Дипломы, курсовые, рефераты, контрольные...
Срочная помощь в учёбе

Изучение белковых антигенов Helicobacter pylori на основе моноклональных антител

Диссертация: Изучение белковых антигенов Helicobacter pylori на основе моноклональных антител
ДиссертацияПомощь в написанииУзнать стоимостьмоей работы

Роль Н. pylori в возникновении гастродуоденальной патологии считается доказанной и подтверждённой современными исследованиями микробиологов, клиницистов и эпидемиологов. Ежегодные данные ВОЗ, свидетельствующие о стремительном расширении круга лиц, поражённых этим возбудителем, ставят проблему хеликобактериоза в один ряд с важнейшими проблемами мирового здравоохранения. Только в СНГ и России… Читать ещё >

Содержание

  • Список сокращений

Глава 1. Обзор литературы.--------------------------------------------------------------------------------------------и

1.1. Бактериологические особенности Н. pylori

1.2. Роль белково-антигенных комплексов в патогенности Н. pylori.

1.3. Проблемы диагностики Н. pylori.

1.4. Микробиологические и серологические методы диагностики Н. pylori.

1.5. Методы получения моноклональных антител и их практическое использование

Глава 2. Материалы и методы исследования

2.1. Лабораторные животные

2.2. Бактериальные штаммы и антигены

2.3. Приготовление элективной питательной среды для выделения и культивирования Н. pylori (СЭХ) и её экспериментальная оценка

2.4. Культивирование штаммов Н. pylori

2.5. Клеточные линии позвоночных

2.6. Оборудование и реактивы, схема этапов работы

2.7. Получение гибридом

2.7.1 Иммунизация лабораторных животных и получение поликлональной сыворотки

2.7.2. Гибридизация клеток

2.7.3. Клонирование гибридом

2.7.4. Культивирование гибридом in vitro и in vivo

2.7.5. Криоконсервирование гибридом

2.8 Метод очистки иммуноглобулинов

2.9. Выделение и фракционирование белков Н. pylori. Электрофорез белков в полиакриламидном геле

2.9.1. Подготовка и проведение электрофореза

2.9.2. Визуализация белковых фракций методом окрашивания геля Coomassie brilliant blue R250

2.10. Иммуноферментные методы

2.10.1. Твердофазный иммуноферментный анализ

2.10.2. Иммуноферментный анализ дот-блот

2.10.3. Метод непрямой иммунофлюоресценции моноклональных антител

2.10.4. Иммунодиффузия в геле по Оухтерлони

2.10.5. Конкурентный иммуноферментный анализ

2.11. Иммуноблоттинг

2.11.1. Электроперенос фракционированных белков с полиакриламидного геля на нитроцеллюлозную мембрану

2.11.2. Визуализация белковых фракций на фильтре

2.11.3. Проведение иммуноблоттинга

2.12. Характеристика белкового антигена методом спектрофотометрии

2.12.1. Элюирование белкового антигена----------------------------------------------------—

2.12.2. Определение концентрации белка по Лоури

2.12.3. Исследование спектров поглощения и собственной флуоресценции белка препарата.

2.13. Денситометрический метод обработки результатов гель-электрофореза и используемое програмное обеспечение

2.14. Методы статистической обработки результатов исследования

Глава 3. Результаты исследования.

3.1. Результаты культивирования бактериальных штаммов Н. pylori и иммунизации лабораторных животных

3.2. Исследование и оценка ростовых и элективных свойств среды (СЭХ) для выделения и культивирования Н. pylori.

Характеристика полученных колоний Н. pylon.

3.3. Иммунизация

3.4. Получение и первичный скрининг гибридом-продуцентов МКА к белкам Н. pylori

3.5. Оценка специфической активности МКА в серолоических методах

3.6. Определение эпитопной направленности МКА к Н. pylori

3.7. Определение класса полученных иммуногобулинов

3.8. Получение препаративных количеств МКА, их очистка

3.9. Фракционирование и построение белкового профиля Н. pylori

3.10. Денситометрическое исследование белковых фракций Н. pylori

3.11. Сравнительное исследование белковых фракций Н. pylori методом иммуноблоттинга.---------------------------------------------------------------------------------------------------------------ЮЗ

3.12. Оценка термолабильности белкового антигена Н. pylori, выявляемого МКА гибридомы В10

3.13. УФ спектры поглощения и флуоресценции белка.

3.14. Определение небелковых компонентов белковых фракций.

3.15. Оценка возможности использования полученных МКА в диагностике

Н. pylori — инфекции.

3.16. Сравнительный анализ чувствительности иммунохимических методов на основе МКА и поликлональных сывороток.

Обсуждение результатов исследования.

Выводы.

Изучение белковых антигенов Helicobacter pylori на основе моноклональных антител (реферат, курсовая, диплом, контрольная)

Актуальность исследования.

Роль Н. pylori в возникновении гастродуоденальной патологии считается доказанной и подтверждённой современными исследованиями микробиологов, клиницистов и эпидемиологов. Ежегодные данные ВОЗ, свидетельствующие о стремительном расширении круга лиц, поражённых этим возбудителем, ставят проблему хеликобактериоза в один ряд с важнейшими проблемами мирового здравоохранения. Только в СНГ и России ежегодный прирост заболеваемости хроническими гастритами и язвенной болезнью желудка и двенадцатиперстной кишки составляет более 1 млн. случаев, из которых от 60% до 90% составляют хеликобактер-ассоциированные (Аруин Л.И., 1999). Особую значимость данной патологии придаёт официальная констатация Н. pylori как канцерогена I класса, иницирующего запуск патологических реакций, малигнизации тканей (ВОЗ., 1995).

Впервые упоминания о наличии в желудочном содержимом изогнутых и спиралевидных бактерий относятся к концу XIX-века. Однако связь между этими микроорганизмами и гастродуоденальных патологий была установлена лишь в 1983 г., когда австралийские учёные Уоррен и Маршалл выделили чистую культуру этих микробов и выдвинули предположение об их влиянии на деструкцию эпителиального барьера в желудке. Долгое время господствовала версия о паразитическом образе жизни Н. pylori в желудке человека. Однако в настоящее время, господствующее положение постепенно приобретает версия о симбиотическом характере взаимоотношений человека и Н. pylori. Несмотря на допускаемые симбиотические взаимоотношения человека и Н. pylori, это микроорганизм всё же является одним из самых существенных факторов риска развития язвенной болезни желудка, язвенной болезни двенадцатиперстной кишки, хронического гастрита, аденокарциномы желудка (Negrini R., Lisato L., Zanella I et al., 1991). В связи с этим изменилось представление о методах лечения и диагностики этих заболеваний.

Разработано большое количество методов диагностики, позволяющих выявлять и идентифицировать этот микроорганизм. Развитие и усовершенствование этих методов помогло в получении ценной информации об эпидемиологии хеликобактериоза, сыграло большую роль в понимании патогенеза этой инфекции. Это, в свою очередь, позволило разработать наиболее эффективные схемы противохеликобактерной терапии и мероприятия, направленные на профилактику хеликобактериоза.

Тем не менее, ни один из существующих методов диагностики H. pyloriинфекции не универсален. Пределы возможностей этих методов могут быть ограничены не только их чувствительностью, но, зачастую зависят от возраста пациента, его индивидуальных особенностей, стадии заболевания, а также индивидуальных особенностей течения инфекции. Среди наиболее распространённых методов диагностики хеликобактерной инфекции выделюят: бактериологический, гистологический, уреазный тест, молекулярно-биологический (ПЦР-исследование), серологический методы. Все перечисленные методы имеют свои достоинства и недостатки. Из недостатков приведённых методов можно указать следующие: инвазивность, трудоёмкость и необходимость в специальном оборудовании для бактериологического метода, инвазивность и квалифицированные персонал для гистологического исследования, недостаточная чувствительность для уреазного теста, трудности в интерпретации значимости положительного результата в ПЦР-исследовании.

Для выделения и культивирования хеликобактерий в исследовательской практике используются различные питательные среды. Рецепты применяемых сред известны, однако их воспроизведение в лабораторных условиях затрудняется сложностью приобретения всего перечня добавок и факторов элективности. Трудновыполнимы также жесткие требования к газовой среде культивирования, которая должна состоять из 5% кислорода, 10% углекислого газа и 85% азота. Решению этих проблем служит разработанная в Ростовском ПЧИ питательная среда для выделения и культивирования хеликобактерий элективная (СЭХ). В основу идеи создания среды заложен принцип полной комплектности препарата, гарантирующий оптимальный уровень его ростовых свойств. Оценка качества, элективных и ростовых свойств среды является важной составной частью успешной работы по выделению и наработке биомассы микроорганизма.

Среди перечисленных методов особое место занимают серологические методы исследования. Одним из таких методов является метод обнаружения Н. pylori с помощью моноклональных антител (МКА). Использование моноклональных антител, получаемых к белковым антигенам клеток Н. pylori, является оправданным вследствие неинвазивности, чувствительности и специфичности тест-системы для обнаружения этого микроорганизма у пациента на их основе. Моноклональные антитела являются сегодня наиболее эффективным инструментом, с помощью которого возможно, с одной стороны, проведение тонких исследований антигенной композиции микробной клетки, выяснение функций отдельных антигенных детерминант, с другой — повышение чувствительности и специфичности серологического анализа, создание на их основе новых, более точных и быстрых методов идентификации и дифференциации.

Выяснение биологических и иммунохимических свойств антител и распознаваемых ими антигенов является необходимым условием их последующего успешного применения в диагностических целях, и нашей задачей было изучение свойств МКА, секретируемых гибридомой В10, полученной в лаборатории «гибридом» Ростовского противочумного института.

Цель исследования.

Целью настоящего исследования явилось характеристика белковых антигенов Н. pylori на основе моноклональных антител и определение возможности их использования для создания новой тест-системы по обнаружению данного микроорганизма. Задачи исследования.

1. Культивирование, получение колоний и наращивание биомассы микроорганизма Н. pylori.

2. Экспериментальная оценка элективной питательной среды для выделения и культивирования Н. pylori (СЭХ), полученной в Ростовском НИПЧИ.

3. Фракционирование и характеристика белковых антигенов методом электрофореза в полиакриламидном геле, денситометрии, спектрофотометрии и флуорометрии.

4. Получение гибридом-продуцентов моноклональных антител к антигенам Н. pylori и характеристика их свойств.

5. Выявление белкового антигена Н. pylori, против которого направлены моноклональные антитела гибридом-продуцентов.

6. Выделение, очистка и характеристика препарата белкового антигена из клеток Н. pylori путём гель-электрофореза и иммуноблоттинга с использованием полученных моноклональных антител.

7. Исследование возможности использования полученных моноклональных антител в качестве основы тест-системы скрининга Н. pylori — инфекции.

8. Оценка диагностической значимости моноклональных антител в серологическом методе диагностики Н. pylori — инфекции.

Научная новизна.

В результате проведённых исследований показана эффективность элективной питательной среды для культивирования микроорганизма Н. pylori. Показана эффективность в обеспечении ростовых свойств микроорганизма Н. pylori, обладает элективностью в отношении энтеробактерий, дрожжевой флоры и протея, позволяя четко дифференцировать колонии возбудителя хеликобактериоза от сопутствующей микрофлоры.

В результате проведённых исследований созданы гибридомы-продуценты моноклональных антител строго специфичных в отношении белковых антигенов микробных клеток Н. pylori. Показано отсутствие перекрёстной активности моноклональных антител гибридомы В10 с микроорганизмами, имеющими антигенное родство с Н. pylori.

Впервые методом иммуноблоттинга выявлен белковый антиген со средней молекулярной массой 30 ± 1 кДа, против которого направлены моноклональные антитела гибридомы В10. Выявленный белковый антиген был оценен как термолабильный, с типичной белковой формой УФ абсорбционного спектра и спектра флуоресценции, не содержит связанных липидов, углеводов и нуклеиновых кислот.

Впервые оценена возможность применения полученных моноклональных антител гибридомы В10 для изучения антигенной структуры штаммов Н. pylori, и создания тест-системы скрининга Н. pylori — инфекции.

Научно-практическая значимость работы.

В результате исследования показано, что использование среды СЭХ в практических медицинских учреждениях позволит значительно повысить эффективность исследования материала, подозрительного на обсемененность хеликобактериями.

Получена коллекция гибридных культур, продуцирующих моноклональные антитела к белковым антигенным детерминантам Н. pylori, которая хранится в жидком азоте в библиотеке гибридом Ростовского противочумного института. Произведено депонирование гибридомы.

Характеристика моноклональных антител, продуцируемых гибридомой В10 и белков-антигенов Н. pylori, явилась необходимой основой для оценки возможности создания тест-системы скрининга Н. pylori — инфекции.

Материалы диссертации используются при чтении общего курса «Биотехнология» и спецкурса «молекулярная иммунология» на кафедре биохимии и микроюиологии Ростовского госуниверситета.

По материалам диссертации планируется создание и введение в клинико-лабораторную практику тест-системы скрининга Н. pyloriинфекции.

Основные положения выносимые на защиту.

1. В результате проведённых исследований показана эффективность элективной питательной среды для культивирования микроорганизма Н. pylori. Показана эффективность в обеспечении ростовых свойств микроорганизма Н. pylori.

2. Охарактеризован фракционный состав белков Н. pylori методами гель-электрофореза и денситометрии.

3. Получен набор стабильных гибридных культур, продуцирующих моноклональные антитела к антигенным детерминантам Н. pylori, не обладающих перекрёстной реактивностью с гетерологичными микроорганизмами. Среди полученного набора по оптимальным характеристикам отобрана для дальнейшего использования гибридная культура В10.

4. Методом иммуноблоттинга идентифицирован белковый антиген, против которого направлены моноклональные антитела гибридомы В10. Проведено выделение данного белкового антигена. Антиген термолабилен, имеет молекулярную массу 30 ± 1 кДа, типичные белковые адсорбционные спектры и спектры флюоресценции, не содержит связанных липидов, углеводов и нуклеиновых кислот.

5. Показана диагностическая значимость, полученных моноклональных антител гибридомы В10.

Апробация диссертационной работы.

Материалы диссертации докладывались и обсуждались на научных конференциях биолого-почвенного факультета Ростовского государственного университета (Ростов-на-Дону, 2003;2006), а также были представлены на 2, 3, 4 международной межвузовской конференции молодых учёных «Обмен веществ при адаптации и повреждении» Ростовского государственного медицинского университета (Ростов-на-Дону, 2003;2005). Материалы диссертации апробированы на совместном заседании кафедры биохимии и микробиологии Ростовского госуниверситета и лаборатории гибридом ФГУЗ «Ростовского противочумного института» Публикации.

По теме диссертации опубликовано 5 научных работ, из них две в центральной печати. Личный вклад автора 100%.

Выводы.

1. Показана эффективность питательной среды (СЭХ), разработанной в РПЧИ, в обеспечении ростовых свойств Helicobacter pylori, а также её элективность в отношении энтеробактерий, дрожжевой флоры и протея.

2. В результате гибридизации миеломы NSO и иммунных спленоцитов белых мышей-самок инбредной линии BALB/c получены гибридомы-продуценты моноклональных антител к белковым антигенным детерминантам Helicobacter pylori.

3. Установлена возможность использования полученных моноклональных антител для обнаружения Helicobacter pylori в реакциях ИФА, дот-ИФА, непрямой иммунофлуоресценции и иммунопреципитации.

4. В процессе исследования выявлена стабильная гибридома В10 с высокой пролиферативной активностью и антителопродукцией, моноклональные антитела которой отвечают диагностическим требованиями и могут быть использованы для разработки новых современных тест-систем.

5. Определён фракционный состав белков Helicobacter pylori методом гель-электрофореза. Выявлено и охарактеризовано 11 основных белковых фракций с молекулярной массой от 20 до 65 кДа.

6. Установлено, что моноклональные антитела, продуцируемые гибридомой В10, отличаются высокой специфичностью в отношении Helicobacter pylori. Методом иммуноблоттинга выявлен белковый антиген со средней молекулярной массой 30 ± 1 кДа, против которого направлены моноклональные антитела гибридомы В10.

7. Выявленный белковый антиген был оценен как термолабильный, с типичной формой УФ абсорбционного спектра флуоресценции, характерной для белка.

— 1398. На клиническом материале показана эффективность использования моноклональных антител гибридомы В10 в диагностике Helicobacter pylori — инфекции.

— 140.

Показать весь текст

Список литературы

  1. Г. И. Моноклональные антитела // Соросовский образов, журн. -1998.-№ 1-С. 16−20.
  2. Р. Методы культуры клеток для биохимиков.- М.: Мир. 1983. -263 с.
  3. Антитела. Методы: Кн. 1: Пер. с англ./Под ред. Д. Кэт-А72 ти. — М.: Мир, 1991.—287 с, ил.
  4. JI. И. Helicobacter pylori в патогенезе язвенной болезни: что известно и что узнать предстоит//Матер. 6-й сессии Российской группы по изучению Helicobacter pylori. Омск, — 1997. — С. 82−85.
  5. JI. И. Helicobacter pylori в этиологии и патогенезе язвенной болезни // Матер. 7-й сессии Российской группы по изучению Helicobacter pylori. Нижний Новгород, 1998. — С.6−11.
  6. JI. И. Роль Helicobacter pylori в формировании морфологического субстрата язвенной болезни // Матер. 8-й сессии Российской группы по изучению Helicobacter pylori. Уфа, 1999. — С. 711.
  7. JI. И., Григорьев П. Я., Исаков В. А., Яковенко Э. П. Хронический гастрит. Амстердам. 1993. — 362 с.
  8. JI. И., Капуллер Л. Л., Исаков В. А. Морфологическая диагностика болезней желудка и кишечника. М.: Триада-Х, 1998. -496с.
  9. И. П., Воробьев А. А. Статистические методы в микробиологических исследованиях. JI.: Медгиз. — 1962. — 180 с.
  10. Ю.Барановский А. Ю., Щукина О. Б., Назаренко JI. И. Эрадикационная терапия Helicobacter pylori // Клинич. фармакология и терапия. 1999. -№ 1. — С. 54−58.
  11. П.Баранская Е. К. История открытия Helicobacter pylori // Рос. журн. гастроэнтерол., гепатол., колопроктол. 1999. — № 4. — С. 61−66.
  12. Е. К. Язвенная болезнь и инфекция Helicobacter pylori // Болезни органов пищеварения. 2000. — № 1. — С. 8−14.
  13. Белая 10. А. с соавт. Частота встречаемости специфических антигенов Helicobacter pylori при заболеваниях желудочно-кишечного тракта. // «Журнал микробиологии», — 2004, — № 6, -с. 63 69.
  14. Биотехнология / Под ред. Н. С. Егорова, В. Д. Самуилова. Кн. З: Клеточная инженерия/ Р. Г. Бутенко, М. В. Гусев, А. Ф. Киркин, Т. Г. Корженевская, Е. Н. Маркарова. М.: Высш. шк. — 1987. — 127 с.
  15. А. Д. Диагностические тесты в гастроэнтерологии (пер. с англ.).- М.: Медицина, 1995. 65 с.
  16. И. А. Проблема H.pylori: миф и реальность // Клиническая медицина. 1997, № 12. — С .71 — 74.
  17. П.Васильев В. С., Комар В. И., Цыркунов В. М. Практика инфекциониста.- Мн.: Высш. шк. -1994. 495 с.
  18. А. П. Ультрафиолетовая спектрофотометрия и Структура белков // Наукова думка, — Киев, -1981.
  19. И. В. Бабин В. Н. О взаимоотношениях эпителиальных клеток слизистыз оболочек с микробами—внутриклеточными паразитами. // Мед. паразитол. и паразитарные броезни.—1996.—№ 4.—С. 3−8.
  20. И. В.Вирулентность бактерий, как функция адаптации Ж. микробиол.—1957,—№ 4.—С. 16−20
  21. И. В. Некоторые проблемы адаптации патогенных бактерий к окружающей среде // Ж. микробиол.—1957.—№ 4.—С. 3135
  22. А. М., Осипов А. П., Дзантиев Б. Б., Гаврилова Е. М. Теория и практика иммуноферментного анализа.- М.: Высшая школа.- 1991. С. 288
  23. В. Т., Лапина Т. JI. Н. pilori от научных исследований к клинической практике. Диагностика и лечение // Русский медицинский журнал.- 1996.-т.4&bdquo- № 4.-с.149−150.
  24. В. Т. Н. pylori: биологические характеристики, патогенез перспективы эрадиации // Росс, журнал гастроэнтерологии, гематологии. -1997, № 10.- С. 77−78.
  25. В.Т., Мегро Ф., Лапина Т.Л. Helicobacter pylori: революция в гастроэнтерологии. М.: «Триада-Х», 1999. — 255с.
  26. Иммунология инфекционного процесса / Под ред. В. И. Покровского, С. П. Гордиенко, В. И. Литвинова. М.: Наука. — 1993. -308 с.
  27. Иммуноферментный анализ / Под ред. Т. Нго, Г. Ленхоффа. М.:Мир. -1988. — 446с.
  28. Иммунологические методы/Под ред. Г. Фримеля, Пер. И53 с нем. А. П. Тарасова. — М.: Медицина.- 1987, — 472 с.
  29. А.В. Язвенная болезнь: диагностика, современные принципы лечения и профилактики // Метод рекомендации. М, — 1999. — 30с.
  30. Р.Г., Мак-Керн Т. Дж., Бехтол К. Б. Моноклональные антитела: Гибридомы: новый уровень биологического анализа. М. Медицина. -1983.-416 с.
  31. М. Р., Литвяков А. М., Крылов Ю. В. Диагностика H.pylori в желудочном содержимом // Клиническая лабораторная диагностика, 2000, № 1.- С.-41−43.
  32. А. И., Бабичев С. А. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология. СПб: Спец. лит-ра. — 1998. — 592 с.
  33. JI.B., Минаев В. И., Минушкин О. Н., Васильева Н. Ю. Оценка быстрого визуального теста для скрининга хеликобактериоза // Клин. лаб. диагн: состояние и перспектива. С-Пб, 1996. — С. 95−96.
  34. JI. В., Щербаков П. JI., Иваников И. О., Говорун В. М. «Helicobacter pylori- инфекция: современные аспекты диагностики и терапии». // Пособие для врачей, — М.- 2004
  35. А. С., Фолина И. Г., Тарзиманова А. И. Н. pylori свидетель или виновник? // Клиническая медицина. — 2001, № 6. — с. 68−70.
  36. Лабораторные методы исследования в клинике: Справочник/ В. В. Меньшиков, Л. Н. Делекторская, Р. П. Золотницкая и др.- Под ред. В. В. Меньшикова. М.: Медицина, 1987. — 386с.
  37. А. С., Васильев Ю. В., Сиваш Э. С., Фарбер А. В. Диагностика и лечение пенетрирующих язв желудка и двенадцатиперстной кишки. // Российский гастроэнтерологический журнал. 1996, — № 3. — С. 20−29.
  38. А. С., Аруин Л. И., Ильченко А. А. Язвенная болезнь и Helicobacter pylori. Новые аспекты патогенетической терапии / М.-1993.-230 с.
  39. А. С., Васильев Ю. В., Касьяненко В. И. Слизистая оболочка желудка и обсемененность ее хеликобактер пилори при язвенной болезни двенадцатиперстной кишки у подростков // Российский гастроэнтерологический журнал. -1997, — № 2.- С.27−31.
  40. С. Ю. Роль факторов патогенности в механизмах хеликобактерных поражений желудка. // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 1997, № 6. — С. 108−111.
  41. Медицинская иммунология. / Д. К. Новиков, И. И. Генералов, Н. В. Железняк, В. К. Окулич. Витебск, 1998. — 147с.
  42. Медицинская микробиология / Под ред. В. И. Покровского, О. К. Поздеева -М.: ГЭОПАР Медицина. 1999. — 1200 с.
  43. Методы исследований в иммунологии. / Под ред. И. Лефковитса, Б. Перниса М.: Мир.-1981.-485 с.
  44. Методы практической биохимии. / Под ред. Б. Уильямса, К. Уилсона. — М.: Мир, 1978. —260 с, ил.
  45. В. Д., Чуков С. 3. Воспалительный и иммунный ответы слизистой оболочки желудка на инфекцию Helicobacter pylori. // Клиническая медицина. 2000, № 11. — С. 50−56.
  46. В.Д. Полимеразная цепная реакция в диагностике Н pylori-ассоциированных заболеваний. // Материалы конференции «Диагностика и лечение заболеваний, ассоциированных с Helicobacter pylori.».-М., 1998.-С. 8−10.
  47. Проблемы диагностики Н. pylori при гастродуоденальных заболеваниях. / В. И. Минаев, Ю. В. Несвижский, А. А. Воробьёв и др. // Матер. 6-й сессии Российской группы по изучению Helicobacter pylori. -Омск, 1997.-С. 10−18.
  48. Ройт А, Бростофф Дж&bdquo- Мейл Д. Иммунология. М.:Мир.-2000.-590 с.
  49. Н.В., Жебрун А. Б. Гастрит, язвенная болезнь и хеликобактериоз. // Санкт-Петербург, 1995, 35с.
  50. Теория и практика иммуноферментного анализа /Егоров A.M., Осипов А. П., Дзантиев Б. Б., Гаврилова Е. М. М.: Высш. шк., 1991. — 288с.
  51. E.Jl. Н. pylori и злокачественная опухоль желудка. // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии и колопроктологии. 1996, № 4. — с. 5−7.
  52. Я. С., Зинатуллин М. Р. Концепция взаимосвязи организма человеа и Helicobacter pylori. // Клиническая медицина. 1999, № 2. — с 52−56.
  53. Я.С. Язвенная болезнь и проблема Н. pylori-инфекции: новые факты, размышления, предположения. // Клиническая медицина. 2001, № 4. — с. 67−70.
  54. В.А., Воробьев А. И., Солошенко Д. Д. Практическое руководство по иммунологическим методам исследований. М.: МТГТ. 1985. — 126с.
  55. А.А., Мурадов Н. Н. Обсуждение проблемы геликобакгерной инфекции в докладах 5-й Объединённой европейской недели гастроэнтерологии. // Клиническая медицина. 1997, № 10. — с. 77−78.
  56. Н.В. Ошибки в гастроэнтерологии. Диагностика и лечение. -Таллин.- 1991.- 189с.
  57. Aim R. A, Ling L. S, Moir D. T et at. Genomic-equence comparison of two unrelated isolates of the human gastric pathogen Helicobacter pylori. Nature.—1999. Vol.397.—P. 176−180
  58. Alkout et al. Isolation of a cell component of H. pylori that binds human type 2 Lewis (a) and Lewis (b) antigens. // Gastroenterology. -1997, vol. 112.-p. 1179−1187.
  59. Amano et al. Reactivities of Lewis antigen monoclonal antibodies with the lipopolysaccharides of H, pylori strains isolated from patients with gastroduodenal diseases in Japan. // Infection and immunity. -1997, № 5, vol. 4. p.540−544.
  60. Apel, I., E. Jacobs, M. Kist, and W. Bredit. 1988. Antibody responsw of patients against a 120 kDa surface protein of Campylobacter pylori. // Zentralbl. Bacterid. Hyg. 268:271−276
  61. Archimandritis A. Diagnosis of Helicobacter pylori infection by HpSA test. //Lancet 1999- ii:1209.
  62. Blanchard T G. McGovern K. J, Younginan P et al. Gamma-glutamyl transpeptidase essential for infection of the gastric mucose by H. pylori? Gut.— 1999,—Vol. 45.—Suppl. .p. 27
  63. Blaser M. Ecology of Helicobacter pylori in the human stomach— J. Clinical Investigation. —1997.—Vol. 100,—P. 759−762
  64. , M. // Hypothesis: the changing relationships of Helicobacter pylori and humans: implications for health and disease. J Infect Dis, 1999. 179(6): p. 1523−30.
  65. Braden B, Teuber G, Dietrich CF, et al. Stool test may defeat breath test: new faecal antigen detects Helicobacter pylori infection and eradication. // BMJ 2000−320:148.
  66. Chevalier C, Thiberge J. M, Ferrero R. L, Labigne A. Essential role of Helicobacter pylori gamma-glutamyl transpeptidase for the colonization of the gastric mucosa of mice. Mol. Microbiol —1999. Vol. 31:—P.1359−1372.
  67. Chey WD, Murthy U, Shaw S, et al. A comparison of three fmgerstick, whole blood antibody tests for Helicobacter pylori infection: a United States, multicenter trial. // Am J Gastroenterol 1999−94: 1512−1516.
  68. Covacc A" Falkow S., Censini S. et al. The cag pathogenicity island of Helicobacter pylori: origin, molecular biology and relevance to virulence In.:
  69. Pathogenesis and Host Response in Helicobacter pylori Infectionsio Ed. By A. P. Moran C. A. O’Morain.—Galway.: National University of Irland.—1997.—P. 88−100.
  70. P. Doig, T.J.Trust Identification of surface-exposed outer membrane antigens of HL pylori. // Infection and immunity. 1994, № 10, vol. 62. -p. 4526−4533.
  71. Drouet et al. Partial characterization of an external polysaccharide of H. pylori by using an immunoglobulin M monoclonal antibody. // Infection and immunity. 1993, № 6, vol. 61.- p. 2732−2736.
  72. Duodenogastric reflux before and after surgical or medical therapy for duodenal ulcer /А. Avgerinos, G. Stabropoulos, A. Yalouris et al. //Amer. J. Gastroenterol. 1990.- Vol. 85, № 2.- p 150−153.
  73. Faigel DO, Magaret N, Corless C, et al. Evaluation of rapid antibody tests or the diagnosis of Helicobacter pylori infection. //Am J Gastroenterol 2000- 95:72−7.
  74. Fazekas de St., Groth S. Production of monoclonal antibodies: strategi and tactica. //J. immunol. Meth.- 1980/-.-Vol.35.-P. 1−21
  75. Graham D. Y. Complete genomic sequence of Helicobacter pylon: implications for the clinician. Current opinion in gastroenterology .—1998.—Vol. 11.—Suppl.l.—p. S7-S8
  76. Gunn M. C, Stephens J. C, Stewart J. A, et al. The significance of cagA and vacA subtypes of Heficobacter pylori in the pathogenesis of inflammation and peptic ulceration. J Clin Pathol —1998.—Vol. 51:—P.761−764.
  77. Goding J.W. Monoclonal antibodies: principles and practice. Academic Press Inc. (London) Ltd. — 1986. — 315 p.
  78. Hasty DL, Mainardi CL. Production and preliminary characterization of monoclonal antibodies to rat plasma fibronectin. // Biochim Biophys Acta. 1982 Dec 20−709(2):318−24.
  79. Hawthorne AB, Morgan S, Westmoreland D, et al. A comparison of two rapid whole-blood tests and laboratory serology, in the diagnosis of Helicobacter pylori infection. // Eur. J Gastroenterol Hepatol 1999- 11:863−865.
  80. Hogenraad N.J., Wraght C.J. The effect of pristan on ascites tumor formation! and monoclonal antibody production //Methods in Enzimology. -1986.-Vol. 121. -P.375−381.
  81. Holt P G. Immune and inflammatory function in cigarette smokers. // Thorax 1987−42:241−249.
  82. Huer, M., J. T. R. Parr, R. E. W. Hancock. And W. J. Page. 1986. Outer membrane porin of Campylobacter jejuni. // FEMS Microbiol. Lett. 37:247 250
  83. Josenhans CH. and Suerbaum S. Flagella and motility of Helicobacter pylori In.: Pathogenesis and Host Response in Helicobacter pylori Infectionsio Ed. By A. P. Moran C. A. O’Morain.—Galway.: National University of Irland.— 1997.—P. 6−15
  84. Kohler G., Milstien C. Derivation of specific antibody-producing tissue culture and tumor lines by cell fusion //Eur. J. of Immunol. 1976. -Vol. 6.-P.511−519
  85. Kostrzynska, M" P. W. (TToole, D. E. Taylor, and T. J. Trust. Molecular characterization of a conserved 20-kilodalton membrane-associated lipoprotein antigen of H. pylori. // J. Bacterid., in press.
  86. Laine L, Knigge K, Faigel D, et al. Helicobacter pylori antibody test: better than laboratory serological testing? // Am J Gastroenterol 1999- 94:3464−7.
  87. Lee A. The Helicobacter pylori genkme: the bacteriologist’s viewpoint. Current opinion in gastroenterology .—1998.—Vol. 11.—Suppl.l.—p. S5-S6.
  88. Lee A., Megraud F. Helicobacter pylori. Techniques for clinical diagnosis and basic re-search. Saunders London. Sec. Print., 1996, — 305 p.
  89. Laemmli U. K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4 //Nature.- I970.-Vol. 227.P. 680−685.
  90. Logan, S. M., and T. J. Trust. 1983. Molecular identification of surface protein antigens of Campylobacter jejuni. // Infect. Immun. 42:675−682
  91. Loy CT, Irwig LM, Katelaris PH, et al. Do commercial serological kits for Helicobacter pylori infection diVer in accuracy? A meta-analysis. // Am J Gastroenterol 1996−91:1138−44.
  92. Mai et al. Surface proteins from H. pylori exhibit chemotactic activity for human leukocytes and are present in gastric mucosa. // Journal of experimental medicine. 1992, vol. 175. — p. 517−525.
  93. Makristathis A, Pasching E, Schutze K, et al. Detection of Helicobacter pylori in stool specimens by PCR and antigen enzyme immunoassay. // J. Clin Microbiol 1998−36:2772−4.
  94. Manes G, Balzano A, Iaquinto G, et al. Accuracy of the stool antigen test in the diagnosis of Helicobacter pylori infection in the pre-treatment assessment and in patients on omeprazole therapy. // Aliment Pharmacol Ther 2000 (in press).
  95. Morris A., Ali M.R., Brown P. et al. Campylobacter pylori infection in biopsy speciments of gastric antrum: laboratory diagnosis and examination of sampling error // J. Clin.Patol., 1989−42:727−732.
  96. Negrini R., Lisato L., Zanella I et al. Helicobachter pylori infection induces antibodies cross-reacting with human gastric mucosa. //Gastroenterology 1991- 101:437−45.
  97. , D. G. 1987. Identification of the other membrane proteins of Campylobacter pyloridis and antigenic cross-reactivity between C. pyloridis and C. jejuni. // J. Gen. Microbiol. 133:163−170.
  98. Nishizono et al. Serological assessment of the early response to eradication therapy using an immunodominant outer-membrane protein of H. pylori. // Clinical and diagnostic laboratory immunology. 1998,№ 6, vol. 5. -p. 856−861.
  99. Molecular microbiology. 1999, № 5. — p. 1537−1548.
  100. Oderda G, Rapa A, Ronchi B, et al. High accuracy of the Helicobacter pylori stool antigen test for detection of the infection in children. A multicentre Italian study. // BMJ 2000−320:347−8.
  101. Olbe L, Hamlet A, DalenbKck J, FKndriks. A mechanism by which Helicobacter pylori infection of the antrum contributes to the development of duodenal ulcer // Gastroenterology.- 1996.-V.110. -P. 1386−1394.
  102. СГToole, P. W., J. W. Austin, and T. J. Trust. 1994. Identification and molecular characterization of a major ring-forming surface protein from the gastric pathogen H. mustelae. // Mol. Microbiol. 11:349−361.
  103. Ouchterlony O. Antigen-antibody reaction on gels // Acta path microbial. Scand. -1949.-Vol.49.-P.5007−5017.
  104. Poundeyr R.E., Ng D. Те prevalence of Helicobacter pylori infection in different countries //Aliment. Pharmacol. Ther. 1995. — V.9 (Suppl. 2), 3339.
  105. Ransom J.H., Haspel M.V. Selection of groth factors and myelomas to enhance monoclonal antibody-producing hybridoma formation. New Jersey: Humana Press, Inc. -1987. — P. 195−208.
  106. Reading C.L. Theory and methods for immunization in culture and monoclonal antibody production //J. Immunol. Meth. 1982. — Vol.53,№ 3. -P. 261−291.
  107. Shepherd AJ, Williams CL, Doherty CP, et al. Comparison of an enzyme immunoassay for the detection of Helicobacter pylori antigens in the faeces with the urea breath test. // Arch Dis Child 2000−83:268−70.
  108. Shulman, M., C. D. Wilde, and G. Kohler. 1978. A better cell line for making hibridomas secreting specific antibodies. Nature (London) 276:269 270
  109. Skouloubris S, Thiberge J. M, Labigne A, De Reuse H. The He/icobacter pylorii Urel protein is not involved in urease activity but is essential for bacterial survival in vivo. Infect Immun.—1998-—Vol. 66.—P.:4517−4521.
  110. Suerbaum S., Chin Hur, Ch. Josenhans, P. Michetti. Pathogenesis and virulence factors of Helicobacter pylori. Current Opinion in Gastroenterology—1999 .—Vol. 15.—Suppl. 1.—P.S11-S16.
  111. Sung JJY, Chung SCS, Ling TKW. Antibacterial treatment of gastric ulcers associated with Helicobacter pylori // N Engi J. Med.- 1995.V.- 332. P.-139−142.
  112. Trevisani L, Sartori S, Ruina M, et al. Helicobacter pylori stool antigen test. Clinical evaluation and cost analysis of a new enzyme immunoassay. // Dig Dis Sci 1999−44:2303−6.
  113. Tufano, M. A., F. Rossano, P. Catalanotti, G. Luguori, C. Capasso, M. T. Ceccarelli, and P. Marinelli. 1994. Immunobiological activities of H. pylori porins. // Infect. Immun. 62: 1392−1399.
  114. Wirth H. P, Beins M. H, Yang M, et al. Experimental infection of Mongolian gerbils with wild-type and mutant Helicobacter pylori strains. Infect Immun —1998.—Vol. 66.—P.:4856−4866
  115. H. pylori lipopolysaccharides characterized by reactivity with sera fromhumans with natural infection. // Infection and immunity. 2000, № 1, vol.68.-p. 151−159.
  116. Yokota et al. human antibody response to Helicobacter pylori lipopolysaccharide: presence of an immunodominant epitope in the polysaccharide chain of lipopolysaccharide. // Infection and immunity. -1998, № 6, vol. 66. p. 3006−3011.
  117. Veijola L, Myllyluoma E, Korpela R, Rautelin H. Stool antigen tests in the diagnosis of Helicobacter pylori infection before and after eradication therapy. // World J Gastroenterol. 2005 Dec 14−11(46):7340−4.
Заполнить форму текущей работой

Заказал и сдал!