Лабораторная работа № 9. Получение каллусов из корешков фасоли
Каллусы можно получать из разных частей растения, в том числе из кончиков корней. Образование каллуса происходит в области первичных и вторичных меристем. Процесс каллусообразования зависит от размера экспланта. Оптимальная величина экспланта 5—10 мм3, масса 20—100 мг. Многие ткани имеют физиологическую полярность. Поэтому каллус лучше образуется на той стороне экспланта, которая ближе… Читать ещё >
Лабораторная работа № 9. Получение каллусов из корешков фасоли (реферат, курсовая, диплом, контрольная)
Каллусы можно получать из разных частей растения, в том числе из кончиков корней. Образование каллуса происходит в области первичных и вторичных меристем. Процесс каллусообразования зависит от размера экспланта. Оптимальная величина экспланта 5—10 мм3, масса 20—100 мг. Многие ткани имеют физиологическую полярность. Поэтому каллус лучше образуется на той стороне экспланта, которая ближе к апикальным меристемам корня. Кончики корней легко образуют каллус, если они помещены на среду горизонтально, тогда как сегменты стебля лучше формируют каллус, если их поместить вертикально. Для культивирования на питательных средах лучше использовать стерильные корешки, полученные при проращивании семян в стерильных условиях.
Цель работы: получить каллус из корешков фасоли.
Оборудование и материалы: чашки Петри с питательными средами для индукции каллусогенеза, стерильные чашки Петри, 6%-й раствор хлорамина, препаровальные иглы, пинцеты, скальпели, флаконы со спиртом и стерильной дистиллированной водой.
Объект исследования: семена фасоли.
Ход работы.
Семена фасоли поместить в чашки Петри (по 15 семян в чашку), залить раствором хлорамина до полного погружения семян в жидкость и оставить на 20 мин. Промыть семена стерильной дистиллированной водой три раза. Стерильные семена залить стерильной водой и оставить для набухания на 24 ч.
Семена с разрушенной кожурой удалить, а жизнеспособные семена простерилизовать повторно 6%-м раствором хлорамина в течение 20 мин. Промыть семена стерильной дистиллированной водой три раза. Семена перенести в стерильные чашки Петри (по пять семян в чашку).
Стерильным пинцетом придерживать семя, а стерильным скальпелем надрезать оболочку. Стерильным скальпелем и препаровальной иглой изолировать корешки (2—3 мм) и перенести в чашки Петри со стерильной дистиллированной водой (по 15 корешков в чашку).
Корешки стерильной препаровальной иглой поместить на поверхность агаризованной среды и слегка вдавить в агар для обеспечения хорошего контакта с питательной средой (среда: МС + 20 г/л сахарозы + 100 мг/л мезоинозита + 2 мг/л 2,4-Д + 0,2 мг/л кинетина). Культивируют в светлой культуральной комнате при 25 °C или в термостате.
Задание. Через три недели рассмотреть в микроскоп и зарисовать сформировавшийся каллус.