Дипломы, курсовые, рефераты, контрольные...
Срочная помощь в учёбе

Разработка ПЦР-тест-систем для видовой идентификации и количественной оценки мясного сырья в составе мелкоизмельченных полуфабрикатов и готовых мясных продуктов

Диссертация: Разработка ПЦР-тест-систем для видовой идентификации и количественной оценки мясного сырья в составе мелкоизмельченных полуфабрикатов и готовых мясных продуктов
ДиссертацияПомощь в написанииУзнать стоимостьмоей работы

В последние годы на рынках и торговых предприятиях нашей страны заметно увеличился сбыт фальсифицированных продовольственных, в том числе мясных товаров как отечественного, так и импортного производства. Принятые в России законы «О ветеринарии» (14.05.93), «О защите прав потребителя» (05.12.95), «О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения» (30.03.99), «О качестве и безопасности пищевых… Читать ещё >

Содержание

  • 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
    • 1. 1. Основные положения об идентификации и фальсификации пищевого сырья и готовой продукции
    • 1. 2. Виды фальсификаций мясного сырья, полуфабрикатов и готовых мясных изделий
    • 1. 3. Органолептические и морфологические показатели видовой принадлежности мяса и мясных продуктов
    • 1. 4. Физико-химические показатели видовой принадлежности мяса и мясных продуктов
    • 1. 5. Инструментальные методы идентификации и выявления фальсификаций видового состава мясного сырья и готовых мясных продуктов
    • 1. 6. Сущность полимеразной цепной реакции (ПЦР)
    • 1. 7. Применение метода ПЦР для видовой идентификации мясного сырья и продуктов животного происхождения
    • 1. 8. Количественная оценка содержания компонентов животного происхождения в составе мясного сырья, полуфабрикатов и готовых мясных изделий с использованием метода ПЦР

Разработка ПЦР-тест-систем для видовой идентификации и количественной оценки мясного сырья в составе мелкоизмельченных полуфабрикатов и готовых мясных продуктов (реферат, курсовая, диплом, контрольная)

Актуальность темы

диссертации. Формирование в России рыночных условий развития общества, резкое увеличение объема частного производства и свободной торговли продовольственными товарами, в том числе мясным сырьем, полуфабрикатами и готовыми мясными продуктами, предопределяют возможность различной их фальсификации, но структуре и видовой принадлежности сырьевых составляющих. По экономическим соображениям чаще всего фальсифицируют малоценное мясное сырье, продукцию второго и третьего сортов, реализуя их как продукцию высокого качества.

В последние годы на рынках и торговых предприятиях нашей страны заметно увеличился сбыт фальсифицированных продовольственных, в том числе мясных товаров как отечественного, так и импортного производства. Принятые в России законы «О ветеринарии» (14.05.93), «О защите прав потребителя» (05.12.95), «О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения» (30.03.99), «О качестве и безопасности пищевых продуктов» (02.01.02), направленные на строгое соблюдение определенных требований к сырью и продукции, еще не обеспечивают полного исключения фальсификации различных продуктов.

Показатели качества и безопасности сырья и продуктов животного происхождения, определяемые в Системе обязательной сертификации ГОСТ Р, представлены в Санитарных правилах и нормах (СанПиН 2.3.2. 1078−01). По данным ряда исследований, мясные продукты, не отвечающие требованиям Правил ветсанэкспертизы, ГОСТ и других нормативных документов, составляют в отдельных торговых предприятиях и на рынках до 12−35% от числа всех проверенных партий. Имеются случаи реализации фальсифицированных продуктов, сопровождавшихся ветеринарными документами и сертификатами соответствия, указывающими на их подлинное происхождение и проведенный лабораторный контроль качества.

В настоящее время особенно остро стоит вопрос о необходимости более достоверного определения, как видовой принадлежности блочного мясного сырья, так и состава мясных мелкоизмельченных продуктов. Это обусловлено тем, что из-за фальсификации мясного сырья по видовому составу не только изменяются потребительские свойства готовых изделий, но и возникает опасность для здоровья потребителей.

Наибольшего беспокойства у ветеринарных специалистов вызывают возможные подмены в продуктах мясного сырья мясом животных, пораженных прионами или вирусами, создающими большой риск в эпизоотическом и эпидемическом отношениях (губкообразные энцефалопатии, африканская чума свиней, ящур и другие), а также мясом, импорт которого в нашу страну по каким-либо причинам запрещен. Кроме того, фальсификация видовой принадлежности мясного сырья в многокомпонентных мясных продуктах может нанести большой моральный вред той категории потребителей, национальные или религиозные воззрения которых не позволяют употреблять мясо отдельных видов скота и пгицы.

Известно, что используемые в настоящее время методы органолептического, физико-химического и микробиологического контроля дают возможность наделаю определить свежесть и безопасность в инфекционном отношении мясного сырья и готовых мясных изделий. Но с их помощью нельзя установить видовой состав мяса в продуктах, особенно если количество видоизмененной мышечной ткани незначительное по отношению к основному сырью.

Выявление различных фальсификаций с помощью таких иммунологических методов исследования, как РА, РП, РИД и ИФА, не всегда достигает цели, так как эти методы не позволяют надежно выявить наличие подложного мяса, содержащегося в количестве менее 10−20% от общей массы продукта. Более того, указанные методы практически не пригодны для исследования мясного сырья близкородствештых видов животных и мясных продуктов, прошедших термическую обработку выше 48−57°С.

Помимо идентификации сырьевых составляющих мясных полуфабрикатов и готовых мясных изделий существует необходимость количественной оценки процентного соотношения мясных фальсифицирующих примесей к основному мясному сырью, а также дифференцирование умышленно произведенного подлога от технически неизбежной контаминации пищевого сырья, возникающей в процессе технологической обработки мяса.

Достаточно точными и надежными методами исследования мясного сырья, позволяющими провести количественный анализ исследуемых компонентов продукта, оказались некоторые варианты иммуноферментного анализа (ELISA). Однако термическая обработка продуктов при 80 °C в течение 30 мин, при 100 °C — 20 мин, или 121 °C — 10 мин, отрицательно влияет на чувствительность и специфичность данного метода и не позволяет выявлять в образцах примеси отдельных видов мяса в количестве менее 20%. Кроме того, с помощью ELISA оказалось невозможным дифференцировать мясо близкородственных видов животных и птицы, что снижает надежность применения данного метода (54).

Наиболее перспективными для определения видовой принадлежности тканей животного происхождения в составе мясного сырья и продуктов, в том числе подвергшихся термической обработке, являются методы ДНК-диагностики и, в особенности, метод полимеразной цепной реакции (ПЦР). По сравнению с традиционными способами видовой детекции, установление видовой принадлежности мяса при помощи ПЦР отличается универсальностью, более глубоким уровнем видовой дифференциации, высокой воспроизводимостью и возможностью количественного анализа.

В последнее время метод ПЦР находит практическое применение при диагностике инфекционных заболеваний человека и животных, генотипировании различных микроорганизмов и вирусов, оценке их вирулентности и определении устойчивости к антибиотикам, генодиагностике и генетической дактилоскопии, пренатальной диагностике и биологическом контроле препаратов крови (13,16, 28, 32, 40,41,161).

В настоящее время предложены всевозможные модификации ПЦР, разрабатываются новые амплификационные технологии, основанные на репликации как ДНК-, так и РНК-фрагментов. Несмотря на то, что использование метода полимеразной цепной реакции для видовой идентификации тканей животного и растительного происхождения получило высокую оценку зарубежных специалистов, в нашей стране это направление не нашло еще широкого практического применения в области ветеринарно-санитарной экспертизы. Для решения этой проблемы необходима разработка эффективных и адаптированных к различным объектам исследований ПЦР-тест-систем качественного и количественного анализов видового состава мясного сырья и готовых мясных продуктов.

Цель и задачи исследований. Целью исследований являлась разработка ПЦР-тест-систем для видовой идентификации и количественной оценки измельченного мясного сырья в составе мясных полуфабрикатов и готовых мясных изделий.

В задачи исследований входило:

• конструирование видоспецифичных праймеров для идентификации ДНК крупного рогатого скота, свиньи и курицы методом ПЦР и определение наиболее эффективной методики выделения ДНК из мясного сырья и готовых продуктов;

• оптимизация процесса амплификации по температурному и временному профилям реакции;

• изучение специфичности и чувствительности разработанных однолокусных и мультилокусной ПЦР-тест-систем;

• создание контролей ложноположительных и ложноотрицательных результатов разработанных ПЦР-тест-систем;

• разработка внутренних стандартов для количественного определения ДНК крупного рогатого скота, свиньи и курицы методом конкурентной ПЦР;

• калибровка внутренних стандартов и определение точек эквивалентности для количественной оценки ДНК исследуемых видов животных методом конкурентной ПЦР;

• сравнительный анализ влияния условий хранения и термической обработки мясного сырья на эффективность иммунологических и ПЦР-методов видовой идентификации.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

3. ВЫВОДЫ.

1. Наиболее оптимальным молекулярно-генетическим маркером для видовой идентификации ДНК крупного рогатого скота, свиней и кур на основании анализа уровня межвидового полиморфизма нуклеотидных последовательностей ДНК сельскохозяйственных животных и птицы является митохондриальный ген цитохрома Ь.

2. Наименее трудоемким методом выделения ДНК из мясного сырья и готовых продуктов, обеспечивающим высокое качество очистки нуклеиновых кислот и исключающим необходимость измерения концентрации выделенной ДНК, является метод аффинной сорбции ДНК на магнитном силикагеле в присутствии солей гуанидина.

3. Однолокусные тест-системы «BOV ПЦР-ядро», «SUS ПЦР-ядро» и «GUL ПЦР-ядро» для идентификации тканей крупного рогатого скота, свиней и кур, соответственно, а также мультилокусная тест-система «PECUS ПЦР-ядро» для одновременной идентификации тканей трех видов животных обладают 100% специфичностью и имеют предел чувствительности, соответствующий 0,1% тканей анализируемого вида животного в исследуемом материале.

4. Сконструированы положительные, отрицательные, а также универсальный внутренний контроли, позволяющие оценить качество выделенной ДНК и получить информацию о работе всей амплификационной системы с целью предотвращения получения ложноположительных и ложноотрицательных результатов ПЦР.

5. Разработана методика количественного определения ДНК животного происхождения, основанная на принципе конкурентной ПЦР, позволяющая оценить размеры выявляемых фальсификатов и дифференцировать умышленно произведенный подлог от технически неизбежной контаминации мясного сырья тканями гетерологичных видов.

6. Экспериментально подтверждены более высокие специфичность и чувствительность ПЦР методов идентификации мясного сырья при различных способах его хранения и технологической обработки, по сравнению с иммунологическими методами.

4. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ.

1. Для практического применения в ветеринарных и научных испытательных лабораториях с целью выявления фальсифицирующих примесей говядины, свинины и курятины в составе мясного сырья и готовых мясных изделий наиболее целесообразно использовать ПЦР-тест-системы «BOV ПЦР-ядро», «SUS ПЦР-ядро» и «GUL ПЦР-ядро», соответственно.

2. При проведении скринингового анализа большого количества мясных проб рекомендуется использовать мул ьтил оку сную ПЦР-тест-систему «PECUS ПЦР-ядро», что позволит одновременно выявлять наличие в измельченном мясном сырье фальсифицирующих примесей говядины, свинины и курятины.

3. Для количественного определения ДНК различных видов животных нами предлагается методика, реализующая принцип конкурентной ПЦР, основанной на коамплификации исследуемой ДНК-матрицы с количественно охарактеризованным внутренним стандартом.

4. При арбитражном исследовании фальсификатов целесообразно использовать ПЦР-тест-системы, с помощью которых можно в течение 2 рабочих дней надежно определить видовое происхождение мясных составляющих мелкоизмельченного сырья или готовых продуктов из него.

Показать весь текст

Список литературы

  1. А.И. Анатомия домашних животных. М.: Колос, 1962. — 582 с.
  2. Арбитражный процессуальный кодекс РФ: комментарий. М.: АгроНИИТЭИММП, 1992. — 59 с.
  3. БатингГ., Контор Ч., Коллинз Ф. Анализ генома. Методы. М.: Мир, 1990. -С.176−190.
  4. М.Ф., Швец О. М., Кириллов А. К. Определение видовой принадлежности мяса животных // Методическое пособие. М.: АМБагро, 1998.-34 с.
  5. КГ. Оценка тенденций развития импорта и экспорта агропродовольственной продукции России со странами дальнего зарубежья // Вопросы статистики, № 11 М., 2001. — С. 24−27.
  6. Вальехо-Роман КМ. Гибридизация ДНК / В кн.: Молекулярные основы геносистематики. М.: МГУ, 1980. — С. 85−105.
  7. А.Б. Полимеразная цепная реакция // Молекулярная биология, т.25, вып.4. М.: Наука, 1991. С. 926−936.
  8. B.C., Коваленко И. А., Шалушкова Л. П. Переработка и хранение сельскохозяйственной продукции // Мат. общего собрания Академии аграрных наук респ. Беларусь «Аграрная наука на рубеже XXI века». -Минск, 2000. С. 293−298.
  9. С.Н. Видовые особенности шейных позвонков мелких жвачных и плотоядных // Ветеринария, № 5. М., 1992. — С. 92.
  10. М.Долгов В. А., Светличкин В. В., Доля Е. А., Квятковская А. Ю. К вопросу создания и применения тест-системы на основе генного зондирования в практике ВСЭ // Сбор. науч. тр. «Проблемы ветеринарной санитарии и экологии». М., 1996. — С. 112−119.
  11. ХЪ.Езерская Е. Я. Анализ видовой принадлежности мяса и мясопродуктов // Ветеринария, № 6. М., 2001. — С.45.
  12. Е.Я., Галочкин В А. Идентификация видоспецифичных мышечных белков сельскохозяйственных животных и птицы // С/х биология. Серия: биология животных, № 6.-М., 1999. С. 3−9.
  13. П.В. Технология продуктов убоя животных. М.: Колос, 1984. -236 с. 21 .Журавская Н. К. Исследование и контроль качества мяса // Ветеринария, № 8. -М., 1996. С.94−96.
  14. М.М., Лазарев В. Н., Белоусова Р. В., Народницкий Б. С. Современные методы ДНК-диагностики // Лекция. М., 1997. — 20 с.
  15. Е.М. Определение видовой принадлежности мяса домашних и диких животных // Автореф. дисс. Чебоксары, 1999. — 23 с.
  16. А.А., Обухов И. Л., Сорокина М. Ю., Панин А. Н., Шипулин Г. А. Определение видовой принадлежности тканей жвачных животных // Ветеринария, № 3. М., 2000. — С. 59−62.
  17. В.П., Шведова В. Н. Биохимия. М.: Дрофа, — 2004.
  18. Д., Николаева М., Гильмитова И. Идентификация и фальсификация товаров: причины и следствия // Международный сельскохозяйственный журнал, № 3.-М., 1993.-С. 61−64.
  19. В.А. Ветеринарно-санитарная экспертиза пищевых продуктов на рынках и в хозяйствах: Справочник. М.: Колос, 1992. — 304 с.
  20. М.Ю. Разработка тест-систем идентификации мяса и мясопродуктов на основе ДНК-диагностики // Тез. докл. Всерос. науч.-практ. конф. «Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов». -Щелково, 2000. С. 388−389.
  21. .Д., Чимера Д. А. Обнаружение и идентификация патогенных микроорганизмов молекулярными методами / В кн.: Молекулярная клиническая диагностика. М.: Мир, 1999. — С. 496−506.
  22. Т., Фритч Э., Сэмбрук Дж. Методы генетической инженерии. Молекулярное клонирование. М.: Мир, 1994. — С. 159−172.
  23. Методика обнаружения генетически модифицированной ДНК в пищевых продуктах и полуфабрикатах: Инструкция по применению набора реагентов «SILICA М». М.: ООО Компания Биоком, 2004. — 11 с.
  24. Методические рекомендации МЗ РФ по проведению работ в диагностических лабораториях, использующих метод ПЦР. М., 1995.
  25. В.М. Справочник методов иммунологии. Кишинев: Штиинца, 1982.-304 с.
  26. М.А., Лычников Д. С., Неверов А. Н. Идентификация и фальсификация пищевых продуктов. М.: Экономика, 1996. — С. 84−95.390 качестве и безопасности пищевых продуктов: Федеральный Закон. М., 1999.-41 с.
  27. И.Л. Применение ПЦР в ветеринарии // Аграрная Россия, № 2. М., 2002. С. 62−64.41 .Обухов И. Л., Панин А. Н., Груздев К. Н. Использование ПЦР в практических ветеринарных лабораториях // Ветеринария, № 2. М., 1997. — С.22−27.
  28. А.Н., Обухов И. Л., Шипулин Г. А., Груздев К. Н. Правила проведения работ в диагностических лабораториях, использующих метод ПЦР // Ветеринария, № 7.-М., 1997.-С. 19−21.
  29. Л.С., Паничкина Н. А., Рыбакова А. А. Артамошкина О.М. Электрофоретические методы исследования образцов тканей ценных видов рыб и млекопитающих: Метод, реком. М., 2001.
  30. Руководство по ветеринарно-санитарной экспертизе и гигиене животных продуктов / Под ред. И. В. Шура. М.: Колос, 1965. — 427 с.
  31. В.В. Теоретическое обоснование и разработка тест-систем ускоренной оценки безопасности и качества объектов ветеринарно-санитарного контроля: Автореф. дисс. М., 2002. — 40 с.
  32. .С. Определение видовой принадлежности мяса птицы по особенностям анатомического строения костей скелета // Профилактика и лечение болезней животных, вып. 387 (415). Краснодар, 2001. — С. 158−160.
  33. С.А. Случаи судебно-ветеринарной экспертизы на мясокомбинате // Ветеринария, № 6. М., 1993. — С. 53−54.
  34. Л.Ф. и др. Получение флуоресцентной меченой ДНК и использование ее в качестве зонда при молекулярной гибридизации // Биоорганическая химия, № 11. М., 1986.-С. 1508−1513.
  35. И.П. Идентфикация и фальсификация продовольственных товаров. М.: Дашков и К°, 2002. — 460 с.
  36. М.Н., Галочкин В. А., Матвеев В.А, Езерская Е. Я. Количественный анализ видовой принадлежности мяса и мясопродуктов // Хранение и переработка с/х сырья, № 2. М., 2001. — С. 38−43.
  37. ЬЪ.Шакирова Т. Ф. Видовые особенности строения осевого скелета домашних птиц// Ветеринария, № 3. -М., 1995. С. 82.
  38. Abdulmamjood A. Identification of ostrich meat by RFLP- analysis of cytochrome b gene // Food science. 2002, v.67, № 5, p. 118−124.
  39. Abdulmamjood A. Snail species identification by RFLP-PCR and designing of species-specific oligonucleotide primers // Food science. 2001, v.66, № 9, p. 134 141.
  40. Allsup T.N. A comparison of the agar gel immuno-diffusion (AGID) and counter-immunoelectrophoresis (CIE) tests for species identification of imported red meat and offal // Meat Sci. 1987, v.20, p. 49 -128.
  41. Andrew J. et al. An actin gene-related PCR test for identification of chicken in meat mixtures // Meat Sci. 1999, (353), p.227−231.
  42. Beneke В., Hagen M. Applicability of PCR for the detection of animal species in heated meat products // Fleischwirtscaft. 1998, № 78, p.1016−1019.
  43. Bickley J., Short J.K., McDowell D.G., Parkes H.C. PCR detection of Listeria monocytogenes in diluted milk and reversal of PCR inhibition caused by calcium ions //Lett. Appl. Microbiol. 1996, № 22, p. 153−158.
  44. Burgener M., Hubner P. Mitochondrial DNA enrichment for species identification and evolutionary analysis // Lebensm. Unters. Forsch. 1998, № 207, p. 261−263.
  45. Byrne C.E., Downey G., Troy D.J., Buckley D.J. Non-destructive prediction of selected quality attributes of beef by near-infrared reflectance spectroscopy between 750 and 1098 nm // Meat Sci. 1998, v.49, p. 399−409.
  46. Callaway AS. et al. High-throughput transgene copy number estimation by competitive PCR // Plant mol. biol. rep. 2002, v.20, p.265−277.
  47. Calvo J.H., Zagaroza P., Osta R. Random amplified polymorphic DNA fingerprints for identification of species in poultry pate // Poultry science. 2001, v.80, № 4, p.522−524.
  48. Chen F.C., Hsieh Y.H. Detection of pork in heat-processed meat products by monoclonal antibody-based ELISA // J. AOAC Int. 2000, v. 83, p.79−85.
  49. Chikuni K. et al. Polymerase chain reaction assay for detection of sheep and goat meats // Meat Sci. 1994, v.37, p.337−345.
  50. Cipriano F., Palumbi S.R. Rapid genotyping techniques for identification of species and stock identity in fresh, frozen, cooked and canned whale products // Internet
  51. Clydesdale F.M. Critical review // Food science and nutrition. 2001, v.41, p. 413 450.
  52. Cooper M.G. Species identification of meat product by standard methods / Ed. by Patt.- 1985, v.6,p.l35−141.
  53. Cota-Rivas M., Vallejo-Cordoba B.V. Capillary electrophoresis for meat species differentiation // J. Capillary Electrophoresis. 1997, v.4, p. 195−199.
  54. Coyne V.E., James M.D., Reid Sh.J., Rybicki E.P. Molecular biology techniques manual: standard PCR protocol. 1994, Юр.
  55. Crouse C.A., Schumn J. Investigation of species specificity using nine PCR-based human STR systems // J. of forensic science. 1995, v.40, № 6, p.327−332.
  56. De Lomas J.C., Sunzeri F.L., Bush M.P. False-negative results by PCR due to contamination by glove powder // Transfusion. 1992, № 32, p.83−85.
  57. Demeulemester С et al. Improved ELISA and dot-blot methods for the detection of whey proteins in meat products // J. of the Sci. of Food and Agricult. 1991, v.56, p. 325−333.
  58. Denhardt D.T. A membrane filter technique for the detection of complementery DNA//Biochem. Byophys. Res. Commun. 1966, v.23, p.641−646.
  59. Dincer В., Spearow J.L., Cassens R.G., Greaser M.L. The effects of curing and cooking on the detection of species origin of meat products by competitive and indirect ELISA techniques // Meat science. 1987, v.20, p.253−256.
  60. Dominguez E., Perez M.D., Puyol P., Calvo M. Use of immunological techniques for detecting species substitution in raw and smoked fish // Food Research and Technology. 1997, v.204, № 4, p. 279−281.
  61. Ebbehoj K.F., Thomsen P.D. Differentiation of closely related spesies by DNA hybridisation//Meat Sci.- 1991, v.30, p. 359−366.
  62. Ebbehoj K.F., Thomsen P.D. Species differentiation of heated meat products by DNA hybridization // Meat Sci. 1991, v.30, p.221−234.
  63. Erdbrugger W. et al. Protein-kinase-C izoenzymes in rat and human cardiovascular tissues // Brit. J. of Pharmacology. 1997, v. 120, № 2, p. 177−186.
  64. Erlich H.A. PCR technology. Stockton Press, N.Y. — 1989.
  65. Espinoza E.O., Kirms M.A., Filipek M.S. Identification and quantitation of source from hemoglobin of blood and blood mixtures by high-performance liquid chromotography// J. Forensic Sci. 1996, v. 41, p.804−811.
  66. Fair brother K.S. Meat speciation by restriction fragment length polymorphism analysis using an a-actin cDNA probe // Meat Sci. 1998, v.50, № 1, p.105−114.
  67. Fei S. et al. Species identification of meats and meat products by PCR // Anim. Sc. Technol. 1996, v.67, № 10, p.900−905.
  68. Griffiths N.M., Billington M.J. The use of an ELISA procedure for the determination of meat in compound meat products // J. of the Sci. of Food and Agricult. 1984, v.35, p. 909−914.
  69. Hamm R. Heating of muscle systems / In The Physiology and Bio-chemistry of Muscle As a Food / Ed. by E.J. Briskey, R.G. Cassens, J.C. Trautman, 1st ed. -Univ. of Wisconsin Press, Madison, WI, 1966.- p. 363.
  70. Hargin K. Survey of misdescription of tuna species in tuna products // Information sheet — 2000, № 1.
  71. Hashimoto Y., Yasui T. Researches on the detection of meat by serological test //J. of Faculty Agricult. Hokkaido. 1957, v.50, p. 171.
  72. Haurowitz F. The internal structure of protein molecules // Experentia. 1949, v.9, p. 347.
  73. Haurowitz F. The nature of protein molecule: Problems of protein structure // J. of Cell Сотр. Physiol. 1956, v.47 (Suppl. 1), p.l.
  74. Hayashi K. Mannpulation of DNA by PCR / In PCR the Polimerase chain reaction / Ed. by Mullis et al. — 1994, p.3−14.
  75. Hayden A.R. Determination of residual species serum albumin in adulterated ground beef// J. of Food Sci. 1978, v.43, p. 476−478.
  76. Hayden A.R. Use of antisera to heat-stable antigens of adrenals for species identification in thoroughly cooked beef sausages // J. Food Sci. 1981, v.46, p. 1810−1813.
  77. Helm M.B., Warnecke M.O., Saffle R.L. Gamma globulin isolated from rabbit antiserum for rapid detection of meat adulteration // J. of Food Sci. 1971, v.36, p.998−1000.
  78. Herman L. Determination of the animal origin of row food by species-specific PCR//J. of dairy research.-2001, v. 68, № 3, p. 429−236.
  79. Hiernert H.H., Klinger A. Species-specific protein differentiation. Determination of species by polyacrylamide gel electrophoresis // Fleischwirtschhaft. 1978, b.58, № 9, s.1490−1491.
  80. Higuchi R" Fockler C. f Dollinger G" Watson R. Kinetic PCR analysis: Realtime monitoring of DNA amplification reactions // BioTechnol. 1993, v. ll, p. 1026−1030.
  81. Hitchcock C.H.S. et al. Determination of soya proteins in food using an ELISA procedure // J. of the Sci. of Food and Agricult. 1981, v.32, p. 157−165.
  82. Hitchcock C.H.S. Opportunities and Incentives for developing food immunoassays //J. of Food Sci. 1988, v.10, p. 3−16.
  83. Hofmann K., Muller E., Fischer K. Detection of animal meals in feedstuffs // Fleischwirtschaft. 1999, у.19, № 10, p.92−95.
  84. Hopwood A.J. at al. An actin gene-related PCR test for identification of chicken in meat mixtures // Meat Sci. 1999, v.53, № 4, p.227−231.
  85. Hsiesh Y.H.P., Johnson M.A., Wetzstein C.J., Green N.R. Detection of species adulteration in pork products using agar-gel immunodiffusion and ELISA // J. of Food Quality. 1996, v.19, p. 1−13.
  86. Hunt D.J., Parkes H.C., Lumley I.D. Identification of the species of origin of raw and cooked meat products using oligonucleotide probes // Food chemistry. -1997, № 60, p.437−442.
  87. Hunt D.J., Parkes H.C., Lumley I.D. Identification of the species of origin of raw and cooked meat products using oligonucleotide probes // Food Chem. 1997, v.60, p. 437−442.
  88. Innis M.A. et al. Optimization of PCRs / In PCR protocols, a guide to methods and applications. Academic Press, San Diego, California, 1990. p. 16−21.
  89. Inoue H.I. et al. Species identification of blood and bloodstains by high-performance liquid chromatography // Int. J. Legal Med. 1990, v. 104, p.9−12.
  90. Isigidi C. A PCR-based test for species-specific determination of heat treatment conditions of animal meals as an effective prophylactic method for bovine spongioform encephalopathy // Meat Sci. 2001, v.57, № 1, p.35−41.
  91. Janssen F.W., Voortman G., Gaaij J.A. Detection of wheat gluten, whey protein, casein, ovalbumin, and soy protein in heated products by electrophoresis, blotting, and immunoperoxidase staining // J. of Agricult. and Food Chem. 1987, v.35, p. 563−567.
  92. Jobes C. et al. Evolution and recombinantion of the bovine DNA repeats // J. Mol. Ev. 1995, v.41, p. 277−283.
  93. Jones S.J., Patterson R.L.S. A modified indirect ELISA procedure for raw meat speciation using crude anti-species antisera and stabilized immunoreagents // J. of the Sci. of Food and Agricult. 1986, v.37, p.767−775.
  94. Jones S.J., Patterson R.L.S. Recent developments in meat speciation // J. of Food Sci. 1988, v.10, p. 121−126.
  95. Kang’ethe E.K., Jones S.J., Patterson R.L.S. Identification of the species origin of fresh meat using an ELISA procedure // Meat Science. 1982, v.7, p. 229−240.
  96. Karpas A.B., Myers W.L., Serge D. Serological identification of species of origin of sausage meats // J. of Food Sci. 1970, v.36, p. 150.
  97. Kauzmann W. Structural factors in protein denaturation // J. of Cell Сотр. Physiol. 1956, v.47 (Suppl. 1), p. l 13.
  98. Kim H., Shelef LA. Characterization and identification of raw beef, pork, chicken and turkey meats by electrophoretic patterns of their sarcoplasmic proteins // J. Food Sci. 1986, v.51, p. 731 -741.
  99. Kitchin PA., Szotyori Z., Fromholc C., Almond N. Avoidance of false positives // Nature. 1990, v.344, № 6263, p.201.
  100. Kocher T.D. et al. Dynamies of mitochondrial DNA evolution in animals: amplification and sequencing with conserved primers // Proceedings national academy of sciences USA. 1989, v.86, p.6196−6200.
  101. LaddE.F. Adulterated food products // Bulletin № 63. Fargo, U.S.A. — 1904. -534 p.
  102. Lee J.C., Chang G. Random amplified polymorphic DNA polymerase chain reaction (RAPD PCR) fingerprints in forensic species identification // Forensic science. 1994, v.67, p.103−107.
  103. Lenstra J.A., Buntjer J.B., Janssen F.W. On the origin of meat DNA techniques for identification in meat products // Vet science tomorrow. — 2001, № 2.
  104. Lockley A.K., Bardsley R.G. DNA-based method for food authentication // Food science and technology. 2000, v. l 1, № 2, p.67−77.
  105. Lockley A.K., Jones C.G., Bruce J.S., Franclin S.J., Bardsley R.G. Colorimetric detection of immobilised PCR products generated on a solid support // Nucleic acids research. 1997, № 25, p.1313−1314.
  106. Lumley I.D., Patel I., Stanley C.J. Studies on the specificity of some commercially available antisera used in the analysis of meat products // J. of Food Sci.- 1988, v.10, p. 285−288.
  107. Macedo-Silva A. Hamburger meat identification by dot-ELISA // Meat Sci. -2000, v.56, № 2, p.189−192.
  108. Manz J. Detecting heat-denatured muscle proteins by means of ELISA: determining kangaroo muscle proteins // Fleeschwirtschaft. 1983, v.63, p. 1767.
  109. Manz J. Detecting heat-denatured muscle proteins by means of ELISA: // Fleeschwirtschaft. 1985, v.65, p.497−499.
  110. Matsunaga T. et al. A quick and simple method for the identification of meat species and meat products by PCR assay // Meat Sci. 1999, № 51, p.143−148.
  111. Meyer R., Candrian U., Luthy J. Detection of pork in heated meat products by the PCR // J. Assoc. of Anal. Chem. 1994, № 77, p.617−622.
  112. Meyer R., Hofflein C., Luthy J., Candrian U. PCR-RFLP analysis: a simple method for species identification in food // J. of AOAC international. 1995, v.78, № 6, p. 1542−1551.
  113. Milgrom F., Witebsky E. Immunological studies on adrenal glands // Immunol. 1962., v.5, p.46.
  114. Mondini S., Calocchio E., Altissimi M.S., Haouet M.N., Cenci T. Reliability of the microscopic analysis for the animal species' identification of meat meals // La Selezione Veterinaria. 1999, № 7, p.453−463.
  115. Monin G. Recent methods for predicting quality of whole meat // Meat Sci. -1999, v.49, p. 231−243.
  116. Montiel-Sosa J.F. Direct and highly species-specific detection of pork meat and fat in meat products by PCR amplification of mt-DNA // J. of agricultural and food chemistry. 2000, v. 48, № 7, p.2829−2892.
  117. Munson K., Haefele R., Taylor P. Competitive PCR on the «Wave» nucleic acid fragment analysis system // Application Note. 2000, p. 1−4.
  118. Murray B.W., McClymont R.A., Strobeck C. Forensic identification of ungulate species using restriction digests of PCR-amplified mitochondrial DNA // J. of forensic science. 1995, v.40, p.943−951.
  119. Nakajima H. et al. Degradation of a PCR product by a heatstable deoxyribonuclease (Dnase) produced from Yersinia enterocolitica II Microbiol. Immunol. 1994, № 38, p.153−156.
  120. Nazarenko I.A., Bhatnagar S.K., Hohman R.J. A closed tube format for amplification and detection of DNA based on energy transfer // Nucleic Acids Res. 1997, v.25, p. 2516−2521.
  121. Patterson R., Jones S. Species identification in heat processed products // Proceedings of the Congress of Meat Sci. and Technology. 1989, № 35, p.529−536.
  122. Persing D.H. et al. Target selection and optimization of amplification reaction / In: Diagnostic molecular microbiology. ASM, 1993. — p.88−102.
  123. Pyz-Lukasik R. Metody identyfikacji gatunkowej miesa // Medycyna weterynarjna. 1998, № 11, p.732−736.
  124. Quintero J. et al. Use of mtDNA direct PCR sequencing and PCR-restriction fragment length polymorphism methodologies in species identification of canned tuna // J. of agricultural and food chemistry. 1998, v.46, № 4, p. 1662−1669.
  125. Rehbein H. et al. Application of PCR SSCP to species identification of fishery products // J. of the science of food and agriculture. — 1997, v.74, № 1, p.35−41.
  126. Rossen L., Norskov P., Holmstrom K., Rasmussen O.F. Inhibition of PCR by components of food samples, microbial diagnostic assays and DNA extraction solutions // Int. J. Food Microbiol. 1992, № 17, p.37−45.
  127. Rust S., Funke H., Assman G. Mutagenically separated PCR (MS-PCR) a highly specific one-step procedure for easy mutation detection // Nucleic acids research. — 1993, № 21, p.3623−3629.
  128. Schwagele F. Validation of immunological and gentechnical methods // Fleischwirtschaft. 2001, v.81, № 2, p.78−81.
  129. Seibel P. et al. A method for quantitative analysis of deleted mitochondrial DNA by PCR in small tissue samples // Methods of molecular cell biology. 1991, № 2, p. 147−153.
  130. Shericar A.T., Khot J.B., Jayarao B.M., Pillai S.R. Identification of origin of meat using commercially available antisera // J. of Indian veter. med. 1987, v. l 1, № 1, p. 1−7.
  131. Shu-Chu S. et al. Application of capillary alectrophoresis for identification of the authenticity of bird’s nests // Food Drug Anal. 1998, v.6, p. 455−464.
  132. Singer D.S., Parent L.J., Ehrlich R. Identification and DNA sequence of an interspersed repetitive DNA element in the genome of miniature swine // Nucleic acids res. 1987, v.15, p.2780.
  133. Skarpeid H.J., Kvaal K., Hildrum K.I. Identification of animal species in ground meat mixtures by multivariate analysis of isoelectric focusing protein profiles // Electrophoresis. 1998, v. 19, p.3103−3109.
  134. Straub J.A., Hertel C., Hammes W.P. Limits of a PCR-based detection method for genetically modifies soya beans in wheat bread production // Z. Lebensm. Unters. Forsch. 1999, № 208, p.77−82.
  135. Sun Y.L., Lin C.S. Establishment and application of a fluorescent PCR-RFLP method for identifying porcine, caprine and bovine meats // J. of agricultural food chemistry. 2003, v. 51, № 7, p. 1771−1776.
  136. Tajima К et al. PCR detection of DNAs of animal origin in feed by primers based on sequences of short and long interspersed repetitive elements // Bioscience of biotechnological biochemistry. 2002, v.66, p.2247−2250.
  137. Takara Sh. Competitive PCR guid // Takara Shuzo Co. Ltd., p.1−12
  138. Tartaglia M. et al. Detection of bovine mitochondrial DNA in ruminant feeds: a molecular approach to test for the presence of bovine-derived materials // J. of food protection. 1998, v.61, p.513−518.
  139. Taylor A., Ponce-Alquicira E., Linforth R. Electrospray mass spectrometry // Food Sci. and Technol. Today. 1993, v.7, № 4, p. 225−228.
  140. Tseng S.Y. et al. An homogeneous fluorescence polymerase chain reaction assay to identify Salmonella II Anal. Biochem. 1997, v.245, p. 207−212.
  141. Unseld M, Beyermann В., Brandt P., Hiesel R. Identification of the species of origin of highly processed meat products by mitochondrial DNA sequences // PCR methods and applications. 1995, № 4, p.241−243.
  142. Walker J .A. et al. Quantitative intra-short interspersed element PCR for species-specific DNA identification // Analytical biochemistry 2003, № 316, p.259−269.
  143. Wang A.M., Doyle M. V., Mark D.F. Quantitation of mRNA by the PCR // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1989, v.86, p. 9717−9721.
  144. Wang J., Xu В., Wang В., Wang S. Detection of bovine-derived materials in import animal feed and food by PCR assay // Wei sheng yan jiu. 2003, v.32, № 1, p. 26−29.
  145. WATT poultry statistical yearbook. 1999, v.38, № 9.
  146. Whittaker R.G., Spenser T.L., Copland J.W. An ELISA assay for species identification of raw meat // J. of the Sci. of Food and Agricult. 1983, v.34, p. 1143−1148.
  147. Wilkinson D.T. Prime and shine while saving time intergen’s Amplifluor™ allows direct detection of PCR products // Scientist. 1999, v. 13, p. 16.
  148. Wintero A.K., Thomsen P.D., Davies W. A comparison of DNA-hybridization, immunodiffusion, countercurrent immunoelectrophoresis and isoelectric focusing for detecting the admixture of pork to beef// Meat Sci. 1990, v.21, № 1, p.75−85.
  149. Wittwer C.T. et al. «The LightCycler™ «a microvolume multisample fluorimeter with rapid temperature control // Biotechniques. 1997, v.22, p. 176 181.
  150. Wolf C., Luthy J. Quantitative competitive (QC) PCR for quantification of porcine DNA //Meat Sci. -2001, v.51, № 2, p. 161−168.
  151. Yasue H., Wada Y. A swine SINE (PRE-1 sequence) distribution in swine-related animal species and its phylogenetic analysis in swine genome // Anim. genet. 1996, v.27, p.95−98.
  152. Zimmermann K., Mannhalter J. W. Technical aspects of quantitative competitive PCR // Biotechniques. 1996, v.21, p.268.1. УТВЕРЖДАЮ1. АКТ25 октября 2004 г. г. Москва
  153. С помощью ПЦР-тест-систем «BOV ПЦР-ядро», «SUS ПЦР-ядро» и «GUL ПЦР-ядро» проводили исследования 4 проб измельченного мясного сырья, поступившего из испытательного центра «Биотест» Московского государственного университета прикладной биотехнологии.
  154. Мясо поступило в кусках массой 250−400 г в изрезанном виде с температурой 0−4°С. Отдельные куски имели розовый цвет, один из них выделялся не только цветом, но и по консистенции.
  155. МИНИСТЕРСТВО ОБРАЗОВАНИЯ И РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
  156. МОСКОВСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ ПРИКЛАДНОЙ БИОТЕХНОЛ
  157. Кафедра ветеринарно-санитарной эк<
  158. ПРИМЕНЕНИЕ ТЕСТ-СИСТЕМ «BOV-ПЦР ЯДРО», «SUS-ПЦР ЯДРО»!! «GUL-ПЦР ЯДРО» ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ВИДОВОЙ ПРИНАДЛЕЖНОСТИ МЯСА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА, СВИНЕЙ И КУР МЕТОДОМ ПОЛИМЕРАЗНОЙ ЦЕПНОЙ РЕАКЦИИ
  159. Методические рекомендации для самостоятельной работы студентов специальности 310 800-Ветеринария и 310 500 — Ветерннарно-санитарнаяэкспертиза1. Москва 2005
  160. МИНИСТЕРСТВО ОБРАЗОВАНИЯ И НАУКИ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
  161. МОСКОВСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ ПРИКЛАДНОЙ БИОТЕХНОЛОГИИ
  162. Кафедра ветеринарно-санитарной экспертизы
  163. ВИДОВАЯ ИДЕНТИФИКАЦИЯ МЯСНОГО СЫРЬЯ И ГОТОВЫХ МЯСНЫХ ПРОДУКТОВ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ МЕТОДА ПОЛИМЕРАЗНОЙ ЦЕПНОЙ РЕАКЦИИ
  164. Методические указания для самостоятельной работы студентов специальности 310 800 — Ветеринария и 310 500 ~ Ветеринарно-санитарнаяэкспертиза1. Москва 2005
Заполнить форму текущей работой

Заказал и сдал!