Определение молекулярной массы белков методом ультрацентрифугирования

В результате сделанных Т. Сведбергом открытий ультрацептрифуга стала главным и постоянно совершенствуемым инструментом биохимических исследований. В отличие от громоздких первых ультрацентрифуг сегодня выпускаются и массово применяются настольные ультрацентриФуги.

<<06 ультрацентрифуге см. в подпараграфе 8.5.2.

По скорости оседания частиц в ультрацентрифуге в биохимических исследованиях определяют молекулярную массу высокомолекулярных соединений или биологических объектов. Входящее в полученное в ире-, , х₂ mN_ADu>² р-р₀

дыдущем подпараграфе уравнение In— =——— -т произведе;

X] RT р ние массы частицы на число Авогадро (mN_A) представляет собой искомую молекулярную массу М:

В этом уравнении x₂/x_i соответствует скорости оседания dx/dx (это следует из вывода уравнения в подпараграфе 8.5.2); отношение скорости оседания к ускорению ю²х называют коэффициентом седиментации S:

Коэффициент седиментации S — важнейшая характеристика, используемая при определении молекулярной массы полимеров и белков:

aside class="viderzhka__img" itemscope itemtype="http://schema.org/ImageObject">

При изучении молекулярных масс биологических объектов методом центрифугирования значения плотности частиц р определить затруднительно, поэтому для удобства пользования вводится понятие парциального удельного объема частицы v = V/m (по сути, эго величина, обратная плотности), значения v приводятся в специальной научной литературе. Тогда уравнение для определения молекулярных масс ВМС и биологических объектов принимает вид Коэффициент диффузии D и коэффициент седиментации S одинаково зависят от формы и степени сольватации частиц, что делает метод применимым для систем, содержащих частицы, значительно отличающиеся по форме от сферических или сильно сольватированные. Коэффициент седиментации обычно имеет порядок 10^-13, размерность [с], эту величину называют «сведберг» в честь Теодора Сведберга. Часто молекулярную массу таких объектов выражают через коэффициент седиментации.

Резюме

Определение молекулярной массы ВМС методом ультрацентрифугирования основано на ускоренном оседании частиц в центробежном поле. Важнейшей характеристикой, используемой при определении молекулярной массы полимеров и белков, является коэффициент седиментации.