмифлавина.

Пищевые источники витамина B₂: молочные продукты, особенно творог; яйца; рыба, мясо, печень, сердце, почки; цельнозерновой хлеб и натуральные крупы, особенно гречневая; дрожжи; абрикосы, капуста, томаты.

Очищенный рис, макаронные изделия и белый хлеб бедны рибофлавином.

Чтобы удовлетворить суточную потребность в витамине В₂ нужно съесть, например, 1,5 кг говядины или выпить 2 л молока. В то же время суточная доза витамина В₂ содержится всего в 15 г сухих пивных дрожжей или 80−100 г печени. А такими продуктами, как картофель, морковь, рыба удовлетворить потребность в витамине В₂ не представляется возможным. Картофеля потребуется съесть не менее 20 кг! Вот почему гиповитаминоз В₂ в современном обществе не такое уж редкое явление.

В промышленности большие количества рибофлавина получают при помощи грибов, которые из-за каких-то нарушений метаболизма, вырабатывают витамин в таком изобилии, что он кристаллизуется в культуральной среде.

Витамин В₃ (пантотеновая кислота, антидерматитный фактор) представляет соединение в-аланина с производным масляной кислоты, связанных между собой амидной связью.

Рис. 8. Структурная формула пантотеновой кислоты

Роль пантотеновой кислоты в обмене веществ заключается в том, что она входит в состав коэнзима А, принимающего участие в окислении жирных кислот, а также пировиноградной и лимонной кислот, т. е. выступает в качестве промежуточного метаболита, связывающего углеводный и жировой обмен. витамин физиологический авитаминоз пантотеновый Термин «пантотеновая кислота» происходит от греческого слова «pantos», означающего «вездесущий», так как она обнаружена в растительных и животных тканях, синтезируется микробами и обладает многосторонним биологическим действием. Пантотеновая кислота широко распространена как в животном, так и в растительном мире. Витамин В₃ в норме находится во всех клетках и тканях организма. При гипои авитаминозах у животных и птиц развиваются специфические дерматиты и кератиты, дегенеративные изменения ряда органов и тканей, особенно желез внутренней секреции, наступает депигментация шерсти и перьев, потеря волос, повреждения сердца и почек, снижение иммунобиологической реактивности.

В 1923 году было обнаружено, что так называемый «биос», или комплекс стимуляторов роста дрожжей, представляет собой ряд биологически активных веществ с различными физико-химическими свойствами. 1933 — год открытия витамина в составе «биоса». Первоначально было установлено, что экстракт печени, освобожденный от витаминов В₁ В₂, В₆, излечивает от дерматитов. Этому антидерматитному фактору присвоили название витамин G. В дальнейшем оказалось, что он идентичен пантотеновой кислоте. Витаминной активностью обладает только природный, правовращающий D (+)-изомер пантотеновой кислоты. Левовращающий L (-)-изомер лишен биологической активности.

Физико-химические свойства. Чистая пантотеновая кислота (ПК) представляет собой светло-жёлтое вязкое масло, хорошо растворимое в воде, этаноле, уксусной кислоте. ПК устойчива к свету и кислороду воздуха, стабильна в нейтральной среде, но быстро разрушается в горячих кислых или щелочных растворах. При термической обработке пищевых продуктов теряется 30−50% ПК, часть которой разрушается, часть переходит в воду, в которой варятся продукты. При заморозке пищевых продуктов также разрушается до 30% ПК.

Метаболизм витамина В₃. Поступившая с пищей пантотеновая кислота всасывается в кишечнике и поступает в кровь путем диффузии. Лучшему усвоению пантотеновой кислоты способствует витамин В₁.

В тканях синтезируются коферментные формы пантотеновой кислоты — кофермент, А (SH-KoA, кофермент ацилирования) и 4-фосфопантотеин.

Катаболизм коферментов происходит путем гидролиза, освободившаяся пантотеновая кислота и её метаболиты выводятся с мочой. С мочой выделяется 30−60% пантотеновой кислоты, поступающей с пищей.

Некоторые аналоги пантотеновой кислоты обладают свойствами антивитаминов, наиболее известным из которых является метилпантотеновая кислота, имеющая дополнительную (третью) метильную группу. Большинство антагонистов пантотеновой кислоты, конкурируя с самой кислотой, блокируют образование кофермента, А (КоА), тогда как другие ее антогонисты, например P-dпантоиламиноэтантиол, конкурируют с самим КоА.

Биологическая роль. Биологическая активность пантотеновой кислоты проявляется только при наличии обоих свободных гидроксильных и метильных групп. 4-Фосфопантотеин является коферментом пальмитоилсинтазы. В форме КоА пантотеновая кислота участвует в реакциях активации ацетата и жирных кислот, окисления и синтеза жирных кислот, окислительного декарбоксилирования а-кетокислот (пировиноградной, а-кетоглутаровой и др.), синтеза кетоновых тел, стероидов, нейтральных жиров, фосфатидов, порфиринов, ацетилхолина, гиппуровой кислоты, ацилирования ароматических аминов и чужеродных соединений, ацетилглюкозамина и др. Во всех этих реакциях КоА выполняет роль промежуточного акцептора и переносчика различных ацильных остатков, образуя ацилпроизводные кофермента, А (ацил-КоА), в которых остаток карбоновой кислоты связывается с SH-группой кофермента, А макроэргической связью, что активирует карбоновую кислоту и облегчает ее вступление в различные реакции.

Пантотеновая кислота способствует усвоению и метаболизму многих других витаминов, в частности В₄ и В₉, повышает эффективность действия ряда лекарственных препаратов, применяемых при сердечной недостаточности, в частности сердечных гликозидов, уменьшает токсичное действие стрептомицина и других противотуберкулёзных препаратов.

Клиническое применение витамина В₃. Препараты пантотеновой кислоты применяются для устранения атонии кишечника после операций на ЖКТ, снятия похмельного синдрома у лиц, злоупотребляющих спиртными напитками, в качестве радиопротектора и для уменьшения токсического действия ряда лекарственных препаратов, при заболеваниях кожи, волос и ногтей, слизистой оболочки рта и пародонта, парестезиях, неврите тройничного и лицевого нерва, токсикозах, дистрофии сердечной мышцы, поражениях печени, аллергических реакциях, у детей — при лечении гипотрофии и рахита.

Гиповитаминоз В_3. В связи с широким распространением пантотеновой кислоты и достаточным ее содержанием в продуктах, недостаточность этого витамина у человека встречается крайне редко.

Причины дефицита. Эндогенная (вторичная) недостаточность пантоте новой кислоты возникает при различных заболеваниях, в том числе инфекционных; глистных и паразитарных инвазиях, заболеваниях тонкого кишечника с синдромом малабсорбции, длительном приеме некоторых лекарственных средств (фтивазида, многих антибиотиков, сульфаниламидов, барбитуратов, кофеина, диуретиков, особенно при совместном приеме гипотиазида; алкоголя и др.), восстановительных процессах после операций, дефиците витамина С и витаминов группы В, длительном переохлаждении, солнечных ожогах.

Метаболические нарушения при дефиците витамина В₃. Нарушаются процессы ацилирования, в том числе ацетилирования, развиваются гипохолестеролемия, гипогаммаглобулинемия; при хроническом дефиците развивается гипофункция коры надпочечников с нарушением синтеза в ней глюкокортикоидов — уменьшается выведение 17-кетостероидов с мочой.

Клинические проявления дефицита витамина В₃: слабость, быстрая утомляемость, апатия, сонливость, депрессия, головокружение и головная боль, тремор, атаксия, слабость мышечных групп разгибателей, повышение сухожильных рефлексов, периферический неврит (сначала появляется покраснение и онемение пальцев ног, сопровождающееся покалыванием, затем возникает жгучая боль в пальцах и подошвах — «синдром жжения в стопах», распространяющаяся до голени — «синдром жжения ног»).

Развиваются зрительные нарушения, вплоть до полной слепоты, бледность сосков зрительных нервов и центральные скотомы, выявляются нарушения умственной деятельности, рассеянность, ухудшения памяти.

Тахикардия, гипотензия, анемия, нарушение восприятия вкуса и запаха, анорексия, угнетение желудочной секреции, ахлоргидрия, запоры, снижение сопротивляемости организма инфекциям.

Поражение слизистых внутренних органов, нарушение работы надпочечников, раннее поседение и выпадение волос. Различные нарушения кожного покрова: мелкие трещины в уголках рта, раннее возникновение морщин и дряблости кожи, появление белых пятен на различных участках тела. В далеко зашедших случаях возможно развитие коматозного состояния и смерть.

Оценка обеспеченности организма пантотеновой кислотой. Определяют концентрацию общей пантотеновой кислоты (включая ее производные и КоА) в сыворотке крови (норма 20−180 мкг% или 0,9−8,2 мкмоль/л) и концентрацию свободной пантотеновой кислоты, а также суточную экскрецию пантотеновой кислоты с мочой.

Уменьшение экскреции ниже 3 мг/сут (норма 2,8−6,5 мг/сут) служит указанием на недостаток пантотеновой кислоты в организме.

Для определения пантотеновой кислоты и ее производных в биологических объектах (кровь, моча, ткани) используют микробиологические методы с применением в качестве тест-организмов Saccharomycoides ludwigii КМ, Saccharomyces cerevisiae, Lactobacillus arabinosus, Т. pyriformis, L. plantarum, L. casei, S. Uvarum, которые не способны к синтезу пантотеновой кислоты и растут только при наличии ее в среде.

Химические методы определения пантотеновой кислоты основаны на колориметрическом измерении содержания Р-аланина, реакции с нингидрином или 1,2-нафтохинон-4-сулъфонатом.

В качестве функционального биохимического теста для оценки обеспеченности пантотеновой кислотой определяют скорость ацетилирования сульфаниламидов in vivo. После введения определенной дозы сульфаниламида исследуют экскрецию ацетилированного сульфамида в часовых пробах мочи. Метод дает информацию об обеспеченности организма активной формой пантоте новой кислоты — коферментом А.

Также можно использовать пробу Квика на выделение гиппуровой кислоты при введении бензоата натрия. Оба метода могут быть использованы только при обследовании людей без заболеваний печени.

Суточная потребность в витамине В₃ 10−15 мг (4−5 мг/1000 ккал), увеличивается до 15−20 мг при больших физических нагрузках, беременности и кормлении грудью.

Для детей рекомендуют следующие суточные нормы (США): в возрасте до года 2−3 мг, от года до шести лет — 3−4 мг, от шести до десяти лет — 4−5 мг, и от десяти до четырнадцати лет — 4−7 мг.

При рационе, содержащем 2500 кал и состоящем из растительных и животных продуктов, человек получает в день в среднем 10 мг пантотеновой кислоты. Суточный рацион, содержащий 6 мг пантотеновой кислоты, оказывается явно недостаточным.

Повышается потребность в пантотеновой кислоте при тяжелом физическом труде и занятиях спортом, повышенных умственных нагрузках, инфекционных болезнях, стрессах, после перенесенных операций, приеме антибиотиков и оральных противозачаточных средств, злоупотреблении алкоголем.

Беременные и кормящие женщины обязательно должны получать около 20 мг/сут пантотеновой кислоты.

При лечении некоторых кожных болезней детям назначают по 0,3 г пантотеновой кислоты 2−3 раза в сутки, взрослым — до 1,5 г/сут, а при угревой сыпи — до 10 г/сут.

Пищевые источники витамина В₃: печень, дрожжи, ячный желток, почки, сердце, мясо, рыба, икра рыб, молочные и кисломолочные продукты, бобовые, грибы (шампиньоны, белые), свекла, спаржа, цветная капуста, цельнозер новой хлеб, отруби, ростки пшеницы, орехи.

Содержание пантотеновой кислоты в пищевых продуктах (мг/100 г съедобной части продукта): печень говяжья — 6,8; дрожжи прессованные — 4,2; яйца куриные — 1,3; горошек зеленый — 0,8; хлеб ржаной — 0,6; говядина 1-й категории — 0,5; молоко — 0,38; сыр голландский — 0,3; картофель — 0,3.

Лабораторная работа 1

Качественные реакции на витамин В₂

Материалы, посуда, реактивы:0,025% раствор витамина;

рибофлавин, 0,015% раствор, хранят в склянке из темного стекла;

соляная кислота концентрированная; цинк металлический;0,1% раствор азотнокислого серебра, хранят в склянке из темного стекла; пробирки;пипетки.

А) Реакция с металлическим цинком.

К 1 мл раствора рибофлавина добавляют (под тягой!) 10 капель концентрированной соляной кислоты и кусочек металлического цинка. Под влиянием выделяющегося водорода окраска раствора постепенно меняется: из желтой превращается сначала в зеленую, затем в малиновую, розовую, и, наконец, наступает обесцвечивание. Через несколько минут верхний слой жидкости в пробирке снова принимает желтое окрашивание (окисление лейкофлавина в рибофлавин кислородом воздуха).

В слабокислой или нейтральной среде рибофлавин обладает желто-зеленой флуоресценцией.

Б) Реакция с азотнокислым серебром.

Нейтральные или слабокислые растворы рибофлавина (рН 6,5−7,2), реагируя с азотнокислым серебром, дают соединение, окрашенное в розовый и красный цвет.

К 1 мл раствора рибофлавина добавляют 0,5 мл раствора азотнокислого серебра. Появляется розовое или красное окрашивание (интенсивность окраски зависит от концентрации рибофлавина в растворе).

Лабораторная работа 2

Количественное определение содержания витамина В₂

Метод основан на учете интенсивности флуоресценции рибофлавина. В работе используется ферментный препарат фосфатазы для высвобождения связанного рибофлавина.

Материалы, посуда, реактивы:Ферментный препарат фосатазы: выращивают гриб Aspergillus niger или Penicillium notatum, затем мицелий гриба подсушивают при 45 °C; высушенный гриб экстрагируют 2,5 М раствором ацетата натрия, рН 4,4−5 (на 100 мг мицелия 10 мл раствора) в течение 2−3 ч и фильтруют;

• 4% раствор перманганата калия КMnO₄;
• 3% раствор пероксида водорода Н₂О₂;
• 0,1 н раствор серной кислоты H₂SO₄;

рабочий раствор хлорида олова (II) SnCl₂ (1 г SnCl₂ в 25 мл концентрированной НСl; раствор хранят в темноте, перед определением разбавляют водой в отношении 1:50);

раствор Na₂S₂O₄· 2H₂O (перед употреб-лением растворяют 0,25 г Na₂S₂O₄· 2H₂O в 10 мл 2% раствора NаНСО₃);

образцовый раствор рибофлавина (10 мг рибофлавина растворяют в 200 мл воды, подкисленной уксусной кислотой, добавляют несколько капель толуола, разводят водой в отношении 1:100; получают раствор, содержащий 0,5 мкг рибофлавина в 1 мл).

дрожжи; печень; проростки; флуорометр; весы; водяная баня; термостат; фарфоровые ступки; градуированные пробирки на 10 мл; мерные колбы на 100 мл;

градуированные пипетки на 1, 5 и 10 мл; колбы конические; воронки;фильтры бумажные; кварцевый песок; стеклянные палочки; карандаш по стеклу. А) Получение вытяжки рибофлавина Навеску материала (печень, проростки, дрожжи) (5 г) растирают в ступке с кварцевым песком и 10 мл 0,1 н раствора серной кислоты, переносят в мерную колбу на 100 мл, доводят объем содержимого кислотой до 75 мл и на кипящей водяной бане нагревают при помешивании в течение 45 мин. Затем колбу охлаждают, добавляют 5 мл ферментного препарата, выдерживают при 45 °C в течение 40 мин, доводят объем до 100 мл и фильтруют.

Б) Определение содержание рибофлавина в вытяжках В две градуированные пробирки вливают по 8 мл фильтрата. В одну пробирку добавляют 0,5 мл образцового раствора, содержащего 0,25 мкг рибофлавина. В обе пробирки приливают по каплям 4% раствор перманганата калия до появления слабо-розового окрашивания (примерно 1 мл). Через 10 мин удаляют избыток перманганата 3% раствором Н₂О₂, добавляя его по каплям (пока раствор полностью не обесцветится). Объем полученных растворов доводят водой до 10 мл и измеряют интенсивность флуоресценции. По окончании флуорометрии в обе пробирки вносят по 0,2 мл раствора хлорида олова (II) SnCl₂ и 0,1 мл раствора Na₂S₂O₄· 2H₂O для тушения флуоресценции витамина В₂ и измеряют флуоресценцию примесей.

Содержание рибофлавина в мкг на 1 г исследуемого материала определяют по формуле:

где А — показание флуорометра для опытного раствора;

В — показание флуорометра для опытного раствора после тушения флуоресценции рибофлавина;

A₁ — показание флуорометра для образцового раствора рибофлавина;

b₁ — показание флуорометра для образцового раствора рибофлавина после тушения флуоресценции;

0,5 — количество микрограммов рибофлавина в 1 мл образцового раствора;

V — объем экстракта перед измерением флуоресценции (10 мл);

V₁ — объем вытяжки, взятой для анализа, мл;

V₂ — объем всей вытяжки, мл;

n — навеска материала, г.