Изолирование подкисленным этанолом

Самый первый метод изолирования подкисленным спиртом, названный по имени авторов метода Стаса-Отто, применялся только для алкалоидов.

В дальнейшем это метод претерпел серьёзные изменения и стал использоваться не только для алкалоидов, но и для многих других ядовитых и сильнодействующих веществ, имеющих токсикологическое значение.

Современная модификация метода состоит из этапов:

• * Настаивание измельчённого объекта с этиловым спиртом, подкисленным щавелевой кислотой до рН 2 — 3, в течение суток. Спирт берётся в количестве, необходимом для покрытия объекта до «зеркала». Спиртовое извлечение сливается, и вся операция повторяется трехкратно.
• * Упаривание объединённых спиртовых извлечений при температуре 40 — 50 0С до густого остатка, в который по каплям добавляют абсолютный этанол для коагуляции белков. Осадок отфильтровывают и всю операцию осаждения повторяют по мере необходимости до полного удаления белковых соединений.
• * Упаривание фильтрата при той же температуре до густого остатка и разбавление горячей водой для удаления смолистых веществ, жиров и пигментов. Осадок отфильтровывают.
• * Экстрагирование веществ кислого, нейтрального и слабоосновного характера из водного фильтрата хлороформом при рН = 2 (трёхкратная экстракция), отделение органической фазы и концентрирование полученного извлечения упариванием (фракция А, «кислое» извлечение).
• * Подщелачивание оставшегося после разделения фаз водного слоя до рН 9 — 10, экстрагирование веществ сильноосновного характера (трёхкратная экстракция) хлороформом, отделение органической фазы и концентрирование упариванием (фракция Б, «щелочное» извлечение).
• * Изолирование «нелетучих» ядов из биологического материала подкисленным спиртом (метод Стаса-Отто) проводится по следующей схеме.

Рисунок 1. Схема проведения анализа методом «Стаса-Отто»

Достоинства метода заключаются в следующем:

• 1. Метод универсален, т.к. этанол является хорошим растворителем для многих веществ этой группы (как ионизированных, так и молекулярных форм).
• 2. Метод предусматривает очистку извлечения от балластных веществ, в результате чего получаются чистые хлороформные извлечения, не дающие эмульсий при экстрагировании веществ из водной фазы хлороформом. Метод даёт возможность изолировать до 30% барбитуратов и 20 — 25% алкалоидов.

К недостаткам метода следует отнести:

• 1. Длительность (8 — 10 рабочих дней) и многостадийность. Большое количество операций, связанных с осаждением белков и фильтрованием, ведёт к значительным потерям искомых веществ (алкалоиды теряются на 25 — 50%).
• 2. Сравнительная дороговизна метода (на 1 исследование тратится до 500 мл этанола).

Все это приводит к тому, что классический метод Стаса — Отто теряет своё былое значение и постепенно заменяется более быстрыми, эффективными и экономными методами извлечения подкисленной водой.

В настоящее время метод применяется, главным образом, для исследования гнилостно изменённого биологического материала.