Характеристика цитокинового статуса и регуляторных Т-клеток при физиологической беременности и гестозе

Актуальность исследования.

Гестоз является одним из наиболее тяжелых осложнений беременностиJ занимает 2−3 место в структуре материнской смертности и обусловливает.

I наиболее высокий процент перинатальных осложнений [24, 53, 69, 86, 87].

Несмотрянапристальное внимание к данной проблеме, пусковые механизмы.

J гестоза остаются до сих пор невыясненными. В силу многообразия.

1 клинических проявлений данное осложнение не всегда диагностируется.

I вовремяа существующие методы прогнозирования, профилактики и лечения гестоза недостаточно эффективны [11, 13, 29, 65- 67, 77, 81]. Вместе с тем своевременная и правильная диагностика, оценка степени тяжести гестоза имеют принципиальное значение для исхода беременности и родов [58- 13, 14, 77, 96, 97].

Согласно современным представлениям важную роль в развитии" патологии беременностиютводят иммунным нарушениям [5,16, 53- 63, 64., 82, 85]- Известно, что физиологическое течение беременности ассоциировано с формированием иммунологической толерантности к аллоантигенам плода. Одним из механизмов формирования толерантности является цитокин-опосредованная супрессия, которая обусловлена доминированием Th2/Th3 лимфоцитовпродуцирующих цитокины с иммуносупрессорной активностью: интерлейкин 4 (EL-4), интерлейкин 10- (IL-10) и трансформирующийфактор I роста (TGF-j3) [165,166, 167, 188, 189]. Феномен Thl->Th2/Th3 переключения.

Г 1, представляется чрезвычайно важным, поскольку доминирование продукции i. ¦ j ТЫ цитокинов сопряжено с патологическим характером гестациив частности преждевременным прерыванием беременности [167, 169- 188];

Повышенный уровень Thl цитокинов отмечается и при гестозе [52, 82, 83,.

123, 121, 195]. Причем преобладание продукции Thl/провоспалительных цитокинов задолго предшествует его клинической манифестации [129].

Вместе с тем, рядом авторов показано, что течение гестоза может быть сопряжено не только с увеличением ТЫ цитокинов, но и повышенной продукцией Th2 цитокинов, а также с одновременным возрастанием уровня ТЫ и Th2 цитокинов [214]. Таким образом, данные, характеризующие продукцию различных цитокинов при осложненном течении беременности, носят неоднозначный характер

Вместе с тем, ни у кого не вызывает сомнений, что цитокиновый дисбаланс оказывает непосредственное влияние на характер течения беременности. Поэтому комплексное исследование в периферической крови уровня Thl/Th2 цитокинов и их суммарной биологической активности при физиологической беременности и различных формах гестоза имеет принципиальное значение для понимания патогенеза гестоза, поиска иммунологических маркеров его прогнозапрофилактики и лечения.

Наряду с цитокинами, важную роль в формировании и поддержании иммунологической толерантности могут играть регуляторные Т-клетки с супрессорной активностью. Среди них особый интерес представляют естественные супрессорные Т-клетки- (CD4tCD25+) — Trn. В последние годы их роль широко обсуждается в литературе в контексте подавления трансплантационных реакций при пересадках аллогенных органов и тканей. В экспериментальных исследованиях на мышах показано, что перенос CD4+CD25±KneTOK от здоровых беременных мышей BALB/ самкам с угрозой невынашивания (DBA/2J) предотвращает у них выкидыши и способствует сохранению беременности. При этом, как выяснилось, ведущее значение в развитии выкидышей у DBA/2J мышей имеет дефицит CD4+CD25±KneTOK в тимусе [113, 115]. Имеются единичные сообщения об увеличении содержания CD4+CD25±клеток при гестации у человека [189, 190, 191]. Тем не менее, значение естественных регуляторных Т-клеток в развитии физиологической беременности, и ее позднего осложнения — гестоза у человека остается практически не изученным.

Одной из важных задач является разработка эффективных методов профилактики и лечения гестоза, которое на сегодняшний день представляет исключительно симптоматическую терапию. Развитие гестоза ассоциировано с неполноценной лютеиновой фазой (НЛФ) в результате недостаточной продукции прогестерона [77, 73, 88, 95, 260]. Следует отметить, что НЛФ является также причиной самопроизвольного прерывания беременности, которое успешно корригируется назначением аналога прогестеронадюфастона [74, 75, 72]- Поскольку эффект дюфастона во многом связывают с его способностью индуцировать ТЫ—>ТЬ2/ТЪЗ переключение [166, 167], можно полагать, что данный препарат в силу иммуномодулирующего эффекта может предотвращать в последующем развитие гестоза. Однако исследование влияния дюфастона на уровень цитокинов во второй половине беременности и частоту развития гестоза у беременных из группы риска по прерыванию беременности до сих пор не проводилось.

Исходя из вышесказанного, была сформулирована цель настоящего исследования:

Цель исследования:

На основе исследования баланса ТЫ/ТЬ2 цитокинов и регуляторных Т-клеток изучить клеточно-молекулярные механизмы иммуносупрессии в течении физиологической и осложненной гестозом беременности. Для достижения поставленнойцели, были сформулированы следующие задачи:

1. Оценить биологическую активность сывороток крови и содержание ТИ1/ТЬ2 цитокинов в супернатантах КонА-стимулированных клеток цельной крови при физиологической беременности и гестозе.

2. Охарактеризовать количественное содержание СВ4+ СЭ25+ и С04+ Т-лимфоцитов в периферической крови у беременных в исследуемых группах и оценить сопряженность показателей с тяжестью гестоза.

3. Исследовать пролиферативный ответ Т-лимфоцитов в культурах анти-СЭЗ-стимулированных клеток, а также уровень спонтанного и индуцированного апоптоза Т-клеток у беременных с осложненным и физиологическим течением гестации.

4. Исследовать уровень продукции Thl/Th2 цитокинов и частоту развития гестационных осложнений (угрозы прерывания беременности, фетоплацентарной недостаточности, гестоза) в группах беременных, применявших и не использовавших гестаген дидрогестерон (дюфастон).

Научная новизна исследования.

В работе охарактеризованы особенности цитокинового баланса и естественных регуляторных Т-клеток с супрессорной активностью при физиологическом и осложненном течении беременности, что позволило сделать заключение о роли механизмов иммуносупрессии в процессе гестации и их нарушении при гестозе.

В результате комплексного исследования цитокинового статуса расширены представления о спектре Thl/Th2 цитокинов и их суммарной биологической активности при физиологической и осложненной гестозом беременности. Полученные результаты свидетельствуют о выраженной супрессорной активности сывороток крови и доминировании Th2-цитокинов при физиологической беременности. У беременных с тяжелым гестозом в периферической циркуляции регистрируется повышение продукции как Thl, так и ТЬ2-цитокинов. При этом оценка супрессорной активности сыворотки крови и соотношения отдельных Thl/Th2 цитокинов указывают на снижение содержания факторов/цитокинов с супрессорной активностью при развитии гестоза.

Впервые показано, что физиологическая беременность сопряжена не только с изменением баланса цитокинов, но и с увеличением в циркуляции естественных регуляторных CD4+CD25+T-KneTOK, в том числе с высокой экспрессией CD25 молекул (CD4+CD25bright), причем возрастание численности CD4+CD25+ Т-клеток характерно именно для физиологической беременности и не регистрируется при беременности, осложненной гестозом.

Выявленные новые данные об обратной корреляционной зависимости между супрессорной активностью сыворотки крови, содержанием циркулирующих 1-клеток и степенью тяжести гестоза подтверждают важность нарушения гестационной иммуносупрессии в развитии осложненной гестозом беременности.

На основе анализа уровня пролиферативного ответа и апоптоза Т-клеток в а-СБЗ-стимулированных культурах МНК охарактеризовано состояние функциональной активности Т-клеток при различных вариантах течения беременности.

В ркзультате исследования цитокинового статуса у женщин, принимавших гестаген дюфастон, впервые показано, что иммуномодулирукяцее влияние дюфастона во второй половине беременностипроявляется нормализацией продукции цитокинов и восстановлением функциональной активности Т-клеток у беременных из группы риска по невынашиванию гестации.

Практическая значимость.

На основе клинико-иммунологического анализа выявлены новые иммунологические маркеры, которые могут служить дополнительнымкритерием при оценке степени тяжести гестоза. Характеристика иммунных дисфункций при гестозе является основой для разработки новых подходов к коррекции осложненного течения беременности. Изучение иммуномодулирующего эффекта гестагена дюфастон на продукцию ТЫЛЪ2 цитокинов позволило разработать принципиально новый подход к профилактике гестоза в группах высокого риска, что имеет большое практическое значение для предотвращения репродуктивных потерьснижения перинатальной и младенческой смертности, обусловленной хронической внутриутробной гипоксией плода, развивающейся на фоне гестоза.

Основные положения, выносимые на защиту.

Физиологическая иммуносупрессия второй половины беременности ассоциирована с преобладанием в сыворотке крови факторов с супрессорным действием^ доминированием Т112/противовоспалительных цитокинов и увеличением относительного содержания естественных супрессорных клеток с фенотипом СБ4+С025+, в том числе с высокой экспрессией СБ25+ молекул (СБ4+С025+Ь" 8М).

2.Развитие гестоза сопряжено со снижением супрессорной активности сыворотки крови, усилением продукции ТЫи ТЬ2 цитокинов и уменьшением содержания естественных супрессорных Т-клеток (СВ4+С025+, С04, С025Ь" 8Ь1).

3. Применение дюфастона у женщин с угрозой самопроизвольного прерывания беременности характеризуется выраженным иммунокорригирующим эффектом и приводит к снижению частоты развития гестоза в результате нормализации цитокинового баланса.

Объем и структура диссертации.

Диссертация написана в традиционном стиле и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, 4 глав собственных исследований, обсуждения полученных результатов и выводов: Материал изложен на 117 страницах машинописного текста, включающего 18 таблиц и 3 рисунка. Прилагаемаябиблиография содержит ссылки на 222 литературных источникав том числе 121 иностранных. Апробация работы.

ВЫВОДЫ:

1. Доминирование в сыворотке крови регуляторных факторов с супрессорной активностью в сочетании со смещением баланса в сторону Т112/противовоспалительных цитокинов и увеличением содержания регуляторных СБ4+С025+ Т-лимфоцитов во второй половине гестации свидетельствует о супрессорной реорганизации иммунной системы при физиологической беременности.

2.Развитие гестоза сопряжено с нарушением гестационной иммуносуперссии, на что указывает снижение продукции сывороточных супрессорных факторов, дисбаланс продукции цитокинов, проявляющийся повышенным содержанием ТЫи ТЬ2-цитокинов, а также снижение содержания С04+С025+ и С04+СБ25Ьп¹ Т-клеток при осложненной беременности.

3.Наличие обратной корреляционной зависимости степени тяжести гестоза с супрессорной активностью сыворотки и содержанием циркулирующих С04+С025+ и С04+СШ5Ьп§ 111 Т-клеток указывает на сопряженность нарушения иммунных механизмов супрессии с тяжестью заболевания.

4.Нормализация продукции цитокинов и пролиферативной активности Т-клеток у женщин с угрозой невынашивания, принимавших в первой половине беременности аналог прогестеронадюфастон, свидетельствует об иммунокорригирующем влиянии дюфастона на параметры иммунитета у беременных во второй половине гестации.

5.Совокупность клинической эффективности дюфастона, проявляющаяся снижением частоты развития тяжелых форм гестоза, и его иммуномодулирующего действия позволяет использовать дюфастон в качестве профилактического препарата при угрозе развития гестоза.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ.

1. Для оценки нарушений гестационной иммуносупрессии, приводящей к развитию гестоза, целесообразно во IIтриместре проводить оценку биологической активности сыворотки крови. Повышение индекса супрессорной активности (до проявления клиники осложнения) свидетельствует о высокой вероятности развития гестоза и диктует необходимость проведения мероприятий по его диагностике и профилактике.

2. Оценка содержания регуляторных Т — клеток СЭ4+ С025+ во II триместре беременности у женщин с гестозом позволяет оценить степень его тяжести для назначения адекватной терапии, а также эффективность проводимого лечения.

3. Для профилактики тяжёлых форм гестоза у пациенток с отягощенным акушерско-гинекологическим анамнезом, недостаточностью лютеиновой фазы следует назначать аналог прогестерона — дюфастон в следующей дозировке: до 16 недель 20−40 мг в сутки, с 18 до 20 недель-20мг в сутки.